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INDICAO MDICA DO EXAME Deteco de desordens hemorrgicas secundrias principalmente deficincia dos fatores VIII, IX, XI, XII e Pr-calicrena. Monitoramento de pacientes em terapia com heparina. PRINCPIO O reagente contendo ativador plasmtico (cido elgico) desencadeia o mecanismo de coagulao da via intrnseca atravs da ativao do fator XII (Hageman), que forma um complexo com o cininognio de alto peso molecular (HMWK) e com a pr-calicreina (PK). O fator XII ativado atua sobre o fator XI gerando o fator XIa que na presena de fosfolpides e clcio transforma o fator IX em uma enzima ativa (fator IXa), que ativa o fator VIII, formando o complexo IXa-fosfolpide-VIIIa que ativa o fator X. Esse fator ativado transforma a protrombina em trombina que atua sobre o fibrinognio gerando fibrina. A formao de fibrina macroscopicamente demonstrada pelo aparecimento de um cogulo. O TTPA realizado incubando o plasma citratado com o reagente contendo ativador e fosfolpides. Aps a adio de clcio, faz-se a medio do tempo de formao do cogulo. AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Tipos de amostra Usar plasma colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L (3,2%). Armazenamento e estabilidade da amostra Manter as amostras entre 2 - 24 C e realizar o TTPA at 4 horas aps a coleta. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra A presena de cogulos implica na rejeio da amostra. Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. Critrios para Coleta da Amostra 1. Obter o sangue por puno venosa e evitar garroteamento prolongado, hemlise, formao de bolhas e aspirao de lquido tissular (fator lll). A agulha deve penetrar diretamente na veia na primeira tentativa (puno venosa no traumtica). O sangue deve fluir livremente sem que seja necessrio aplicar demasiada fora ao mbolo. No realizar o TTPA em amostra cuja puno for difcil (puno venosa traumtica). 2. Coletar a amostra com seringa de plstico e centrifugar em tubos de plstico. O uso de material de vidro no siliconizado ativa os fatores da coagulao e reduz falsamente o TTPA. Aps remover a agulha, utilizar a poro central da amostra na seringa, deixando as pores anterior e posterior para outros testes. 3. No caso de sistema de coleta a vcuo, usar tubo de plstico ou vidro siliconizado. Ao realizar coleta somente para testes de coagulao, coletar duas amostras. A primeira em um tubo sem anticoagulante ou em tubo contendo citrato (tampa azul) que deve ser desprezada. A segunda amostra coletada em tubo contendo citrato (tampa azul) ser utilizada para a realizao dos testes. No caso de coleta mltipla, a amostra para testes de coagulao dever ser obtida aps a coleta de amostra em tubo sem anticoagulante e antes da coleta em tubo contendo EDTA. 4. Misturar 9 partes de sangue com 1 parte de citrato ou 3 mL de sangue e 1 gota de Trombstab (Labtest Cat. 45). Homogeneizar 3 ou 4 vezes por inverso suave. No usar oxalato, pois o Fator V muito sensvel a este anticoagulante. 5. Em pacientes que apresentam hematcrito maior que 55% a relao entre os volumes de sangue e de anticoagulante deve ser ajustada para garantir a exatido do resultado. Para calcular o volume de anticoagulante necessrio em funo do hematcrito e do volume de sangue, utilizar a frmula que se segue: Volume de anticoagulante (mL) = 0,00185 x volume de sangue (mL) x (100 hematcrito)

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Exemplo: Para um hematcrito de 60% usar 0,22 mL de citrato e completar para 3,0 mL com sangue. Para usar Trombstab (Labtest Cat. 45), adicionar 2 gotas a 0,5 mL de gua e usar na proporo indicada pelo clculo. 6. Centrifugar at 1 hora aps a coleta a 3000 rpm ou 1500 g durante 15 minutos. No necessrio remover o plasma do tubo. Manter o tubo tampado at a execuo do teste para evitar mudana do pH da amostra, que pode interferir nos resultados. 7. Manter as amostras entre 2 - 24 C e realizar o TTPA at 4 horas aps a coleta. Caso exista possibilidade de congelamento rpido, o plasma, separado das clulas, pode ser congelado a 20 C negativos por 2 semanas ou 70 C negativos por 6 meses. Sugerimos congelar o material em alquotas de 0,5 mL e, para evitar evaporao do material durante o perodo de armazenamento, utilizar frascos adequados para congelamento (criotubos). As amostras devem ser descongeladas rapidamente a 37 C e testadas imediatamente. PRODUTO UTILIZADO APTT Hemostasis, Catlogo 502 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000

ANVISA 10009010135

Reagente 1: Armazenar entre 2 8 C. Contm cido elgico 99 mol/L, fosfolpide de crebro de coelho 0,007%, fenol 320 mmol/L, albumina bovina 0,005%, estabilizadores e preservativo. Pronto para uso. Reagente 2 Armazenar entre 2 8 C. Contm cloreto de clcio 20 mmol/L e azida sdica 14,6 mmol/L. Precaues e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. 3. O Reagente 2 contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 4. A exposio prolongada do Reagente 1 ao ar atmosfrico pode comprometer o desempenho do mesmo. 5. A estabilidade do Reagente 1 pode ser comprometida com a introduo de ponteiras mal lavadas. EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C). 2. Pipetas para medir amostras e reagentes. 3. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos.

