CAROTENOIDES, CONCEPTOS FUNDAMENTALES Y SU IMPORTANCIA EN EL HOMBRE

INTRODUCCIN3 PRIMERAS INVESTIGACIONES SOBRE FOTOSNTESIS 1.1 Resumen histrico de las primeras investigaciones sobre la fotosntesis4 CONCEPTOS FUNADAMENTALES SOBRE FOTOSNTESIS Y PIGEMENTOS FOTOSINTTICOS, ROL DE LOS CAROTENOIDES 1.1 Cloroplastos: estructuras y pigmentos fotosintticos6 1.2 Nociones sobre la absorcin de luz por vegetales8 1.3 Efecto Emerson: fotosistemas cooperativos11 CAROTENOIDES: CONCEPTOS Y FUNDAMENTOS 1.1 Pigmentos carotenoides: consideraciones estructurales y fisicoqumicas12 1.2 Estructura qumica...13 1.3 Propiedades fsico-qumicas15 CAROTENOIDES Y SUS DERIVADOS EN LA SALUD DEL HOMBRE 1.1 Concentraciones de Carotenoides, Tocoferol y Retinol en el Cerebro de Personas de Edad Avanzada18 1.2 Contenido en la dieta de carotenoides y vitaminas A, E, y C, y degeneracin macular avanzada relacionada con la edad20 1.3 Niveles Plasmticos de Retinol y Riesgo de Hepatocarcinoma..22 BIBLIOGRAFA....23

INTRODUCCIN Los pigmentos carotenoides constituyen un grupo de compuestos ubicuos en la naturaleza que realizan una serie de funciones que los hacen especiales. As, son considerados compuestos indispensables para la vida, fundamentalmente debido a las diferentes funciones que llevan a cabo en relacin con la fotosntesis tal y como se conoce hoy en da. Durante muchos aos, la importancia nutricional de los carotenoides se debi a que algunos de ellos poseen actividad provitamnica A, si bien el que el inters por estos isoprenoides se haya multiplicado en los ltimos aos se ha debido a una gran variedad de estudios que parecen indicar que actan como antioxidantes y que podran ser beneficiosos para la prevencin de diversas enfermedades crnicas humanas no transmisibles, si bien existe todava cierta controversia al respecto. En cualquier caso, las funciones y efectos debidos a estos pigmentos se deben a sus propiedades fsico-qumicas y que stas a su vez son consecuencia de su estructura qumica.

Resumen histrico de las primeras investigaciones sobre la fotosntesis

Antes del siglo XVIII los cientficos pensaban que los vegetales obtenan todos sus componentes del suelo. En 1727, Stephen Hales sugiri que parte de sus nutrientes provenan de la atmsfera, y que la luz participaba de alguna manera en el proceso. En aquellos mementos todava no se saba que el aire contena diferentes elementos en estado gaseoso. En 1771, Joseph Priestly, un clrigo y qumico ingls, descubri que las plantas verdes eran capaces de renovar el aire "viciado" por la respiracin de los animales y sugiri la participacin del O2 (aunque todava no se saba que este "aire desflogistado", como l lo llam, estaba formado per molculas). Posteriormente un medico holands, Jan Ingenhousz, demostr que la luz resultaba necesaria para la purificacin del aire. Descubri que las plantas tambin producan "aire viciado" en la oscuridad. De manera sorprendente (en la actualidad) esto le llev a recomendar sacar las plantas de las casas durante la noche, para evitar la posibilidad de que los ocupantes se intoxicaran! Gest (1988) revis este y otros experimentos pioneros que realiz Stephen Hales a principios del siglo XVIII.

Alto Carbohidrato
Respiracin: transporte espontaneo de electrones por O2 Fotosntesis: transporte de electrones impulsados por la luz

Bajo

Figura 01. Relaciones energticas de fotosntesis y respiracin

En 1782, Jean Senebier demostr que la presencia del gas "nocivo" que producen los animales y las plantas en la oscuridad (CO2) estimulaba la generacin de "aire purificado" (O2) en presencia de luz. As, ya en aquella poca se demostr la participacin de dos gases en la fotosntesis. Los trabajos de Lavoisier y otros investigadores dejaron claro que estos gases eran en realidad CO2 y O2. En 1804, N. T. de Saussure propuso la participacin del agua al efectuar las primeras cuantificaciones de la fotosntesis. Descubri que las plantas ganaban ms peso seco durante la fotosntesis del que se poda explicar por la diferencia entre el peso del CO2 absorbido y el peso del O2 liberado. Atribuy correctamente la diferencia a la captacin de H2O. Tambin se dio cuenta de que durante la fotosntesis se intercambiaban volmenes ms o menos iguales de CO2 y O2. En 1864, Julius Sachs demostr la naturaleza del otro producto qumico de la fotosntesis (es decir, de la materia orgnica), cuando observ el crecimiento de granos de almidn (granos amilceos) en cloroplastos iluminados. El almidn slo se detectaba en las zonas de la hoja que se encontraban expuestas a la luz. Entonces se demostr que la reaccin general de la fotosntesis era la siguiente: nCO2 + nH2O + luz (CH2O)n + nO2 (1)

En esta reaccin, (CH2O)n es una forma abreviada de representar al almidn y otros carbohidratos mediante una frmula emprica. El almidn es el producto fotosinttico ms abundante en el mundo que est formado por cloroplastos. Otro descubrimiento importante fue el de C. B. van Niel, quien a comienzos de la dcada de los 30 indic la similitud existente entre el proceso fotosinttico general en las plantas verdes y el de ciertas bacterias. Se saba que diversas bacterias reducan el CO2 utilizando la energa luminosa y una fuente de electrones distinta del agua. Algunas de estas bacterias utilizan cidos orgnicos, tales como cido actico o el succnico, como fuentes de electrones, mientras que aqullas a las que van Niel prest especial atencin utilizan H2S y depositan azufre como sub-producto. Se pens que la ecuacin fotosinttica general para estas bacterias era la siguiente: nCO2 + 2nH2S + luz (CH2O)n + nH2O + 2nS (2)

Al comparar la reaccin 2 con la 1 se puede comprobar la analoga existente entre las funciones de H2S y H2O, y entre las de O2 y el azufre. Esto sugiri a van Niel que el O2 liberado por las plantas provena del agua y no del CO2. Hacia finales de la dcada de los 30 apoyaron esta idea Robin Hill y R. Scarisbrick, en Inglaterra, ya que con su trabajo demostraron que los cloroplastos aislados, as como fragmentos de los mismos, son capaces de liberar O2 en presencia de luz si se les proporciona un aceptor adecuado para los electrones que se extraen del H2O. Los primeros aceptores de electrones que se proporcionaron a los cloroplastos fueron algunas sales frricas (Fe+3), que se reducan a la forma ferrosa (Fe+2), Esta "rotura" del agua provocada por la luz (fotlisis), en ausencia de la fijacin del CO2, se conoci con el nombre de reaccin de Hill. Los trabajos de Hill y Scarisbrick demostraron que, al menos para ciertas reacciones de la fotosntesis, no es necesaria toda la clula, y que la liberacin de O2 inducida por la luz no se encuentra obligadamente unida a la reduccin de CO2. En 1941 apareci una evidencia ms convincente de que el O2 liberado proviene del H2O, con el trabajo de Samuel Ruben y Martin Kamen. Proporcionaron H2O al alga verde Chlorella con 18O, un istopo pesado no radiactivo del oxgeno que puede detectarse mediante un espectrmetro de masas. El O2 que se libera en la fotosntesis estaba marcado con 18O, lo que sustenta la hiptesis de Niel. Por razones tcnicas, los experimentos de Ruben no podan probar que el O2 proceda por completo del H2O, pero investigaciones subsecuentes de Man Stemler y Richard Radmer (1975) parecen proporcionar esa prueba. Por ello, hay que modificar la ecuacin resumida para la fotosntesis que se da en la Reaccin 1 para incluir dos molculas de H2O como reactivos: nCO2+2nH2O+luz (CH2O)n+nO2+nH2O (3)

