0 GLAUCIA SILVANO ROCHA

IMPLICAES DO ESTRESSE OXIDATIVO SOBRE OS ERITRCITOS E DESENVOLVIMENTO NEUROPSICOMOTOR EM ADULTOS COM SNDROME DE DOWN

Tubaro, 2006

1 GLAUCIA SILVANO ROCHA

IMPLICAES DO ESTRESSE OXIDATIVO SOBRE OS ERITRCITOS E DESENVOLVIMENTO NEUROPSICOMOTOR EM ADULTOS COM SNDROME DE DOWN

Trabalho de concluso de curso apresentado ao curso de Fisioterapia, como requisito parcial obteno do ttulo de Bacharel em Fisioterapia.

Universidade do Sul de Santa Catarina

Orientador Especialista Professor: Aderbal Silva Aguiar Junior.

Tubaro, 2006

DEDICATRIA

Dedico

este trabalho

as pessoas que lutam

diariamente ao meu lado, transmitindo f, amor, alegria, determinao, pacincia, e coragem,

tornando os meus dias mais felizes e bonitos. Aos meus pais, Antnio Carlos e Eva, ao meu irmo, Silvano e ao meu namorado, Diego. Sem vocs eu no seria nada! O amor o nico nexo permanente vlido nas relaes familiares. Amar e ser amado um desejo de todos. E tambm um direito que a sociedade deveria proteger e estimular. (Knobel, 1992).

Agradecimentos

Ao todo criador, Deus, que est acima de todas as coisas deste mundo. Concebendo sempre os nossos desejos e vontades, mesmo quando de forma oculta. Aos meus pais, Antnio Carlos e Eva, pela confiana, amor, cuidado, e sabedoria. Ao meu irmo, Silvano, que mesmo longe, sempre esteve to perto. Ao meu amigo e namorado, Diego, por toda caminhada que fizemos juntos at o dia de hoje, e as pelas prximas que viro. Pela pacincia e pela compreenso, por me aturar, me ajudar e me fazer feliz, pelos dias estudando juntos e dias passados sem namorar. A todos os meus amigos e colegas de sala, que com certeza plantaram um pedao de si em meu corao. Mas, especialmente Aline, pela surpresa em ser uma pessoa to maravilhosa, Cndida, pelas caronas, pelo tradutor, e pelas risadas, Cris, pela pacincia em seus ensinamentos, Monique, pelos momentos de alegria, Mirella, por sempre me ajudar, Sara, pela simpatia e felicidade que me transmite, Simone, pela ajuda, gargalhadas e pelos dias que dormi em sua casa. Pessoas antes desconhecidas e to diferente de mim, que me fizeram ver a vida com outros olhos, obrigada pela amizade! Ao professor Aderbal, pela pacincia, ensino, e confiana e a todos de sua equipe pelo empenho e dedicao nos ensaios bioqumicos. Grasiella e Maria Helena membros da APAE de Jaguaruna, e a Elenir da APAE de Tubaro, que em todos os momentos que precisei estavam disposio para ajudar. A Marlene tcnica em enfermagem que coletou o sangue de todos os participantes de Tubaro, se disponibilizando nos dias de folga. E a Analise, farmacutica bioqumica que em meu momento de desespero, cedeu suas funcionrias para a coleta de sangue do participante de Jaguaruna.

4 E a todos os participantes, que quando convidados aceitaram participar desta pesquisa, arranjando tempo para a realizao dos testes, e para a coleta de sangue. Mas, principalmente aos portadores de Sndrome de Down, que se mostram muito empenhados e colaborativos, na realizao dos testes, e pela coragem ao enfrentar o medo da coleta de sangue. O meu muito obrigado, sem todos vocs esta pesquisa no poderia ser concluda. Eu pedi Fora e Deus me deu dificuldades para me fazer forte. Eu pedi Sabedoria e Deus me deu Problemas para resolver. Eu pedi Prosperidade e Deus me deu Crebro e Msculos para trabalhar. Eu pedi Coragem e Deus me deu Perigo para superar. Eu pedi Amor e Deus me deu pessoas com Problemas para ajudar. Eu pedi Favores e Deus me deu Oportunidades. Eu no recebi nada do que pedi, mas eu recebi tudo de que precisava. (autor desconhecido)

Nossas dvidas so traidoras e nos fazem perder o que, com freqncia, poderamos ganhar, por simples medo de arriscar.

(Willian Shakespeare)

RESUMO

A sndrome de Down (SD) a alterao patolgica cromossmica mais encontrada. O fentipo desta trissomia pode ser pela duplicao da regio 21q22, onde se localiza o gene que codifica a enzima superxido dismutase (SOD). As espcies reativas de oxignio (EROS) so produzidas naturalmente em nosso organismo atravs de processos metablicos oxidativos, a alterao entre a produo e a remoo das EROS, promovem o estresse oxidativo, que pode ser causado principalmente pelo aumento da atividade da SOD, nestes indivduos. Esta atividade enzimtica aumentada produz uma agresso endgena constante, pela acelerao da reao de formao de perxido de hidrognio e pelo desequilbrio entre a atividade da SOD e glutationa peroxidase, com a conseqente oxidao dos grupos sulfdricos e a peroxidao dos lipdios insaturados causando dano celular, tecidual, lipdico, levando a um envelhecimento precoce e atraso no desenvolvimento neuropsicomotor. Esta pesquisa foi experimental, tendo como objetivos analisar a atividade da enzima SOD, analisar os nveis de peroxidao de lipdeos atravs das Espcies Reativas ao cido Tiobarbitrico (TBARS), verificando assim o estresse oxidativo, e avaliar o desenvolvimento motor atravs da escala Gross Motor Function Measure (GMFM). A amostra consistiu em um grupo controle (GC) de 8 adultos normossmicos, IMC 26 1,2 kg/m, idade de 23,33 2,13 anos, e um grupo experimental (GE) em 8 adultos com trissomia do 21, IMC 32 1,5 kg/m, idade de 27 3,67 anos, da Associao de Pais e Amigos dos Excepcionais (APAE) de Jaguaruna e Tubaro, residentes da Associao dos Municpios da regio de Laguna (AMUREL). As avaliaes foram: aplicao da Escala de Desenvolvimento Neuropsicomotor de Gross Motor Function Measure (GMFM), amostras de sangue venoso, para a obteno, da atividade da SOD, ndice de peroxidao de lipdeos atravs das Espcies Reativas ao cido Tiobarbitrico (TBARS) e determinao de protenas. Foram encontrados uma maior atividade da SOD nas hemcias, um ndice de peroxidao de lipdios nas hemcias e um menor desenvolvimento motor nos indivduos com sndrome de Down. Estes resultados sugerem que os portadores de SD possuem um estresse oxidativo, o que pode ser a causa um atraso no desenvolvimento neuropsicomotor. Sendo assim, mostra-se de suma importncia a detectao dos produtos da atividade da SOD e da peroxidao lipdica como evidncia indireta na importncia das EROS na patogenia desta doena. Palavras chaves: estresse oxidativo, sndrome de Down, superxido dismutase, peroxidao de lipdeos, desenvolvimento motor.