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Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Procedimento manual 1. Realizar o teste utilizando tubos de vidro rigorosamente limpos. 2. A temperatura do banho-maria deve estar entre 36 - 38 C. 3. Pr-aquecer o Reagente 2 (20 mmol/L) a 37 C. 4. Incubar a 37 C, 0,1 mL do plasma a ser medido (controle ou paciente) por no mnimo um minuto e no mximo 10 minutos. 5. Adicionar 0,1 mL do Reagente 1, homogeneizar e incubar a 37 C por 3 a 5 minutos (tempo de ativao). Para obter resultados reprodutveis o tempo de ativao deve ser padronizado para todas as amostras. 6. Adicionar 0,1 mL do Reagente 2 (previamente aquecido a 37 C) e disparar simultaneamente o cronmetro. Misturar suavemente e manter no banho-maria a 37 C por 15 a 20 segundos. 7. Remover o tubo, inclin-lo sucessivamente em intervalos menores que 1 segundo e observar a formao de um cogulo que interrompe a movimentao do lquido. Parar imediatamente o cronmetro e registrar o tempo. Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 3. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos < 0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. RESULTADOS Unidade de medida Tempo (segundos) Intervalo de Referncia Idade Intervalo (segundos) 2 meses 26,3 46,9 5 meses 26,1 45,9 Criana a partir de 6 meses e 26,7 37,6 adultos Valores crticos Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico.

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LIMITAES DO PROCEDIMENTO Interferncias 1- Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel. 2- Para reviso das formas fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia, sugere-se consultar Clin Chem 1975; 21:1D-432D. Influncias pr-analticas O TTPA pode estar aumentado em indivduos em uso de cido acetilsaliclico, aztreonam, ofloxacino, metronidazol e fenitona. A reduo do TTPA pode ser observada em indivduos em uso de anti-histamnicos, digitlicos, contraceptivos orais, tetraciclina e estrgenos conjugados. SIGNIFICADO CLNICO O TTPA avalia as vias intrnseca e comum da cascata da coagulao. O TTPA relativamente mais sensvel s deficincias dos fatores VIII e IX do que s deficincias dos fatores XI e XII ou fatores da via comum, mas, na maioria das tcnicas, nveis de fatores entre 15% e 30% do normal prolongam o TTPA. O TTPA usado para deteco de deficincias ou inibidores dos fatores da coagulao da via intrnseca ou comum, alm de se prestar para monitorizao da anticoagulao com heparina e para rastreamento do anticoagulante lpico. Distrbios da via intrnseca da cascata da coagulao so caracterizados pelo TTPA prolongado e o Tempo de Protrombina (TP) normal. Formas hereditrias incluem a deficincia dos fatores VIII ou IX (hemofilias A ou B respectivamente), fator XI, pr-calicrena, cininognio de alto peso molecular e fator XII. A deficincia dos trs ltimos fatores no est associada com quadro de manifestao hemorrgica, constituindo-se apenas uma anormalidade laboratorial. Distrbios adquiridos que cursam com TP normal e TTPA prolongado incluem o inibidor lpico ou inibidores dos fatores VIII, IX e XI, alm do uso de heparina. Distrbios da via comum causam o prolongamento do TP e TTPA, os quais, quando hereditrios, indicam formas raras de deficincia de um dos seguintes fatores: fator X, fator V, protrombina ou fibrinognio. Por outro lado, deficincias adquiridas de alguns destes fatores geralmente so acompanhadas por outras anormalidades na via extrnseca ou intrnseca, como ocorre nas hepatopatias, na coagulao intravascular disseminada (CIVD) e na deficincia de vitamina K. Alm disso, quando o TP e o TTPA esto prolongados, torna-se importante a realizao da dosagem de fibrinognio e do tempo de trombina (TT), pois pode tratar-se de afibrinogenemia, hipofibrinogenemia ou disfibrinogenemia. REFERNCIAS 1. International Committee for Standardization in Hematology.Thromb Haemostas 1976;36:237238. 2. NCCLS. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays; Approved GuidelineFourth Edition. NCCLS document H21-A4, 2003. 3. NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved StandardFifth Edition. NCCLS document H3-A5, 2003. 4. NCCLS. One-Stage Prothrombin Time (PT) Test and Activated Partial Thromboplastin Time (APTT) Test; Approved Guideline. NCCLS document H47-A, 1996. 5. CLIA Requirements for Analytical Quality. Disponvel em <http://www.westgard.com/clia.htm>. 6. Conway AM, Hinchliffe RF, Finn A, Bell F. Clin. Lab Haem 1999;21:427-428. 7. Flanders MM, Crist RA, Roberts WL, Rodgers GM. Clinical Chemistry 2005;51:1738-1742. 8. Jacobs DS, DeMott WR, Oxley DK. Laboratory Test Handbook, 5a edio, Lexi-Comp Inc: Hudson (Cleveland), 2001, 328-330. 9. Labtest: Dados de arquivo. 10. Instrues de Uso - Labtest Diagnstica SA

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