En 1951 se descubri que un constituyente natural de los vegetales, una coenzima que contiene vitamina B (niacina o nicotinamida), y que se denomina fosfato dinucletico de nicotinamida y adenina (abreviado NADP+) tambin era capaz de comportarse como reactivo de Hill al aceptar electrones del agua en reacciones que se producen en membranas aisladas de tilacoides o en cloroplastos fracturados. Este descubrimiento estimul de nuevo la investigacin de la fotosntesis, y como ya se saba que la forma reducida del NADP+, el NADH, es capaz de transferir electrones a varios compuestos vegetales, se poda suponer que su funcin normal en los cloroplastos es la de reducir el CO2. Por consiguiente, una de las dos funciones esenciales de la luz en la fotosntesis consiste en impulsar a los electrones provenientes del H2O para reducir el NADP+ a NADH; mientras que la otra funcin consiste en proporcionar energa para la formacin de ATP a partir de ADP Pi, tal como vamos a explicar a continuacin. La conversin de ADP y Pi a ATP en los cloroplastos se descubri en el laboratorio de Daniel Aman en la University of California, en el campus Berkeley, durante 1954. Anteriormente, el nico mecanismo importante que se conoca para la formacin de ATP era la respiracin, especialmente las reacciones que reciben el nombre de fosforilacin oxidativa, y que se llevan a cabo en las mitocondrias. Arnon descubri que el ATP se sintetiza en forma de cloroplastos aislados slo en presencia de luz, lo que se llam fosforilacin fotosinttica, o simplemente fotofosforilacin. Este proceso de formacin de ATP mediante fotofosforilacin se puede resumir de la forma siguiente: ADP + Pi + luz ATP + H2O (4)

La fotofosforilacin en los cloroplastos es la causa de que en las hojas se realice mucha ms formacin de ATP durante la luz del da que fotofosforilacin en las mitocondrias de las mismas hojas, por lo que claramente tiene gran importancia cuantitativa. Sin embargo, hay que advertir que la ecuacin resumida para la fotosntesis (es decir, la reaccin 3) no dice nada sobre compuestos del tipo de ATP, NADPH o NADP+. La razn es que, cuando se forman ATP y NADPH, la energa de ambos se utiliza en el proceso de la reduccin de CO2 y en la sntesis de carbohidratos, donde vuelven a liberarse ADP, Pi y NADP+. As, ADP y Pi convierten rpidamente en ATP, mediante la energa luminosa, mientras que el ATP se degrada con la misma rapidez cuando la fotosntesis se efecta a un ritmo constante.

Cloroplastos: estructuras y pigmentos fotosintticos

En diversos tipos de vegetales se pueden encontrar cloroplastos de muchos tamaos y formas. Esos cloroplastos surgen de diminutos protoplastidios (plstidos inmaduros, pequeos y casi incoloros, con pocas o ninguna membrana interna). Casi siempre, los protoplastidios se derivan slo de vulos sin fecundar; el esperma no contribuye en absoluto. Los protoplastidios se dividen a medida que se va desarrollando el embrin, y se convierten en cloroplastos al formarse los tallos y las hojas. Los cloroplastos jvenes tambin se dividen de una forma activa, especialmente cuando el rgano que los contiene se expone a la luz, por lo que a menudo cada clula de una hoja madura contiene unos cuantos cientos de cloroplastos. La mayora de los cloroplastos se aprecian con facilidad al microscopio ptico, pero su estructura fina slo pudo revelarse por medio de microscopa electrnica. Suponiendo que los organismos pueden dividirse de manera lgica en cinco reinos, los cloroplastos se presentan en casi todos los miembros del reino Plantae y en ciertas algas, o miembros semejantes a stas, del reino Protista. Las nicas excepciones que se conocen son algunas angiospermas parsitas e incoloras. Las cianobacterias y otras bacterias fotosintticas del reino Monera carecen de cloroplastos, pero poseen pigmentos fotosintticos embebidos en membranas especializadas, como sucede en el caso de los cloroplastos. No se presentan cloroplastos en los reinos Animalia y Fungi (hongos). Ahora slo discutiremos los cloroplastos tpicos de las plantas vasculares, las briofitas y numerosas algas verdes del reino Plantae. La Fig. 02 muestra la estructura de un cloroplasto de una hoja. Cada cloroplasto se encuentra rodeado por un sistema de doble membrana o envoltura que controla el trnsito de molculas hacia dentro y hacia fuera. En el interior del cloroplasto se encuentra el material amorfo, gelatinoso y rico en enzimas llamado estroma, que contiene enzimas que convierten el CO2 en carbohidratos, especialmente almidn. Embebidos por todo el estroma se encuentran los tilacoides (del griego tilakos, "saco" o "bolsita"), que contienen pigmentos y en los que se emplea la energa de la luz para oxidar el H2O y formar ATP y NADPH, que son ricos en energa y necesarios a su vez para que el estroma convierta el CO2 en carbohidratos. En algunas porciones del cloroplasto se encuentran pilas de tilacoides que reciben el nombre de grana (cada pila o saco individual es un granum o elemento de grana). La regin en la que un tilacoide se encuentra en contacto con otro recibe el nombre de regin apresada.
Membrana plasmtica Grana Membrana tilacoidal Estroma Membrana del cloroplasto (externa e interna)

Grnulo de almidn

Figura 02. Estructura de un cloroplasto

Estas regiones del tilacoide efectan fotorreacciones ligeramente diferentes a las que se realizan en las regiones tilacoidales sin apresar y en los tilacoides estromticos, ya que ambos se encuentran en contacto directo con el estroma. Los tilacoides estromticos son tilacoides ms alargados, que conectan un elemento de grana con otro y se extienden por todo el estroma. Muchas veces llegan a formar parte de uno o ms grana, situacin en la que, en los puntos de contacto, no existe distincin obvia entre ellos y los tilacoides de la grana. La Fig. 03 es una interpretacin tridimensional de la relacin entre los tilacoides estromticos y los de la grana. Observe que existe una cavidad, comnmente llamada luz o lumen, entre las dos membranas de cada tilacoide. Este lumen se encuentra lleno de agua y de sales disueltas, y adems tiene una funcin especial en la fotosntesis.

Granum

Lumen de tilacoide

Tilacoides

Tilacoide de estroma

Lumen

Zona apresada Zona libre

Figura 03. Interpretacin tridimensional de la disposicin de las membranas internas en el cloroplasto, realizando la relacin entre los tilacoides estromticos y los del grana

Los pigmentos que hay en las membranas tilacoidales consisten principalmente en dos tipos de clorofilas verdes, la clorofila a y la clorofila b. Tambin aparecen pigmentos amarillo-naranja que se clasifican como carotenoides. Existen dos tipos de carotenoides: los carotenos, que son hidrocarbonos puros, y las xantofilas, que contienen oxgeno. Ciertos carotenoides (en especial la violaxantina, que es una xantofila) tambin aparecen en la envoltura del cloroplasto, dndole cierto color amarillento, mientras que las clorofilas nunca se presentan en las envolturas. La Fig. 04 muestra las estructuras de las clorofilas a y b, as como las de algunos carotenoides. En la mayora de los vegetales, incluyendo las algas verdes, el caroteno y la xantofila lutena son los carotenoides que ms abundan en los tilacoides.

En la bacterioclorofila

Enlace saturado en la bacterioclorofila

Clorofila a

En la Ficocianobilina

Ficoeritrobilin a

Enlace insaturado en la Ficocianobilina

- Caroteno

Lutena

Figura 04. a) las clorofilas a y b y la bactericlorofila, principales colectores de energa luminosa. b) Ficoeritrobilina y
Ficocianobilina (ficobilinas), pigmentos antena en cianobacterias y algas rojas. c) el -caroteno y d) Lutena, pigmentos accesorios.

La microscopia electrnica no proporciona informacin sobre cmo se disponen las clorofilas y los carotenoides en los tilacoides, pero existen otras tcnicas que muestran que todas las clorofilas, as como la mayora (o todos) de los carotenoides se encuentran embebidos en los tilacoides, y estn unidos mediante enlaces no covalentes a molculas de protena. En conjunto, los pigmentos del cloroplasto representan cerca de la mitad del contenido lipdico en las membranas tilacoidales, mientras que la otra mitad est compuesta principalmente por galactolpidos, con pequeas cantidades de fosfolpidos. La cantidad de esteroles es escasa o nula, en contraste con lo que se observa en otras membranas vegetales. Los galactolpidos y los fosfolpidos conforman una bicapa tpica de las membranas. Las porciones de cidos grasos de los lpidos tilacoidales son ricas en cido linolnico (con tres enlaces dobles) y cido linoleico (con dos enlaces dobles). Estos cidos grasos insaturados hacen que las membranas tilacoidales sean inusualmente fluidas, por lo que algunos compuestos que se localizan en su interior adquieren gran movilidad. En los cloroplastos tambin se presentan ADN, ARN, ribosomas y, por supuesto, diversas enzimas. Todas estas molculas se encuentran principalmente en el estroma, donde se produce tanto la transcripcin como la traduccin. El ADN del cloroplasto (es decir, el genoma) existe en forma de 50 o ms crculos de cadenas dobles superenrolladas por plstido. Parece que muchos de los genes de plstido codifican todas las molculas de ARN de transferencia (unas 30) y ARN ribosmico (cuatro) que los plstidos utilizan en la traduccin. Existen unos 85 genes ms que codifican las protenas que participan en la transcripcin, la traduccin y la fotosntesis, pero la mayora de las protenas que se localizan en los plstidos se codifican mediante los genes del ncleo.

