Dentro de la familia Enterobacteriaceae existen especies que son patgenas para el ser humano debido ya sea a sus caractersticas

intrnsecas o a su capacidad para producir toxinas. A nivel Clnico se busca identificar al agente causal de una enfermedad o infeccin para as determinar la teraputica a seguir. Con el urocultivo se busca definir si se est frente a una infeccin urinaria mediante un examen directo de la muestra de orina y posterior cultivo para el aislamiento y cuantificacin del agente etiolgico, mientras que el Coprocultivo es una tcnica que permite el aislamiento de microorganismos sospechosos de ser los causantes de alguna patologa intestinal. Para ambos casos, se hace necesaria la realizacin de la Prueba de susceptibilidad antibitica.

El presente curso tiene como objetivo capacitar al estudiante en las tcnicas de Urocultivo , de tal manera que aprenda a aislar, identificar y determinar la susceptibilidad antibitica de aquellas especies bacterianas involucradas en infecciones urinarias.

Toma de Muestras en Mujeres: La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa. Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente: a) jabn desinfectante; b) agua hervida o agua estril; c) gasa estril o un pao acabado de lavar; y d) el recipiente para tomar la muestra (Urolab). Proceda primero a lavarse las manos y luego sintese en el inodoro, lo ms hacia atrs que pueda. Separe los labios genitales con una mano y mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la zona genital con el jabn desinfectante. Enjuague con abundante agua estril y luego seque bien con gasa estril o con un pao limpio. Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco SLO EN EL MOMENTO DE LA MICCIN y sin tocar con los dedos su interior, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar en la poceta y recoja en el frasco slo la muestra del chorro del medio es decir, NO DEBE RECOGER NI LA PRIMERA, NI LA LTIMA PARTE DEL CHORRO DE ORINA. Tape muy bien el frasco y rotlelo con su nombre. Trigalo al Laboratorio lo ms pronto posible, en un recipiente con hielo, cuidando de que no se bote el contenido

Toma de Muestra en hombres: La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa. Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente: a) jabn desinfectante; b) agua hervida o agua estril a temperatura ambiente; c) gasa estril o un pao acabado de lavar; y d) el recipiente para tomar la muestra. Lavarse con jabn desinfectante primero las manos y luego la cabeza del pene empezando por la abertura uretral y contine en direccin a usted, como muestra la ilustracin, previa retraccin del prepucio, si no est circuncidado. Luego enjuagar bien con agua estril o previamente hervida (a temperatura ambiente) y secar con gasa estril o con un pao recin lavado. Destape el Urolab slo en el momento de la miccin y sin tocar con los dedos su parte interna, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. Comience a orinar en la poceta y recoja en el frasco slo la muestra del chorro del medio, es decir, NO DEBE RECOGER NI LA PRIMERA NI LA LTIMA PARTE DEL CHORRO DE ORINA. Tapar bien el frasco, rotularlo con su nombre y traerlo al laboratorio lo ms pronto posible, en un recipiente con hielo y cuidando de que no se bote.

Objetivo: Hacer el recuento de bacterias por el mtodo del asa calibrada. Materiales Mechero Fisher Pinza p/diseccin punta roma Asa bacteriolgica Gradilla de aluminio Estufa bacteriolgica asa bacteriologa Portaobjetos Yodo de Gram Safranina Acetona Microscopio Aceite de inmersin Asa p/sembrar en pruebas bioqumicas Metodologia Usar el asa calibrada, flamear, dejar enfriar, mantener en posicin vertical introducir solo el aro debajo del nivel de la orina previa mezclar de la orina sin centrifugar. Estriar en las placas de cultivo de la siguiente manera: METODO DE KASS

Estriar de arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina en una serie de pasos de ngulo de 90 a travs del inoculo (solo para el mtodo de 0.001 ml) Incubacin Una vez sembradas las placas incubarse durante 24 hrs a 35-37 c. Tira reactiva deben

