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CUESTINARIO

1. Qu es un vector de expresin?
http://books.google.com.mx/books?id=p3DCb9lTLx8C&pg=PA311&lpg=PA311&dq=vector +de+expresi%C3%B3n&source=bl&ots=Y_EYXLfWS&sig=HvtYaerJLoAOSD_l3hYWInwiksQ&hl=es&sa=X&ei=S44dUZeYA4iY2AX2k 4GQAg&ved=0CGoQ6AEwCQ#v=onepage&q=vector%20de%20expresi%C3%B3n&f=fals e Sistema que se utiliza como ayuda en el proceso de transferencia de un gen exgeno al interior de la clula. Facilita la entrada y biodisponibilidad intracelular del material gentico a transducir y, por consiguiente, su funcionamiento correcto.

2. Cul es la utilidad de la clonacin?


http://www.portaley.com/biotecnologia/bio5.shtml http://seguridadbiologica.blogspot.mx/2011/02/transformacion-bacteriana.html En el mbito de la medicina y la investigacin mdica: Mejorar el conocimiento gentico y psicolgico. Disponer de modelos de enfermedades humanas. Producir a bajo coste protenas para su posible uso teraputico. Suministrar rganos o tejidos para trasplantes.

En la investigacin agrcola y agrnoma: Permite mejorar la seleccin de animales que posean alguna cualidad innata o adquirida de inters (resistencia, productividad, etc). La clonacin animal podra ser til para investigar en diversos aspectos de la gentica, preservar especies en extincin, obtener animales homogneos que podra tener utilidad en la industria de la alimentacin y en la industria farmacutica

3. Explique el termino de transformacin bacteriana


La transformacin es un proceso de transferencia de genes en donde la clula bacteriana capta DNA desnudo a partir del medio, lo incorpora y expresa. Para que la clula pueda captar el DNA desnudo debe encontrarse en estado de "competencia". El estado de "competencia" ocurre naturalmente en algunos microorganismos, competencia fisiolgica, y puede ser inducido artificialmente en otros,competencia artificial. El DNA exgeno internalizado puede integrarse mediante recombinacin al cromosoma o a un plsmido, o puede establecerse como un replicn autnomo si contiene un origen de replicacin y puede circularizarse. La transformacin gentica de bacterias es un procedimiento de laboratorio por el cual se introduce material gentico a una bacteria. Es el proceso en el que las clulas procariontes toman DNA exgeno del ambiente, alterando a su fenotipo y el de sus descendientes. En general la entrada del DNA a las clulas es independiente de la fuente del DNA (o de sus secuencias), pero es muy dependiente del estado fsico-qumico del DNA (tamao, hebra simple o doble, lineal o circular, relajado o superenrollado). La eficiencia con la que la clula blanco tima el DNA exgeno vara ampliamente entre especies procariticas y dentro una especie, de las cepas. Algunas especies pueden ser manipuladas en el laboratorio para incrementar la

eficiencia con la que toman el DNA. Las clulas pre-tratadas que toman el DNA ms eficientemente se dice que son competentes.

4. Por qu se usa un antibitico de seleccin en el medio de cultivo?


Al transformar con un plsmido que contiene su propio ori y un gen de resistencia a antibitico las clulas blanco que adquieran el plsmido se transformarn, de un fenotipo sensible al antibitico, a otro, resistente al antibitico; las cuales se pueden encontrar al sembrar las clulas tratadas sobre cajas de agar que contienen antibiticos. El antibitico matar cualquier clula que no adquiri el plsmido.