Nociones sobre la absorcin de luz por vegetales

Para averiguar por qu la luz induce la fotosntesis, hay que aprender algunas cosas sobre sus propiedades. En primer lugar, la luz tiene caractersticas de partcula y de onda. La luz representa slo la porcin de la energa radiante con longitudes de onda visibles para el ojo humano (comprendidas aproximadamente entre 390 y 760 nanmetros, nm). Esta es una regin muy reducida del espectro electromagntico. Cuando se dice que la luz tiene la forma de cuantos o fotones (paquetes discretos de energa, cada uno asociado a una longitud de onda especfica) se est haciendo referencia a la naturaleza particulada de la luz. La energa de cada fotn es inversamente proporcional a su longitud de onda, por lo que las longitudes de onda del azul y del violeta tienen fotones ms energticos que las longitudes del rojo y del anaranjado, que son ms largas. Un principio fundamental de la absorcin de luz, que suele recibir el nombre de ley de Stark Einstein, es que cualquier molcula slo puede absorber un fotn al mismo tiempo, y que ese fotn producir la excitacin de un solo electrn. Los electrones de valencia (es decir, de enlace) especficos en orbitas que tienen un estado fundamental (basal) estable son los que casi siempre resultan excitados; cada uno de estos electrones puede alejarse de su estado basal respecto al ncleo (con carga positiva) hasta una distancia que corresponde a una energa exactamente igual a la energa del fotn que se absorbi (consulte la Fig. 05). Una molcula de pigmento en esta si tuacin est en un estado excitado, y esta energa de excitacin es la que se utiliza en la fotosntesis.

Resonancia inductiva

Transferencia de

Transferencia de

Figura 05. La excitacin que producen las luces roja o azul llevan al mismo nivel energtico final (A menudo se denomina primer singlete excitado).

Las clorofilas y otros pigmentos pueden permanecer en estado de excitacin slo durante periodos muy cortos, casi siempre de una mil millonsima de segundo (es decir, un nanosegundo) o menos. Como muestra la Fig. 05, la energa de excitacin puede perderse por completo por la liberacin de calor que se presenta cuando el electrn regresa a su estado banal. Esto es precisamente lo que sucede en ese momento con los electrones contenidos en la tinta de estas palabras. Una segunda forma en la que algunos pigmentos (incluyendo la clorofila) pueden perder energa de excitacin es debido a una combinacin de fluorescencia y prdida de calor (la fluorescencia es la produccin de luz que acompaa a la rpida disminucin de energa en los electrones que se encuentran en estado excitado). La fluorescencia de la clorofila slo produce luz de color rojo oscuro cuya longitud de onda puede verse con facilidad cuando se ilumina una solucin de clorofila a o b lo suficientemente concentrada, o bien una mezcla de pigmentos de cloroplasto, especialmente con radiaciones azules o ultravioletas. En la hoja, la fluorescencia es dbil porque la energa de excitacin se utiliza en la fotosntesis. La Fig. 05 explica, en trminos energticos, por qu en la fotosntesis la luz azul es siempre menos eficiente que la luz roja. Despus de excitarse mediante un fotn azul, el electrn de una clorofila siempre pierde su contenido energtico con extrema rapidez, al liberar calor, lo que lo sita en un nivel energtico menor. Sin embargo, cuando se absorbe un fotn rojo este nivel se alcanza con luz roja de menor energa sin esa prdida de calor. Desde este nivel inferior, se pueden presentar la prdida adicional de calor, la fluorescencia o la fotosntesis. Para que se produzca la fotosntesis es necesario que se transfiera la energa de los electrones excitados de varios pigmentos a un pigmento colector de energa, es decir a un centro de reaccin. Hay dos tipos de centros de reaccin en los tilacoides, ambos consistentes en molculas de clorofila a, que son especiales por estar asociadas con protenas particulares y otros componentes de la membrana. La Fig. 05 ilustra el hecho de que la energa en un pigmento excitado puede transferirse a un pigmento adyacente, y de ste a otro pigmento, y as hasta que, por ltimo, la energa llega al centro de reaccin. Existen diversas teoras para explicar la emigracin de la energa dentro de un grupo de molculas de pigmento adyacentes entre si, pero la ms popular de ellas establece que la energa emigra por transferencia de un excitn, mediante resonancia inductiva. No vamos a explicar esta teora, pero hemos de indicar que la excitacin de cualquiera de las muchas molculas de pigmento en un tilacoide posibilita una colecta momentnea de la energa luminosa que hay en el centro de reaccin de una clorofila a. Las hojas de la mayora de las especies absorben ms del 90% de las longitudes de onda del violeta y del azul que inciden sobre ellas, y un porcentaje casi tan elevado de las correspondientes al rojo y al anaranjado. Casi toda esta absorcin la llevan a cabo los pigmentos del cloroplasto. En los tilacoides cada fotn es capaz de excitar a un electrn de un carotenoide o de una clorofila. Las clorofilas son verdes porque absorben de manera poco eficiente las longitudes de onda del color verde, de manera que las reflejan o las transmiten. Se puede utilizar un espectrofotmetro para medir la absorbancia relativa de diversas longitudes de onda luminosas por un pigmento purificado. Un grfico en el que se representa esta absorcin en funcin de la long. de onda recibe el nombre de espectro de absorcin. En la Fig. 06A se muestran los espectros de absorcin de las clorofilas a y b. Dichos espectros revelan que, in vitro, se absorbe muy poco de la luz verde y verdeamarilla comprendidas entre 500 y 600 nm, y que ambas clorofilas absorben intensamente las long. de onda violeta, azul, anaranjada y roja. La mayora de los carotenoides (tanto -caroteno como xantofilas) de los tilacoides transfieren de una forma eficiente su energa de excitacin a los mismos centros de reaccin que las clorofilas, por lo que tambin contribuyen a la fotosntesis. La Fig. 06B muestra los espectros de absorcin del caroteno y la lutena. Estos pigmentos in vitro, slo absorben longitudes de onda violeta y azul. Reflejan y transmiten los colores verde, amarillo, anaranjado y rojo; una combinacin que, para nosotros, aparece como amarillo. Los carotenoides adems de comportarse corno pigmentos colectores de luz, que contribuyen a la fotosntesis, protegen a las clorofilas contra la destruccin oxidativa por el O2 cuando los niveles de irradiancia son elevados.

Clorofila a Clorofila b

Lutena Coeficiente de absortividad

-Caroteno

Longitud de onda (nm)

Comparada con el espectro de absorcin de carotenoides y clorofilas purificadas, la accin de la luz verde y de la amarilla para inducir fotosntesis en plantas con semilla, y la absorcin de estas longitudes de onda por parte de las hojas, es sorprendentemente elevada. Por otra parte, parecer que los carotenoides y las clorofilas son los nicos pigmentos que absorben estas longitudes de onda. La razn principal de que los espectros de accin sean superiores a los de absorcin para las longitudes de onda correspondientes al amarillo y al verde es que, aunque la probabilidad de que cualquiera de estas longitudes de onda se absorba es pequea, las longitudes de onda que no se absorben se reflejan repetidamente en la compleja red de clulas fotosintticas, de cloroplasto a cloroplasto. Con cada reflexin se absorbe un pequeo porcentaje adicional de estas longitudes de onda hasta que, por ltimo, la mayora de las hojas absorben la mitad o ms y se induce la fotosntesis. Esta reflexin interna no se presenta en la celda (o en la cubeta de un espectrofotmetro que contenga clorofila disuelta), por lo que la absorbancia de las longitudes de onda correspondientes al color verde es muy baja (consulte la Fig. 06A). Adems, la absorcin in vitro que realizan estos pigmentos en un solvente orgnico se produce a longitudes de onda ms cortas que cuando se encuentran en los tilacoides del cloroplasto.
1

Figura 06. A) espectros de absorcin de las clorofilas a y b disueltas en ter dietlico. El coeficiente de absortividad que se ha utilizado aqu es igual a la absorbancia (densidad ptica) de una solucin con una concentracin de 1g/L en una profundidad (longitud de trayecto ptico) de 1cm. B) espectros de absorcin de -caroteno en hexano y de la lutena (una xantofila) en etanol. El coeficiente de absortividad utilizado es el mismo que en la figura 06A.

