PRODUCCINDEBIOHIDRGENOAPARTIRDERESIDUOSORGNICOS ElenaCastell1,VernicaPerna,ClaudiaEtchebehere2,LilianaBorzacconi3

UnidaddeBioprocesosAmbientales(BIOPROA).Fac.deIngeniera.UDELAR. 2 LaboratoriodeEcologaMicrobiana(LEM)InstitutodeInvestigacionesBiolgicas ClementeEstable(IIBCE)MEC.

Abstract El hidrgeno se puede producir en forma sustentable por bacterias anaerbicas que crecen en la oscuridad con sustratos ricos en carbohidratos dando como productos finales H2, CO2 y cidos grasos voltiles.El suero lcteo, subproducto de la produccin de queso, presenta un gran potencial para ser utilizado para la generacin de hidrgeno ya que tiene un alto contenido de carbohidratos y una alta carga orgnica De acuerdo a estimaciones tericas se calcul que para el total de suero de queso que se produce en el pas y tomando un rendimiento del 50% del terico (o sea 4 moles H2/mol de lactosa) se podran producir 1.9 millones de m3 de H2 al ao, cantidad que podra aumentar si se logra aumentar el rendimiento que actualmente se ha logrado un mximo de 0.9 mol H2/mol lactosa. Palabrasclave:Biohidrgeno,suerodequeso,fermentacinoscura

Biohidrgeno a partir de residuos El tratamiento de residuos, tanto industriales como municipales, es un rea que hasta hace poco tiempo era vista nicamente con el objetivo de reducir el nivel de contaminacin. Sin embargo, al objetivo anterior se le puede agregar el de valorizar el residuo recuperando la energa en l contenida. En ese marco, la produccin biolgica de hidrgeno a partir de residuos orgnicos es una alternativa interesante ya que presenta bajos costos de operacin y materia prima ya que se est utilizando un residuo que de cualquier manera deberamos tratar previo a su disposicin final. Produccin de biohidrgeno por fermentacin oscura El hidrgeno se puede producir en forma sustentable por bacterias anaerbicas que crecen en la oscuridad con sustratos ricos en carbohidratos dando como productos finales H2, CO2 y cidos grasos voltiles. Si se trabaja con cultivos mixtos se ha encontrado que la mayora de las bacterias productoras de hidrgeno pertenecen a la especie Clostridium. Esta especie puede utilizar un amplio rango de carbohidratos como sustratos. El mximo terico de produccin de hidrgeno se alcanza cuando el acetato es el nico producto del fermentacin de los carbohidratos (4mol H2/mol hexosa). Debido a la flexibilidad metablica de la especie Clostridium pueden producir distintos productos de fermentacin lo cual puede reducir la produccin de hidrgeno respecto al mximo.Las condiciones del proceso tienen un efecto significativo en la produccin de hidrgeno ya que influyen en la formacin de los productos de la fermentacin. La fermentacin de la hexosa a acetato o butirato produce H2 y CO2. La fermentacin a lactato o propionato no produce H2. Productos de fermentacin reducidos como etanol y otros alcoholes contienen tomos de hidrgeno adicionales que no contienen los cidos correspondientes por lo tanto con la produccin de alcohol se obtienen producciones menores de H2. El proceso fermentativo que genera hidrgeno es similar a la fase acidognica de la digestin anaerobia Sin embargo las condiciones fisiolgicas y fisicoqumicas bajo las cuales se optimiza la produccin de H2 no estn an establecidas.El gran desafo para poder disear sistemas eficientes y sustentables de produccin de hidrgeno por fermentacin oscura es por lo tanto manipular la cadena anaerbica de manera de favorecer los procesos de produccin de hidrgeno y eliminar a los consumidores de hidrgeno as como a aquellos microorganismos que compiten por el sustrato. El

