MICROBIOLOGA CLNICA

MEDIOS DE CULTIVO
(CURSO 2012-2013) (GRUPOS 1 y 2)

Agar BCYE (agar tamponado con extracto de levadura y carbn, buffered, charcoal, yeast extract) Medio rico suplementado con L-cistina y pirofosfato frrico que permite el crecimiento y enriquecimiento de especies de Legionella. Cuando se le aade polimixina B, vancomicina y anisomicina es selectivo para Legionella y Nocardia, ya que inhibe bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente. Agar BHI (infusin cerebro-corazn, brain-heart) La infusin cerebro-corazn es una frmula muy rica que puede emplearse, ya sea como caldo o medio slido, con sangre adicional o sin sta, para el crecimiento de una gran variedad de microorganismos. Los componentes clave incluyen infusin de distintos tejidos animales con el agregado de peptona, tampn fosfato y una pequea concentracin de glucosa que proporciona una fuente de energa fcilmente accesible a los microorganismos. Los caldos infusin cerebro-corazn se emplean con frecuencia como medio para hemocultivo y como medio base para muchas pruebas metablicas, en especial para la identificacin de estreptococos. Agar BHI con antibiticos El agar BHI adicionado de cloranfenicol y cicloheximida se utiliza para el aislamiento selectivo de hongos patgenos. La cicloheximida inhibe el crecimiento de hongos saprfitos mientras que el cloranfenicol acta como agente antibacteriano tanto de bacterias Gram positivas como Gram negativas. La incorporacin de ambos antimicrobianos proporciona una mayor selectividad frente a hongos saprfitos y bacterias. Agar BHI con 5% sangre de oveja El agar infusin cerebro-corazn con 5-10% de sangre de oveja adicionado de cloranfenicol y gentamicina inhibe el crecimiento de bacterias, pero permite el crecimiento de hongos, incluso de los ms exigentes. Este agar se emplea como medio de aislamiento primario para el crecimiento de hongos, ya que permite una mejor recuperacin de patgenos que el agar glucosa de Sabouraud. Agar Campy con sangre Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. El medio est suplementado con sangre y con cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el desarrollo de la mayora de las bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente. Agar CCF (fructosa, cicloserina, cefoxitina) Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Clostridium difficile en muestras de heces u otros materiales intestinales. Contiene rojo neutro como indicador. Cicloserina y cefoxitina inhiben la microbiota intestinal. C. difficile a las 48 horas de incubacin forma colonias rizoides amarillentas que tienen estructuras internas cristalinas birrefringentes. Agar chocolate Este medio usa la misma base que el agar sangre. En un principio, los eritrocitos se adicionaban a la base fundida y luego se elevaba la temperatura (alrededor de 85C) para lisar parcialmente las clulas, lo que otorgaba al medio el color pardo-chocolate. Actualmente, la hemoglobina y otros nutrientes presentes en los lisados de los glbulos rojos, como hemina (factor X) y coenzima NAD (factor V), se aaden como suplementos a un agar base muy rico. Tambin se puede agregar IsoVitaleX, un suplemento definido que proporciona el factor V, vitaminas, aminocidos, coenzimas, glucosa, iones frricos y otros factores que favorecen el crecimiento de especies exigentes.