5. Explique cada paso de la transformacin bacteriana http://www.datoanuncios.org/?a=21193


http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/25_micro.htm La transformacin es un proceso de transferencia de genes en donde la clula bacteriana capta DNA desnudo a partir del medio, lo incorpora y expresa. Para que la clula pueda captar el DNA desnudo debe encontrarse en estado de "competencia". El estado de "competencia" ocurre naturalmente en algunos microorganismos, competencia fisiolgica, y puede ser inducido artificialmente en otros,competencia artificial. El DNA exgeno internalizado puede integrarse mediante recombinacin al cromosoma o a un plsmido, o puede establecerse como un replicn autnomo si contiene un origen de replicacin y puede circularizarse. La transformacin puede dividirse en diferentes etapas que son comunes a todas las bacterias: 1. Desarrollo de la competencia 2. Unin del DNAu 3. Procesado y captacin del DNA 4. Integracin del DNA por recombinacin y expresin Desarrollo de la competencia: La "competencia" requiere complejos cambios fisiolgicos que ocurren en determinadas etapas de crecimiento y est asociada a diversos fenmenos en distintas especies de bacterias. En Streptococcus pneumoniae se ha descrito que el estado de "competencia" se logra cuando se alcanza cierta densidad celular crtica durante la fase de crecimiento exponencial y una concentracin efectiva de una protena extracelular, a menudo denominada factor de competencia FC, que induce la sntesis de ciertas protenas involucradas en el proceso de transformacin. Este factor de competencia liberado por algunas clulas inducen la competencia de las restantes clulas presentes en el cultivo. Durante este estado las clulas adems liberan al medio autolisinas que desenmascaran el sitio de unin y captacin del DNA. En Bacillus subtilis la competencia se produce durante la fase estacionaria cuando la sntesis de cidos nucleicos est disminuda. En Haemophilus spp. la competencia est asociada a clulas que no se dividen. Y en Neisseria gonorrhoeae, la competencia est relacionada con la presencia de pilis, ya que las clulas con pilis son naturalmente competentes mientras que las clulas sin pilis son incapaces de alcanzar la competencia. En ciertas especies de bacterias se puede inducir la "competencia" por mecanismos artificiales debido a que son incapaces de alcanzar este estado naturalmente. En uno de ellos, las bacterias son colocadas en soluciones de CaCl2 (Cloruro de Calcio) que por mecanismos desconocidos permiten la absorcin y captacin de DNA exgeno. Otro mecanismo es la electroporacin, en la que por medio de pulsos elctricos se abren pequeos poros en las bacterias por los cuales ingresa el DNA exgeno. Unin del DNA: La clula une mediante un receptor que se encuentra en su superficie principalmente DNA doble cadena aunque pueden unir limitadas cantidades de DNA simple cadena. La especificidad del DNA que la clula puede unir vara con la especie bacteriana. Las bacterias Gram positivas como el Streptococcus pneumoniae y el Bacillus subtilis pueden unir

cualquier tipo de DNA doble cadena que este presente en el medio. Esto significa que pueden unir tanto DNA homlogo como heterlogo. En cambio, las bacterias Gram negativas como el Haemophilus y Neisseria spp. slo pueden unir DNA homlogo o de especies muy semejantes. Por ejemplo, en Haemophilus la internalizacin del DNA requiere una secuencia especfica de 11 pares de bases (5'-AAGTGCGGTCA-3'), la que se encuentra repetida 600 veces en su genoma. La unin del DNA transformante involucra una primera fijacin reversible que luego se transforma en irreversible. Durante la fijacin de tipo irreversible el DNA no puede soltarse ni reemplazarse. Procesado y captacin del DNA: Una vez que el DNA doble cadena se ha fijado irreversiblemente a la clula sufre diversos procesos que llevan a la captacin de una de las cadenas del DNA. En las bacterias Gram positivas el DNA doble cadena unido es nickeado (ruptura del enlace fosfodister entre dos nuclesidos de una misma cadena) por una protena que se cree forma parte del receptor del DNA. Este receptor empuja la cadena complementaria hacia el interior de la clula y la cadena nickeada es degradada a oligonugletidos por una endonucleasa asociada. De esta manera, slo ingresa a la clula una de las cadenas del DNA originalmente unido. En esta etapa, el DNA simple cadena internalizado se encuentra en una etapa de eclipse, ya que ha perdido la capacidad de servir como DNA "donante" para una nueva transformacin porque el DNA simple cadena es unido y captado en forma muy pobre por clulas competentes. El DNA simple cadena captado es protegido de la accin de endonuclesas por su asociacin a protenas SSB especficas de la competencia, y forma un complejo de eclipse. En las bacterias Gram negativas, el DNA doble cadena especfico que se ha unido es tomado por unas vesculas denominadas transformasonas. Dentro de estas vesculas una de las cadenas es degradada y la otra es internalizada por un proceso similar al del pneumococo. Sin embargo, en bacterias comoHaemophilus no se han observado intermediarios DNA simple cadena en el citoplasma y por lo tanto hay ausencia de DNA en eclipse. Los transformasomas protegen al DNA de las DNasas externas y de las enzimas de restriccin celulares. Integracin del DNA por recombinacin y expresin: En Streptococcus pneumoniae, Bacillus subtilis y Haemophilus influenzae los DNAs donante y receptor forman un producto que es DNA heterodplex. La integracin del complejo DNA simple cadena-protenas SSB a regiones homlogas del cromosoma es muy rpida en Streptococcus pneumoniae y est mediada por recombinasas como la RecA. Sin embargo el DNA que no contiene homologa es degradado por nucleasas celulares. En las bacterias como el Haemophilus el DNA simple cadena se integra al cromosoma en regiones homlogas por recombinacin a medida que ingresa a la clula desde los transformasomas.

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