Licenciatura em Engenharia Qumica e

Biolgica
Cintica Microbiana
Engenharia Biolgica I - Universidade de Cabo Verde



















Cintica Microbiana
Quando se arranca uma fermentao devem ser satisfeitas as
seguintes condies:


Inculo vivel

Existncia de fonte de energia

Existncia de nutrientes (em qualidade e quantidade)

Ausncia de inibidores

Condies fsico-qumicos adequadas



















Cintica Microbiana
Considerando uma cultura onde se pressupe no existirem
problemas de transferncia, pode dizer-se que para um acrscimo de
tempo (dt), o correspondente acrscimo da concentrao de
biomassa (dX) ser proporcional concentrao de biomassa (X)
existente:
Sendo que representa a taxa especifica de crescimento

Quando constante, a integrao da equao anterior conduz a:



















Cintica Microbiana
Em que X
0
a concentrao de biomassa para t=t
0
.

Para t>>t
0
obtm-se:
A partir desta expresso possvel determinar o tempo de duplicao
de uma cultura microbiana (t
d
).

Quando X=2X
0
obtm-se:
Como se ver mais adiante, a lei exponencial de crescimento s
aplicvel quando permanecem constantes as condies de
crescimento



















Cintica Microbiana
O rendimento Y
i/j
definido como a relao entre a velocidade de
consumo de substrato (-r
i
) e a velocidade de produo (r
j
):
O rendimento em biomassa, Y
x/s
dado por:
E representa o acrscimo de biomassa conseguido por um consumo
de uma quantidade S de substrato.

Pode escrever-se de um modo mais rigoroso:



















Cintica Microbiana
Se as condies da cultura se mantiveram constantes, Y
x/s
manter-se-
tambm constante, podendo escrever-se a seguinte expresso:
A concentrao mxima de biomassa (corresponde ao consumo total
de substrato) :



















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Perodo de Latncia
Quando se inicia uma fermentao, frequente o aparecimento de
um perodo de latncia.

Este tempo pode ser determinado pelo mtodo de Lodge e
Hinshelwood:



















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Quocientes metablicos

A taxa de consumo de substrato numa cultura microbiana :
Em que q
s
o quociente metablico.

O quociente metablico de uma cultura vem sempre afectado de um ndice
correspondente ao substrato:

q
G
quociente de consumo de glucose

q
C
quociente de consumo de carbono

Pode escrever-se, para o substrato consumido no crescimento durante o
intervalo de tempo dt:



















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Efeito da concentrao de substrato na velocidade de crescimento
O consumo de substrato regulada por uma cintica enzimtica do
tipo Michaelis-Menten:



















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Multiplicando ambos os membros por 1/X:
Substituindo q
s
= /Y
X/S
na relao anterior, obtm-se a conhecida
Relao de Monod:
Sendo
max
a taxa especifica mxima de crescimento e k
s
a constante
de saturao.



















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difcil determinar rigorosamente o valor de k
s
(10
-5
a 10
-6
mol/L)

Os valores de k
s
encontram-se normalmente abaixo dos limites de deteco
dos mtodos analticos disponveis;

difcil definir as condies ambientais de modo a ter resultados
comparveis;

k
s
varia com a estirpe utilizada;

As tcnicas disponveis so:

Medida instantnea da concentrao do substrato limitante num quimiostato
(cultura continua em estado estacionrio);

Medida das velocidades de crescimento iniciais com diferentes
concentraes iniciais de substrato em culturas descontinuas;

Medida das taxas de diluio criticas em quimiostato com diferentes
concentraes de substrato entrada;

Mtodo de estado estacionrio de Button.



















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A equao de Monod ainda actualmente a equao chave para
caracterizar a cintica de crescimento microbiano, no entanto outras
equaes tm sido propostas:
k
D
o parmetro que engloba a permeabilidade da parede, difuso do
substrato e tamanho da clula.



















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Produo e Crescimento microbiano
Um organismo consome substrato para diferentes objectivos:
Este modelo valido para a maior parte das situaes.

Os valores de Y e m so praticamente independentes da
velocidade de crescimento e parmetros de operao (pH meio)
dentro dos limites razoveis.



















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vulgar, em processos de fermentao, definir um rendimento
global:



















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Fase de arranque: as clulas esto a adaptar-se s novas condies de
cultura ( = 0) obviamente, desejvel que o tempo de durao desta fase
seja o mais curto possvel;

Fase de crescimento exponencial: a concentrao celular aumenta
exponencialmente com o tempo ( =
max
);

Fase estacionria: a concentrao celular total se mantm constante ( =
k
d
), embora a percentagem de clulas no viveis aumente com o tempo;

Fase de morte: para alm da diminuio das clulas viveis, ocorre
tambm a lise celular (k
d
> 0).



















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Influncia da concentrao de biomassa na taxa especifica
de crescimento
Normalmente considera-se que o crescimento microbiano segue
uma cintica de 1 ordem relativamente concentrao em
biomassa.

Na fase exponencial de crescimento em processo
descontnuo (Batch) e em operao em contnuo, tem-se:



















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Extenso da cintica de Monod fase de arranque
O t
lag
pode ser calculado pelo mtodo de Lodge e Hinshelwood:



















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Existem vrias relaes entre o tempo de arranque e o
tamanho do inculo.