Agar chocolate con IsoVitaleX y vancomicina Medio selectivo modificado para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis a partir de muestras clnicas que contienen microbiota mixta de bacterias y hongos. La vancomicina es activa frente a bacterias Gram positivas. Agar CIN (cefsulodina, irgasn, novobiocina) Medio selectivo para Yersinia. Contiene manitol y rojo neutro como indicador. Las colonias de Yersinia presentan un borde transparente con un amplio centro rojo muy intenso. No es totalmente especfico para Yersinia, ya que pueden crecer otros bacilos Gram negativos, en particular Citrobacter freundii, que presenta colonias semejantes a las de Yersinia. Agar cistina-telurito Medio utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae. Sobre la base de agar infusin se agrega 5% de sangre de oveja. La reduccin del telurito de potasio por C. diphtheriae produce colonias negras. Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en electrolitos) Es un medio diferencial recomendado para el anlisis bacteriolgico de orina ya que en l crecen profusamente la gran mayora de las bacterias, tanto Gram negativas como Gram positivas, que provocan infecciones urinarias, pudindose diferenciar o identificar sus respectivas colonias. Debido a su deficiencia en electrolitos (no lleva cloruro sdico), no permite que las colonias de Proteus invadan la placa de cultivo, lo que facilita el recuento. La lactosa es el nico carbohidrato presente. La cistina facilita el crecimiento de los coliformes dependientes de ella. El azul de bromotimol permite distinguir las colonias de bacterias fermentadoras de las que no lo son. Los microorganismos fermentadores de lactosa dan lugar a colonias de color amarillo. Los no fermentadores dan lugar a colonias traslcidas o de color claro. La alcalinizacin del medio provoca la aparicin de un color azul intenso. Agar CNA (colistina, cido nalidxico) Agar base de Columbia adicionado de colistina y cido nalidxico que suprimen por completo el crecimiento de enterobacterias y de Pseudomonas, pero permiten el desarrollo de estafilococos, estreptococos, enterococos y levaduras. Ciertos microorganismos Gram negativos como Gardnerella vaginalis y algunas especies de Bacteroides pueden crecer muy bien en este medio. Se puede aadir 5% de sangre desfibrinada que proporciona ms nutrientes y la capacidad de detectar reacciones hemolticas. Agar Columbia Es una excelente base para el crecimiento de microorganismos exigentes y para la buena visualizacin de hemlisis con el agregado de sangre. Incluye peptona, triptena, extracto de levadura y extracto de corazn que favorecen el desarrollo de microorganismos exigentes. El almidn incrementa el desarrollo de neiserias y las reacciones de hemlisis de algunos estreptococos. Tiene la ventaja de permitir la adicin de sangre o de antibiticos entre otras cosas, obtenindose as un medio ms enriquecido o selectivo de acuerdo al aditivo. Agar desoxicolato-citrato (ADC) Medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella y Shigella. El desoxicolato sdico inhibe o suprime considerablemente el crecimiento de coliformes y bacterias Gram positivas. Sin embargo, en ocasiones crecen coliformes, y cuando se encuentran en grandes cantidades producen cido a partir de la lactosa, precipitan la sal biliar y dan un medio rojo que hace difcil la deteccin de patgenos. Incluye rojo neutro como indicador. Las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras. Agar EMB (eosina, azul de metileno, eosin-methylen blue, Agar de Levine) Es un medio diferencial y selectivo para aislar y detectar enterobacterias en muestras mixtas. Los colorantes de anilina (eosina y azul de metileno) inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y a las Gram negativas exigentes. Tambin se combinan precipitando a pH cido, actuando como indicadores de produccin de cidos. El medio incluye lactosa, lo que permite la diferenciacin de los fermentadores de lactosa de los no fermentadores. Los fermentadores fuertes de lactosa, sobre todo Escherichia coli, producen colonias de color negro verdoso con brillo metlico. Los productores ms dbiles de cidos, forman colonias de color violeta. Los no fermentadores de lactosa forman colonias transparentes.

