Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, em duas amostras, obtendo-se os seguintes resultados:

Concentrao (un/dL) Desvio padro

Coeficiente de variao (%)

Amostra 1 Amostra 2 60,84 3,20 5,26 178,30 3,61 2,02

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Caraway, W.T.: Amer, J.Clin.Path. 32, 97-99, 1959. Pesce. J.A., Kaplan. A.L.: Qumica Clnica Mtodos, 830 - 842, 1990. Tibrcio, H.M.: Controle Interno da Qualidade Analtica, 1aed. maro/1995. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: n 10231810051
o

AMILASE
FINALIDADE Sistema colorimtrico para determinao de amilase no soro e na urina. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO O soro incubado com soluo de amido tamponado em pH 7. Em contato com o iodo, a soluo de amido torna-se azulada. medida que a molcula de amido hidrolisada pela amilase o tom azulado esmaece. Dentro de certos limites, a alterao produzida na cor pelo amido degradado com o iodo proporcional concentrao de amilase no soro. PARTICULARIDADES DO SISTEMA O kit Doles de amilase uma modificao do mtodo de Caraway. O substrato tem por base amido solvel que propicia condies timas para a atividade amiloclstica da amilase. METODOLOGIA Caraway modificado. REAGENTES Substrato : soluo tampo fosfato 0,19M contendo Cloreto de Sdio 0,03mol, cido Benzico 0,07mol, estabilizantes e 400mg de Amido solvel, por litro. O pH da soluo 7,0. Soluo de iodo concentrado: soluo 0,45M de Iodeto de Potssio e 0,25M de Iodo. APRESENTAO Substrato Soluo de iodo concentrado NMERO DE TESTES 60 testes/20L amostra 120 testes/10L amostra EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de medir as absorvncias em 660nm ou filtro vermelho. Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica de 20L. Ponteiras descartveis. gua deionizada ou destilada. Cronmetro. Banho maria (37oC). Frasco de vidro mbar com capacidade volumtrica de 100mL. Balo volumtrico de 100mL. 3 x 20mL 1 x 4mL

BIOQUMICA CLNICA

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2 Concentrao (un/dL) Desvio padro
Coeficiente de variao (%)

ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Substrato: armazenar temperatura de 2-8C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Soluo de iodo concentrado: armazenar temperatura de 2-8C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo da ampola, obedecidas as condies de armazenamento. Soluo de iodo (uso): armazenar em frasco mbar ao abrigo da luz. Estvel por 2 anos, sob refrigerao (2-8C), obedecidas as condies de preparo e manuseio. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. A soluo concentrada de Iodo dever ser manuseada com cautela, pois o contacto com a pele pode causar leses midas, bolhosas e dermatite de sensibilizao. A soluo de uso, embora diluda, dever ser pipetada com o auxlio de pera. Em caso de contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:

73,28 3,64 4,97

165,58 4,78 2,89

Especificidade: a presente metodologia de Caraway modificado especfica para determinao da amilase srica. Sensibilidade: a diferena de absorvncia, de 0,010, corresponde a 20un/dL de concentrao de Amilase, quando realizados os testes em espectrofotmetro, a 660nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia de Caraway modificado. S u b stn c ias in terf eren tes: t o d o s o s anticoagulantes, com exceo da heparina, inibem a atividade da amilase por quelao com o clcio. Quando contamina o material de ensaio, a amilase salivar interfere decisivamente nos valores da amilase srica, levando a resultados falsamente elevados. Certas drogas interferem nos teores de amilase. Para controle de tal interferncia, recomenda-se que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos.

Corrosivo

Irritante

Reviso:

15 (11/2010)

AMOSTRA Soro ou plasma (colhido com heparina), urina e lquidos duodenal asctico e pleural. A enzima permanece estvel no soro por 8 horas, temperatura de 20-30C, e por 30 dias, temperatura de 2-8C. Todos os anticoagulantes, com exceo da heparina, inibem a atividade da amilase, por sequestrarem o clcio necessrio otimizao da atividade amilsica. A amilase na urina permanece estvel por 15 dias temperatura ambiente (20-30C). O volume coletado pode oscilar entre 1 e 24 horas, porm o tempo de coleta recomendado de 2 horas. O volume urinrio deve ser medido, pois a interpretao baseada na quantidade de unidades de amilase excretada por hora. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes.

