Genetic A

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ
INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUMICO-BIOLGICAS
PROGRAMA DE BIOLOGA
MANUAL DE PRCTICAS
GENTICA
MANUAL DE PRCTICAS DE GENTICA

COMPILADORES:
NAYELI VERA RAMIREZ
GUILLERMO BOJORQUEZ
PRINCIPAL: GUILLERMO BOJORQUEZ
Colaboradores:
M. en C. ROCIO ANGELICA CORTS RODRGUEZ
DR. CESAR PEDROZA ROLDAN
Ciudad Jurez, Chihuahua

Universidad Autnoma de Ciudad Jurez
2011
P. 111
M. en C. Emilio Clarke Crespo

Coordinador de la Academia de Biologa
D. Ph. Antonio de la Mora Covarrubias

Coordinador del Programa de Biologa
Dr. Alejandro Martnez Martnez

Jefe del Departamento de Ciencias Qumico-Biolgicas
M.C. Hugo Staines Orozco

Director del Instituto de Ciencias Biomdicas
Aprobados por la Academia de Biologa, 2011
INDICE
PRESENTACIN................................................................................................ 1
PRCTICA 1. MEDIOS DE CULTIVO PARA Drosophila sp............................... 2
PRCTICA 2. CICLO BIOLGICO Y SEXADO DE Drosophila sp. .................... 8
PRCTICA 3. CROMOSOMAS POLITENICOS ................................................. 9
PRCTICA 4. AISLAMIENTO DE ADN BACTERIANO .................................... 18
PRCTICA 7. ELECTROFORESIS DE ADN.................................................... 48
PRCTICA 8. AISLAMIENTO DE PLASMIDOS .............................................. 54
PRCTICA 10. CORPUSCULO DE BARR....................................................... 65
PRCTICA 11. ESTRUCTURA DE LOS CROMOSOMAS............................... 73
PRCTICA 12. MITOSIS .................................................................................. 78
PRCTICA 13. CULTIVO DE LINFOCITOS Y ANALISIS DE CROMOSOMAS84
PRCTICA 14. USO Y LIMPIEZA DE MATERIAL DE LABORATORIO ........... 92
PRESENTACIN
PRCTICA 1. MEDIOS DE CULTIVO PARA Drosophila sp.
Introduccin
Drosophila sp. es un organismo de uso comn en investigacin
gentica, que entre otras particularidades,
puede desarrollarse en una
amplia variedad de medios en fermentacin, incluyendo
frutas en
descomposicin (uva, pltano, ciruela, papaya), y ocasionalmente crece en

las corolas de las flores. Un componente bsico en su dieta es la levadura de
la cual se alimentan principalmente en estado larvario
Bridges y Darby, estudiantes de T. H. Morgan
describieron las
condiciones mas adecuadas que deberan considerarse en la elaboracin del

medio nutritivo para el mantenimiento de moscas en laboratorio e incluyeron,
el uso de la pulpa de pltano fermentado, levadura, azcar como fuente de
carbono, harina y agar. Este medio resulto ser nutritivo, econmico, con alto
contenido de humedad, textura suave y resistente a contaminacin por otros
organismos incluyendo bacterias y hongos.
Aunque actualmente pueden adquirirse medios instantneos deshidratados
que contienen
nutrientes balanceados y conservadores que facilitan su
preparacin y almacenamiento, es importante aprender a preparar medios

convencionales los cuales son relativamente fciles y rpidos de preparar.
Objetivos
El alumno conocer y preparara diferentes medios de cultivo para el
realizar y mantener experimentos con
Drosophila.
Objetivos especficos
2
especies del genero
El alumno conocer y aplicara las tcnicas de lavado, preparacin y