Cuando se comparan los efectos de longitudes de onda diferentes sobre la relacin (o tasa) fotosinttica, asegurndose de que no se aade demasiada energa de cualquier longitud de onda (porque el proceso se saturara), se obtiene un espectro de accin. Los espectros de accin deis fotosntesis, as como otros procesos fotobiolgicos, ayudan a identificar al pigmento implicado, porque estos espectros coinciden a menudo estrechamente con el espectro de absorcin de cualquier pigmento participante. Para que la luz sea efectiva, debe absorberse. Las relaciones fotosintticas relativas para varias especies de dicotiledneas herbceas y pastos pueden trazarse en funcin de la longitud de onda que incide sobre cierta unidad de rea foliar. Inada (1976) obtuvo unos resultados similares. Todas las especies presentan un pico principal en la regin correspondiente al rojo, as corno un pico distintivo menor en la regin del azul; ambos picos resultan de la absorcin de luz por clorofilas y carotenoides1. En rboles deciduos se presentan resultados similares. Sin embarco, las conferas muestran una respuesta menor a la luz azul porque sus agujas cerosas reflejan ms la luz azul, y porque contienen cantidades elevadas de carotenoides, algunos de los cuales absorben la luz azul pero no transfieren la energa las clorofilas para que stas realicen la fotosntesis. En particular, el abeto azul y el abeto verdeazulado de Colorado fotosintetizan poco con luz azul o violeta.

Cuando los datos se trazan en funcin de la energa que hay en cada longitud de onda que se aplica se obtienen espectros de accin diferentes, con picos menores en la regin del azul. Esto se debe a que, aunque un fotn azul que absorbe un pigmento fotosintticamente activo es tan eficaz como cualquier otro fotn, contiene ms energa que otros, y una parte mayor de esta energa se pierde en forma de calor. Por ello, la luz azul puede ser igual de eficaz que la roja en la fotosntesis, pero nunca tan eficiente. En muchas algas, los pigmentos llamados ficobilinas y carotenoides (las ficoeritrinas rojas, o las ficocianinas azules) absorben luz, originando la actividad fotosinttica. El espectro de accin de estas algas es muy distinto al de las plantas con semilla.

En las hojas vivas, la absorcin de los carotenoides se desplaza desde la porcin azul del espectro hacia la verde, de manera que cierta cantidad de actividad fotosinttica en la porcin verde, a unos 500 nm, se debe a la absorcin que realizan los carotenoides activos. Ambos tipos de clorofilas presentan slo desplazamientos pequeos in vivo en la regin azul, pero la clorofila a muestra varios desplazamientos en la regin del rojo. La asociacin de clorofila a con las protenas de los tilacoides produce picos de actividad adicionales en la regin del rojo. Nos interesan dos de estos picos menores, que son los que se presentan alrededor de los 680 y los 700 nm, porque se originan partiendo de molculas de clorofila a situadas en ambientes qumicos especiales y que actan como pigmentos de centros de reaccin. Estos pigmentos se abrevian corno P680 y P700.

Efecto Emerson: fotosistemas cooperativos

En la dcada de los 50, Robert Emerson, de la University of Illinois, se interes en la razn por la que la luz roja con longitudes de onda mayores de 690 nm es tan ineficiente para inducir actividad fotosinttica, aunque gran parte de ella se absorbe por la clorofila a in vivo. Su equipo de investigacin descubri que si se proporciona una luz de longitud de onda ms corta al mismo tiempo que otras longitudes del rojo (que son ms largas), la fotosntesis era an ms rpida que la suma de las tasas individuales que se producen al aplicar por separado cualquiera de ambos colores. A este sinergismo o intensificacin se le denomin efecto Emerson. Este efecto es como si las longitudes de onda largas del rojo fuesen tiles a las longitudes de onda ms cortas, o viceversa. Ahora se sabe que en la fotosntesis cooperan dos grupos independientes de pigmentos o fotosistemas, y que adems las longitudes de onda largas slo las absorbe un fotosistema, el fotosistema I (FS I). El segundo fotosistema, el fotosistema II (FS II), absorbe longitudes de onda menores de 690 nm; para que se presente una fotosntesis mxima, las longitudes de onda que absorben ambos sistemas deben trabajar a la par. Normalmente los dos fotosistemas cooperan para propiciar la fotosntesis a todas las longitudes de onda menores de 690 nm, lo que incluye al rojo, anaranjado, amarillo, verde, azul y violeta, ya que ambos fotosistemas absorben esas longitudes. La importancia del trabajo de Emerson es que sugiri la presencia do dos fotosistemas distintos. Sin embargo, fueron R. Hill y E Bendall (1960) quienes propusieron por primera vez, y con claridad, cmo pueden cooperar dos fotosistemas, propuesta que despus se enriqueci con el trabajo de L. N. M. Duysens y sus colaboradores, en los Pases Bajos. En la reaccin 5 se resume cmo FS I y FS II utilizan la energa luminosa para oxidar H2O y transferir cooperativamente los dos electrones disponibles de sta al NADP+, formando as NADPH:

FS II

+ Luz

FS I O2 +

+ Luz

2NADPH +

2H+ (5)

2H2O

4H+ 2NADP+

Pigmentos carotenoides: consideraciones estructurales y fisicoqumicas

Los carotenoides son compuestos ubicuos en la naturaleza, cuya presencia en diversas estructuras de plantas y en gran variedad de animales, algas, hongos y bacterias se ha descrito desde hace dcadas. Estos pigmentos no slo son responsables del color de flores y frutos para favorecer la polinizacin y dispersin de semillas, o de estructuras animales como las plumas y picos de algunos pjaros, el exoesqueleto de crustceos y el msculo o la piel de algunos peces para otros fines, en algunos casos no muy claros, sino que realizan otras funciones que los hacen pigmentos especiales. As, son considerados compuestos indispensables para la vida, fundamentalmente debido a las funciones que llevan a cabo en relacin con la fotosntesis, hasta el punto de que sin ellos, la fotosntesis, tal y como se conoce hoy en da, sera inviable. As, se ha demostrado ampliamente que como consecuencia de la inhibicin de la enzima fitoenosintasa con herbicidas se producen fenmenos de fotooxidacin que conducen a la destruccin de las molculas de clorofila. Durante aos, la importancia nutricional de los carotenoides se debi sobre todo al hecho de que algunos poseen actividad provitamnica A, la cual sigue siendo objeto de estudio en la actualidad (ver Fig. 07). No obstante, el que el inters por estos compuestos isoprenoides se haya multiplicado no solo en Latinoamrica, sino a nivel mundial, se ha debido a estudios en los que se concluye que son compuestos antioxidantes y beneficiosos para la prevencin de diversas enfermedades, como ciertos tipos de cncer, trastornos oculares y vasculares, etc., si bien existe an cierta controversia al respecto. As, el inters actual en los pigmentos carotenoides desde un punto de vista nutricional es claro, tal que los artculos de revisin en los que se discute las propiedades antioxidantes y beneficiosas para la salud de los humanos son numerosos, as como aquellos que tratan sobre la biodisponibilidad de los mismos.

Oxidacin del aldehdo a cido

cido retinoico (d)

Seal hormonal a las clulas epiteliales

Luz visible

Punto de ruptura

Oxidacin del alcohol a aldehdo

Seal neuronal al cerebro

Vitamina A1 (Retinol) (b)

11-cis-Retinal (Pigemnto visual) (c)

Todo-trans-Retinal (e)

-caroteno (a) Figura 07. Vitamina A1, sus precursores y derivados. (a) el -caroteno es el precursor de la vitamina A1. Se resaltan las unidades estructurales de isopreno mediante lneas de trazos rojas. La rotura de -caroteno produce dos molculas de Vitamina A1. (b) la oxidacin en C-15 convierte el retinol en su aldehdo retinal (c) y la posterior oxidacin produce acido retinoico (d), una hormona que regula la expresin gnica. La rodopsina (no mostrada), pigmento visual muy utilizado en la naturaleza, esta formada por la combinacin del retinal con la protena opsina. En la oscuridad, el retinal de la rodopsina est en la forma 11-cis (c). Cuando se excita una molcula de rodopsina con luz visible, el 11-cis-retinal sufre varias reacciones fotoqumicas que lo convierten en todotras-retinal (e) forzando un cambio en la forma de la molcula completa de rodopsina.