conocimiento profundo de los microorganismos involucrados es fundamental para lograr este desafo (Dvila-Vazquez et al., 2008). Reactores utilizados En cuanto a la tecnologa utilizada, los tipos de reactores ms estudiados son los reactores de mezcla completa (Hallenbeck, 2009), aunque tambin se han realizado estudios con reactores con retencin de biomasa como reactores UASB, EGSB y con biomasa inmovilizada en soportes inertes (lecho fluidizado o reactores de lecho fijo). La ventaja de los reactores de mezcla completa es que se obtiene un mayor control del consumo de hidrgeno por metanognesishidrogenotrfica debido a que se opera a muy bajos tiempos de residencia celular (menores a 8h) lo que evita la duplicacin de dichos organismos. Por otro lado, la operacin a muy bajos tiempos de residencia celular hace al sistema ms susceptible a inestabilidades a largo plazo debido al potencial lavado de la biomasa con la consecuente bajada de la produccin (Guo et al., 2008). En el caso de los reactores UASB, debido a que se independiza el tiempo de residencia celular del hidrulico es posible trabajar con concentraciones de biomasa mucho mayores (por lo menos 5 veces mayores que en los reactores de mezcla completa), esto hace posible una mayor diversidad de microorganismos y la posibilidad de disminuir el tiempo de residencia hidrulico en forma independiente de manera de poder tener reactores de menor volumen. Los puntos dbiles de esta tecnologa cuando es utilizada para la produccin de hidrgeno son la capacidad de la biomasa desarrollada para formar grnulos o alternativamente tener una buena capacidad de sedimentacin de forma que pueda ser efectivamente retenida y adems debido al mayor tiempo de residencia celular es ms factible la presencia de metanognesishidrogenotrfica. Ambos factores disminuyen el rendimiento obtenido. Respecto a las condiciones de operacin se han testado diferentes pH de operacin y en general los mejores resultados se han obtenidos a pH cercano a 5 (Hallenbeck, 2009). Tambin se han probado diferentes cargas orgnicas y no hay consenso en cul sera la mejor carga a aplicar. Dependiendo del tipo de agua residual, en general se obtiene un mximo de carga a aplicar luego de la cual la produccin de hidrgeno decae (Kraemer y Bagley, 2007). Uno de los problemas principales de los reactores de produccin de hidrgeno es la baja estabilidad del proceso, la produccin alta de hidrgeno se mantiene por tiempos cortos o es muy inestable en el tiempo. Esta inestabilidad muchas veces es asociada a la competencia con otros microorganismos consumidores de hidrgeno o competidores por el sustrato. Suero lcteo para produccin de biohidrgeno El grupo Bioproa de Facultad de Ingeniera y el grupo de Ecologa Microbiana del Instituto Clemente Estable han estado trabajando en el tema de produccin de biohidrgeno desde el ao 2007. El trabajo se enmarca dentro de la bsqueda de alternativas para la disposicin del suero lcteo. El suero lcteo es un subproducto de la produccin de queso. Tiene una alta concentracin de materia orgnica, entre 50 y 70 g/L de Demanda Qumica de Oxigeno (DQO) compuesta entre un 70 y un 80% de lactosa, el resto se compone de protenas y cido lctico fundamentalmente. Este sustrato presenta un gran potencial para ser utilizado para la generacin de hidrgeno ya que tiene un alto contenido de carbohidratos y una alta carga orgnica (originada por la alta concentracin y el alto caudal de generacin). De acuerdo a estimaciones tericas se calcul que para el total de suero de queso que se produce en el pas y tomando un rendimiento del 50% del terico (o sea 4 moles H2/mol de lactosa) se podran producir 1.9 millones de m3 de H2 al ao, cantidad que podra aumentar si se logra aumentar el rendimiento. El tratamiento del suero lcteo en una sola etapa anaerobia con produccin de metano tiene la desventaja de que debido al alto contenido de carbohidratos y la baja alcalinidad tiene tendencia a acidificarse por lo que es un sistema factible pero que requiere un riguroso control de la alcalinidad para su correcta operacin. La alternativa de tratamiento es en dos etapas, una etapa

acidognica con produccin de hidrgeno y luego una fase metanognica con produccin de metano segn se esquematiza en la Figura1. Este trabajo discute los resultados obtenidos en tres experiencias, dos con reactores UASB operados en diferentes condiciones e inoculados con bioamsa diferente y a partir de un trabajo conjunto con la escuela de Ingeniera de la Universidad de San Pablo tambin se trabaj con un reactor de lecho empacado. Los resultados de cada una de las experiencias individuales se encuentran en Castell et al., 2009 ; 2011 y Perna et al., 2012. Se plantean las perspectivas de trabajo a futuro en base a la experiencia adquirida.
Compresiny transporte Utilizacindirectapara obtencindeenerga