esterilizacin de materiales para medios de cultivo de Drosophila
El alumno preparara medios de cultivo convencionales en base a
harina de maz, levadura y carbohidratos.
El alumno aprender a preparar medio de cultivo instantneo Formula
4-24, (Carolina Biological Supply Company)
Materiales
Recipiente
preparar
Viales
de
Levadura
medio
plstico o frascos de
cerveza
aluminio,
vidrio Gasa, algodn
polvo 26.4gr
vaso de precipitado,
e hilo o tapones de
matraz, etc.
propileno
Probeta
destilada 500ml
Guantes de tela
(olla
el
para
de
resistentes al calor
Agua
Harina de maz
42 gr
Sacarosa 28gr
Agar-agar 6.4gr
seca
de
en
Acido propi nico
1.6ml
Termoplaca
horno convencional
Balanza analtica
Campana
de
flujo laminar
Procedimiento
Medio de cultivo de harina de maz
1.- Esterilizar los viales o frascos en el horno a 100C junto con los tapones
de propileno o de algodn con gasa, dejar ah hasta que el medio est listo
para servir. En caso de utilizar recipientes que no son resistentes a las altas
temperaturas optar por otros mtodos de esterilizacin. (UV, hipoclorito, etc.)
2.- Pesar y mezclar en seco la harina de maz, la sucrosa, el agar-agar y la
levadura de cerveza.
3.- Calentar el agua destilada hasta punto de ebullicin.
4.-A punto de ebullicin, agregar lentamente la mezcla permitiendo se
disuelva lentamente
3
5.-Cuando la mezcla suelte el primer hervor bajar la temperatura y cocinar

por espacio de 15 minutos
Mover el medio constantemente para evitar se formen grumos o se queme.
6.-Trascurridos los 15 minutos retirar del calor, agitando constantemente,
hasta que disminuya su temperatura para poder agregar el acido propi nico
sin que este se vaya a evaporar.
7.-Al agregar el acido propi nico volver a agitar hasta que este se disuelva en
la mezcla.
8.-Apagar el horno y sacar los viales o frascos.
9.-Servir el medio y verificar que los viales o frascos no estn demasiado
calientes, si lo estn se puede notar porque al verter el medio, este vuelve a
ebullir, si ese es el caso, esperar a que los frascos enfren.
- La cantidad vaciada en cada frasco /vial no debe sobrepasar los 2cm de
altura
10.-Tapar los viales o frascos con borlas de gasa o tapones de propileno y
regresarlos al horno el cual deber estar apagado, se dejara enfriar por 24
horas, antes de ser utilizados.
Medio de cultivo instantneo Formula 4-24, (Carolina Biological Supply
Company)
Esta frmula no es necesario cocinarla
o esterilizarla, se torna azul al
adicionarle agua, el color hace fcil la observacin del desarrollo de los

estados de Drosophila.
1.- Esterilizar los viales o frascos en los que se va a preparar el medio
2.-Colocar en los viales proporciones iguales de la
formula 4-24 y agua
destilada, procurando no sobrepasar 1/3 del recipiente contenedor. Cuidar no

colocar una mayor cantidad de agua que de formula.
3.- Esperar que el medio gelifique, finalmente tapar los frascos con un tapn
de propileno o de gasa con algodn. La gelidificacin debe ser rpida y se
puede utilizar inmediatamente.
4
Bibliografa
Hernndez, V., Manual de Practicas de Gentica. Escuela superior de
Agricultura Hermanos Escobar. 1990.
Resultados
Cuestionario
1.- Qu funcin tienen cada uno de los ingredientes utilizados en la
preparacin del medio convencional?
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2.- Que se debe tener en cuenta para seleccionar el medio de cultivo ms
adecuado?
5
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3.-Si te encontraras colectando Drosophila en el campo y no dispusieras de
medios de cultivo adecuados, a que recurriras para mantenerlas vivas por un
tiempo prolongado
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4.-Investiga que otro tipo de medios de cultivo para Drosophila se encuentran
disponibles comercialmente
Conclusiones
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Bibliografa consultada
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6
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PRCTICA 2. CICLO BIOLGICO Y SEXADO DE Drosophila sp.
Introduccin
Ciclo biolgico
Drosophila sp. Es un insecto que presenta metamorfosis completa, con
cuatro fases discretas: huevo, larva, pupa y adulto. Su ciclo de varia
dependiendo de las condiciones ambientales, especialmente la temperatura del
cultivo. A 25C, el ciclo dura cerca de 10 das, pero a 20C, puede durar hasta
15 das. altas temperaturas ( 30C), resultan en esterilizacin o muerte de
las moscas,
y a bajas temperaturas (
10C),
genera
ciclos de vida
prolongados pero reduce la viabilidad.