En relacin con todo ello, resulta claro afirmar que las funciones y efectos de estos pigmentos se deben a sus propiedades fsicas y qumicas, las cuales son consecuencia de su estructura qumica. Debido a las acciones beneficiosas de las que son responsables, y sobre todo a su creciente importancia en el campo de la Nutricin, el objetivo de esta revisin es la descripcin de dichas caractersticas.
Actividad provitamnica A de algunos carotenoides en el hombre Retinol -caroteno (100%) (100%) -caroteno 17 100 13-cis--caroteno 9-cis--caroteno 6 50 -caroteno (all-trans) 8-9 50 -criptoxantina 8-10 50 -caroteno 50 -apo-8-carotenal 12 50-60 -apo-10-carotenal 0 0 -criptoxantina 0 0 Lutena 0 0 Zeaxantina 0 0 Licopeno 0 0 Fitoeno 0 0 Fitoflueno 0 0
*Adaptado de Zechmeister, 1962; Bauerfeind, 1981; Simpsom, 1983. (1) Segn las ltimas DRI (2001) para vitamina A, los valores de equivalentes de actividad en retinol de los carotenoides a partir de alimentos seran la mitad de los especificados hasta el presente e indicados en esta tabla (1 Eq. Actividad retinol = 12 g -caroteno o 24 g otros provitamnicos). (2) Valores segn Zechmeister, 1944. (3) Valores segn Rodrguez-Amaya, 1997.

(2) 100 50-54 50-60 42-50 72 -

(3) 100 53 38 53 57 42 -

Estructura qumica
Como ocurre con cualquier compuesto qumico, las funciones de los carotenoides son debidas en ltima instancia a su estructura qumica. En el caso particular de estos isoprenoides, la caracterstica estructural ms llamativa es el sistema de d.e.c. (d.e.c.) caracterstico de sus molculas, que es el principal responsable de su espectro de absorcin, reactividad, forma, localizacin en estructuras subcelulares y de su papel en procesos de transferencia de energa. As, el nmero de d.e.c. no slo afecta a sus propiedades de absorcin de luz y por tanto a su color, sino tambin a su reactividad frente a radicales, a la forma de la molcula y a su efectividad en los procesos de transferencia de energa dentro del aparato fotosinttico. Qumicamente la mayora de los carotenoides son tetraterpenoides, compuestos de 40 tomos de carbono formados por ocho unidades isoprenoides unidas de forma que la secuencia se invierte en el centro de la molcula. Es decir, la unin de dichas unidades es cabeza-cola, excepto en el centro de la molcula, donde es cabeza-cabeza. Debido a ello, los dos grupos metilo centrales de la cadena polinica estn separados por seis tomos de carbono, mientras que el resto estn separados por cinco. Algunos carotenoides son acclicos, si bien la mayora contienen anillos a uno o ambos extremos de la molcula. Considerando los elementos qumicos presentes en sus molculas, los carotenoides pueden dividirse en dos grandes grupos: carotenos, que son hidrocarburos, y xantfilas, que contienen tomos de oxgeno. ste puede estar presente en forma de grupo hidroxilo (zeinoxantina, lactucaxantina, etc.), metoxilo (esferoidenona, espiriloxantina, etc.), epxido (anteraxantina, licopeno-1,2-epxido, etc.), carbonilo (capsantina, esferoidenona, etc.) o carboxilo (norbixina, neurosporaxantina, etc.), principalmente. Otros grupos oxigenados presentes en carotenoides son acetatos (fucoxantina, dinoxantina, etc.), lactonas (peridinina, urilido, etc.) y sulfatos (caloxantina-3-sulfato, nostoxantina- 3-sulfato, etc.).

Figura. 08

-apo-8-carotenal

Crocetina

Peridinina

Decaprenoxantina

Semi-- carotenona

Rodoxantina

Las xantfilas hidroxlicas pueden existir en la naturaleza en estado libre o esterificadas con cidos grasos (palmtico, linoleico, linolnico, esterico, mirstico, lurico, oleico, etc.) en pimientos y derivados, patatas, mango, ctricos, etc. Precisamente, la esterificacin de carotenoides est suscitando gran inters recientemente, concretamente en relacin a la biodisponibilidad de los pigmentos, a su efecto en las reacciones de los carotenoides con radicales libres y a su papel durante la maduracin de frutos. Existen asimismo glucsidos (crocina, zeaxantina monoramnsido, etc.) y glucosil steres de xantfilas (crocetina monoglucosil ster, glucosil ster del cido diapolicopenodioico, etc.), los cuales se han descrito en estigmas de azafrn, frutos de gardenia, bacterias, etc. Los carotenoides pueden encontrarse adems formando complejos hidrosolubles estables con protenas, lipoprotenas o glucoprotenas sobre todo en animales invertebrados acuticos como gambas, langostas y cangrejos, entre muchos otros. No todos los carotenoides constan de ocho unidades isoprenoides, ya que algunos, denominados apocarotenoides, poseen un esqueleto de menos de 40 tomos de carbono, debido probablemente a escisiones en uno (por ejemplo el -apo-8-carotenal, pigmento presente en el nspero y en ctricos, entre otras fuentes) o ambos extremos de la molcula (como por ejemplo la crocetina, pigmento caracterstico del azafrn (Fig. 08). Otros apocarotenoides han sido identificados en diversas fuertes, como las semillas de Bixa orellana, el pimiento, flores de Boronia megastigma, etc. Otros carotenoides con un nmero de tomos de carbono diferente de 40 son los norcarotenoides, como la peridinina, en los que uno, dos o tres tomos de carbono han sido eliminados del esqueleto

hidrocarbonado, o los secocarotenoides (como la -carotenona) en los que se ha roto un enlace entre carbonos adyacentes (excepto los carbonos 1 y 6 de anillos). Otros carotenoides poseen 45 o 50 tomos de carbono, y se forman por la adicin de unidades isoprenoides a los grupos terminales, como por ejemplo la decaprenoxantina. En cuanto a los retrocarotenoides (como la rodoxantina), la posicin de los dobles enlaces a lo largo de la cadena polinica est invertida, de forma que los carbonos 15 y 15 estn unidos por un enlace simple (Figura 08).
Figura 08. Estructuras qumicas de -apo-8-carotenal, crocetina, peridinina, decaprenoxantina, semi--carotenona y rodoxantina.

Debido a la presencia del sistema de d.e.c., podran existir, en teora, muchos ismeros geomtricos de cada carotenoide, si bien, debido a impedimentos estricos, slo algunos son estables. La mayora de los carotenoides naturales son ismeros todo-trans (todo-E), aunque tambin existen ismeros cis (ismeros Z) en fuentes naturales, como es el caso de la bixina, presente como (9Z)-bixina en las semilla de Bixa orellana, y del fitoeno, presente comnmente como (15Z)-fitoeno en productos vegeta les y microorganismos, entre otros. El anlisis por cromatografa lquida de ismeros geomtricos de carotenoides se ha visto favorecido en los ltimos aos debido al desarrollo de columnas C30, cuyo diseo las hace muy eficientes para su separacin. As, diferentes ismeros de carotenoides han sido objeto de estudio en una gran variedad de fuentes, como vegetales, zumo de zanahorias y bebidas enriquecidas en vitaminas, mango, zumo de naranja, flores, etc. El estudio de ismeros geomtricos de carotenoides resulta especialmente interesante debido a que parece que presentan distintas actividades o reactividad frente a diversos agentes y que podran absorberse en diferente medida. No obstante, debe tenerse en cuenta que los ismeros cis pueden ser en ocasiones artefactos, producidos durante la manipulacin de las muestras o debido a tratamientos tecnolgicos o culinarios. Por otra parte, muchos carotenoides naturales poseen centros quirales, por lo que pueden existir diversos ismeros pticos de cada uno de ellos, como es el caso de la zeaxantina (Fig. 09), capsantina, aloxantina, neoxantina y muchsimos otros.

(3R-3R)-zeaxantina

Meso-zeaxantina ((3R-3S)-zeaxantina)

(3S-3S)-zeaxantina

Figura 09. Configuraciones de la Zeaxantina

Propiedades fsico-qumicas
Son compuestos lipdicos, aunque existen algunas excepciones, por lo que son insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos como acetona, metanol, ter dietlico, hexano, cloroformo y piridina, entre muchos otros. Debido a su carcter hidrofbico se encuentran normalmente en ambientes lipfilos, como en membranas, si bien su asociacin con protenas o reacciones de glicosilacin les permiten tambin estar presentes en medios acuosos. En relacin con el papel de los pigmentos carotenoides en membranas de distinta naturaleza, cabe sealar que los carotenos permanecen en el interior de las mismas, mientras que las xantfilas pueden encontrarse en otras localizaciones en las que interaccionan a travs de sus grupos hidroxlicos con molculas de fosfolpidos. La asociacin con protenas permite adems a los carotenoides permanecer en una posicin correcta con respecto a otras molculas, siendo ejemplos claros de este hecho los complejos pigmento-protena que mantienen a carotenoides y clorofilas en posiciones adecuadas para los procesos de transferencia de energa que tienen lugar durante la fotosntesis.