ABSTRACT

Down Syndrome (DS) is the most found chromosomic pathological alteration. The phenotype of this trissomy can be caused by duplication of 21q22 region, where it located the gene that encodes superoxide dimutase enzyme (SOD). The reactive oxygen species (EROS) are naturally produced in our body through oxidative metabolic processes, the alteration between production and removal of EROS promotes oxidative stress, that can be caused mainly by the increasing of SODs activity in these individuals. This increased enzyme activity produces constant endogenous aggression, caused by acceleration of reaction of hydrogen peroxide formation and by unbalance between SODs activity an glutathione peroxidase, with consequent oxidation of sulphidric and insaturated lipid peroxidation causing cellular, tissue and lipid damage, inducing precocious aging and delay of neurophysicomotor development. This research was experimental, and has as objectives to analyze the activity of SOD, to analyze the levels of lipoperoxidation through thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), verifing the oxidative stress, and to evaluate motor development through Gross Motor Function Measure (GMFM). The sample was constituted by a control group (CG) with 8 normosomic adults, IMC 26 1,2 kg/m, 23,33 2,13 years old, and an experimental group (EG) with 8 adults with 21 trissomy, IMC 32 1,5 kg/m, 27 3,67 years old, of Associao de Pais e Amigos dos Excepcionais (APAE) of Jaguaruna and Tubaro, that live in Associao dos Municpios da regio de Laguna (AMUREL). The evaluations were: application of Neurophycomotor Development Scale of Gross Motor Function Measure (GMFM), samples of venous blood to obtention of SOD activity, lipoperoxidation rate through thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS) and determination of proteins. A larger SOD activity was found in erythrocyte, a lipoperoxidation rate in erythrocytes and a lesser motor development in individuals with Down syndrome. These results suggest thar DS carriers have an oxidative stress, that can be the cause of a neurophsycomotor development delay. So, its showed the importance of detection of products of SOD activity and lipoperoxidation like an indirect evidence in importance of EROS in this diseases pathology. Key-words: oxidative stress, Down syndrome, superoxide dimutase, lipoperoxidation, motor development.

LISTA DE GRFICOS

Grfico 1 Atividade da enzima SOD no grupo controle e no grupo com sndrome de Down, indicando um aumento significativamente (p<0,05) da enzima neste ltimo grupo...............38 Grfico 2 Lipoperoxidao no grupo controle e no grupo com sndrome de Down, mostrando uma significncia (p<0,05) maior de peroxidao de lipdios nos Down, atravs do TBARS .....................................................................................................................................39 Grfico 3 Quociente motor de Gross est significativamente (p<0,05) diminudo em pacientes com sndrome de Down, acarretando um atraso no desenvolvimento neuropsicomotor .......................................................................................................................41

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Os valores obtidos da atividade enzimtica da SOD, peroxidao de protenas atravs do TBARS e da escala de desenvolvimento motor de GROSS, no grupo controle e no grupo com sndrome de Down. * p< 0,05, teste de Stundet ....................................................37

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LISTA DE ABREVEATURAS

AMUREL Associao dos Municpios da regio de Laguna CAT catalase EPM padro mdio EROS espcies reativas de oxignio GC grupo controle GE grupo experimental GMFM Gross Motor Function Measure, GPx glutationa peroxidase MDA malondialdedo SD sndrome de Down SOD superxido dismutase TBARS Thiobarbituric Acid Reactive Species, espcies Reativas ao cido Tiobarbitrico

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LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Corrida ...................................................................................................................32 Figura 2 Trote .......................................................................................................................32 Figura 3 Salto para a frente ..................................................................................................32 Figura 4 Salto o obstculo .................................................................................................... 32 Figura 5 Salto em distncia .................................................................................................. 32 Figura 6 Deslizar .................................................................................................................. 32 Figura 07 Golpeando uma bola estacionria ........................................................................33 Figura 08 Drible estacionrio ............................................................................................... 33 Figura 09 Pegar.....................................................................................................................34 Figura 10 Chute .................................................................................................................... 34 Figura 11 Arremesso com a mo.......................................................................................... 34 Figura 12 Rolar a bola .......................................................................................................... 34

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SUMRIO

1 INTRODUO .................................................................................................................. 14

2.1 SNDROME DE DOWN ................................................................................................. 17 2.1.1 A sndrome de Down: um breve histrico...................................................................... 17 2.1.2 As formas de alterao cromossmica na sndrome de Down ...................................... 18 2.1.3 Caractersticas fenotpicas e distrbios mais comuns da sndrome de Down ................ 20 2.1.4 Patogenia da sndrome de Down ................................................................................... 21 2.1.5 O papel patognico do estresse oxidativo na sndrome de Down .................................. 23

3 DELINEAMENTO DA PESQUISA ................................................................................. 27 3.1 Tipo de pesquisa .............................................................................................................. 27 3.1.1 Tipo de pesquisa quanto ao nvel ................................................................................... 27 3.1.2 Tipo de pesquisa quanto abordagem............................................................................ 27 3.1.3 tipo de pesquisa quanto ao procedimento utilizado na coleta de dados ......................... 28 3.2 Populao / Amostra ....................................................................................................... 28 3.2.1 Populao ....................................................................................................................... 28 3.2.2 Amostra .......................................................................................................................... 29 3.2.3 Critrios de incluso ....................................................................................................... 29

13 3.2.4 Critrios de excluso ...................................................................................................... 29 3.3Instrumentos utilizados na coleta de dados.................................................................... 30 3.4 Procedimentos utilizados na coleta de dados ................................................................ 30 3.4.1 Avaliao da escala de desenvolvimento motor............................................................. 30 3.4.2 Anlise Bioqumica ........................................................................................................ 34 3.5 Clculo de tamanho da amostra ..................................................................................... 35 3.5 Procedimentos e instrumentos utilizados no tratamento de dados ............................. 35

4 RESULTADOS E ANLISE DOS DADOS .................................................................... 36 4.1 Apresentao dos resultados .......................................................................................... 36 4.2 Anlise dos dados e discusso dos resultados............................................................... 37 4.2.1 Aumento da atividade enzimtica da SOD nos pacientes com Down............................ 37 4.2.2 Aumento dos nveis de lipoperoxidao na sndrome de Down .................................... 39 4.2.3 Atraso no desenvolvimento motor na sndrome de Down ............................................. 40

5 CONSIDERAES FINAIS ............................................................................................. 42

REFERNCIAS .................................................................................................................... 43

ANEXOS ................................................................................................................................ 46 ANEXO A Consentimento livre e esclarecido ..................................................................... 47 ANEXO B Escala de Desenvolvimento Neuropsicomotor .................................................. 51

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1 INTRODUO

A Sndrome de Down (SD) ou trissomia do par 21, segundo Silva e Aguiar (2003), Mancini et al (2003), Silva e Dessen (2002) foi a primeira anormalidade gentica descrita pelo homem e constitui a aberrao cromossmica mais comumente encontrada. A deficincia mental tem sido considerada uma das caractersticas mais constantes da SD, que constitui conforme Moreira, El-Hanib e Gusmo (2000) como uma causa mais freqente de deficincia mental, compreendendo cerca de 18% do total de deficientes mentais em instituies especializadas. Moreira, El-Hanib e Gusmo (2000), Voivodic e Storer (2002), Tecklin (2002), Silva e Dessen (2003), Mancini et al (2003), afirmam que em torno de 15% a 18% dos portadores de SD possuem deficincia mental, devido, provavelmente, a um atraso global no desenvolvimento, que varia de criana para criana. uma doena cromossmica que consiste na presena e expresso de trs cpias de genes localizados no cromossomo 21. O fentipo nesta trissomia pode ser pela duplicao da regio 21q22, onde se localiza o gene que codifica a superxido dismutase (SOD). A cpia extra desse gene causa aos portadores da Sndrome de Down uma atividade da enzima aumentada em 50% em diferentes tipos de clulas eritrcitos, leuccitos, plaquetas e fibroblastos, ocasionando danos celulares, levando a envelhecimento precoce, dano cerebral e demncia.