Agar glucosa de Sabouraud Este medio fue desarrollado para el cultivo de hongos patgenos, especialmente de los productores de micosis superficiales. En la actualidad se recomienda slo para el aislamiento primario de dermatfitos, con el agregado de cicloheximida y cloranfenicol. El pH final (alrededor de 5,6) es mucho menor que el de la mayora de los medios y tiende a eliminar el crecimiento bacteriano. Los subcultivos de los hongos aislados originalmente en BHI pueden presentar una morfologa ms uniforme en agar glucosa de Sabouraud, por esto es til para la identificacin de hongos una vez aislados. Agar HE (agar entrico de Hektoen) Este medio es un ejemplo de agar selectivo y diferencial que no necesita ser esterilizado en autoclave porque son muy pocos los microorganismos que pueden crecer en l. Las concentraciones de sales biliares y de los colorantes azul de bromotimol y fucsina cida son lo suficientemente altas como para inhibir el desarrollo de la mayora de la microbiota fecal normal. Est indicado para el aislamiento de Salmonella y Shigella. Como elementos diferenciadores se incorporan lactosa, sacarosa y salicina que no son fermentadas ni por Salmonella ni por Shigella. Los organismos fermentadores de lactosa, al acidificar el medio alrededor de la colonia, toman un color amarillo. La adicin de citrato frrico amnico y tiosulfato sdico permite la visualizacin del sulfhdrico por la formacin de un precipitado negro alrededor de las colonias. Las colonias de Shigella son verdes o transparentes, y las de Salmonella, verdes o transparentes con un precipitado negro en el centro Agar inclinado de Loeffler Medio de cultivo que contiene glucosa y suero, utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae. Agar Lowenstein-Jensen Este medio fue desarrollado como agar para enriquecimiento selectivo de micobacterias. El colorante verde de malaquita inhibe el crecimiento de contaminantes que son capaces de sobrevivir al tratamiento inicial de la muestra. Los medios con base de Lowenstein son los nicos de uso comn que requieren el agregado de huevos homogeneizados, lo cual obliga a la esterilizacin por tindalizacin. La utilizacin de la protena de los huevos por parte de algunas micobacterias les permite producir niacina, una caracterstica diferencial importante. Actualmente se emplean muchas modificaciones del medio bsico, incluyendo la adicin de glicerol o la de antibiticos y cido ribonucleico como factor de crecimiento. Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperacin de enterobacterias y bacilos Gram negativos entricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la nica fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitacin de las sales biliares por la gran cantidad de cidos formados, lo que se observa fcilmente en el medio por la aparicin de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. Agar Martin-Lewis Modificacin del agar Thayer-Martin, consistente en la sustitucin de nistatina por anisomicina (que se conserva durante ms tiempo y tiene una mayor actividad contra las levaduras) y una mayor concentracin de vancomicina. Agar Mueller-Hinton Es un medio de cultivo rico, diseado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comit de la Organizacin Mundial de la Salud sobre estandarizacin de pruebas de susceptibilidad. Este Comit lo propuso ya en 1970 para determinar la susceptibilidad de los microorganismos frente a los antimicrobianos, por no llevar incorporados inhibidores de los antimicrobianos, como, por ejemplo, el PABA (cido p-amino benzoico), que anula la actividad de sulfamidas y antibiticos y debido a su reproducibilidad y aceptacin por las personas que trabajan en este campo. Desde entonces su empleo se ha generalizado.