Los carotenoides cidos pueden formar sales sdicas o potsicas solubles en agua por tratamiento con lcali, como es el caso de bixina, astaceno o mitiloxantina. Las carotenoprotenas son tambin solubles en agua y muy estables. El color de estos complejos es estable durante aos a temperatura ambiente y en contacto con el aire, por lo que tienen un gran inters como posibles colorantes. El carcter hidrofbico de la mayora de los carotenoides hace que tiendan a la agregacin y cristalizacin en medio acuoso, siendo un ejemplo tpico los cristales de licopeno en los cromoplastos de los tomates. Los puntos de fusin son elevados, generalmente comprendidos en el rango 130-220C y la solubilidad de los cristales generalmente pequea, siendo mejor en disolventes orgnicos clorados y en benceno. El sistema de d.e.c. de las molculas de carotenoides es responsable de su intenso color. Para que estos pigmentos tengan una coloracin perceptible son necesarios al menos siete d.e.c.. As, el caroteno (7 d.e.c.) es amarillo plido, mientras que fitoeno (3 d.e.c.) y fitoflueno (5 d.e.c.), son incoloros. El color se debe concretamente a la oscilacin de los electrones a lo largo de la cadena hidrocarbonada insaturada. La absorcin de luz produce el paso de la molcula de su estado energtico basal a otro de mayor energa llamado estado excitado. En el caso de los carotenoides, la transicin electrnica se produce de orbitales enlazantes a orbitales * antienlazantes. Como consecuencia de la deslocalizacin de los electrones a lo largo de la cadena hidrocarbonada, debido a la presencia de numerosos d.e.c. en sta, la molcula en estado excitado no posee un alto contenido energtico, de ah que la energa de la radiacin visible sea normalmente suficiente para que se produzca el salto electrnico. La asociacin de carotenoides con protenas estabiliza a los pigmentos adems de extender el rango de colores a verde, azul y prpura. As, el mx. de absorcin de astaxantina en acetona es 478 nm, mientras que el de la -crustacianina es 632 nm, de ah su coloracin azulada. Analticamente, el color de los carotenoides es de gran importancia, ya que un cambio de color durante el anlisis es indicativo de degradacin o de modificacin estructural de los pigmentos. De igual forma, el color permite monitorizar su separacin mediante cromatografa en columna y en capa fina. En los ltimos aos, han aparecido estudios en los que se propone la medida objetiva del color como una potente herramienta en el mbito del control de calidad para la estimacin rpida del contenido en carotenoides en diversas fuentes, como tomates, zumo de naranja y albaricoques, fundamentalmente debido a las ventajas que ofrecen tales medidas, como rapidez, no destruccin de las muestras, versatilidad, etc. As, la medida objetiva del color se ha propuesto recientemente como un mtodo apropiado para la determinacin de la actividad vitamnica A de zumos de naranja de una forma ms eficiente, rpida y realista en el mbito del control de calidad. Aparte de estos estudios en los que el color se ha correlacionado de algn modo con el contenido en carotenoides, existen otros muchos en los que el contenido de estos pigmentos y el color de diferentes muestras se han analizado paralelamente. En este sentido debe tambin tenerse en cuenta que diversas tcnicas espectroscpicas se usan, aunque sin obtener parmetros cromticos, para el anlisis de estos compuestos. El espectro de absorcin UV-Vis de los carotenoides es de inters para aclarar su estructura. Normalmente aparecen tres mximos cuyas longitudes de onda () dependen del nmero de d.e.c. y del disolvente empleado para la medida, si bien el mximo de absorcin (mx.) de los carotenoides in vivo aparece a longitudes de onda unos 10 nm mayores en comparacin con los mximos en hexano o etanol, debido a su presencia en un ambiente proteico o lipdico. Independientemente del disolvente, las mx. aumentan con la longitud del cromforo, de forma que los dobles enlaces no conjugados no afectan significativamente al espectro. No obstante, cuando existen d.e.c. en un anillo, debido a que ste no es coplanar con la cadena polinica lineal, las mx. aparecen a longitudes de onda menores en comparacin con los carotenoides no cclicos con el mismo nmero de d.e.c. .Los grupos carbonlicos conjugados con la cadena polinica tambin aumentan la longitud del cromfobo. As, la presencia de uno de estos grupos en un anillo hace que los mximos se localicen a aproximadamente 10 nm superiores, mientras que su presencia en la cadena polinica hace que se desplacen a longitudes de onda en torno a 30 nm superiores. Los grupos hidroxilo y metoxilo, sin embargo, no afectan al cromforo, de ah que los espectros del -caroteno y sus hidroxiderivados criptoxantina y zeaxantina sean prcticamente idnticos. Por otra parte, la forma del espectro y la persistencia de las bandas de absorcin, lo que comnmente se conoce como estructura fina, reflejan el grado de planaridad del cromforo. El sistema de d.e.c. de los carotenoides acclicos puede

adoptar una conformacin casi planar, de ah que sus espectros presenten mximos y mnimos perfectamente definidos, aunque la persistencia de las bandas disminuye cuando existen ms de nueve d.e.c. El espectro de los carotenoides cclicos en los que el cromforo no se extiende a los anillos presenta tambin bandas de absorcin persistentes, aunque cuando la conjugacin se extiende a anillos existen impedimentos estricos entre el grupo metilo en el carbono 5 del anillo y el tomo de hidrgeno del carbono 8 de la cadena polinica, que hacen que los dobles enlaces de los anillos no sean coplanares con los de la cadena polinica. Como consecuencia se produce un desplazamiento hipsocrmico (a menores) de las mx., un efecto hipocrmico (disminucin de la absorcin) y una prdida de estructura fina (115,120). As, la primera banda de absorcin de carotenoides con dos anillos , como -caroteno, -criptoxantina y zeaxantina, se reduce a una mera inflexin. Cuando existen grupos carbonilos conjugados con la cadena polinica, se produce un desplazamiento batocrmico (a mayores) de los mximos, adems de una prdida de estructura fina, de forma que el espectro de estos compuestos, como astaxantina, cantaxantina o capsorrubina, entre otros, se reduce a una curva simtrica o a una banda principal con inflexiones a uno y otro lado. El espectro de ismeros Z o cis presenta algunas peculiaridades con respecto a los de ismeros todo-E o todo-trans. As, el mximo de absorcin se localiza a entre 2 y 6 nm menores en el caso de ismeros mono-cis, la estructura fina disminuye y una nueva banda de absorcin aparece en la regin ultravioleta. Los carotenoides en disolucin, obedecen la ley de Lambert-Beer, de ah que se cuantifiquen espectrofotomtricamente, relacionando la absorbancia a una determinada con un valor estndar expresado como coeficiente de absorcin, ya sea el coeficiente de absorcin especfico, (A ), que se define como la absorbancia terica de una disolucin de concentracin 1% (P/V) en una cubeta de 1 cm de paso de luz, o el coeficiente de absorcin molar, , definido como la absorbancia terica de una disolucin de concentracin 1 molar. Ambos coeficientes estn relacionados por la frmula = (A peso molecular)/10. Tericamente, es caracterstico del cromforo e independiente del peso molecular del carotenoide, por lo que podra ser considerado el mismo para carotenoides distintos con idntico cromforo, como por ejemplo -caroteno y zeaxantina. En cambio, los valores de A no seran los mismos para ambos compuestos, si bien estn relacionados por sus pesos moleculares: A (zeaxantina) = A (-caroteno) (536/568)

La exactitud de la cuantificacin de los carotenoides depende, por tanto, de la de los coeficientes de absorcin. Para la determinacin de estos coeficientes se recomienda pesar con precisin entre 1 y 2 mg del pigmento puro y disolverlos completamente en un disolvente apropiado. Este procedimiento suele ser bastante complicado, sobre todo si los carotenoides estn cristalizados, por lo que el contenido en carotenoides es frecuentemente subestimado. La determinacin cuantitativa de los pigmentos carotenoides, implica por tanto una cierta inexactitud. En relacin con este hecho, cabe sealar que los coeficientes de absorcin de los ismeros cis son sensiblemente menores que los de los correspondientes ismeros todo-trans, si bien pocos han sido determinados experimentalmente, por lo que la cuantificacin de los ismeros cis con los valores tabulados para los ismeros todotrans implica an un mayor grado de inexactitud. En la literatura existen tablas en las que se indican los valores de los coeficientes de absorcin, generalmente el especfico, para distintos carotenoides en varios disolventes, especificndose asmismo la a la que debe llevarse a cabo la medida de absorbancia. No obstante, debido a las dificultades inherentes a la determinacin experimental de los coeficientes de absorcin, existen discrepancias en algunos de los valores de tabulados. Para calcular la concentracin de un determinado carotenoide se aplica la frmula x = Ay/(A 100), donde x es el peso del carotenoide en gramos, y es el volumen de la disolucin en mililitros, A la absorbancia medida experimentalmente y A el coeficiente de absorcin especfico. Cuando no se ha determinado el coeficiente de absorcin especfico para un carotenoide o bien se pretende estimar el contenido total de carotenoides de un extracto, se suele usar un valor arbitrario de 2500.