Las tiras reactivas de orina consisten en unas pequeas cintas de plstico rgido, de unos pocos centmetros de longitud y alrededor de medio centmetro de anchura, a las que van pegados unos reactivos, que son diferentes dependiendo de lo que se quiera analizar. Los reactivos son unos pequeos cuadraditos de un material poroso, de colores suaves. Segn las tiras, puede haber diferente nmero de ellos a lo largo de la misma. Tipos de tiras reactivas Fundamentalmente dos: Cualitativas: o dan positivo, o dan negativo. Si hay en la orina la sustancia que buscan, dan positivo, pero no
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dan idea de si hay mucha o poca concentracin de la misma. Cuantitativas: adems de dar positivo, pueden cambiar mucho o poco de color, dando idea de si hay mucho o poco del producto que pretenden analizar en la orina. Cmo funcionan Estos cuadraditos van impregnados de sustancias que, en contacto con lo que quieren analizar (por ejemplo, si es un reactivo para azcar en orina, pues al contacto con esta glucosa) reaccionan cambiando el color. El cambio de color puede ser desde poco intenso, hasta muy importante. Modo de empleo Normalmente, se pueden utilizar de dos maneras diferentes: Empapndolos en el chorro de la orina. Recogiendo orina en un recipiente especfico para ello, y despus mojando la tira en ella. Despus de haber mojado las tiras, se sacan y se da tiempo para que hagan reaccin. Segn lo que se pretenda medir el tiempo es mayor o menor, pero normalmente esta informacin est includa en el envase. Cuando ha transcurrido lo suficiente, se procede a su lectura Las tiras cuantitativas, que cambian ms o menos de color segn cunta sustancia haya en la orina: traen una escala de colores en el envase; se coloca la tira al lado de dicha escala, y se decide a cul de los colores correspondientes se parece ms. El nmero que trae debajo dicho color nos dir la concentracin aproximada en orina. Por ejemplo, las de medir la glucosa. En este grupo, hay tambin tiras que miden varias cosas a la vez, como sangre, leucocitos, glucosa, protenas... En estos casos, la escala de colores del envase lleva las referencias del color en el mismo orden que la tira. Se coloca la tira a lo largo de la escala, de forma que el primer cuadro de la tira coincida con el primero de la escala, el segundo con
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el segundo,... y se procede a la misma comparacin explicada.

Resultados Densidad PH Leucocitos Nitritos Protenas Glucosa Cetonas Urobilinogeno Hemoglobina

Muestra#1 1.010 5 Negativo Positivo Negativo Normal 1+ 1 Positivo

Muestra #2 1.025 8 Negativo Positivo Negativo Normal Negativo Normal Negativo

Efectuar el anlisis microscpico por el mtodo de Gram de cada una de los medios para la confirmacin de la morfologa de los bacilos. Seleccionar la o las colonias que son consideradas como sospechosas. FROTIS Con el asa bacteriolgica limpia se esteriliza y se deja enfriar en la zona estril. Se coloca una o dos gotitas de agua sobre el portaobjeto limpio y seco. Se vuelve a esterilizar el asa bacteriolgica en la flama del mechero Fisher, enfriar en la zona estril

Tomar la caja petri que contiene el cultivo en estudio, abrir la caja petri en la zona estril y tocar la colonia estudiada, cerrar la caja petri, De inmediato, disolver en la gota de agua la colonia correspondiente, extendiendo y mezclando, con cuidado.

Se esteriliza el asa bacteriolgica y se deja sobre la mesa de trabajo. Ya extendido el frotis, fijarlo al calor (sobre la flama del mechero Fisher, pasar el portaobjeto y sobre el dorso de la mano; NO SOBRECALENTAR) para evitar la deformacin de las clulas.

TINCIN A partir del frotis fijado Cubrir la preparacin con 1 o 2 gotitas de cristal violeta por 1min, desechar, lavar y escurrir. Yodo de gram 1min. desechar, lavar y escurrir. Acetona 10 seg. desechar lavar y escurrir. Safranina 20seg. desechar, lavar y escurrir.

Examen microscpico Observar en el microscopio en 10x para localizar el campo y pasar a 100x para observar.

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RESULTADOS DE LAS PRUEBAS BIOQUIMICAS (BACTERIA 1) NOMBRE DEL MEDIO COLOR DEL MEDIO INOCULA DO

ESPECIE

GENERO

RESULTADOS

TSI Agar de Hierro triple Azucar

Escherichia

coli

Pico cido/fondo cido/gas Glucosa (+) Lactosa (+) Pico cido/fondo cido/gas (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganism o Fermenta Glucosa (+) Lactosa (+)

KIA Agar de hierro de Kliger

CS Agar Citrato de Simmons

Escherichia

coli

No hay crecimiento bacteriano

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LIA Agar de Hierro y Lisina AF o FA Fenilalani naAminasa

Escherichia

coli

Descarboxilaci n de la lisina (-)

Fenilalanina aminasa (-)

SIM Agar SulfuroIndolMotilidad

Escherichia

coli

Motilidad + Indol +

MIN Agar MotilidadIndolNitritos MR-VP Rojo de MetiloVoges Proskauer

Motilidad (+)

Reacciono al rojo de metilo (+)

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El urocultivo se utiliza para el aislamiento de bacterias existentes en las vas urinarias, la bacteriuria puede ser asintomtica o presentarse como enfermedad crnica, una infeccin urinaria puede ser causada por una solo bacteria aunque por lo general se encuentran 2 o ms, esto se debe a que quizs y al momento de la recoleccin de la muestra el paciente no lo hizo de la manera adecuada. La bacteria ms comnmente aislada es E. coli pues se ha encontrado en la mayora de los casos.

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