El agar Mueller-Hinton se utiliza para la realizacin del ensayo de difusin en placa, en tanto que el caldo Mueller-Hinton se emplea para la determinacin de la concentracin mnima inhibidora en el ensayo de diluciones seriadas. Agar nutritivo Medio slido que se prepara aadiendo agar a un caldo nutritivo. Existen diversas clases de agar nutritivo comercializadas: agar infusin de cerebro y corazn (agar BHI), agar triptona de soja (TSA), agar brucela, agar Columbia. Agar NYC (New York City) Medio selectivo para Neisseria gonorrhoeae. Suplementado con 3% de hemoglobina, plasma de caballo y vancomicina, colistina, anfotericina B y trimetoprim. Agar PEA (alcohol feniletlico, phenylethanol) Agregando alcohol feniletlico a una base con peptona, extracto de carne y agar se obtiene un medio que inhibe el desarrollo de las bacterias Gram negativas. La adicin de un 5% de sangre de oveja proporciona nutrientes para estreptococos y estafilococos. Este medio tambin se emplea para el cultivo de microorganismos anaerobios que no son inhibidos por el alcohol. Despus de su preparacin las placas con alcohol feniletlico huelen a rosas. Agar Regan Lowe Medio de enriquecimiento y selectivo para Bordetella pertussis. Es un agar con carbn, suplementado con sangre de caballo, cefalexina y anfotericina B. Agar SABHI (agar base de Sabouraud, infusin de cerebro y corazn) Este medio es una combinacin del agar glucosa de Sabouraud y el agar BHI. Se emplea para el aislamiento y cultivo de hongos patgenos como los dermatfitos y tambin no patgenos. Es til para la mxima recuperacin de Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum de tejidos y fluidos corporales. La adicin de sangre incrementa la recuperacin de H. capsulatum y ayuda la conversin de H. capsulatum y B. dermatitidis a la fase de levadura (hongos dimrficos). La incorporacin de antibiticos de amplio espectro como el cloranfenicol inhibe el crecimiento de muchas bacterias Gram negativas aunque puede inhibir el crecimiento de algunos hongos. Agar salino manitol (SM, MS mannitol saline, Medio de Chapman) Es un medio selectivo para estafilococos debido a la alta concentracin de cloruro sdico (75 g/L). La mayora de los microorganismos no crecen a esta concentracin de sal, mientras que los estafilococos, entre los que se encuentran los del gnero Staphylococcus, s lo hacen. Incorpora manitol como fuente de carbono y rojo fenol como indicador, lo que permite aprovechar la correlacin que existe entre la patogenia y la capacidad fermentadora del manitol de los estafilococos para establecer un diagnstico presuntivo y sirve, por lo tanto, como indicativo de la presencia de Staphylococcus aureus. Los estafilococos patgenos fermentan el manitol y producen colonias amarillas. Los estafilococos no patgenos no lo fermentan y producen colonias de color rosa. Agar sangre (AS BA, blood agar) Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con importancia clnica excepto el de los ms exigentes. Se prepara aadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un agar base rico (agar Columbia, por ejemplo). Se utiliza tambin para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos, por lo que se considera un medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas extracelulares que actan sobre los glbulos rojos. Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que poseen: alfa, beta o gamma. Para leer con exactitud la hemlisis producida, se debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la luz. La hemlisis de tipo alfa es una hemlisis incompleta, caracterizada por la destruccin parcial de la membrana de los eritrocitos y prdida de algo de hemoglobina en el agar. A simple vista este tipo de hemlisis se detecta por la aparicin de una coloracin verdosa alrededor de la colonia. La beta-hemlisis se caracteriza por la destruccin total de la membrana por lo que se detecta por la aparicin de un halo transparente alrededor de la colonia. Cuando los microorganismos no producen ningn tipo de hemlisis se dice que son gamma-hemolticos.

Agar sangre con disco de bacitracina Se utiliza para la identificacin de estreptococos beta-hemolticos del grupo A de Lancefield ya que estos son sensibles a la bacitracina a la concentracin que se encuentra en los discos (0,04 U). El antibitico no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta-hemolticos. Sobre la placa de agar sangre se coloca un disco con bacitracina y tras la incubacin se observa la presencia de halo de inhibicin (estreptococos beta-hemolticos presuntamente del grupo A) o la ausencia del mismo (estreptococos beta-hemolticos que presuntamente no pertenecen al grupo A). Agar sangre con estra estafiloccica Muchas bacterias y levaduras sintetizan y secretan NAD (factor V) durante el crecimiento, tal es el caso de Staphylococcus aureus. En cultivos mixtos, las especies de Haemophilus que requieren este factor pueden crecer como colonias puntiformes alrededor de las colonias de estos otros