Concentraciones de Carotenoides, Tocoferol y Retinol en el Cerebro de Personas de Edad Avanzada

Los carotenoides y los tocoferoles presentan especial inters para los investigadores mdicos debido a sus caractersticas antimutagnicas y anticarcinognicas y a su asociacin con mayor longevidad y disminucin del riesgo de cncer y enfermedades cardiovasculares observadas en estudios epidemiolgicos. Aunque el suplemento con -carotenos no ha sido asociado con efectos beneficiosos sobre la reduccin del riesgo de cncer o enfermedades cardiovasculares, en estudios recientes se ha sealado que tanto la lutena como la zeaxantina dietarias o plasmticas elevadas se asociaron con reduccin de la progresin de lesiones aterosclerticas y con menor riesgo de cataratas. (Fig. 09)

Lutena

Zeaxantina

Figura 09. Estructuras qumicas de la Lutena y la Zeaxantina

Se ha sealado que hay carotenoides y tocoferoles en el cerebro humano, y varios indicios indican que ambos antioxidantes pueden enlentecer los cambios degenerativos en ste y disminuir el riesgo de enfermedad de Alzheimer (EA). Tambin existe evidencia sustancial acerca de que los carotenoides y tocoferoles tienen efecto protector sobre otro derivado neural, la retina. En este sentido, el Estudio acerca de las Patologas Oculares relacionadas con la Edad (AREDS) demostr que el tratamiento con altas dosis de -tocoferol, vitamina C, -caroteno y cinc retrasa la progresin de la maculopata degenerativa asociada con la edad. Si bien se han incrementado los indicios de que los antioxidantes de la dieta desempean un papel fundamental en la prevencin de enfermedades neurodegenerativas, no se ha informado que haya distribucin de carotenoides individuales y de los ismeros de tocoferol en regiones cerebrales y en la sustancia gris y blanca. Esta ausencia de informacin condujo a este anlisis sobre la distribucin de carotenoides individuales, retinol, y -, - y - tocoferoles en el lbulo frontal y la corteza occipital de cerebros de seres humanos de edad avanzada, con el objetivo de determinar las concentraciones de los principales carotenoides, tocoferoles y retinoles en las regiones frontales y occipitales.

Se obtuvieron muestras de cerebro congeladas de 5 donantes humanos de edad avanzada que haban fallecido por causas no relacionadas con demencia del Massachusetts Alzheimer's Disease Research Center del Hospital General de Massachusetts. Se examinaron los lbulos frontales y occipitales para crear una base para un estudio posterior de comparacin entre los nutrientes antioxidantes en el tejido cerebral de sujetos normales de edad avanzada y aquellos en cerebros con EA. Los donantes fueron 2 mujeres de 85 y 90 aos, y 3 hombres de 67, 73 y 77 aos. Las muestras fueron disecadas en cuanto llegaron al laboratorio; se colocaron en cajas secciones de 0.5 cm de cada regin cerebral, las cuales fueron congeladas en hielo seco y mantenidas a -80 C. El laboratorio haba examinado previamente secciones microscpicas con tinciones de plata, azul Luxol y hematoxilina-eosina para confirmar que los cerebros no presentaban procesos neuropatolgicos identificables. Las 10 muestras individuales de las cortezas frontal y occipital pesaron entre1 g y ms de 100 g. Las secciones seleccionadas fueron disecadas en sustancia gris y blanca, extradas con solventes orgnicos y analizadas mediante HPLC. Dado que slo se cont con 5 donantes, no se tuvo en cuenta el sexo para el anlisis. Debido a la relevancia potencial para neurodegeneracin, las muestras se agruparon en aquellas provenientes de las regiones frontales y vulnerables a la EA; y en aquellas de regiones occipitales menos vulnerables. El anlisis estadstico se efectu mediante programas de computacin comerciales. Debido a la distribucin no normal de la poblacin y al reducido nmero de la muestra, se utiliz la prueba de correlacin de Spearman para evaluar la relacin entre la edad y las concentraciones de antioxidantes. Los anlisis de varianza de Wilcoxon y las pruebas U de Mann-Whitney se utilizaron para comparar las regiones frontales y occipitales, la sustancia gris y blanca. Los valores de p iguales a 0.05 fueron considerados significativos. Se hall que la -criptoxantina fue el carotenoide principal en el cerebro (Fig. 10), y que lutena, zeaxantina, anhidrolutena y -criptoxantina estuvieron presentes en cantidades significativas. La concentracin total de carotenoides (licopeno, cis-licopeno, -caroteno, -caroteno, y cis--caroteno) fue significativamente menor (p < 0.0001, segn el anlisis de Wilcoxon) que el valor total de los carotenoides xantfilos (oxigenados), los cuales constituyeron entre el 66% y 77% del total de carotenoides en la regin frontal y occipital. Tambin se hallaron presentes niveles cuantificables de retinol, -criptoxantina, lutena, zeaxantina y -tocoferol en cada una de las muestras cerebrales analizadas. Los lmites de deteccin fueron de 0.3 pmol/g para el retinol, 2 pmol/g para los tocoferoles y 0.06 pmol/g para la mayora de los carotenoides, pero variaron en proporcin al peso de la muestra.

Figura 09. Estructura qumica de la (3R)--criptoxantina

Se encontr mayor abundancia de tocoferoles que de carotenoides en todas las regiones cerebrales, siendo el -tocoferol el que present las concentraciones ms elevadas, seguido por -tocoferol, tocoferol, retinol, -criptoxantina y lutena. Las concentraciones de lutena fueron significativamente mayores que las de zeaxantina (p < 0.02). Las razones informadas entre lutena y zeaxantina en el suero humano varan entre 3 y 9. La razn media en el cerebro encontrada fue de 1.39. Se detectaron 8 sustancias no identificadas, pero que fueron tentativamente asignadas como xantfilos. La mayora de estos compuestos desconocidos se present en concentraciones entre 10% y 50% menores respecto de la anhidrolutena. La zeaxantina y la lutena se hallaron altamente correlacionadas entre s (p < 0.0001) y con anhidrolutena, -criptoxantina, -criptoxantina (p = 0.0006). La concentracin total de carotenos oxigenados excedi significativamente la de los carotenos tanto en la sustancia gris como en la blanca (p < 0.005 para ambas, segn el anlisis de Wilcoxon). Las concentraciones medias de lutena y zeaxantina en la sustancia gris de la regin occipital fue de casi el doble respecto de la hallada en la sustancia blanca (p < 0.03 para ambas); y

las concentraciones de -criptoxantina y de los xantfitos totales tambin tuvieron la tendencia a ser mayores en esta misma regin, lo que indica que estos xantfilos estuvieron selectivamente distribuidos en la sustancia gris. Los tocoferoles y los carotenos en la sustancia gris no difirieron significativamente de las mediciones halladas en la sustancia blanca. Cabe sealar que fibras mielnicas pasan a travs de la sustancia gris de la corteza occipital, lo que sugiere que la diferencia verdadera entre la sustancia gris y blanca en la corteza occipital puede estar subestimada. En la comparacin de las concentraciones de antioxidantes en los lbulos frontales (una regin cerebral que resulta precozmente afectada en la EA) con las presentes en los lbulos occipitales -una regin que en general no se encuentra afectada en la EA sino hasta estadios ms tardos- los lbulos frontales presentaron valores significativamente ms elevados de -tocoferol, tocoferol total y xantfilos totales y tendieron a presentar mediciones ms elevadas de zeaxantina, lutena, criptoxantina y -criptoxantina. La comparacin de la sustancia blanca en las regiones frontales y occipitales mostr que las regiones frontales ms vulnerables tuvieron adems 4 veces ms zeaxantina y 3 veces ms lutena, anhidrolutena, -criptoxantina, xantfilos totales y carotenoides totales que la sustancia blanca en las regiones occipitales, pero las diferencias no alcanzaron significacin estadstica. Con slo 5 especmenes de entre 67 y 90 aos, fue sorprendente observar correlaciones con la edad. Los lbulos frontales -pero no los occipitales- presentaron descensos significativos relacionados con la edad en retinol, -tocoferol, -tocoferol, tocoferoles totales, carotenoides totales y xantfitos totales. Los descensos ms significativos ocurrieron con la -criptoxantina y con varios de los compuestos no identificados. No se encontraron prdidas relacionadas con la edad de zeaxantina o lutena en ninguna de las regiones cerebrales. El anlisis adicional seal descensos significativos en el -tocoferol en la sustancia blanca (p < 0.04) pero no en la sustancia gris (p = 0.18). En general, los carotenos no variaron con la edad, pero se hall una declinacin significativa de los -carotenos en la sustancia blanca (p < 0.04).