Bergter e Knorr propem a seguinte extenso da cintica de
Monod, incluindo t
lag
:



















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Extenso da cintica de Monod fase estacionria
A expresso mais utilizada conhecida como lei logstica, o e
| so constantes empricas:



















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Extenso da cintica de Monod fase de morte celular
Existem vrias hipteses para modelar a morte celular (desde
formas exponenciais at formas abruptas):



















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Na equao de Monod pode incluir-se o parmetro k
d
(h
-1
), que
representa a taxa de morte celular.
A relao:
Permite, conhecendo k
d
, determinar
max
e k
s
.



















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O declnio da biomassa consequncia de dois factores: clulas
mortas e metabolismo endgeno.
Modelo cintico para metabolismo endgeno

A fonte de energia consumida no s para reaces macroscpicas
(como o crescimento) mas tambm para a manuteno da estrutura
celular, pelo que deve ser includo na equao de consumo de
substrato um termo de manuteno (m
s
).



















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Outros modelos para metabolismo endgeno:



















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Modelos cinticos para inibio por substrato e produto
Cintica de inibio por substrato:
Cintica de inibio pelo produto:



















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Modelos cinticos para a formao de produto
Segundo Gaden, podem distinguir-se quatro tipos fundamentais de
acumulao de produto:

Tipo 0: A produo de produtos do tipo 0 ocorre mesmo em clulas
em repouso que utilizam apenas uma pequena quantidade de
substrato para o seu prprio metabolismo.

Exemplo: Transformao de esterides e sntese de vitamina E por S.
Cerevisiae.


Tipo I: Processos em que a acumulao de produto est directamente
associado com o crescimento; este o caso dos metabolitos primrios,
em que a formao do produto est ligada ao metabolismo energtico.

Exemplo: Etanol e cido glucnico.



















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Tipo II: Processos que tm uma associao parcial ao crescimento e, como
consequncia, uma ligao indirecta ao metabolismo energtico.

Exemplo: cido ctrico e aminocidos.

Tipo III: Fermentaes em que no h ligao directa entre crescimento e
formao de produto e tambm nenhuma ligao (directa ou indirecta) com
metabolismos primrios (metabolismos secundrios).

Exemplo: Penicilina e Estreptomicina.



















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Cintica de substrato mltiplos
Em situaes reais, ocorrem casos complexos que no podem ser
tratados com as equaes anteriormente descritas.

No caso do crescimento num meio complexo, os componentes
facilmente utilizveis so consumidos rapidamente. Para a utilizao
dos restantes componentes, os enzimas responsveis pela sua
degradao tm que ser, primeiro, sintetizadas.

As clulas passam por muitas transies; daqui resulta uma srie de
fases de crescimento, cada uma com uma taxa de crescimento
sucessivamente decrescente.

Podem distinguir-se essencialmente trs situaes:

1. Utilizao sequencial de substrato;
2. Utilizao simultnea de substrato;
3. Sobreposio das duas situaes.




















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Cintica de substrato mltiplos
Cintica multisubstrato para uma
reaco com dois substratos:

a) diagrama concentrao/tempo
para utilizao estritamente
sequencial dos substratos
(crescimento diauxico);
b) utilizao de substrato
parcialmente sequencial e
parcialmente simultnea;
c) utilizao simultnea do
substrato.



















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Cintica de substrato mltiplos
Cintica da utilizao sequencial de substrato
( ) ( ) ( ) t s f s s
repr
,
1 2 1
+ =
f
repr
uma expresso formal que descreve a represso catablica no uso de
s
2
enquanto s
1
est presente.
Em crescimento diauxico foram propostas as seguintes
expresses para f
repr
:
( ) ( )
R
repr repr
K S
s f
S S
S
s f
+
=
+
=
1
1
1
2 1
2
1
Uma outra funo utilizada com o mesmo propsito :
( )
|
|
.
|

\
|

+
=
repr
s
s
L
repr
f
S K
K
t
t , s f
2
1
1

onde t
L2
um tempo de latncia diauxico.
A utilizao estritamente sequencial de substrato pode encontrar-
se, por exemplo, durante o fabrico de cerveja, onde a glucose, a
maltose e a maltotriose so utilizadas uma aps a outra.




















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Cintica de substrato mltiplos
Cintica da utilizao simultnea de substrato

O caso da utilizao simultnea comum em tratamento biolgico de
efluentes.
Uma equao de uso genrico :

=
i
i tot
r r
ou, utilizando cintica enzimtica:
X
S K
S
q q
i
i i S
i
i S tot S

|
|
.
|

\
|
+
=

,
max, , ,
onde K
S,i
uma constante para a reaco i e q
S,max,i
a contribuio da
reaco i para a taxa mxima, tal que:

=
i
i S S
q q
max, , max ,



















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Cintica de substrato mltiplos
Sobreposio das duas situaes

Uma das formas de descrever a utilizao de dois substratos com
utilizao parcialmente simultnea consiste em utilizar o conceito de
concentrao de substrato crtica, que se pode medir directamente.
O valor S
1,crit
a concentrao para a qual existe, durante um curto
perodo de tempo, utilizao simultnea de S
1
e S
2
e portanto o factor:
crit
S
S
f
, 1
1
1
1
1
+
=
pode substituir f
repr



















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Cintica de substrato mltiplos
Caso particular: Processos aerbios

Como seria de esperar, em processos aerbios, e alm do substrato,
tambm o O
2
pode ser limitante.

A modelizao cintica pode, neste caso, ser efectuada por uma
funo de limitao dupla por substrato:
( )
O K
O
S K
S
o s
o s
+

+
=
max
,
Influncia das limitaes transferncia
do oxignio, representadas por k
L1
a, no
crescimento