Tecnologa de la fermentacin del etanol - mobilis de Zymomonas

P. Gunasekaran y K. Chandra Raj

Departamento de la tecnologa microbiana, escuela de ciencias biolgicas, universidad de Madurai Kamaraj, Madurai 625 021, la India

debido a la disminucin del combustible fsil, la produccin microbiana del bio -combustible de subproductos orgnicos ha adquirido la significacin en aos recientes. El etanol se ha confiado en como combustible alterno para el futuro. Aunque varios microorganismos, incluyendo sp. del clostridium, se han considerado como microbios etanologenicos, los mobilis cerevisiae y facultativos del saccharomyces de la levadura de la bacteria de Zymomonas son candidatos mejores a la produccin industrial del alcohol. Los mobilis del Z. poseen ventajas sobre el S. cerevisiae con respecto a productividad y a tolerancia del etanol, as animando a investigadores para explotar Z. capacidad de los mobilis de utilizar la sucrosa, la glucosa, y la fructosa por el camino de Entner-Deudoroff. Los embotellamientos en mobilis del Z. son: (i) su inhabilidad de convertir los polmeros complejos del carbohidrato tiene gusto de la celulosa, del hemicellulose, y del almidn al etanol, (ii) su dando por resultado subproductos tales como sorbitol, acetoin, glicerol, y cido actico, y (iii) formacin del polmero levan extracelular. Para evitar estos problemas, la manipulacin gentica de los mobilis del Z. se ha procurado para ensanchar la gama utilizable de los mobilis del Z. , es decir los genes que codificaban varias enzimas hidrolticas de especies bacterianas relacionadas se han reproducido, y se han transferido en mobilis del Z. . Interestingly, un operon del animal domstico ( roduction de p de et hanol) fue construido combinando el pdc (decarboxylase del pyruvate) y genes del adhII (dehydrogenase del alcohol) de Z. los mobilis, y transferido a otras tensiones bacterianas para hacerles la novela ethanologenic filtran. Con acercamientos clsicos de la mutacin y de la seleccin, los mutantes de los mobilis del Z. con caractersticas mejoradas de la fermentacin y sin la formacin del subproducto se han obtenido . Adems del etanol, los mobilis del Z. tambin se han dirigido metablico para producir el L-l-alanine y el cido L-la'ctico. Genes que codifican b - la sntesis del caroteno tambin se ha reproducido y se ha expresado con xito en mobilis del Z. para enriquecer los alimentos fermentados de los animales del campo. Varios usos de levan en alimento e industrias farmacuticas proporcionan una oportunidad de explotar los mobilis del Z. para la produccin en grande de levan. Los mritos de los mobilis del Z. sugieren el uso potencial de este organismo en la produccin industrial de los varios productos de la fermentacin.

Los recursos energticos naturales tales como combustible fsil, petrleo y carbn se estn utilizando en una tarifa rpida y estos recursos se han estimado al ltimo sobre algunos aos. Por lo tanto, las fuentes de energa alternativa tales como etanol, metano, e hidrgeno se estn considerando. Algunos procesos biolgicos han rendido las rutas posibles para producir el etanol y el metano en volmenes grandes. Un inters mundial en la utilizacin del bio-etanol como fuente de energa ha estimulado estudios en el coste y la eficacia de los procesos industriales para la produccin 1 del etanol . La investigacin intensa se ha realizado para obtener organismos fermentantes eficientes, los substratos baratos de la fermentacin, y las condiciones ambientales ptimas para que la fermentacin ocurra. Tradicionalmente, el etanol se ha producido en la fermentacin de la hornada con las tensiones de la levadura que no pueden tolerar la alta concentracin del etanol. Esto hizo necesario el programa de mejora de la tensin para obtener las tensiones alcohol-tolerantes para el proceso de fermentacin. Los mobilis de Zymomonas

, una bacteria gram -negative, se consideran como organismo alternativo en la produccin en grande del etanol del combustible. Los estudios comparativos del laboratorio y pilot-scale en la cintica de la fermentacin de la hornada de los mobilis del Z. contra una variedad de levadura han indicado la conveniencia de los mobilis del Z. sobre las levaduras debido a las ventajas siguientes:

i. ii. iii. iv. v.

su uptake y etanol ms altos del azcar rinden, su produccin ms baja de la biomasa, su tolerancia ms alta del etanol, no requiere la adicin controlada del oxgeno durante la fermentacin, y su amenability a las manipulaciones genticas.

