PRUEBAS PARA LA DETERMINACION DE LA VELOCIDAD ENZIMATICA DE LA CATALASA

RESUMEN/ABSTRACT En el proyecto en cuestin, se busc la determinacin de la velocidad de reaccin de la enzima catalasa, antes que todo, se realiz una extensa investigacin previa sobre aspectos tericos concretos de la catalasa y de las enzimas en general, posteriormente se procedi a montar, con elementos caseros, un dispositivo que fuera capaz de medir la cantidad de oxigeno producida al poner en contacto una solucin de agua oxigenada con hgado de pollo, parte del dispositivo estaba sumergido en agua, y todo actuaba bajo la premisa de que, por la diferencia de densidades el oxgeno tendera a subir en relacin al agua, por lo que, empleando una probeta, para fines practicas se midi como oxigeno la cantidad de agua desplazada por efecto de este. Se realizaron un total de tres pruebas con diferentes cantidades y proporciones de enzima-sustrato (1:1, 1:2, 1:4), como enzima se tom la encontrada en el hgado de pollo, y en cuanto a sustrato se tom el agua oxigenada ordinaria que se halla en la mayora de las farmacias del pas, los valores se dieron en gramos en cuanto a la enzima, y mililitros en cuanto al sustrato, cada experimento centro con dos repeticiones, las pruebas duraron un periodo de cuatro minutos en todos los casos, por lo que se analizaron un total de nueve grupos de valores de la enzima, con estos valores experimentales establecidos, se procedi a hacer un anlisis estadstico de los resultados obtenidos, adicionalmente se emple, mediante el programa ofimtico Microsoft Excel un ajuste de curvas utilizando el mtodo de mnimos cuadrados, con el fin de poder obtener un valor de la pendiente como principal referente de la velocidad de reaccin.

INTRODUCCION

Las enzimas son catalizadores biolgicos, es decir, molculas que aceleran la velocidad a la que ocurren las reacciones exergonicas, por lo que, debe entenderse que para que una enzima pueda funcionar, la reaccin debe ser espontanea, debe ocurrir naturalmente, favorecida desde el punto de vista termodinmico, el catalizador solo se encargara de que dicha reaccin tenga una velocidad aceptable para el organismo, otra caracterstica es que a diferencia de otras molculas que pueden acelerar reacciones, en ningn caso la enzima ser consumida por la reaccin, si no que una misma enzima se reutiliza un nmero ilimitado de veces. Desde el punto de vista bioqumico, las enzimas pertenecen al grupo de las protenas, por lo que estn compuestas por cadenas polipeptidicas que a su vez se encuentran

formadas por aminocidos. Dichas protenas, como la mayora, estn determinadas en cuanto a funcin por su estructura. La forma de trabajar de las enzimas es a travs de la accin en un sustrato, dichos sustratos se unirn a una parte de la protena enzimtica, una vez acoplada, la enzima se encargara de acelerar la reaccin hasta que solo queden productos, dichos productos sern liberados al medio, dejando a la enzima libre para volver a catalizar la misma reaccin con otro sustrato. Al lugar en que el sustrato se une a la enzima se le denomina sitio activo, la conformacin del sitio activo depende fuertemente de las estructuras de la protena, es imposible entonces ver de maneras aisladas la forma y la funcin. Una vez que el sustrato entra al sitio activo, se mantendrn juntos mediante interacciones dbiles, por puentes de hidrogeno en la mayora de los casos. El sitio activo est constituido por las cadenas laterales o grupos R de los aminocidos que componen a la enzima. El sitio activo tambin tiene la particularidad de no ser totalmente rgido, si no que una vez que el sustrato se une a este, comenzara a cambiar de conformacin para lograr un mximo acoplamiento al sustrato, una vez que este se haya retirado en forma de producto, el sitio activo recuperara su conformacin original, y repetir el mismo proceso (Figura 1).

Figura 1 Descripcin del ciclo cataltico de una enzima

Las enzimas en general se tratan de una reliquia biolgica, y en promedio, pueden llegar a convertir 1000 molculas de sustrato en producto en un segundo. Existen adems, adems de los factores de composicin de las enzimas, que afectan el rendimiento y las capacidades de estas, principalmente los ambientales referidos como el pH y la Temperatura. En general se puede considerar que con un incremento de la temperatura la enzima trabajara mejor, debido a que los sustratos colisionaran con mayor velocidad en el sitio activo, mas sin embargo, la estructura terciara de las protenas (referida a la interaccin entre cadenas laterales o R de los aminocidos que la componen) ms sin embargo, aumentado cierto valor de temperatura la actividad enzimtica se detendr totalmente, debido a que justamente estas interacciones de la cadena terciaria se detendrn, lo que causara una desnaturalizacin de la enzima, el rango de temperatura de las enzimas varia fuertemente, siendo la de los humanos un rango de 35 a 40 C y como contraste, en algunas bacterias que habitan en manantiales encuentran su punto ptimo a temperaturas de 70C . En el caso del pH, tenemos que el espectro mas comn en el que las enzimas trabajan ptimamente va del 6 al 8, aunque igual como en el caso de la temperatura, hay sus excepciones, a pH muy acido las protenas tambin terminaran por desnaturalizarse. Obviamente todas estas caractersticas no son mas que una prueba del gran nivel de especificidad que tienen las enzimas, no solo a nivel de sustrato, si no que tambin a nivel ambiental. Comprendidos los elementos fundamentales de las enzimas, se proceder a hablar ahora sobre la Catalasa, que es la enzima que se trabajo y desarrollo durante este proyecto. La Catalasa es una enzima que se encarga de escindir el Perxido de Hidrogeno en agua y oxigeno (Figura 2), esto es de suma importancia para los seres vivos, debido a que estos acumulan cantidades de perxido naturalmente, mas sin embargo este compuesto en abundancia es daino, la falta eficiente de la accin de la catalasa puede tener resultados negativos para el organismo

2 H2O2 2 H2O + O2
Figura 2 Reaccin qumica de la catalasa La catalasa se encuentra en la mayora de los tejidos de los seres vivos, tanto humanos pues animales, puesto que el perxido es generado en todo el organismo, adems, dados numerosos estudios, se entiende a la catalasa como una de las enzimas con mayor velocidad de reaccin existente. Adems de sus propiedades casi esenciales para la vida, la catalasa ha jugado un papel determinante en muchas industrias modernas:

Microbiologa: Existe una prueba en la cual se clasifica a los organismos en funcin a si hay presencia o no de catalasa en sus organismos Alimentaria: La catalasa durante el proceso industrial es utilizada para la remocin del perxido de hidrogeno de la leche y del queso. Tambin suele ser parte de los conservadores, dado que tambin evita que la comida se oxide Textil: Remueve el perxido de hidrogeno de la fabricas, para comprobarse que el material este libre de este. Limpieza: Se suele utilizar como limpiador de lentes y gafas, adems de en los lentes de contacto Esttica: La catalasa es usada en mltiples tratamientos de la piel, especialmente los relacionados con mascarillas de belleza

La catalasa, adems, trabaja ptimamente en un pH neutro y en valores de temperatura depende fuertemente del organismo, en el caso de los humanos y la mayora de los mamferos la catalasa acta en un rango de temperatura de aproximadamente 37C