Utilizacindirectapara obtencindeenerga

H2+CO2
Suero Lcteo cidos grasos voltiles

CH4+CO2

Etapa acidognica

Etapa metanognica

Efluente tratado

Figura 1 Esquema del tratamiento en dos fases

Sistema experimental utilizado El reactor UASB utilizado tena un volumen activo de 4.6 L y se ubic en una cmara termostatizada a 30C. El pH se control mediante la adicin de NaHCO3 a la alimentacin para mantener el pH en el reactor en un promedio de 5. El reactor de lecho empacado presentaba un volumen total de 3.75 L con un volumen activo de 2.5 L. El relleno utilizado era polietileno reciclado de baja densidad segn lo descrito en Peixoto et al., 2011. En todos los casos, se monitore la DQO, los slidos suspendidos voltiles y totales (SSV y SST), de acuerdo a mtodos estndar (Standard Methods, 1995). La composicin de biogs se determin por cromatografa gaseosa (Cromatgrafo SRI 8610), los cidos voltiles se determinaron por HPLC.La caracterizacin de la biomasa se realiz por tcnicas de biologa molecular segn lo descrito en Castell et al., 2009; 2011.En las dos experiencias realizadas con los reactores UASB (UASB1 y UASB2) el sustrato utilizadofue suero lcteo que era enviado semanalmente desde una industria local. El mismo se almacenaba a 4C hasta ser usado. El suero era diluido a la concentracin necesaria de acuerdo a la carga orgnica que se fuera a alimentar y suplementado con NaHCO3. En el caso del reactor de lecho fijo se utiliz suero en polvo a partir del cual se preparaba la solucin de alimentacin. Los inculos utilizados fueron, para el UASB 1 lodo anaerobio tratado trmicamente, para el UASB 2 compost de residuos alimentarios y para el lecho empacado biomasa generada a partir de la fermentacin del mismo suero. Resultados y Discusin En las tablas siguientes (Tabla 1, 2 y 3) se muestran las condiciones de operacin y los resultados obtenidos para cada uno de los reactores utilizados.

Tabla 1 Condiciones de operacin y resultados obtenidos en UASB1

Da TRH (h) 24 12 24 12 12 SSV reac (g/l) 7 16 11 16 10 18 12 17 7-9 Carga volumtrica (gCOD/l.d) 10 20 10 20 20 Carga especfica (gCOD/gVSS.d) 0.6 1.4 1.2 1.8 0.6 1.0 1.2 1.6 2.2 2.8 Qg (L/d) 5,17 7,18 15,5 H2 (%) 13,5 19,5 26,4 Contenido Metano en biogs (%) nd 6 12 9 19 15 20 25 de el Contenido de Hidrgeno en el biogas (%) Nd <1 <1 <1 20 30 Rendimiento (moles de H2/mol de lactosa ) 0,23 0,72 0,71

0 56 57 99 100 139 140 219 220 260

Tabla 2 Condiciones de operacin y resultados en UASB2

Etapa 1 2 3 Das 7-99 182-195 196 225 Carga (gDQO/Ld) 17,45 21,9 27,3 pH 4,9 4,8 5,1 Velocidad de produccin de H2 (LH2/LRd) 0,14 0,36 0,66

Tabla 3 Condiciones de operacin y resultados en lecho empacado. Das Carga pH Qg % H2 Velocidad de (gDQO/Ld) (L/d) produccin de H2 (LH2/LRd)) 0-6 25,6 4,0 0 0 0 7-32 21,0 4,8 2,6 5,6 0,063 33-40 24,0 5,7 21,6 4,5 0,23 41-47 33,6 6,2 20,2 9,5 0,76 48-56 35,8 5,6 26,1 10,3 1,1