La nica limitacin de los mobilis del Z. compar a la levadura es que su gama utilizable del substrato est restringida a la glucosa, a la fructosa, y a la sucrosa. Los mobilis del Z. fueron aislados originalmente de las bebidas alcohlicas como el vino de palma africano, el ' pulque mejicano ', y tambin com o contaminante de la sidra y de la cerveza en pases europeos. En base de la evaluacin usando los acercamientos taxonmicos modernos, el gnero Zymomonas 2 tiene solamente una especie con dos subespecies, subsp de los mobilis del Z.. mobilis y subsp de los mobilis del Z.. pomaceae . La capacidad de utilizar la sucrosa como fuente del carbn distingue mobilis del Z. de Z. anaerobios 3 . Es una de las pocas bacterias anaerobias facultativas que metaboliza la glucosa y la fructosa va el camino (e -d) de Entner-Deudoroff, que est generalmente presente en los microorganismos aerobios 4 . Bajo condiciones anaerobias, Z. los mobilis producen los subproductos tales como acetoin, glicerol, acetato, y lactato, que dan lugar a la produccin reducida del etanol de la glucosa. Durante el crecimiento de los mobilis del Z. en fructosa, la formacin del as el toin, el cido actico, y el acetaldehyde eran claramente ms pronunciados que cuando estaba crecido en glucosa. Sin embargo la produccin de clula era baja durante su crecimiento en fructosa. Adems de la fermentacin del etanol, los mobilis del Z. tienen uso potencial en la produccin del polmero. Levan, un polmero de las unidades de la fructosa se lig por el enlace de b -2,6-fructosyl, es producido por mobilis del Z. durante su crecimiento en medio de la sucrosa. Levan microbiano es de importancia comercial y se utiliza como un espesamiento, gelificndose, y agente que suspende. En aos recientes, las estrategias para mejorar la produccin de produccin levan por los microorganismos atrajeron la mayor atencin. En esta revisin, los progresos recientes en los usos potenciales de los mobilis del Z. se discuten.

Bioqumica de los mobilis de Zymomonas

En mobilis del Z. , D - glucosa y D - fructosa es transportada por la difusin facilitada 5 . Las soluciones de glucosa concentradas no son inhibitorias a las

enzimas e-d del camino, puesto que procede la conversin de la glucosa al etanol por este organismo rpidamente 6 . As, la presin osmtica extracelular de la s olucin de glucosa se puede balancear rpidamente por concentraciones intracelulares correspondientes del azcar. Las altas concentraciones del azcar disminuyen el potencial total del agua, y ejercen las presiones osmticas que son comparables a las de las soluciones de sal relativamente fuertes. La tolerancia poco salada de los mobilis del Z. plantea los problemas para la fermentacin de la melaza que contiene generalmente un contenido 4 de la alto-sal . El estudio de intermedios metablicos demostr que el dehydrogenase y el phosphoglycerolmutase de glucose-6-phosphate son las enzimas limitadoras, y que el phosphofructokinase no est presente en el camino e-d de los mobilis 7 del Z. . El decarboxylase del pyruvate (Pdc) y el dehydrogenase del alcohol (alimentador de originales) son las enzimas dominantes en la formacin del etanol. El Pdc es una enzima nica en mobilis del Z. que requiere el pirofosfato de la tiamina para su actividad 8 . Mientras que el alimentador de originales I de los mobilis del Z. es cinc-dependiente y es similar a alimentador de originales IV de la levadura, el alimentador de originales II es muy inusual en contener el hierro y no el cinc 9 . El alimentador de originales II aparece facilitar la continuacin de la fermentacin en la alta concentracin del etanol.