Si se considera un ciclo de vida de 12 das a 25C aproximadamente,
dos de ellos corresponde al estado de huevecillos, cuatro en larva, cuatro en
pupa y dos en estado adulto. La,
hembra empieza a depositar huevos en
cantidades que van de 50 a 75 a los 2 das de haber emergido, y sostener esta

produccin por algunas das, , despus la produccin de huevos disminuye. El
promedio de vida de las moscas adultas es de 37 das a 25C.
En todos los experimentos, es necesario identificar el sexo de los
individuos de estudio para poder realizar las cruzas, con el fin de utilizar
individuos y sexos conocidos y en proporciones adecuadas. Las especies de
Drosophila,
presentan un dimorfismo sexual muy asentuado, en el cual es
posible distinguir desde que se encuentra en estado de pupa. En estado adulto

las hembras son ms grandes y el abdomen termina en forma puntiaguda. El
macho es ms pequeo y tiene los tres ltimos segmentos abdominales
aparentemente fusionados lo que da la apariencia de una mancha negra. La
estructura mas confiable para distinguir machos de hembras son los peines
sexuales presentes en los machos los cuales utiliza
durante la cpula.
para sujetar a la hembra
Objetivos
Que el estudiante se familiarice con la manipulacin de las moscas
adultas, as como el reconocimiento de diferentes estadios de desarrollo
de Drosophila sp.
Que el estudiante
reproduccin
adquiera la habilidad de en el manejo, cruzas,
y mantenimiento de los organismos en sus diferentes
etapas de desarrollo.
Que el alumno aprenda a diferenciar las hembras de los machos en los
estados de pupa y adulto de Drosophila sp., para realizar cruzas.
Materiales
Pinceles
Agujas de diseccin
Cajas petri
Fly Nap, Sal de Uvas o Material biolgico:

Alka-tse-tser
Microscopio
frascos con cultivos de

Drosophila
Estereoscopio
Solucin salina al 7%
Procedimiento
1.- Tomar un frasco con moscas y dormirlas (CO2, Fly Nap, ter), para evitar
que las moscas escapen.
2.-Una vez dormidas las moscas colocarlas en una caja petri
3.-Del frasco de cultivo obtener con ayuda d un pincel huevos y larvas, y
colocarlos en una caja petri aadiendo una gota de solucin salina o agua
destilada para su observacin en el estereoscopio. As mismo obtener pupas
de la pared del frasco.
4.-Una vez que haya observado las caractersticas de Drosophila sp, seleccione
3 parejas, (procure seleccionar hembras vrgenes) de los diferentes fenotipos
(ojos rojos, sepia, blancos, pteros, alas vestigiales etc.) y coloque cada
fenotipo en un frasco con medio de cultivo. No olvide rotular sus frascos

(nombre, fecha, materia, fenotipo.)
Bibliografa
Mejia, D. L. (2002). practicas de laboratorio genetica general. Guatemala:
Universidad de San Carlos Guatemala.
Vadillo Hernndez, A.M. Manual de Practicas de Gentica. Escuela superior de
agricultura Hermanos Escobar. 1990
Rodrguez, A. R., et al. Manual de prcticas de gentica y cuaderno de trabajo.
UNAM. 2005
Resultados
Realizar un esquema de los huevos,
caractersticas ms visibles.
HUEVO (mide 0.5mm y dura 1-2dias):
Se pueden observar sobre la superficie del
alimento. Es ovoide, una cubierta delgada
pero fuerte (corion) con dos pequeas
proyecciones que emergen de un extremo,
poseenformaaplanada,estaslesirvencomo
alas de agua, evita que se hunda en el
mediodecultivo,ascomopararespirar
LARVA(mide45mmydura4das):Esblanca,
segmenta. Posee las partes bucales de
coloracin negra (ganchos bucales) en una
regin angosta de la cabeza. No posee ojos,
tampoco tiene apndices y deben empujarse
para desplazarse por el medio. Respiran por
larvas y
pupas, sealando las
trqueas y poseen un par de espirculos