microorganismos (satelitismo). Esto proporciona una tcnica para detectar especies de Haemophilus en muestras mixtas y una prueba presuntiva para la identificacin del gnero. La tcnica consiste en sembrar una posible colonia de Haemophilus en estra (como un csped) en agar sangre. Posteriormente, se hace una nica estra sobre la placa con un cultivo de S. aureus. A las 24 horas pueden observarse las pequeas colonias grises de Haemophilus dentro del rea hemoltica adyacente al crecimiento de los estafilococos. Agar sangre con suplementos para anaerobios Es un medio rico, sin inhibidores, que permite el desarrollo de gran cantidad de especies anaerobias. Contiene un agar base, como el agar Columbia, adicionado de sangre de oveja, extracto de levadura, hemina y vitamina K. Agar sangre de caballo con bacitracina Existen varios medios selectivos que utilizan frmulas con agar sangre como base para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras clnicas, como el agar infusin de cerebro y corazn con sangre de caballo al 5% y bacitracina. En ste, la infusin de cerebro y corazn proporciona los nutrientes generales y la sangre de caballo los factores V y X para favorecer el crecimiento de H. influenzae. Se aade bacitracina para inhibir la mayor parte de la microbiota, mientras que H. influenzae es resistente a este agente antimicrobiano. Agar sangre de caballo con carbn Es un medio selectivo para el aislamiento de Bordetella pertussis y B. parapertussis. Incluye sangre de caballo al 7% y cefalexina que suprime parcialmente la microbiota normal de las vas respiratorias. El desarrollo posterior de este medio dio lugar al agar Regan-Lowe. Agar sangre kanamicina-vancomicina (KV) El medio KV es til para el aislamiento selectivo de especies de anaerobios (Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium, Veilonella) en muestras clnicas que contienen bacterias aerobias y anaerobias mezcladas. La kanamicina inhibe el desarrollo de muchos, pero no todos, bacilos Gram negativos anaerobios facultativos y la vancomicina inhibe el de las bacterias Gram positivas en general (incluidas la mayora de anaerobias y no anaerobias). Agar selectivo para estreptococos Es una modificacin del agar sangre de oveja, que contiene cristal violeta, trimetoprim~sulfametoxasol y colistina en concentraciones adecuadas para inhibir a la mayora de los estreptococos excepto Streptococcus pyogenes y S. agalactiae. La beta hemlisis se observa fcilmente. El medio es efectivo para la siembra primaria de hisopos de garganta para la deteccin de estreptococos del grupo A. Agar Skirrow Preparado con una base como agar brucela, TSA o agar Columbia, enriquecida con sangre de oveja al 5% y que se hace selectivo para Campylobacter por la adicin de vancomicina, polimixina y trimetoprim. Agar SS (Salmonella-Shigella) Lleva sales biliares, citrato sdico y frrico, tiosulfato y el colorante verde brillante. El carcter diferencial se basa en la fermentacin de la lactosa. Incorpora rojo neutro. Las colonias lactosa positivas son de color rojo,

mientras que las lactosa negativas son transparentes (Shigella). Las colonias de Salmonella son transparentes con el centro negro. Agar sulfito de bismuto Medio para el aislamiento de Salmonella typhi. El sulfato ferroso acta como indicador en la produccin de sulfhdrico. El sulfito de bismuto y el verde brillante inhiben considerablemente el crecimiento de bacterias contaminantes. S. typhi produce colonias con centro negro y bordes claros que a las 48 horas adquieren halo negro grisceo y brillo metlico. Agar TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares) Medio selectivo para especies del gnero Vibrio debido a las altas concentraciones de tiosulfato sdico, citrato frrico y cloruro sdico que inhiben a la mayora de las enterobacterias. Por la presencia de sacarosa y el azul de timol y bromotimol como indicadores, permite diferenciar los microorganismos que fermentan este azcar, como V. cholerae (colonias amarillas), de otros que no lo fermentan, como V. parahaemolyticus (colonias verdes), y, entre stos, los productores de sulfhdrico (generalmente Proteus). Agar Thayer-Martin Este medio es una modificacin del agar chocolate para que sea selectivo para las neiserias patgenas. Estas modificaciones incluyen la adicin de colistina (para inhibir otras bacterias Gram