Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Facultad de Qumica.

Bacteriologa Experimental Grupo 4 Alumno: Rengel Garca Christian Rodolfo Equipo: 6 Fecha: 13/Agosto/2013 Semestre 2014-1 Tarea 1: Cocos Gram positivos y Gram negativos

1) Staphylococcus a) Caractersticas morfolgicas: bacterias esfricas (cocos), de 0.5-1.5 m de dimetro, no poseen flagelos ni esporas, algunas tienen capsula, Gram variable pero la mayora son positivos. b) Condiciones de cultivo: Medios: Agar sangre de carnero (SBA), agar sal manitol y agar Baird-Paker. Para muestras muy contaminadas en agar Columbia adicionado con colistn y cido nalixdico (CNA) o con agar alcohol fenil etlico (PEA). Tiempo de incubacin: Aproximadamente 24 horas. Temperatura de incubacin: 37 C Requerimiento de oxgeno: Facultativo c) Medio Carbohidrato Inhibidor Indicador Caracterstica adicional Composicin SBA Peptona, NaCl, --------Medio enriquecido y evidencia IMC hemolisis SMA Manitol Conc. sal Rojo de fenol Fermentacin de manitol CNA Almidn de maz Acido nalixdico ----Selectivo para gram + y colistn PEA NaCl, extracto Alcohol fenil ----Selectivo para el aislamiento de de carne, etlico Estafilococos y Estreptococos Triptosa ABP Peptona, LiCl y telurito ----Liplisis y protelisis extracto de carne y levadura

d) Pruebas bioqumicas para su identificacin. Prueba

Catalasa

Fundamento/Reaccin
2H2O22H2O + O2

Enzima
Catalasa

Reactivos/Indicador
H2O2

Lectura
Positivo, Formacin de burbujas Positivo o negativo, Formacin de coagulo Positivo o negativo, vire a color amarillo Positivo, Formacin de un precipitado y turbidez

Control +
S. aureus subesp. aureus ATCC 12600 S. aureus

Control Streptococcus pyogenes ATCC 12344 S. epidermidis

Coagulasa

PlasmaCoagulo de fibrina

Coagulasa

Plasma de humano o conejo

Fermenta cin de carbohidra tos DNAsa

Di,tri,polisacridosGlucosa Glucosacidos orgnicos Glucosa2EtOH+CO2 DNA + HCl DNA(pp) DNAsa

Rojo de fenol

HCl 1N

S. aureus subesp. aureus ATCC 25923 A S. aureus subesp. aureus ATCC 25923

S. epidermidis ATCC 19615

e) Tablas de identificacin.

2) Estreptococcus a) Caractersticas morfolgicas: cocos gram positivo, con un dimetro entre los 0.5-1 m, inmviles, no esporulados, en su mayora presentan capsulas muy evidentes y dispuestos en pares o cadenas. b) Condiciones de cultivo: Medios: Agar Tripticasena-soya (libre de carbohidrato o con sangre de carnero), agar sangre de carnero y base agar Columbia. Tiempo de incubacin: Aproximadamente 48 horas. Temperatura de incubacin: 35 C Requerimiento de oxgeno: Anaerobio Facultativo c) Medio Carbohidrato Inhibidor Indicador Caracterstica adicional Composicin SBA Peptona, NaCl, --------Medio enriquecido y evidencia IMC hemolisis TSA Peptona de --------Evidencia protelisis casena y soya, NaCl Columbia Almidn soluble --------Visualizacin de hemolisis con el agregado en sangre.

d) Pruebas bioqumicas para su identificacin. Prueba

Catalasa

Fundamento/Reaccin
2H2O2

Enzima
Catalasa

Reactivos/Indicador
H2O2

Lectura
Negativo, no formacin de burbujas Negativo, no vire a color azul

Control +
S. aureus subesp. aureus ATCC 12600 Neisseria mucosa ATCC 19696 S. aureus

Control Streptococcus pyogenes ATCC 12344 Escherichia coli ATCC 11775

Oxidasa

CitCr c red.+2H + O2 2CitCr c oxi.+H2O Di,tri,polisacridosGlucosa

Citocromo Oxidasa

Fermenta

Reactivo de Kovacs, diclorhidrato de TPD (tetrametil-pfenilendiamina) Rojo de fenol

Positivo, Viraje

cin de carbohidra tos Reduccin de nitratos

Glucosacidos orgnicos Glucosa2EtOH+CO2 NO3 +2e +2H NO2 +H2O Desnitrificacin: + 2NO3 +10e +12H N2+6H2O
+ -

a color amarillo

Nitrato reductasa

Reactivo de Griess (cido sulfanlico y naftilami-da) y Zn

Negativo, no vire a violeta, al agregar Zn a nitratos vira a morado

subesp. aureus ATCC 25923 A Escherichia coli ATCC 11775

Acinetobacter lwoffii ATCC 15309

e) Tablas de identificacin.

3) Neisseria

a) Caractersticas morfolgicas: microorganismos gram negativo baciloformes o cocos, en general agrupados en pares o cadenas cortas, con un tamao entre 0.6-1 m, inmviles y no forman endoesporas. b) Condiciones de cultivo: Medios: Agar chocolate no selectivo, agar nutritivo, agar tripticasa y cistina, en agar McConkey y agar sangre, en estos dos ltimos solo algunas especies. Tiempo de incubacin: Aproximadamente 24-72horas. Temperatura de incubacin: 35-37 C Requerimiento de oxgeno: Aerobio y atmsfera entre 5 y 10 % CO2.

c) Carbohidrato Composicin SBA Peptona, NaCl, IMC ChocolaAgar tripticasa te de soya, NaCl y se adiciona de hemoglobina bovina McConkey Lactosa CTA Eleccin Medio Inhibidor --------Indicador --------Caracterstica adicional Medio enriquecido y evidencia hemolisis Medio enriquecido

Cristal violeta y sales biliares Alcohol fenil etlico

Rojo neutro Rojo de fenol

Fermentacin de lactosa, selectivo Gram Fermentacin de carbohidrato por parte de neisserias patgenas, evidenciar motilidad bacteriana y para mantener el potencial de oxidoreduccin que facilita el desarrollo de microorganismos anaerobios.

d) Pruebas bioqumicas para su identificacin. Prueba

Oxidasa

Fundamento/Reaccin
CitCr c red.+2H + O2 2CitCr c oxi.+H2O Lactosa cidos orgnicos
+

Enzima
Citocromo Oxidasa

Reactivos/Indicador
Reactivo de Kovacs, diclorhidrato de TPD (tetrametil-pfenilendiamina) Rojo neutro

Lectura
Positivo, vire a color azul

Control +
Neisseria mucosa ATCC 19696 Escherichia coli ATCC 25922 S. aureus subesp. aureus ATCC 25923 A

Control Escherichia coli ATCC 11775 S. aureus ATCC 25923

McConkeyFermentacin de lactosa Fermenta cin de glucosa

Glucosacidos orgnicos Glucosa2EtOH+CO2

Rojo de fenol

Negativo, No vira a rosa intenso, ni hay halo de pp. Positivo o negativo, vire a color amarillo

e) Tablas de identificacin.