Contenido en la dieta de carotenoides y vitaminas A, E, y C, y degeneracin macular avanzada relacionada con la edad
Un total de 356 pacientes que fueron diagnosticados en la fase avanzada de DME durante el ao previo a su participacin en el estudio, con edades de 55-80 aos, y que residan en las proximidades de alguno de los centros clnicos participantes en el estudio. Los 520 participantes que actuaron como controles fueron personas que residan en las mismas zonas que los pacientes, que presentaban otras enfermedades oculares y que estaban equiparados con los casos en cuanto a edad y sexo. Se estim el riesgo relativo de DME en relacin con los indicadores dietticos del estado antioxidante, con control del consumo de cigarrillos y de otros factores de riesgo, y aplicando anlisis de regresin logstica mltiple. El mayor consumo de carotenoides en la dieta se asocio a una disminucin en el riesgo de DME. Tras el ajuste de otros factores de riesgo para la DME, observamos que los pacientes situados en el quintil mayor de ingestin de carotenoides mostraron un riesgo de DME un 43% menor que el que presentaron los pacientes situados en el quintil menor (ODDS RATIO, 0.57 ; Intervalo de Confianza [IC] del 95%. 0.35-0.92 ; p para la tendencia= 0.02). Entre los diversos carotenoides especficos, la lutena y la zeaxantina- que existen principalmente en la verdura de hoja oscura- fueron los que se asociaron con mayor fuerza a la disminucin del riesgo de DME ( p para la tendencia= 0.001). Varios alimentos ricos en carotenoides se asociaron en forma inversa con la DME. En particular, el elevado consumo de espinaca y de col rizada se asoci a un riesgo sustancialmente menor de DME (p para la tendencia < 0.001). El consumo de vitamina A preformada (retinol) no se relacion de forma apreciable con la DME. Los consumos de vitamina E y C tampoco se acompaaron de una disminucin estadsticamente significativa en el riesgo de DME, aunque en los pacientes con mayor consumo de vitamina C procedente - en especial - de los alimentos se observ un riesgo menor de DME.

Niveles Plasmticos de Retinol y Riesgo de Hepatocarcinoma

Los retinoides (el retinol y sus derivados) intervienen en el control del crecimiento y la diferenciacin celular. En estudios experimentales se demostr que pueden contrarrestrar la actividad carcinognica de diversos factores de riesgo que predisponen a la aparicin de hepatocarcinoma, como la infeccin crnica por hepatitis B y C, el consumo excesivo de alcohol, la dieta rica en aflatoxinas, la obesidad y la diabetes. Adems, se les atribuyen numerosas acciones, como inhibir la transformacin de clulas estrelladas del hgado, la produccin de metabolitos txicos de la aflatoxina y de citoquinas proinflamatorias, suprimir la proliferacin de clulas de hepatoma y ejercer efectos antioxidantes. En el presente estudio, los autores analizaron la relacin entre las concentraciones plasmticas de diferentes micronutrientes (retinoides, carotenoides, tocoferoles, selenio) y el riesgo de aparicin de hepatocarcinoma en una cohorte de pacientes de la ciudad de Shanghai, China, despus de un seguimiento de 15 aos. Participaron del estudio 18 244 hombres de entre 45 y 64 aos sin antecedentes de cncer reunidos entre enero de 1986 y septiembre de 1989. Durante la entrevista inicial se obtuvo informacin sobre caractersticas demogrficas, dieta habitual, consumo de alcohol y tabaco y antecedente de enfermedades de los participantes. Luego, a cada uno se le extrajo una muestra de 10 ml de sangre que posteriormente fue congelada a -70 C. Tambin se recolectaron muestras de orina para valorar los metabolitos urinarios de aflatoxina. Hasta el da final del estudio, 31 de diciembre de 2001, fueron identificados 214 participantes con hepatocarcinoma que fueron establecidos como casos. El diagnstico se llev a cabo mediante antecedentes clnico-radiolgicos compatibles (n = 53), por hallazgos tomogrficos o ecogrficos y clnicos compatibles (n = 115) o por el certificado de defuncin (n = 7). De la misma cohorte de pacientes se eligieron los controles. Las muestras de sangre fueron analizadas en una habitacin protegida de la luz para evitar los cambios qumicos que sta puede provocar en el retinol y en ciertos carotenoides. Las concentraciones de -caroteno, -caroteno, -criptoxantina, lutena, licopeno, zeaxantina, retinol y -tocoferoles fueron determinadas por cromatografa lquida de alta resolucin. Las concentraciones de selenio fueron medidas por espectrofotometra de absorcin atmica. En todas las muestras se examin la presencia de marcadores de hepatitis B (HBbsAg) y C (anti-HVC). Se utilizaron anlisis de covariancia para comparar las diferencias en las concentraciones plasmticas de los micronutrientes entre los casos y los controles y entre los controles fumadores y no fumadores, consumidores de alcohol y no consumidores y con serologa para hepatitis B positiva y negativa. Se emplearon mtodos estadsticos estndar y de regresin logstica multivariable para el anlisis de los datos con los programas SAS 9.1 y Epilog 1.0. Los factores de riesgo para la aparicin de hepatocarcinoma en la poblacin estudiada fueron tabaquismo, consumo elevado de alcohol (> 50g de etanol da), antecedente de hepatitis o cirrosis, positividad para el HBsAg y exposicin a aflatoxinas en la dieta. En la cohorte evaluada, la incidencia de hepatitis C fue muy baja y no represent un factor de riesgo. En el grupo control, los pacientes HBsAg positivos tuvieron niveles de retinol significativamente ms bajos pero concentraciones de criptoxantina, licopeno y zeaxantina ms elevados que los pacientes HBsAg negativos. Por su parte, los consumidores de alcohol mostraron niveles ms elevados de retinol y lutena. En los individuos que presentaron hepatocarcinoma (casos), las concentraciones plasmticas de retinol, -caroteno, significativamente menores que las de los controles.

Cuando se analiz la asociacin entre niveles plasmticos de micronutrientes e incidencia de hepatocarcinoma se observ una relacin inversa: cuanto mayor eran los niveles plasmticos, menor era la incidencia de cncer. Despus de eliminar la influencia de posibles aspectos que pudieran producir sesgo (hepatitis B, alcoholismo, cirrosis, tabaquismo) se analiz el efecto de cada micronutriente y se advirti que el retinol era responsable de esta relacin inversa. Luego de estudiar todos los casos, la influencia de este micronutriente se apreci con mayor nitidez en aquellos con hepatitis B (por ejemplo, los pacientes que tuvieron niveles ms bajos de retinol mostraron un riesgo 70 veces mayor de presentar hepatocarcinoma). La vitamina A se encuentra en alimentos de origen animal y en forma de provitamina A (carotenoides) en los alimentos de origen vegetal. Se estima que ejerce un efecto protector contra la aparicin de hepatocarcinoma al modular la diferenciacin celular y la respuesta inmunitaria frente a la infeccin viral. Datos de estudios clnicos previos demostraron que los pacientes con enfermedades hepticas crnicas (hepatitis, cirrosis) tienen menores niveles de retinol en el hgado y en sangre. Segn los autores, este estudio mostr la existencia de una relacin inversa entre los niveles de retinol plasmtico previos al diagnstico y el riesgo de presentar hepatocarcinoma en una cohorte de 18 000 pacientes de sexo masculino seguidos durante 15 aos en la ciudad de Shangai, China. Una limitacin del trabajo que reconocen los autores seala la baja incidencia de hepatocarcinoma, que determin el relativamente bajo nmero de casos. Esto provoc que, para algunas asociaciones (por ejemplo, niveles de retinol, hepatitis B y hepatocarcinoma), los intervalos de confianza medidos fueran bastante amplios. Sin embargo, fue un estudio prospectivo, de grandes dimensiones, con muestras de sangre y en el que se analiz un nmero importante de micronutrientes. Estas muestras fueron obtenidas al momento del ingreso de los pacientes, vale decir, antes de la aparicin de hepatocarcinoma, lo que minimiz la influencia de cambios eventuales en la dieta realizados durante el seguimiento.

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