negativas), vancomicina (para inhibir bacterias Gram positivas) y nistatina o anisomicina (para inhibir levaduras). El agar Thayer-Martin incorpora nistatina. El agar Thayer-Martin Modificado (MTM) incluye trimetoprim para inhibir a Proteus. Agar triptona-soja (TSA) Medio rico de uso general para el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. Se produce por digestin enzimtica de la soja y de la casena. Con frecuencia se utiliza como agar base para otros tipos de medios, como agar sangre, por ejemplo. En este medio pueden crecer algunos microorganismos exigentes como ciertas especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria, Neisseria y Vibrio. Agar verde brillante Medio altamente selectivo para el aislamiento de especies de Salmonella excepto S. typhi y S. paratyphi. No se recomienda para el aislamiento de Shigella. Incluye lactosa, sacarosa y rojo fenol. El verde brillante es el agente inhibidor. Las colonias de Salmonella se ven de color rosa o blanco, o transparentes, sobre un fondo rojo. Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicolato) Como el agar de Hektoen, este medio es diferencial y selectivo para Salmonella y Shigella. No necesita ser esterilizado en autoclave. Las sales biliares inhiben a muchas enterobacterias y microorganismos Gram positivos. El indicador rojo fenol permite la diferenciacin de los no fermentadores de lactosa (Salmonella y Shigella) como colonias incoloras (rosa plido). El citrato de hierro y amonio permite la visualizacin de microorganismos productores de sulfhdrico como colonias con centros negros. Los microorganismos que fermentan los carbohidratos del medio (xilosa, lactosa y sacarosa) dan lugar a colonias amarillas. Caldo con carne picada Este medio se emplea para enriquecer y conservar el desarrollo de bacterias anaerobias. Los trozos de carne proporcionan un sustrato proteico para las enzimas proteolticas, que actan como sustancias reductoras manteniendo un potencial de xido-reduccin bajo y de algn modo evitan que las bacterias de crecimiento rpido sobrepasen a las formas ms lentas. Si se coloca una capa de vaselina lquida sobre un caldo con carne picada en el que se ha cultivado una bacteria anaerobia, muchos microorganismos permanecern viables, a temperatura ambiente, durante varios meses. El medio con carne picada no necesita ser incubado en anaerobiosis para permitir el crecimiento de los anaerobios. Caldo nutritivo Contiene extracto de carne y cloruro sdico. Puede complementarse con peptonas, extracto de levadura y/o glucosa. Asimismo, puede incorporar un tampn. Este tipo de medio se encuentra comercializado bajo diferentes denominaciones, segn su formulacin ms o menos rica: caldo de infusin de cerebro y corazn (BHI), caldo

triptona de soja (TSB), caldo brucela, caldo Columbia, etc. Caldo para Gram negativos Se emplea como caldo selectivo para el cultivo de Salmonella y Shigella a partir de muestras de heces e hisopos rectales. Contiene citrato de sodio y desoxicolato sdico (una sal biliar) que destruyen los microorganismos Gram positivos e inhiben la multiplicacin temprana de los coliformes. La adicin de mayor cantidad de manitol que de glucosa estimula el crecimiento de los patgenos fermentadores de manitol y no es favorable para Proteus. El medio se tampona para mantener el pH neutro an despus de la produccin de metabolitos bacterianos cidos. Para obtener el mximo beneficio de sus propiedades selectivas, el caldo GN debe ser subcultivado despus de 6-8 horas tras la inoculacin e incubacin iniciales, ya que despus de este perodo los coliformes sobrepasan a los patgenos. Caldo selenito F Caldo con selenito sdico que en ocasiones se suplementa con cistena, diseado para el enriquecimiento de salmonelas. El selenito inhibe el crecimiento de coliformes y enterococos en las primeras 12 horas de incubacin mientras que Proteus y Salmonella no son inhibidos. Caldo tetrationato Es selectivo para especies de Salmonella y Shigella. Caldo base de peptona que incluye iodo, ioduro potsico, sales biliares, tiosulfato de sodio y tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solucin iodoiodurada) que permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como Salmonella, pero inhiben el desarrollo de microbiota acompaante como bacterias Gram positivas y resto de enterobacterias. Caldo tioglicolato Es el caldo