15 Os indivduos trissmicos possuem caractersticas do dano oxidativo como o envelhecimento precoce, dano cerebral e modificaes bioqumicas o que poderia ser conseqncia desse desequilbrio gentico-bioqumico. O metabolismo celular produz espcies reativas de oxignio (EROS) em condies fisiolgicas que possuem vrios efeitos teis, conforme Schneider e Oliveira (2004), nas situaes em que h necessidade de ativao do sistema; na desintoxicao de drogas; e na produo do fator relaxante derivado do endotlio, o xido ntrico, extremamente importante nos processos que desencadeiam o relaxamento dos vasos sangneos. A EROS produzida sob o controle de estmulos e sinais moleculares e tambm pode ser formada a partir de vrias clulas do organismo. Para Ramos, Ramos e Domingues (2000) podem ser induzidas por fontes exgenas (radiaes ionizantes, toxinas, drogas, produtos qumicos, agentes poluidores ambientais, etc.) e em vrias outras situaes patolgicas, neste caso produzindo dando celular. Em condio normal, o organismo dispe de sistemas antioxidantes de defesa, que so os antioxidantes no-enzimticos e enzimticos, este ltimo composto por enzimas capazes de metabolizar as EROS, como a superxido dismutase (SOD), a catalase (CAT) e a glutationa peroxidase (GPx). Ramos, Ramos e Domingues (2000) citam ainda a glutationa redutase (GRed). O equilbrio entre estes sistemas necessrio para o bom funcionamento celular, caso os ndices de proxidantes estejam aumentados nas clulas acarretar em um estresse oxidativo, ou seja, a EROS causar dano celular, tecidual, protico, lipdico, e no prprio DNA. A SOD em condies normais catalisa a reao de converso dos nions superxidos (O2) em perxidos de hidrognios (H2O2), que eliminado pela ao das enzimas catalase e glutationa peroxidade. O aumento da atividade desta enzima produz uma agresso endgena constante, pela acelerao da reao de formao de perxido de hidrognio (H2O2) e pelo

16 desequilbrio entre a atividade da SOD-1 e glutationa peroxidase (GSH-Px), com a conseqente oxidao dos grupos sulfdricos e a peroxidao dos lipdios insaturados causando dano celular. Pueschel (1999) cita que crianas com SD possuem todas as etapas do desenvolvimento motor iguais a de uma criana normal, entretanto de uma forma mais lenta, ou seja, as aquisies motoras dar-se-o de forma mais tardias. O presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o ndice de estresse oxidativo sobre eritrcitos e desenvolvimento neuropsicomotor em adultos com trissomia do cromossomo 21 e em adultos normossmicos. E como objetivos especficos, analisar a atividade da enzima superxido dismutase (SOD), analisar os nveis de peroxidao de lipdeos atravs das Espcies Reativas ao cido Tiobarbitrico (TBARS), verificando assim o estresse oxidativo, e avaliar atravs da escala de GROSS o desenvolvimento neuropsicomotor. Em suma, o trabalho est distribudo em: introduo, onde pode-se verificar os objetivos. O captulo 2 possui a fundamentao terica sobre a sndrome de Down; um breve histrico, as alteraes cromossmicas, caractersticas fenotpicas e distrbios, patogenia, patogenia do estresse oxidativo e desenvolvimento motor nos portadores de sndrome de Down. O captulo 3 formado pelo delineamento da pesquisa, o tipo de pesquisa, a populao e amostra do trabalho, os procedimentos e instrumentos utilizados na coleta de dados, o clculo e tamanho da amostra, e os procedimentos utilizados no tratamento de dados. O captulo 4 referente aos resultados dos dados coletados. O captulo 5 referente discusso dos dados. O captulo 6 as consideraes finais. E por ltimo encontram-se as referncias bibliogrficas e os anexos.

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2 SNDROME DE DOWN

2.1 A sndrome de Down: um breve histrico

A sndrome de Down caracterizada, de acordo com Mancini et al (2003), como condio gentica, que leva seu portador a apresentar uma srie de caractersticas fsicas e mentais especficas. Ambrosano et al (2005) cita que essa sndrome no uma doena, mas sim um acidente gentico caracterizado na maioria dos casos pela trissomia do par 21. tambm conhecida como mongolismo ou trissomia cromossomo 21. O reconhecimento da sndrome de Down como uma manifestao clnica s ocorreu com o trabalho de John Langdon Down, em 1866, que foi influenciado pelos conceitos revolucionistas da poca. Em seu trabalho Langdon Down afirma a existncia de raas superiores a outras, sendo a deficincia mental caracterstica de raas inferiores. Alm disso, a tuberculose presente nos genitores de crianas com sndrome de Down daquela poca, era considerada como um fator etiolgico, onde chamou a condio inadequadamente de idiotia mongolide, por serem parecidos com o povo Mongol, sendo excludo em 1960 por ofensa racial. (MOREIRA, EL-HANI, GUSMO, 2000) Silva e Dessen (2002) relata que aps este trabalho, vieram muitos outros, onde a denominao de sndrome de Down s foi proposta aps vrias outras denominaes terem

18 sido usadas como: imbecilidade mongolide, idiotia mongolide, cretinismo furfurceo, criana mal acabada, criana inacabada, dentre outras, sendo que a partir de 1965, prevaleceu denominao de sndrome de Down, como forma de homenagear John London Down. Garcias et al (1995), Gonzalez (2003) afirmam que a incidncia da sndrome de Down de 1 para cada 600 nascidos vivos. De acordo com Silva e Aguiar (2003) [...] a primeira anormalidade autossmica descrita pelo homem e constitui a aberrao cromossmica mais comumente encontrada.

2.2 As formas de alterao cromossmica na sndrome de Down

Em um indivduo normal existe em cada clula do organismo um total de 46 cromossomos, que so iguais, sendo divididos em duplas de 23 pares. Na sndrome de Down ocorre de maneira diferente, o indivduo possui 47 cromossomos, onde h um cromossomo extra. Para Silva e Aguiar (2003) esta sndrome [...] ocorre por aberrao cromossmica, na fase de desenvolvimento dos gametas ou ao redor da fase da fecundao, de trs maneiras, decorrentes de trissomia regular, mosaiscismo ou translocao. Rincon (2000) cita que em 94% dos portadores so decorrentes da trissomia simples, 2,4% do mosaicismo, e em 3,3% dos portadores da translocao. Na trissomia regular ou trissomia simples existe um cromossomo 21 extra em todas as clulas, conseqente da no disjuno cromossmica de um dos genitores durante a gametognese, ou seja, a meiose, que pode ocorrer tambm na primeira clivagem da clula ovo, produzindo assim, uma clula trissmica e outra monossmica, conforme Schwartzman (1999) [...] o caritipo 47, XX, + 21 ou 47, XY, + 21 est presente em cerca de 95% dos casos da composio cromossmica das pessoas com sndrome de Down.