Rendimiento (mol H2/mol lactosa) 0 0,050 0,16 0,68 0,93

Conversin de lactosa (%) 91,6 97,9 99,0 99,0

En ambos reactores UASB la produccin de biogs fue muy inestable, teniendo en el UASB1 una importante presencia de metano. Recin cuando se aument la carga especfica, aumentando las purgas de biomasa del reactor, el contenido de hidrgeno en el biogs aument a valores entre 20 y 30%. La mxima produccin alcanzada fue de 0,1 L H2/Lreac d para una carga orgnica de 20 gDQO/L-d y 2.5 gDQO/gSSV.d. El tiempo de retencin hidrulico tanto en el UASB2 como en el reactor de lecho empacado fue de 24 horas y se fij en base al estudio de Yang et al., 2007, queutilizaron un RCA alimentado con suero de queso para produccin de hidrgeno y observaronque no se degrad completamente la lactosa a TRH menores a 24 horas. Sin embargo, en estetrabajo, la conversin de lactosa en el reactor de lecho fijo lleg a99% en la ltima etapa y en el UASB la conversin fue total en los puntos medidos. Estos resultados sugieren que ambos sistemas podran operar a TRH menores, y de este modohacer uso de la ventaja operativa de los filtros anaerobios y los UASB, que permiten manteneruna alta concentracin de biomasa a bajos tiempos de retencin hidrulicos. En el lecho empacado la produccin de hidrgeno fue mucho ms estable que en los reactores UASB. Cabe resaltar que los UASB fueron alimentados con suero crudo, influente ms inestable que una preparacin a partir de suero de queso en polvo, factor que podra ser en parte responsablede las fluctuaciones en la produccin de gas. El porcentaje de H2 fue mayor en el UASB2 en el que se inocul el reactor con un compost y selleg a valores de 36% de hidrgeno en el biogs de salida, mientras que el mximo en el lecho empacado, inoculado con lactosuero crudo, fue de 13,8% (da 56), coincidente con la deteccin demenor cantidad de bacterias lcticas (ver Perna et al., 2012). En el estudio de Noike y colaboradores (Noike et al., 2002), se plantea que las bacteriocinas excretadas por lasbacterias del cido lctico (por ejemplo, Lactobacillusparacasei) podran inhibir la produccinde hidrgeno. En base a estos resultados, sera conveniente en prximos estudios utilizar uninculo con menor contenido de bacterias del cido lctico. Todos los resultados de los anlisis microbiolgicos se reportan en Castell et al., 2009; 2011 y Perna et al., 2012. En base a los trabajos realizados se puede concluir que es posible obtener hidrgeno utilizando como sustrato suero de queso tanto en el reactorUASB como en un RLF.En ambos casos el rendimiento est lejos del mximo terico llegando a valores promedios enla etapa de mayor produccin de 0,7 moles H2/mol lactosa (en el UASB2) y 0,9 molesH2/mollactosa (en el RLF).

Perspectivas Si bien el objetivo de estos trabajos fue evaluar la produccin de hidrgeno, es parte de unobjetivo mayor que abarca tratar este residuo industrial, que constituye un problema paranuestro pas en lo que respecta a su disposicin. Por lo tanto, es necesario comenzar a estudiarla eficiencia de un sistema en dos etapas donde el efluente del primer reactor productor dehidrgeno, pase a otro reactor metanognico donde sean tratados los cidos grasos. Evaluar laremocin de DQO que se alcanza, la produccin de hidrgeno y la produccin de metano demanera de tener una visin ms global de las posibles alternativas.

Bibliografa
Castell E., Garca y Santos C., Iglesias T., Paolino G., Wenzel J., Borzacconi L., Etchebehere C. (2009). Feasibility of biohydrogen production from cheese whey using a UASB reactor: Links between microbial community and reactor performance. Int J Hydrogen Energy 34: 56745682. Castell E., Perna V., Wenzel J., Borzacconi L., Etchebehere C.(2011) Microbial community composition and reactor performance during hydrogen production in a UASB reactor fed with raw cheese whey inoculated with compost. Water Science and Technology 64(11): 2265 2273 Hallenbeck P., Ghosh D. (2009) Advances in fermentative biohydrogen production: the way forward? Trends in Biotechnology 27(5): 287-297. Kraemer J., Bagley D. (2007) Improving the yield from fermentative hydrogen production.Biotechnology Letters, 29, 685-695. Lee D., Kuan-Yeow S., Ay S. (2011) Dark fermentation on biohydrogen production: Pure culture. BioresourceTechnology 102 (18): 8393 8402. Davila-Vazquez G., Arriaga S., Alatriste-Mondragn F., de Len-Rodrguez A., RosalesColunga L.M., Razo-Flores E. (2008). Fermentative biohydrogen production: trends and perspectives. Rev Environ SciBiotechnol. 7: 2745. Dunn S. (2002) Hydrogen futures: toward a sustainable energy system. Int J Hydrogen Energy 27:23564. Peixoto, G., Saavedra, N. K., Varesche, M. B., &Zaiat, M. (2010). Hydrogen production from soft-drink wastewater in an upflow anaerobic packed-bed reactor. Internationaljournal of hydrogen energy. Doi:10.1016/j.ijhydene.2011.05.014 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.19 edicin, 1995. Yang P, Zhang R, Mc Garvey J, Benemann J. Biohydrogenproduction from cheese processing wastewater by anaerobicfermentation using mixed microbial communities. Int JHydrogen Energy 2007;32:476171.Perna et al., 2012 Noike, T., Takabatake, H., Mizuno, O., &Ohba, M. (2002).Inhibition of hydrogen fermentationof organic wastes by acid lactic bacteria.International Journal of Hydrogen Energy, 27,13671371.