Prctica 3. Extraccin en fase slida. Separacin de colorantes sintticos.

Equipo 2 Garca Reyes Ivn Miguel Quintanilla Daz Dayana Darely 25/09/2013

OBJETIVOS *Separar una mezcla de colorantes sintticos usados en alimentos: tartrazina y rojo no. 3, por extraccin en fase slida, aplicando los conceptos de cromatografa en fase reversa. *Comprobar la eficiencia de la separacin por medio de la cromatografa en capa fina sobre gel de slice.

RESULTADOS Mezcla de colorantes Tartrazina = 0.25 Rf Rojo No. 3 =0.875 Rojo No. 3 =0.9 Colorantes por separado Tartrazina =0.30

Rojo No. 3

Rojo No. 3

Tartrazina Tartrazina

Fig.1 Cromatografa en capa fina que muestra la separacin de los colorantes tartrazina y rojo no. 3 Fase mvil: butanol/ cido actico/ agua (4:2:1) Fase estacionaria: Slica gel

ANLISIS DE RESULTADOS La extraccin en fase slida es una tcnica que se aplica a la purificacin de mezclas. Presenta varias ventajas como son el corto tiempo que se emplea, la poca cantidad de muestra y disolvente requeridos, es sencilla y existe una amplia disponibilidad de fases. La tartrazina es un aditivo del grupo de los colorantes; se utiliza ampliamente en todo tipo de conservas alimentarias, est relacionado con las reacciones alrgicas y trastorno de hiperactividad y dficit de atencin en nios. Se ha demostrado que el rojo no. 3, empleado para teir cerezas, cctel de frutas, caramelos y productos horneados causa tumores de tiroides en ratas. En la prctica se llev a cabo la separacin de estos colorantes haciendo uso de la extraccin en fase slida y posteriormente se comprob la eficiencia de la misma mediante la realizacin de la cromatografa en capa fina.

Lo primero que se hizo fue acondicionar la columna con metanol y agua, posteriormente se aplic la muestra que contena la mezcla de colorantes, despus se llev a cabo un lavado con agua, esto con el fin de eluir a los compuestos no adsorbidos sobre el gel de slice una vez llevado a cabo esto se realiz elusin de los compuestos de inters con metanol a diferentes proporciones (10%, 30% y 100%) con ello se iba disminuyendo la polaridad de la fase estacionaria logrando con ello que las interacciones entre el analito y esta fase estacionaria disminuyeran tambin. El primer colorante en eluir fue la tartrazina ya que interaccion menos con la fase estacionaria que era no polar (C18), el colorante ms fuertemente retenido en esta separacin de fase reversa fue el rojo no. 3 debido a que es ms no polar y por lo tanto interaccion ms con la fase estacionaria no polar. Estas diferencias de polaridad pueden deberse, entre otras cosas, a que en el caso del rojo no.3 la presencia de yodo en la molcula disminuye la polaridad de la misma, mientras que la presencia de partes inicas en la molcula de tartrazina la hace una molcula ms polar. Una vez separados los colorantes mediante la extraccin en fase slida se procedi a realizar la cromatografa en capa fina, usando como fase estacionaria la slica gel, es decir, una fase normal, esta diferencia en la polaridad de la fase estacionaria dio lugar a que en este caso la tartrazina interaccionara ms con la fase estacionaria obtenindose con ello un valor rf ms pequeo, mientras que el colorante rojo no. 3 interaccion ms con la fase mvil no polar obtenindose un rf de mayor valor. Al realizar la cromatografa en capa fina se pudo observar coleo en las manchas obtenidas, esto se debi a que, en el caso de la mezcla de colorantes, estos se encontraban en agua por lo que ocurri un efecto matriz. Lo mismo sucedi con la mancha obtenida en la tartrazina, esto pudo deberse a que cuando esta misma eluy por la fase slida haba la presencia de agua ponindose de manifiesto el mismo efecto que en la mancha anterior. Los Rf obtenidos en la cromatografa de capa fina nos indican que la extraccin en fase slida es una buena tcnica para llevar a cabo la purificacin de sustancias ya que lor rf obtenidos son muy similares al de la mezcla de colorantes. CONCLUSIONES La tartrazina es un compuesto de mayor polaridad que el Rojo No. 3 La extraccin en fase solida ocupa disolventes similares al de la matriz para eliminar impurezas