En mobilis del Z., las enzimas e-d del camino son ms tolerantes al etanol, pues el sistema sin clulas de los mobilis del Z. puede consumir rpidamente la glucosa y producir el etanol ms el de 15% w/v (ref. 10). La membrana de la clula de Z. los mobilis han adquirido el contenido alterado del cido graso para contrariar los efectos nocivos del etanol. Los cidos grasos principales que ocurren en mobilis del Z. son cido myristic, cido, y cis palmitic - cido vaccenic. Entre los phospholipids, el ethanolamine del phosphotidyl est el lo ms abundante posible presente. La alta concentracin de cis - el cido

vaccenic y los hopanoids inusuales en la membrana son responsables de la alta tolerancia 11 del etanol . Estn situados en la membrana de la clula de los mobilis del Z. el Nadh- y los NADPH-nADPH-oxidases que catalizan la oxidacin de NAD(P)H (ref. 12). Adems, el catalase de las enzimas, el dismutase del superoxide, y el peroxidase estn tambin presentes. Aqu, la transferencia de electrones va la cadena respiratoria no se junta con el phosphorylation oxidative. El oxidoreductase de la glucosa-fructosa y el dehydrogenase de la glucosa conducen a la formacin del cido glucnico que despus del phosphorylation incorpora el camino e -d despus de la formacin de NAD(P)H. Un topo de la coenzima reducida formada es consumido directamente por el dehydrogenase del mannitol y el oxidase de NAD(P)H, dando por resultado la acumulacin de los subproductos, a saber, de acetaldehyde, de acetoin, y de cido actico 13 . La produccin del acetaldehyde por mobilis del Z. en la presencia del oxgeno es debido a la actividad creciente del oxidase del NADH dando por resultado la disponibilidad disminuida del NADH para la reduccin del acetaldehyde al etanol de Adh. No tiene un dehydrogenase del aldehino para oxidar el acetaldehyde al cido actico. Los mutantes del alimentador de originales de los mobilis del Z. que demostraban niveles crecientes de la produccin del acetaldehyde han sido aislados usando el alcohol el allico como agente selectivo 14 . Los mobilis del Z. poseen los phosphatases cidos y alcalinos. Mientras que la actividad cida del phosphatase es la ms alta de la presencia del magnesio 2+ , la actividad del phosphatase alcalino es la ms alta con Zn(II) (ref. 15). El phophatase alcalino de los mobilis del Z. se asocia a las membranas y ocurre en dos isoforms 16 . Por la actividad de la hidrolizacin de la sucrosa se parece ser estimulada la sucrosa y la fructosa 17 . El ndice de la hidrlisis de la sucrosa y el ndice del transfructosylation se demuestran para ser ms altos que el ndice del uptake del azcar de Z. mobilis . Durante la fermentacin de la sucrosa por mobilis del Z. , tres tipos de transfructosylation ocurren dando por resultado la formacin de la fructosa libre, de los oligosaccharides, y de polmeros ms altos de la fructosa y levan donde el agua, la sucrosa, y levan del polyfructose pueden actuar respectivamente como aceptador 18 . Levansucrase se ha purificado de las clulas 19 as como del caldo 20 de la cultura . Tres diversas enzimas saccharolytic se han divulgado en mobilis del Z. ; un sucrase endocellular, un levansucrase exocelular, y un sucrase exocelular 21 . Estas enzimas son b - D - los fructofuranosyl-fructofuranosyl-transferases y pueden por lo tanto hydrolyse la sucrosa. Por otra parte, el levansucrase sintetiza levan y puede alternadamente ser hidrolizado parcialmente. El sucrase y el levansucrase no hydrolyse la inulina, un polmero bajo de la fructosa del peso molecular.

Biologa molecular de los mobilis del Z.

El tamao del genome de las tensiones de los mobilis del Z. es en la gama del 1,53 0,19 ' 10 9 Da, el cerca de 56% del genome del E. coli, y puede acomodar los cistrons cerca de 1500. La composicin de la base de la DNA de los mobilis del Z. (el 48,5 G 1,0% + C) fue determinado por la desnaturalizacin termal 22 . El gene del decarboxylase del pyruvate ( pdc ) se ha reproducido de las tensiones ATCC 31821 (ref. 23) y ATCC 29191 (refs 24, 25) de los mobilis del Z.. La regin de la codificacin es 1,7 KB-largos y codifica un polipptido de 567 aminocidos con una masa de la subunid ad del kDa 60,8 (ref. 25). Pues la regin del promotor no contiene las secuencias homlogas a la estructura generalizada del promotor para E. coli , no reconocen al promotor del pdc en E. coli, aunque el gene reproducido se expresa relativamente en los altos niveles bajo control de promotores alternativos. La comparacin de la secuencia del nucleotide del gene del pdc de las tensiones ATCC 29191 y ATCC 31821 de los mobilis del Z. demostr la existencia del polimorfismo en diversos aislantes