Biotecnologia no Melhoramento de Plantas

PLANTAS TRANSGNICAS
02/09/2013

Sumrio
Algumas definies Objetivo da transformao gnica Como fazer uma planta transgnica? Aplicaes

Algumas definies
Transformao gentica: a transferncia (introduo) de uma sequncia de DNA (ou mais especificamente um gene) em um organismo sem que haja a fecundao ou o cruzamento. Transgnico: organismos transformados geneticamente. Ex: Vegetais - plantas transgnicas. Denominao geral : Organismos Geneticamente Modificados (OGM)

Objetivo da transformao gnica

Introduzir um transgene em um organismo, por meio da engenharia gentica ou da tecnologia do DNA recombinante, de forma que ele se expresse, seja estvel e herdado pelas prognies do indivduos

Como se faz uma planta transgnica?

Passos necessrios para transformao

Identificao , isolamento e caracterizao do gene desejvel (doador) Construo do cassete de expresso e clonagem Transferncia desse gene para dentro da clula vegetal Integrao desse gene ao genoma da planta Regenerao e seleo das clulas transformadas Expresso do gene introduzido nas plantas Transmisso do gene introduzido de gerao em gerao

Estrutura molecular do gene

Onde:
Folhas Raiz

O que:
Protena bacteriana Absoro de Fe Sntese acar

Final do gene

Quando:
Incio da germinao Ataque de insetos

Quanto:
Muito Pouco

Lembrando: Expresso de um gene

Construo do cassete de expresso

Cassete de expresso: contm o promotor, regio codificante e terminadora Pode conter outros elementos reguladores

Construo do cassete de expresso

Construo do cassete de expresso

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AB209952.1 Regio promotora 35S do vrus do mosaico da couve flor Peptdeo de trnsito de Petnia

Gene que codifica a protena EPSPS que confere resistncia ao herbicida

Regio terminadora do gene da nopalina sintase (NOS) Sequncia de DNA presente na soja RR (Roundup Ready).

Cassete contendo gene de interesse + regies promotoras + terminadoras + genes de seleo

Regio promotora

Regio terminadora

Transferncia do gene para dentro da clula vegetal

Transformao indireta: mediada por Agrobacterium tumefaciens

Transformao direta: bombardeamento (biobalstica)

Transferncia do gene para dentro da clula vegetal Modelo esquemtico de transformao direta (bombardeamento) e indireta (Agrobacterium).

Transformao mediada por Agrobacterium tumefaciens

Mtodo mais utilizado em dicotiledneas e algumas monocotiledneas Bactria gran-negativa (-) Plasmdeo Ti T-DNA ou DNA de transferncia - natureza: produo de substncias que serviro de alimentos para o patgeno e levaro a clula a se multiplicar Formao de tumores (galhas)

O plasmdeo Ti de Agrobacterium

Modelo da Interao Molecular Mediado por Agrobacterium na Transformao Gentica das Clulas da Planta.

Tzfira and Citovsky Cell Biology vol 12 N.3 March 2002

O plasmdeo Ti manipulado

Transformao mediada por Agrobacterium tumefaciens

Vantagens de ser natural, apresentar alta probabilidade de integrao do gene e a transferncia de um pequeno nmero de transgenes Desvantagens: dependente da suscetibilidade do vegetal a infeco por Agrobacterium
http://www.youtube.com/watch?v=4EWmvSh_bAQ http://www.youtube.com/watch?v=TMrUaswOICA

Transformao por bombardeamento

Mtodo mecnico de transformao Utilizado em espcies no infectadas por Agrobacterium (cereais) Consiste em acelerar uma macropartcula carregada de milhes de microesferas de tungstnio ou ouro revestidos com DNA exgeno em direo s clulas a serem transformadas

Transformao por bombardeamento

Vantagem : permite a transformao de clulas, tecidos e espcies de forma direta, simples e rpida, sendo aplicvel para transferncia de genes a espcies nas quais os outros mtodos so falhos

Desvantagem: integrao de mltiplas cpias; fragmentao dos genes em diferentes posies no genoma, podendo alterar ou silenciar a expresso dos genes exgenos http://www.youtube.com/watch?v=oIpnGbYyT_Q http://www.youtube.com/watch?v=nxjIbBiudp0

Seleo e regenerao das clulas transformadas

09.09.2013

Seleo utilizando marcadores de seleo ou seleo negativa

Permite o crescimento preferencial da clula transformada na presena do agente seletivo eliminando a no-transgnica. Tipos: Antibiticos: gene nptII resistente a canamicina Herbicidas: gene ESPS sintase - glifosato : gene bar - imidazolinona

Marcadores de seleo

Genes reprteres ou seleo positiva

Separar de forma precoce as plantas transformadas das no transformadas, neste caso no h eliminao das plantas no transformadas. - GUS (b-glucuronidase) - confere clula transgnica capacidade de produzir citocinina e se desenvolver mais rapidamente que as no-transgnicas

Genes reprteres

Esquema das etapas de seleo e regenerao de plantas transgnicas.