19 A translocao cromossmica ocorre aproximadamente em 3 a 4% dos casos de sndrome de Down, o cromossomo 21 adicional est fundido a um outro cromossomo; sendo mais comum ao cromossomo 14 e 21. A trissomia simples e translocao possuem relao com a idade materna, de acordo com Gusmo, Tavarez e Moreira (2003) onde estimou-se em 43,6% o percentual de sndrome de Down dependente da idade materna, sendo estimado que em 56,4% dos casos no estavam associados idade materna, porm o estudo demonstrou um percentual bem menor que o indicado por Penrose (1961 apud GUSMO; TAVAREZ; MOREIRA, 2003) que de 75% o percentual de sndrome de Down que depende da idade materna. No mosaicismo, a alterao cromossmica ocorre em um nmero menor sendo em torno de 2 a 4%. Nesse caso, os afetados iro apresentar dois tipos de clulas, um com nmero normal de cromossomos (46), e outro com 47 cromossomos pela trissomia do 21, portanto ser em parte das clulas do indivduo, e no em todas. A causa principal nesta translocao a no disjuno do cromossomo 21 durante o processo de mitose (diviso das clulas somticas) no embrio. Quando a no disjuno do cromossomo 21 ocorre numa clula, as clulas derivadas desta sero trissmicas. O resultado final ser uma proporo entre clulas normais e trissmicas. Quanto menor o nmero de clulas trissmicas, menor ser o envolvimento fentipo, e assim o comprometimento. Esta alterao no possui relao com a idade materna, por ser uma aberrao do embrio. Conforme Boherer (1997 apud ASHTON-PROLLA; FLIX, 1997) a investigao citogentica dos portadores de sndrome de Down faz-se necessrio, mesmo em casos onde atravs do exame clnico j possvel a detectao da sndrome. Ela importante para definirse o tipo de sndrome de Down, e se h necessidade de investigao do caritipo dos pais, neste caso, para clculo de risco de recorrncia para futuros filhos do casal com a sndrome.

20 A translocao o tipo de sndrome de Down que se faz mais necessrio a investigao do caritipo dos pais, porque de acordo com Boherer (1997 apud ASHTONPROLLA; FLIX, 1997) a probabilidade de uma criana com sndrome de Down com uma me abaixo de 30 anos ser portadora de uma translocao de 9%, e a chance de um de seus pais ser portador de uma translocao balanceada de .

2.3 Caractersticas fenotpicas e distrbios mais comuns da sndrome de Down

As crianas com sndrome de Down, segundo Pueschel (1993), igualmente a outras crianas possuem caractersticas fsicas por influncia dos genes de seus pais, devido ao material gentico adicional no cromossomo 21 extra. Estas crianas possuem caractersticas corporais que lhe do aparncias diferentes a dos seus pais e irmos. A adio ao cromossomo 21 faz com que crianas com sndrome de Down sejam muito semelhantes entre si, possuindo assim caractersticas tpicas em todas as crianas com esta sndrome, tornando fcil o diagnstico ps-parto. Pode-se destacar as seguintes manifestaes clinicas, segundo Tecklin (2002) a parte posterior da cabea bastante achatada (braquicefalia), e as fontanelas so maiores que as normais levando mais tempo para se fecharem. Pode haver reas de perda de cabelo, pele spera, face achatadas devido aos msculos faciais subdesenvolvidos, nariz pequeno, olhos estreitos, com plpebras oblquas e com cantos com dobras epicantais. Boca pequena e lngua protusa, dentio em geral, atrasada e irregular, hipotonia muscular, o abdmen pode ser protuberante, as mos e os ps tendem a ser pequenos e o quinto dedo curvado para dentro. Em 50% das crianas uma nica prega observada na palma da mo em uma ou nas duas mos, e os dedos dos ps so normalmente curtos e com espao entre o primeiro e os segundo dedo, com uma prega correndo entre eles na sola do p.

21 Ratliffe (2000), os portadores de SD tem inteligncia gravemente afetada para mdia baixa, sendo a maioria classificada na faixa de retardo leve a moderado, 35% possuem cardiopatia congnita, sendo comuns problemas visuais, como estrabismo, nistagmo, astigmatismo, miopia e cataratas, deteriorizao auditiva, e tambm deficincia imunolgica que ocasiona infeces respiratrias freqentes e outras infeces, possuem maior incidncia de leucemia, disfuno da tireide e desenvolvimento sexual tardio ou incompleto. Tecklin (2002) diz que estas crianas possuem uma frouxido ligamentar e uma hipotonia muscular generalizada, que encontrada em todos os grupos musculares das extremidades, do pescoo e do tronco, sendo o principal fator contribuinte para o atraso no desenvolvimento motor. A deficincia mental tem sido considerada uma das caractersticas mais constantes da SD. Voivodic (2002), Tecklin (2002), Moreira, El-Hani e Gusmo (2000), Silva e Dessen (2003), Mancini et al (2003), afirmam que em torno de 15% a 18% das crianas com SD, possuem uma deficincia mental, devido, provavelmente, a um atraso global no desenvolvimento, que varia de criana para criana.

2.4 Patogenia da sndrome de Down

Conforme Pueschel (1993) normalmente h 46 cromossomos em cada clula, que esto dispostos em pares, formando assim 23 pares, so 22 pares de cromossomos autossmicos e um par, ou seja, dois cromossomos, que esto ligados ao sexo, se for feminino ter o ltimo cromossomo XX, e se for masculino XY. Metade dos cromossomos so derivados do pai e a outra metade da me. No momento da concepo entre o espermatozide e o ovcito II haver o total de 46 cromossomos, mas se alguma clula tiver um cromossomo

22 extra, o indivduo passar a ter 47 cromossomos, e se o cromossomo extra for o 21, a criana nascer com sndrome de Down. Segundo Moreira, El-Hanib e Gusmo (2000) o cromossomo 21 o menor dos autossomos humanos, contm cerca de 255 genes, de acordo com os dados do Projeto Genoma Humano. Conforme Moreira, El-Hanib e Gusmo (2000) e Jorde et al (2000) a parte principal do cromossomo 21 responsvel por esta sndrome est reduzida na banda cromossmica 21q22 do brao longo distal, referente a 1/3 desse cromossomo, onde tem sido relacionada s caractersticas da sndrome. O referido segmento cromossmico apresenta, nos indivduos afetados, as bandas caractersticas da eucromatina correspondente a genes estruturais e seus produtos em dose tripla. Moreira, El-Hanib e Gusmo (2000) diz que dos genes mapeados no segmento cromossmico, apenas 22 foram clonados e poucos demonstraram relao com a SD, dentre eles se encontraram os genes que comandam a formao de enzimas que podem estar ligadas a alteraes neurolgicas, como a SOD. Tecklin (2002) descreve que a principal causa de distrbios no sistema nervoso central (SNC) em crianas com SD devido anormalidades enceflicas, como o peso total do encfalo que 76% do normal, com peso combinado do cerebelo e tronco enceflico de 66% do normal, sendo que h microcefalia, onde o encfalo anormalmente arredondado e pequeno, com um dimetro antero-posterior diminudo, ele possui uma diminuio dos sulcos, dos neurnios pequenos e das sinaptognese, e uma migrao defeituosa dos neurnios pequenos. H tambm uma anormalidade nos dentritos espinais dos tratos talmicos do crtex motor, provocando principalmente uma descoordenao motora nessas crianas.