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PROCEDIMENTO TCNICO Preparo da soluo de iodo (uso): Transferir todo o contedo de uma ampola de iodo concentrado para um balo volumtrico de 100mL. Lavar internamente a ampola com gua deionizada e transferir o lquido para o balo. Acertar o volume marca com gua deionizada e guardar em frasco mbar. Rotular dois tubos de ensaio com C (controle) e T (teste). Proceder como segue:
Substrato C 1,0mL T 1,0mL

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. A curva de calibrao a representao grfica da relao entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro (a curva foi construda utilizando-se conjunto de soros de concentraes conhecidas). As absorvncias relacionadas na tabela acima foram obtidas da relao: absorvncia C - absorvncia T absorvncia C A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear at 400un/dL (ver curva acima). Para valores mais elevados, diluir a amostra com soluo fisiolgica e proceder a nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. absorvncia C - absorvncia T A relao absorvncia C define a poro de amido hidrolizado pela enzima durante o perodo de incubao. A unidade de amilase definida como a quantidade de enzima que hidrolisa 10mg de amido em 30 minutos e temperatura de 37oC. Na presente metodologia, 1mL do substrato contm 0,4mg de amido que incubado durante 7,5 minutos com 20L de soro e que, transformado em nmeros, gera a seguinte equao:

CLCULOS
absorvncia C - absorvncia T Amilase un./dL de soro= absorvncia C x 800

Exemplo:

Abs.( C ) : 0,412

Abs. ( T) : 0,372

0,412 - 0,372 x 800 = 77,6 0,412

Amilase un./dL de soro =

URINA Unidade de amilase urinria/hora = absorvncia (C) - absorvncia (U)

x 800 x absorvncia C 100 V x T 1

Incubar durante 5 minutos em banho maria (37C). Amostra 20L

Agitar e incubar durante, exatamente, 7 minutos e 30 segundos, em banho maria (37C). Soluo de iodo (uso)
gua destilada ou deionizada

V = volume urinrio em mL T = tempo de coleta da amostra em horas Exemplo: Abs.( C ) : 0,412 Abs. ( T) : 0,359 V : 200mL T : 2 horas 0,412-0,359 200 1
Unid. de amilase urinria/hora = 0,412 x 800 x x 100 2 =102,9

3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5.O nvel da gua do banho maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio e a temperatura (37oC), rigorosamente observada. 6.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). 7.O tempo deve ser rigorosamente controlado por cronmetro. 8.Na pipetagem, no soprar a pipeta, para evitar contaminao pela amilase salivar. 9.A estabilidade do substrato verificada, em cada determinao, pela leitura do controle. VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao sugerimos os seguintes valores: Soro 60 - 160 un/dL Urina 50 - 140 un/hora SIGNIFICADO CLNICO A amilase srica apresenta-se aumentada nas pancreatites agudas e crnicas. Pode ainda estar aumentada nas condies em que o paciente portador de pseudo-cisto pancretico, perfurao intestinal com peritonite, gravidez ectopica e patologias que comprometam as vias biliares. A dosagem da amilase srica utilizada como meio laboratorial diagnstico na parotidite epidmica (caxumba) que ocorre principalmente em crianas. CARACTERSTICAS DO DESEMPENHO Foram realizados 46 testes em amostras cujo teor de Amilase situava-se no intervalo de 52 a 309 un/dL. A comparao do kit de Amilase Doles (Y) com um mtodo de referncia (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 3,042 + 0,956X, sendo o coeficiente de correlao 0,99. Adio de amilase (amilase salivar) em soros cujas concentraes oscilaram entre 60 e 190 unidades Caraway, mostraram recuperao de 99 5%.

1,0mL 8,0mL

1,0mL 8,0mL

Misturar bem e determinar as absorvncias do C (controle) e T (teste) em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 660nm ou filtro vermelho, zerando o aparelho com gua deionizada. A cor final permanece estvel por 5 minutos, temperatura de 20-30C. Obs.: Dosando-se a amilase em vrios soros ao mesmo tempo, basta a determinao de um controle. Acrescentar o soro a intervalos de 30 segundos. O tempo deve ser controlado com um cronmetro. Dosagem da amilase na urina Coletar urina durante determinado tempo em horas e anotar o volume. Ajustar o pH ao nvel de 7-7,4. Se a urina for cida, adicionar Carbonato de Sdio slido. Se alcalina, acrescentar Fosfato de Potssio Monobsico. Proceder de maneira idntica ao soro. CURVA DE CALIBRAO

SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADE A unidade Caraway de amilase no convertvel para Unidade Internacional (U.I.). LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. O tempo deve ser controlado com um cronmetro. A pipeta no dever ser soprada, para evitar contaminao pela amilase salivar. A atividade da amilase apresenta valores falsamente elevados com o paciente em uso de aspirina, colinrgicos, codena, etanol, morfina, tetraciclina e anticoncepcionais orais. CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1.Limpeza e secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade.

0,4 30 x x 10 7,5

100 = 0,02 volume de soro 800

Conc. Padro Absorvncia (un/dL) 1 0.000 0 2 0.075 59 3 0.150 118 4 0.297 236 5 0.509 400 6 0.533 442 (un/dL)

amido

tempo de incubao

As unidades so expressas por decilitros de soro, justificando o nmero 100 no quociente.

2/4

3/4