Transformao

Como sei que a minha planta foi transformada?

Testes dos organismos transformados Anlise molecular via PCR (Polymerase Chain Reaction) utilizando primers especficos para o cassete de expresso

Antes da liberao e utilizao comercial do organismo geneticamente modificado, importante conhecer e certificar a sua biossegurana.

Aplicaes
Caractersticas de Produo Input visam reduo de custo de produo resistncia doenas, pragas ou herbicidas performance produtividade Caractersticas de Consumo Output acrescentam valor melhor qualidade protica novas cores, formas e tamanho melhor conservao ps-colheita

Aplicaes
Soja Roundup Ready:
glifosato (Round up) gene EPSPS-CP4 bactria Agrobacterium tumefaciens

Milho LibertyLink:
glufosinato (Basta) gene PAT - bactria Streptomyces hygroscopicus

Tecnologia Roundup Ready

Aplicaes
Resistentes a insetos: ordem Lepidoptera
introduo do gene Cry1A(b)
bactria Bacillus thrurigienses

algodo (Bollguard) e milho (Yieldguard)

Eventos combinados
resistncia a insetos das ordens Lepidoptera e Coleoptera resistncia a insetos e herbicidas

Resistncia ao vrus da mancha anelar

Mamo

Resistncia ao vrus do mosaico dourado

Feijo

Resistncia ao vrus da mancha anelar

Milho Bt (insetos)

Transgnico

Convencional

Genes de resistncia a insetos expressos em plantas GM

Tipo de Gene Microorganismos Protena Cry endotoxinas de Bt Protena vegetativa inseticida vip Isopentyl transferase (ipt) Coleterol oxidase Helicoverpa armigera stunt virus Plantas Inibidores de serino protease Inibidores de cisteno protease Inibidores de Amilase Lectinas Peroxidases Quitinases Tryptophan decarboxylase (TDC) Animais Quitinases (insetos) Biotin binding proteins (avidin) Ordem Lepidoptera/Coleptera Lepidoptera Lepidoptera/Homoptera Lepidoptera/Coleptera Lepidoptera Lepidoptera/Coleptera Coleptera/ Homoptera Lepidoptera/Coleptera Coleptera/Homoptera/Lepidoptera Lepidoptera/Coleptera/Homoptera Homoptera Homoptera Lepidoptera Coleoptera/Lepidoptera

Aumento do Volume de Madeira em Pinus

Resistncia ao frio em Eucalipto

No transgnico Transgnico
Gene CBF
Induz rota metablica para proteo ao frio

Aplicaes - output
Tomate Flavr Sarv.
gene antisenso da poligalacturonase retarda o amadurecimento

Arroz dourado
alta produo de betacaroteno
(provitamina A)

Melhoramento Convencional x Biotecnologia

Melhoramento Convencional
Linkage drag

Planta Doadora

Material Comercial

Novo Material Comercial

Uso de transformao de plantas

Organismo doador

Carter de interesse

Material Comercial

Novo Material Comercial

Vantagens dos transgnicos x convencionais

Reduo do tempo para obteno de novas cultivares; Preciso transferncia apenas dos genes desejveis; Caractersticas podem ser introduzidas de uma nica vez sem complicaes de genes extras por retrocruzamento; Transferncia de genes entre organismos filogeneticamente diferentes;

Perspectivas para 10 anos

Economia 133,95 bilhes de litros de gua na lavoura 3 milhes de pessoas podero ser atendidas 21,8 milhes de rvores sero preservadas Reduo na emisso de 2,96 milhes de toneladas CO2 equivale a retirada de 465 mil carros da rua Economia de 1,11 bilho de litros de combustvel Reduo 127 mil ton. de ingredientes ativos Economia de US$8 bilhes em custo de produo at 2020 Aumento de produo / rea