CUESTIONARIO a) Definir los siguientes conceptos: Eluir: Proceso en el cual los componentes son arrastrados por la fase mvil. Eluyente: Disolventes utilizados para constituir a la fase mvil de un sistema cromatogrfico. Eluato: Es la disolucin que sale. Adsorcin: Separacin que depende de los equilibrios de adsorcin-desorcin de los componentes de la

mezcla, entre la fase estacionaria y loa fase mvil. Particin: Separacin de una mezcla de substancias mediante el reparto existente entre la fase mvil y la fase estacionaria soportada o ligada sobre un slido adecuado. Intercambio inico: Separacin llevada a cabo con materiales insolubles y de textura porosa, los cuales presentan grupos reactivos asociados a iones lbiles capaces de intercambiarse con el medio que los rodea. Fluido supercrtico: Es cualquier sustancia que se encuentre en condiciones de presin y temperatura
superiores a su punto crtico que se comporta como un hbrido entre un lquido y un gas, es decir, puede difundir como un gas (efusin), y disolver sustancias como un lquido (disolvente).

b) Investigar los nombres, formulas y propiedades de los colorantes artificiales usados en alimentos y empleados en la prctica.

Tartrazina Colorante azoico utilizado en repostera, productos crnicos, sopas, salsas helados, etc. Posee minimas cantidades de metales pesados (plomo, arsnico y mercurio) y se presenta en polvo fino.

Rojo No. 3 eritrosina Colorante sinttico, utilizado en alimentos as como para tintas de uso comn (impresoras), contiene yodo. Este causa un aumento de fotosensibilidad en las personas sensibles a la luz solar. En altas concentraciones interfiere con el metabolismo del yodo.

Azorrubina Colorante sinttico azoderivado empleado en los chocolates, repostera industrial, salsas emulsionadas, elaboracin de refrescos, etc. Relacionado con personas hipersensibles a los salicilatos, cancergeno.

Rojo 2G Colorante azoico empleado para la coloracin rojiza de la carne y lustrado de elementos de reporteara industrial. Potencialmente cancergeno y debido a su capacidad de liberar histamina esta intensifica los sntomas del asma.

c) Discutir en base a las estructuras de los colorantes, el orden de elucin esperado de los mismos en la cromatografa en columna y en la cromatografa en placa fina.

En la cromatografa en columna se espera que la trartrazina eluya primero debido a su baja polaridad y que este interaccione menos con la fase estacionaria. Esta misma en placa fina se espera que eluya primero debido a una mayor interaccion con la fase estacionaria que con la fase mvil. En cuanto al rojo No. 3 se espera ser el ltimo en eluir en la columna debido a que este tiene menor afinidad por la fase mvil y al adicionar metanol en diferentes concentraciones se logra modificar la polaridad de la

columna y as que el colorante tenga mayor afinidad por la fase mvil. En tanto para una cromatografa en placa fina se espera que sea el ltimo en eluir esto debido a que posee una mayor interaccion con la fase mvil que con la fase estacionaria por lo cual el colorante es menos polar en comparacin con la tartrazina. d) Explicar si la relacin de polaridades utilizada para la fase estacionaria y para fase mvil corresponde a la cromatografa en columna en fase normal o fase reversa. Corresponde a una cromatografa en columna de fase reversa debido a que la tartrazina es ms polar que el rojo No. 3 y la fase estacionaria es no polar por lo que se invierte dicha polaridad para favorecer la interaccin de la fase mvil con la tatrazina y as esta pueda eluir ms rpido que el rojo No.3 e) Explicar que se entiende cuando la columna de cromatografa empacada con gel de slice de fase reversa lleva en su etiqueta C12 C18?

Significa que la fase estacionaria est compuesta por una fase estacionaria no polar la cual tuvo un tratamiento previo para cambiar la polaridad de dicha fase.

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