23 2.5 O papel patognico do estresse oxidativo na sndrome de Down

As espcies reativas de oxignio (EROS), segundo Schneider e Oliveira (2004) so produzidos naturalmente em nosso organismo atravs de processos metablicos oxidativos, sendo til, nas situaes em que h necessidade de ativao do sistema imunolgico (como exemplo, os macrfagos utilizam o perxido de hidrognio para destruir bactrias e outros elementos estranhos); na desintoxicao de drogas; e na produo do fator relaxante derivado do endotlio, o xido ntrico, extremamente importante nos processos que desencadeiam o relaxamento dos vasos sangneos. Koury e Donangelo (2003) dizem que nos organismos aerbicos, o oxignio consumido reduzido gua na mitocndria. A enzima catalizadora desta reao a citocromo oxidase, a qual impede a produo elevada de espcies reativas de oxignios nas mitocndrias das clulas. Floyd (1999) ressalta que aproximadamente cerca de 2% do oxignio que respiramos necessrio para produzir EROS nestas organelas com a formao do on superxido e de perxido de hidrognio. Roskoski Jnior (1997) diz que a reao do oxignio com um s eltron resulta na formao do radical superxido. O superxido uma substncia reativa que pode causar a modificao de protenas e cidos nuclicos das clulas e lipdeos das membranas. Uma dismutao uma reao nas quais duas molculas idnticas entre si so transformadas em substncias diferentes. A superxido dismutase catalisa a transformao de dois nions de superxido em oxignio e perxido de hidrognio. A superxido dismutase segundo Stryer (1996) e Roskoski Jnior (1997) est presente em todos os organismos aerbicos. Para Stryer (1996) [...] a superxido dismutase uma adaptao molecular essencial ao desafio imposto por uma atmosfera contento oxignio. Conforme Roskoski Jnior (1997) ela exerce um papel central na proteo contra a toxidez do

24 oxignio, transformando uma espcie altamente reativa em forma menos danosa s clulas. A reduo de oxignio molecular por dois eltrons produz o perxido de hidrognio, que transformado em oxignio e gua pela catalase ou pela glutationa peroxidase. O perxido de hidrognio (gua oxigenada) tambm gerado por leuccitos e macrfagos, ajudando a combater bactrias invasoras. Outro derivado txico do oxignio o radical hidroxila que reage com macromolculas celulares modificando-as, pode ser destrudo. As EROS so formadas pelo nion superxido (O2 -), perxido de hidrognio (H2O2), e o radical Hidroxila (OH-). PASTOR et al (1998, apud HALLIWELL; GUTTERIDGE, 1984). Para combater as EROS o organismo dispe de mecanismo de defesa antioxidante, que segundo Koury e Donangelo (2003) tem como principal funo inibir ou reduzir os danos causados s clulas pelas EROS. O sistema possui dois mecanismos de defesa: noenzimtico e enzimtico. Este ltimo formado, de acordo com Schneider e Oliveira (2004) pela superxido dismutase (SOD), catalase (CAT), e a glutationa peroxidase (GPx). Conforme o mesmo autor, a CAT e a GPx evitam o acmulo de radical superxido e de perxido de hidrognio para que no haja produo de radical hidroxila. A alterao entre a gerao e remoo de EROS denominado de estresse oxidativo e pode ser um evento significante nas patologias de um nmero de doenas neurodegenerativas, como Alzheimer e Sndrome de Down. (ZANA et al, 2006). A harmonia entre as enzimas antioxidantes importante para a manuteno da integridade celular. Quando h um desequilbrio entre os sistemas proxidantes e antioxidantes ocorrer um dano celular, e o organismo no conseguir manter o estado redox celular, de acordo com Halliwell e Gutteridge (1985, apud PASTOR et al 1998) este desequilbrio ocasionar oxidao de estruturas celulares importantes como membranas de lipdeos, mudana na estrutura e funcionamento de protenas e mutaes do DNA. O excesso de liberao da EROS est associado ao mecanismo de vrias doenas,

25 como cita Koury (2003) [...] isquemia, inflamao, trauma, doenas degenerativas e morte celular por ruptura da membrana (lipoperoxidao) e inativao enzimtica. Kinochi (1991) relata a dificuldade de mensurar a quantidade de EROS que provocam isquemia cerebral. H vrias evidncias que mostram que indivduos com sndrome de Down esto sob nvel de estresse oxidativo. Eles envelhecem prematuramente e muitos desenvolvem demncia. Alm disso eles sofrem de um comeo prematuro de patologias degenerativas, tais como cataratas e doenas auto-imunes. O estresse oxidativo pode ser causado devido principalmente, a atividade de SOD encontrar-se aumentada nos indivduos com SD em at 50%, fazendo com que a razo de SOD para CAT e GPx seja alterada, significando que mais perxido de hidrognio gerado por SOD, que CAT e GPx podem neutralizar, conduzindo ao desequilbrio severo de oxidao (JOVANOVIC; CLEMENTS; MACLEOD; 1998), e acmulo de perxido de hidrognio no crebro, danificando-o, contribuindo assim para a neurodegenerao (BUSH; BEAIL, 2004, apud HAAN; IANNELLO; KOLA, 1997). O aumento do estresse oxidativo nos pacientes com SD pode causar o aparecimento de doenas diferentes, tais como o arteriosclerose, do envelhecimento acelerado das clulas, mutao celular, e das desordens neurolgicas que ocorrem frequentemente nestes pacientes. (PASTOR et al, 1998, apud FLOYD, 1990). O desenvolvimento motor uma srie de transformaes, caracterizadas pelos processos de maturao que iro acontecer ao longo da vida atravs de interao entre o biolgico e o social. "A motricidade possibilita ao homem o confronto com o meio ambiente. Para a criana, a melhora constante das capacidades motoras significa a aquisio da sua independncia e a capacidade de adaptar-se a fatos sociais" (FLEHMIG, 2000, p. 2). A criana com sndrome de Down possuir todas as etapas do desenvolvimento motor normal, porm de forma mais lenta quando comparada a de uma criana normal, ela ter um atraso em todo o desenvolvimento neuropsicomotor. Sendo, portanto, a principal

26 caracterstica da patologia, a deficincia mental ocorre pela duplicao da regio 22q 21, onde est enzima SOD.

27

3 DELINEAMENTO DA PESQUISA

3.1 Tipo de pesquisa

3.1.1 Tipo de pesquisa quanto ao nvel

Quanto ao nvel de pesquisa classificada do tipo explicativa, onde, de acordo com Gil (2002, p. 42), [...] tm como preocupao central identificar os fatores que determinam ou que contribuem para a ocorrncia dos fenmenos [...]. De acordo com Heerdt e Leonel (2005, p. 73) [...] identifica fatores que contribuem ou agem como causa para a ocorrncia de determinados fenmenos. o tipo de pesquisa que explica a razo, ou os porqus das coisas. No presente trabalho foram analisados as implicaes do estresse oxidativo sobre os eritrcitos e desenvolvimento neuropsicomotor de adultos com sndrome de Down.