ms comunmente usado en microbiologa clnica. Favorece el crecimiento de anaerobios, aerobios, microaerfilos y microorganismos exigentes. Contiene 0,075% de agar para evitar que las corrientes de conveccin transporten el oxgeno atmosfrico a toda la masa del caldo. El cido tiogliclico tambin acta como agente reductor, disminuyendo an ms el potencial de xido-reduccin del medio. Con el agregado de muchos nutrientes como casena, extractos de levadura y de carne, vitaminas y otros, el medio permite el crecimiento de la mayora de las bacterias patgenas. Se puede distinguir la diferencia entre el desarrollo difuso de los bacilos facultativos Gram negativos y el crecimiento globuloso de los cocos Gram positivos. Los aerobios estrictos tienden a crecer formando una pelcula delgada sobre la superficie del caldo. Para el cultivo de los anaerobios es mejor suplementar el caldo tioglicolato con hemina, vitamina K y bicarbonato sdico. Caldo tioglicolato Campy Medio de apoyo selectivo para la recuperacin de especies de Campylobacter. Se trata de un caldo tioglicolato suplementado con una concentracin aumentada de agar y antibiticos. Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibiticos Se utiliza para la seleccin y enriquecimiento de Streptococcus agalactiae en muestras de tracto genital femenino. El caldo Todd-Hewitt, que se emplea para el enriquecimiento de estreptococos, se suplementa con cido nalidxico y gentamicina o colistina para una mayor selectividad. Medio de Diamond Medio de cultivo empleado que favorece considerablemente el crecimiento y la multiplicacin de Trichomonas vaginalis. El medio de Diamond contiene tripticasa de peptona, extracto de levadura, maltosa, Lcistena, cido L-ascrbico, suero bovino, penicilina G y estreptomicina. La incorporacin de agar en el medio limita a los microorganismos contaminantes en su mayora a la porcin superior del tubo del ensayo, mientras que ayuda a mantener las condiciones microaerfilas en el fondo del tubo, donde Trichomonas se encuentra en grandes cantidades. Medio de Kligler La prueba de Kligler es una prueba mltiple que permite conocer si una determinada bacteria (inicialmente se dise para la identificacin de enterobacterias) produce cidos y gases a partir de la glucosa, de la lactosa o de ambos a la vez. Tambin sirve para investigar si es capaz de producir sulfhdrico. El medio incorpora glucosa y

lactosa en proporcin 1:10, respectivamente. Lleva, adems, una fuente de azufre (tiosulfato sdico) y una fuente de hierro (sulfato ferroso). Como indicador cido-base se aade rojo fenol (pH neutro: color rojo; pH cido: color amarillo). La parte de arriba del medio se denomina pico de flauta y la de abajo, fondo. Ambas deben tener la misma altura, aproximadamente 3 cm. La siembra se puede realizar con asa o con hilo (fondo en picadura y pico de flauta por estras) y la incubacin es de 24 a 48 horas a 37C. Interpretacin de los resultados: 1. Fondo y pico de flauta amarillos (cido) La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa (si el medio aparece roto, significar que se han producido gases). 2. Fondo negro y pico de flauta amarillo (cido) La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa y produce sulfhdrico (aunque no se vea el color amarillo en la zona que cubre el precipitado negro, debe suponerse que est amarillo porque es necesario un pH cido para que se forme el precipitado). El sulfhdrico es incoloro, pero cuando en el medio hay una fuente de hierro se forma sulfuro de hierro que precipita en un entorno cido con un color negro caracterstico. 3. Fondo amarillo (cido) y pico de flauta rojo (alcalino) La bacteria fermenta slo la glucosa. A las pocas horas de incubacin tanto el fondo como el pico de flauta estarn amarillos debido a la utilizacin de la glucosa y al descenso del pH por la produccin de cidos. A medida que transcurre el tiempo, la formacin de aminas en la parte que est en contacto con el aire, debido a reacciones de descarboxilacin oxidativa de los aminocidos, provoca la alcalinizacin del medio, lo que hace virar el indicador a color rojo. En profundidad, donde no hay oxgeno, se mantiene el color amarillo. 4. Fondo negro y pico de flauta rojo (alcalino) La bacteria fermenta slo la glucosa y produce sulfhdrico. 5. Fondo y pico de flauta rojos (alcalino) La bacteria no fermenta la glucosa ni la lactosa.