visibles (poros areos) en los extremos
anterioresyposterioresdelcuerpo.Elperiodo
larvariosedivideentresestadios,eneltercer
estadio la larva se alimenta hasta que esta
listaparapupar,enesemomentoemergedel
mediohaciaunlugarsecodondesedetieney
evertesusorificiosrespiratoriosanteriores
PUPA (3mm); La pupa es considerada la fase

reorganizativa del ciclo de la mosca, durante
el cual la mayora de las estructuras larvarias
son destruidas y las estructuras adultas se
desarrollan a partir de tejidos embrionarios
llamados anlagen o discos imaginables.
Despus de everter sus orificios anteriores a
cuernos ppales el cuerpo de la larva se
acortaylacutculadelltimoperiodolarvalse
endureceysepigmenta.Cuandosecompleta
la metamorfosis, el adulto emerge forzando
su salida por la parte anterior (oprculo) del
pupario
Dibuja al adulto indicando la estructura general de la cabeza, trax y segmentos

abdominales, as como las caractersticas que caracterizan a hembras y
machos (abdomen, regin genital, peinecillo sexual, etc.)
ADULTO(2mm):Alprincipioesdecolorclaroylasalassinabrir,conabdomenlargo.Enpocas
horas.Lasalasseextienden,elabdomenseensanchayelcolorseobscurece
Observa y esquematiza las diferencias fenotpicas que presenta Drosophila sp.

(Ojos, alas, setas, color del cuerpo, etc.
Bibliografa
Rosas m. L., 1990, manual de investigaciones de laboratorio y campo
para el curso de biologia 1, unam, mexico d.f. pags 61
Salceda v.m., gallo a., j., 1984, genetica de drosophila tecnicas de laboratorio,
limusa, mexico d.f, pags. 16-84
Vadillo a.m., 1990, manual de practicas de genetica, escuela superior de
agricultura "hermanos escobar", cd. Juarez, chih. Pags. 6, 12, 14, 19, 90
Cuestionario
1. Describe brevemente cinco de los descubrimientos ms importantes en los
que Drosophila ha sido el objeto central de estudio.
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2. Adems de la mosca Drosophila, menciona al menos otros diez organismos
incluyendo plantas y bacterias, que sirvan como organismos modelo para la
investigacin en gentica.
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3. Los estudios con Drosophila nunca se han limitado a machos y hembras

adultos. Menciona otras etapas del desarrollo (embriones, pupa, etc.) de la
mosca, que hayan sido utilizadas para investigacin Gentica y en cita
brevemente el objetivo de dichos estudios.
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4. La mosca Drosophila sp.
es la ms conocida en Gentica, sin embargo
existen otras especies del gnero Drosophila igualmente valiosas. Menciona

tres especies ms.
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5. Menciona cuales son las caractersticas morfolgicas ms apropiadas para
diferenciar hembras de machos.
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6. Explica la posible razn del dimorfismo sexual que presentan el gnero