3.1.2 Tipo de pesquisa quanto abordagem

Quanto abordagem utilizada a pesquisa se classifica do tipo quali-quantitativa devido aos instrumentos e mtodos utilizados na coleta de dados. A pesquisa do tipo quantitativa para

28 Luciano (2001, p.12) [...] o conhecimento obtido de modo quantificvel, ou seja, o conhecimento traduzido em nmeros, opinies e informaes com vista anlise. E a do tipo qualitativa fundamenta-se segundo Chizzotti (1998, p.52) em dados coligidos nas interpretaes interpessoais, na co-participao das situaes dos informantes, analisadas a partir da significao que estes do aos seus atos. O pesquisador participa, compreende e interpreta.

3.1.3 Tipo de pesquisa quanto ao procedimento utilizado na coleta de dados

A pesquisa quanto ao procedimento utilizado na coleta de dados trata-se do tipo experimental. Na pesquisa experimental, segundo Kche (1997), o investigador analisa o problema, constri suas hipteses e trabalha manipulando os possveis fatores, as variveis, que se referem ao fenmeno observado, para avaliar como se do suas relaes preditas pelas hipteses. A manipulao das variveis na qualidade e quantidade permite relao entre causas e efeitos para controlar e avaliar os resultados.

3.2 Populao / Amostra

3.2.1 Populao

A populao estudada trata-se de indivduos adultos, do sexo masculino, matriculados regularmente na APAE Associao de Pais e Amigos dos Excepcionais de Jaguaruna Santa Catarina e Tubaro Santa Catarina, com diagnstico de Sndrome de Down (SD), residentes da Associao dos Municpios da regio de Laguna (AMUREL).

29 3.2.2 Amostra

A amostra consistiu em dois grupos, o grupo controle (GC) com 8 adultos normossmicos, IMC 261,2 kg/m, com idade 23,332,13 anos, e o grupo experimental (GE) em 8 adultos com sndrome de Down, IMC 321,5 kg/m, com idade 27 3,67 anos.

3.2.3 Critrios de incluso

A amostra foi selecionada pelos seguintes critrios: Grupo controle: Adultos com idade entre 19 e 30 anos; Normossmicos; Gnero masculino;

Grupo experimental: Adultos com idade entre 19 e 30 anos; Gnero masculino; Trissomia do par 21;

3.2.4 Critrios de excluso

Os critrios para excluso foram de ordem de outras doenas de qualquer etiologia.

30 3.3 Instrumentos utilizados na coleta de dados

Os instrumentos utilizados na coleta de dados foram: agulhas descartveis, seringas descartveis, tubos de ensaio, materiais de laboratrio e reagentes qumicos, e fitas de anlise Boehringer Mannheim, balana Filizola, dois cones, fita adesiva, uma bola de futebol, uma bola de basquete, uma bola de tnis, uma mesa, taco de beisebol, suporte para bola, saco de areia e cmera digital Canion.

3.4 Procedimentos utilizados na coleta dos dados

Primeiramente, foram realizados os devidos esclarecimentos sobre os objetivos e procedimentos a todos os sujeitos da pesquisa, e estes responsveis assinaram o Termo de Consentimento livre e esclarecido (Anexo A) e o Termo de Consentimento para fotografias, vdeos e gravaes.

3.4.1 Avaliao da escala de desenvolvimento motor

A avaliao do desenvolvimento neuropsicomotor foi atravs da aplicao da Escala de Desenvolvimento Neuropsicomotor de Gross Motor Function Measure (GMFM) (PALLSANO, 1997, p. 39-42) tanto no grupo controle quanto no grupo experimental. (Anexo B). Todos os indivduos possuem uma ficha para preenchimento dos dados de identificao e das pontuaes de cada teste, sendo utilizada para a anlise dos dados. A ficha de avaliao consta de trs sees. Na primeira so preenchidos os dados de identificao do paciente, como: nome, escolaridade, gnero, data de nascimento, idade cronolgica, escola, nome do examinador. Na segunda seo so preenchidos a pontuao total dos testes de locomoo e

31 de controle de objetos (pontuao bruta, pontuao padro, porcentagem e idade equivalente), somando a pontuao padro e quociente do teste motor grosseiro, sendo que cada teste realizado duas vezes. E a terceira seo a condio do teste (local do teste, nvel de barulho, interrupes, distraes, luz, temperatura) onde se pontua de 1 5, se estes fatores interferiram ou no no teste. Onde de 1 4 interfere e 5 no interfere. Os testes so divididos: em teste de locomoo e teste de controle de objetos. O teste de locomoo composto pelos seguintes testes: Corrida: marca-se 18 metros (m) no cho, coloca-se 2 cones separados a 15 m de distncia um do outro, necessrio que haja aproximadamente 2,5 m a 3 m para uma parada segura. Dizer para o indivduo correr rapidamente de um cone ao outro (Figura 1). Trote: colocar 2 cones separados a 8 m um do outro. Galopar do primeiro cone ao segundo, a volta para o primeiro cone j a repetio do teste (Figura 2). Salto para a frente: colocar dois cones separados a uma distncia de aproximadamente 1,20 m, saltar trs vezes com o p dominante e trs com o p no-dominante (Figura 3). Salto o obstculo: colocar um saco de areia no cho e marcar uma distncia do obstculo de 3 m. A pessoa fica na marcao, corre e pula sobre o saco de areia (Figura 4). Salto em distncia: marcar uma linha no cho, a pessoa fica nesta linha e pula o mais longe que conseguir (Figura 5). Deslizar: colocar um cone separado a 8 m de outro. Dizer para o indivduo andar de lado de um cone ao outro (Figura 6).

32

Figura 1 Corrida.

Figura 2 Trote.

Figura 3 Salto para a frente.

Figura 4 Salto o obstculo.

Figura 5 Salto em distncia.

Figura 6 Deslizar.

33 No teste de controle de objetos, so executados os seguintes itens: Golpeando uma bola estacionria: uma bola amarrada por uma linha a um basto, o alvo para a pessoa bater na bola com um basto (Figura 7). Drible estacionrio: uma bola de basquete em cima de uma superfcie plana, mover a bola 4 vezes com apenas uma mo, sem mover o p, e parar segurando a bola (Figura 8). Pegar: marcar duas linha de 4,5 m separadas, numa linha fica o participante e na outra o arremessador, lanar a bola de forma rpida e direta no peito do participante que pega a bola com ambas as mos (Figura 9). Chute: colocar a bola em cima do saco de areia, em uma linha a 6 m da parede, a pessoa fica na linha de 9 m, corre e chuta a bola o mais forte que conseguir (Figura 10). Arremesso com a mo: uma fita no cho a 6 m de uma parede, a pessoa fica parada atrs da linha e joga a bola de tnis na parede (figura 11). Rolar a bola: colocar dois cones na parede, separados um do outro a 1,20 m. A pessoa fica a 6 m da parede e rola a bola entre os dois cones (Figura 12).

Figura 07 estacionria.

Golpeando

uma

bola

Figura 08 Drible estacionrio.

34

Figura 09 Pegar.

Figura 10 Chute.

Figura 11 Arremesso com a mo.

Figura 12 Rolar a bola.

3.4.2 Anlise Bioqumica

As amostras de sangue venoso foram obtidas dos pacientes e controles colocados em uma posio que se sentissem confortveis, e retirado 8 ml de sangue sem anticoagulante. Alquotas de eritrcitos foram obtidas aps a centrifugao do sangue sem anticoagulante a 1.500g e 4oC durante 10 minutos. Todas as alquotas foram armazenadas a -80oC at o momento das anlises.

35 a) Superxido Dismutase (SOD): A atividade da SOD foi determinada segundo Bannister e Calabrese (1987). A atividade enzimtica foi estimada pela inibio da auto-oxidao da adrenalina medida espectrofotometricamente (480m). b) Espcies Reativas ao cido Tiobarbitrico (TBARS): Como ndice de peroxidao de lipdeos foi verificado a formao de substncias reativas ao aquecimento do cido tiobarbitrico medido espectrofotometricamente (532nm) e foram expressos como equivalentes de malondialdedo (MDA) (mol/mg protena), conforme descrito por Draper e Hadley, (1990) foi determinado espectrofotometricamente em 370m usando um coeficiente 22.0000 Molar. c) Determinao de Protenas: A atividade da SOD e os nveis de TBARS foram ponderados atravs da determinao da protena (albumina srica bovina), utilizando a partir da tcnica descrita por Lowry et al (1951).

3.5 Clculo de tamanho da amostra

Considerando o estudo de Aguilar-da-Silva, Moraes e Moraes (2003), encontrando valores mdios de atividade da SOD de 3.245,20 U/g de Hb, e o poder de teste 80%, o tamanho de amostra para cada grupo 7,6.

3.6 Procedimentos e instrumentos utilizados no tratamento de dados

Os valores foram expressos em mdia erro padro mdio (EPM). O teste de hiptese utilizado foi a distribuio de student, sendo a diferena significante quando p< 0,05.

36

4 RESULTADOS E ANLISE DOS DADOS

A presente pesquisa caracteriza-se pela anlise da atividade enzimtica da superxido dismutase (SOD), dos nveis de peroxidao de lipdeos atravs das Espcies Reativas ao cido Tiobarbitrico (TBARS) verificando assim o estresse oxidativo, e dos testes de desenvolvimento motor em adultos normossmicos e trissmicos, atravs da escala de desenvolvimento motor de GROSS. Os resultados seguem, em uma nica tabela para todos os dados, mostrando a mdia e o desvio padro, nos grupo controle e no grupo de portadores de sndrome de Down. E a seguir, os dados so correlacionados com outros estudos, sendo apresentados os valores da nossa pesquisa, sob a forma de grficos.

4.1 Apresentao dos resultados

Os indivduos portadores de sndrome de Down apresentaram significativamente (p<0,05) maior atividade da SOD nas hemcias do que os indivduos do grupo controle, com os valores respectivamente, de 38,47,0 U SOD/mg protena e de 22,12,1 U SOD/mg protena. (Tabela I) O ndice de peroxidao de lipdeos, verificado atravs dos nveis de TBARS e expressos como equivalentes de MDA nos eritrcitos foi significativamente maior (p<0,05) nos indivduos com sndrome de Down com os valores de 1,340,10 nmol MDA/mg protena,

37 e 0,690,03 nmol MDA/mg protena no grupo controle (Tabela I). A aplicao da escala de desenvolvimento neuropsicomotor de Gross Motor Function Measure (GMFM), tanto no grupo controle, quanto no grupo de Down, obtiveram os valores respectivamente, de 116,0 1,3 e 65,5 0,6. Estes valores mostram que o grupo Down apresentou significativamente (p<0,05) menor desenvolvimento motor que o grupo controle, indicando atraso no desenvolvimento motor (Tabela 1). Tabela 1: Os valores obtidos da atividade enzimtica da SOD, peroxidao de protenas atravs do TBARS e da escala de desenvolvimento motor de GROSS, no grupo controle e no grupo com sndrome de Down. * p< 0,05, teste de Stundet. Controle SOD (U SOD/mg protena) TBARS (nmol MDA/mg protena) GROSS 22,12,1 0,690,03 116,0 1,3 Down 38,47,0* 1,340,10* 65,5 0,6*

4.3 Anlise dos dados e discusso dos resultados

4.2.1 Aumento da atividade enzimtica da SOD nos pacientes com Down

Em nosso estudo houve um aumento da atividade da SOD nas hemcias (Grfico 1) o que tambm foi encontrado por Pastor (1998) onde determinou nas hemoglobinas a atividade da SOD em 72 pacientes com SD, comparando com 72 pacientes controles saudveis, tambm foi encontrado um aumento desta enzima, nos portadores de sndrome de Down. Pastore et al (2003) realizou um estudo com 46 crianas com SD e em 64 crianas normais, encontrando uma atividade da SOD nas hemoglobinas aumentadas nos pacientes com sndrome de Down.

38

Grfico 1 Atividade da enzima SOD no grupo controle e no grupo com sndrome de Down, indicando um aumento significativamente (p<0,05) da enzima neste ltimo grupo.

O estudo realizado por Aguilar-da-Silva, Moraes e Moraes (2003) com 24 amostras de sangue, divididas em dois grupos, sendo 12 em portadores com Down da APAE e 12 no grupo controle, apresentou valores na hemoglobina para uma atividade da SOD aumentada nos pacientes com SD. O aumento da enzima superxido dismutase (SOD) nos portadores de sndrome de Down, conforme Moreira, El-Hanib e Gusmo (2000), Pastore et al (2003), Aguilar-daSilva, Moraes e Moraes (2003), Zana, Janka e Klmn (2006) se d pelo fato da enzima localizar-se no cromossomo onde ocorre a trissomia, ou seja, no segmento distal do cromossomo 21 da regio 21q22, referente a deste cromossomo, e portanto ter uma duplicao desta regio, como a SOD catalisa a reao de converso dos nions superxidos (O2 -) em perxidos de hidrognios (H2O2), que eliminado pela ao das enzimas catalase e glutationa peroxidase, quando aumentada a sua atividade causar um desequilbrio entre as enzimas antioxidantes e oxidantes, produzindo uma agresso endgena constante, o que

39 acarretar em espcies reativas de oxignio (EROS) pela acelerao da reao de formao de perxido de hidrognio (H2O2) reagindo com o nion superxido, produzindo o radical hidroxila , causando danos oxidativo.

4.2.2 Aumento dos nveis de lipoperoxidao na sndrome de Down

Em nossos pacientes com sndrome de Down, a concentrao dos nveis de lipdios nas hemcias, mostraram-se maiores, em relao ao grupo controle, o que indica uma lipoperoxidao nesta populao (Grfico 2).

Grfico 2 Lipoperoxidao no grupo controle e no grupo com sndrome de Down, mostrando uma significncia (p<0,05) maior de peroxidao de lipdios nos Down, atravs do TBARS. Os nossos resultados foram semelhantes de Jovanovic, Clements e MacLeod (1998) que encontraram, em um estudo com portadores de sndrome de Down e controle, avalizando o TBARS em creatina um aumento de lipoperoxidao no grupo Down. Pastore et al (2003) tambm encontraram em amostras de sangue atravs do TBARS. Este aumento da

40 lipoperoxidao no grupo com Down, revelam nveis elevados de marcadores de estresse oxidativo de TBARS. Capone et al (2002) em seu estudo com 46 SD e 43 controles, tambm encontraram um aumento de lipoperoxidao em amostras de plasma no TBARS, nos indivduos com sndrome de Down.

4.2.3 Atraso no desenvolvimento motor na sndrome de Down

Os indivduos portadores de sndrome de Down apresentaram uma diminuio do quociente motor Gross, o que indica um atraso no seu desenvolvimento neuropsicomotor (Grfico 3).

Quociente Motor de GROSS (adimensional)

160,0

120,0

80,0

40,0

0,0 Controle Down

Grfico 3 Quociente motor de Gross est significativamente (p<0,05) diminudo em pacientes com sndrome de Down, acarretando um atraso no desenvolvimento neuropsicomotor. Segundo Schwartzman (1999), os portadores de sndrome de Down possuem um atraso inevitvel em todas as reas do desenvolvimento e um estado permanente de

41 deficincia mental. Voivodic e Storer (2002) afirmam que o desenvolvimento cognitivo desta populao no somente mais lento, mas tambm se processa de forma diferente. Capone et al (2002) mostram uma capacidade cognitiva menor nos pacientes com a trissomia. Bush e Beail (2004) em seus estudos encontraram uma incidncia alta no grupo com sndrome de Down a desenvolver demncia, principalmente do tipo Alzheimer. O mecanismo patolgico do atraso neuropscicomotor pode ser explicado, atravs da unio dos dois resultados acima. O crebro consome grandes quantidades de oxignio, e suscetvel ao estresse oxidativo, o metabolismo dos principais neurotransmissores, geram as EROS que so capazes de consumir as defesas antioxidantes. As membranas neuronais contm nveis elevados de lipdios polinsaturados capazes de sofrer peroxidao lipdica, e algumas clulas glias so capazes de produzir superxido e perxido de hidrognio, e consequentemente o radical hidroxila. As EROS geradas oxidam assim lipdios de membrana, protenas ou do prprio DNA (ZANA, JANKA, KLMN, 2006). Embora a SOD possa ser um importante componente no mecanismo da proteo de encontro aos radicais do oxignio, pode tambm ter um efeito negativo (BUSH; BEAIL, 2004). Os autores, Druzhyna et al (1998), Capone et al (2002), explicam que o envelhecimento precoce ocorre pelo excesso de informao gentica da SOD, onde produz efeitos cumulativos de radicais de oxignio, de nions superxidos, radicais hidroxilas e de perxido de hidrognio. Massaccesi et al (2006) afirma que o perxido de hidrognio no completamente metabolizado causa o estresse oxidativo, prejudicando o estado redox do SNC, diminuindo as funes corticais.

42

CONSIDERAES FINAIS

O estudo chegou ao final obtendo-se como resultados: Uma maior atividade da SOD nas hemcias nos indivduos com sndrome de Down do que nos indivduos controles. Uma maior concentrao dos nveis de peroxidao de lipdeos nas hemcias nos portadores de sndrome de Down do que no grupo controle, indicando uma lipoperoxidao. Uma diminuio do quociente motor de GROSS nos portadores de sndrome de Down, mostrando um atraso do desenvolvimento neuropsicomotor nesta populao. Sendo assim, estes resultados sugerem que os portadores de sndrome de Down possuem um estresse oxidativo, o que pode ser a causa do atraso no desenvolvimento neuropsicomotor. E que os eritrcitos so marcadores biolgicos das agresses txicas em nosso organismo. Observou-se uma escassez de publicaes nacionais ficando como sugesto a realizao novos estudos sobre o estresse oxidativo, em indivduos com sndrome de Down, uma vez, quanto mais informaes sobre a patologia melhor pode ser seu tratamento. Por fim, este trabalho mostrou-se de suma importncia na detectao dos produtos da atividade da SOD e da peroxidao lipdica como evidncia indireta na importncia das espcies reativas de oxignio na patogenia desta doena.

43

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ANEXOS

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ANEXOS A Consentimento livre e esclarecido

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UNIVERSIDADE DO SUL DE SANTA CATARINA COMISSO DE TICA EM PESQUISA - CEP UNISUL TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Ttulo do Projeto: Implicaes do estresse oxidativo sobre os eritrcitos e desenvolvimento neuropsicomotor. Gostaria de obter todas as informaes sobre este estudo: a- tempo que terei de ficar disponvel; b- quantas sesses sero necessrias (com dia e horrio previamente marcados); c- detalhes sobre todos os procedimentos (testes, tratamentos, exerccios, etc.); d- local onde ser realizado; e- equipamentos ou instrumentos que sero utilizados; f- se preciso vestir alguma roupa ou sapato apropriado; a. Aproximadamente 15 minutos; b. 1 sesso; c. Ser tirado sangue com os adultos, e sero guardadas em um vidro a 80C at o momento das anlises. Ser avaliado o desenvolvimento motor pela aplicao de uma escala, que se chama Escala de Desenvolvimento Neuropsicomotor de Gross Motor Function Measure (GMFM). d. Ser realizado na prpria escola da criana, na APAE e na Escola de Educao Bsica Marechal Luz de Jaguaruna. e. Utilizaremos uma agulha esterilizada, um vidro para colocar o sangue tirado, escala de desenvolvimento e uma filha de papel para anotar os resultados. f. No ser preciso nenhuma roupa ou sapato especfico, apenas com a roupa que estiver vestindo na hora.

49 e quaisquer outras informaes sobre o procedimento do estudo a ser realizado em mim. Quais as medidas a serem obtidas? Ser retirado o sangue e analisado, onde veremos a quantidade de uma enzima que temos no sangue a antioxidante SOD. Esta enzima demais no sangue acaba diminuindo o desenvolvimento em adultos, por isso aplicaremos uma escala de desenvolvimento. O nico desconforto da pesquisa o medo da agulha porque a agulha pica, mas no h segredos em tirar sangue porque vai ser tirado por uma pessoa que tem experincia e formao neste assunto. As vantagens ser um melhor tratamento para os portadores de sndrome de Down, porque ser realizado um teste para seu desenvolvimento e estudado seu sangue. Pesquisador responsvel Aderbal Silva Aguiar Junior, co-orientador Marcos Oliveira Machado e orientando do estudo Glaucia Silvano Rocha.

Quais os riscos e desconfortos que podem ocorrer?

Quais os meus benefcios e vantagens em fazer parte deste estudo? Quais as pessoas que estaro me acompanhando durante os procedimentos prticos deste estudo? Existe algum questionrio que preciso preencher? Sou obrigado a responder a todas as perguntas? PESSOA PARA CONTATO: Aderbal Silva Aguiar Junior (pesquisador responsvel)

Sim. Sim.

NMERO DO TELEFONE: (0xx48) 9986-8070 ENDEREO: Rua Simeo Esmeraldino de Menezes, 68. Tubaro SC. CEP: 88704-090

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TERMO DE CONSENTIMENTO
Declaro que fui informado sobre todos os procedimentos da pesquisa e que recebi, de forma clara e objetiva, todas as explicaes pertinentes ao projeto e que todos os dados a meu respeito sero sigilosos. Eu compreendo que neste estudo as medies dos experimentos/procedimentos de tratamento sero feitas em mim. Declaro que fui informado que posso me retirar do estudo a qualquer momento.

Nome por extenso : _______________________________________________

RG : _______________________________________________

Local e Data: _______________________________________________

Assinatura: _______________________________________________

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Adaptado de: (1) South Sheffield Ethics Committee, Sheffield Health Authority, UK; (2) Comit de tica em pesquisa - CEFID - Udesc, Florianpolis, BR.

ANEXOS B Escala de Desenvolvimento Neuropsicomotor

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