Drosophila.
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7. Explica los principales problemas que se presentaron durante el desarrollo de
la prctica y relacionados con la anestesia, la sobrevivencia y la identificacin
de las estructuras que permiten diferenciar los sexos
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8. Explica cmo puedes garantizar que las hembras seleccionadas para un
experimento que implique cruzas selectivas no estn preadas y
sean
realmente vrgenes.
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Conclusiones
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PRCTICA 3. CROMOSOMAS POLITENICOS
Introduccion
En
1881
Balbiani
descubri
unas
estructuras
que
se
tean
diferencialmente en los ncleos de las glndulas salivales de algunos insectos,

hoy en da denominados Cromosomas Politnicos y son de los ms grandes
que se conocen; pueden medir ms de 2 mm de
longitud y claramente son visibles por lupa.
Posteriormente
se
secretores, tales
descubrieron
en
tejidos
como, los tbulos de Malpigio,
recto, e intestinos.
En las glndulas salivales de Drosophila sp.
El complemento cromosmico de esta especie es
de 4 pares de cromosomas, de los cuales tres son
Fig 1.Cromosomas politnicos
autosomas y un par son cromosomas sexuales.

Estos cromosomas presentan bandas que
difieren en morfologa y amplitud, tal que el patrn de bandeo de cada

cromosoma es nico y caracterstico. Este patrn condujo a Bridges en 1935 a
la construccin del mapa citolgico proveniente de los cromosomas politnicos
de las glndulas salivales de larvas de Drosophila. La mayora de los genes
activos residen en las zonas claras, en las zonas oscuras el DNA esta ms
compactado.
Las
bandas
se
pueden
descondensar
para
formar
ensanchamientos o pufs que muestran que los genes estn transcribindose

en dichas zonas.
La obtencin de estos cromosomas es relativamente sencillo y rpido por
lo que resultan en excelentes herramientas de anlisis citogenetico.
Objetivos
Conocer y aprender la tcnica de aislar y teir los cromosomas
politenicos a partir de glndulas salivales de larvas de Drosophila
Que el alumno observe el bandeo natural y las secuencias gnicas de
los cromosomas
Que el alumno identifique las estructuras de los cromosomas
politcnicos, as como el nmero de cromosomas visibles en la
preparacin
Materiales
Agujas de diseccin,
suero fisiolgico al
microscopio
jeringas de insulina o
0.7 % o NaCl al 7%
estereoscopio
alfileres entomolgicos
agua destilada
microscopio
Toallas de papel
aceite de inmersin
compuesto
Pinceles
aceto-orceina o
Lpiz con goma
acetocarmin al 2%
cultivo de Drosophila
sp. con larvas de 3er
estadio
portaobjetos
Procedimiento
Seleccin de la larva
1.-Coloque una gota de agua destilada, suero fisiolgico o NaCl 7%. Frote la
superficie de un portaobjetos con su dedo pulgar, esto permitir que se forme
una gota.
2.-En un cultivo de Drosophila sp. seleccione una larva en tercer estadio de
desarrollo, utilice una aguja de diseccin, coloque la larva en el centro del
portaobjetos con la solucin y observe bajo el estereoscopio.
10
RECOMENDACIONES: La solucin en la que coloque la larva
no debe
secarse, agregue cada vez que sea necesario. Si la solucin se le seca,

abandone la diseccin y comience de nuevo.
Diseccin de la larva y obtencin de las Glndulas Salivales
1.-Comience la diseccin localizando primero el extremo anterior (cabeza) de
su larva podr ver las mandbulas las cuales se distinguen por su forma y color
negro. Las glndulas podr visualizarlas entre el tercer o cuarto segmento.
2.-Con una mano coloque una aguja de diseccin aproximadamente entre el
tercer y cuarto segmento de la larva y sostngala firmemente.
3.-Con la otra mano coloque la aguja de diseccin justamente atrs de los
ganchos bucales de color negro.
4.-Mueva la aguja de diseccin que se encuentra atrs de los ganchos bucales
lentamente en direccin opuesta a la otra aguja a manera de estirar la larva, las
glndulas generalmente se quedan adheridas a la regin mandibular. Adems
generalmente tienen un cuerpo graso, largo, delgado unido a ellas.
5.-Para el paso siguiente puede seguir trabajando en el mismo portaobjetos, sin
embargo retire todos rganos, trozos de cutcula, deje solamente las glndulas,
cuidando de los arrastrarlas junto con los dems rganos y coloque una gota de
aceto-orceina o acetocarmin sobre las glndulas. O bien puede colocar una
gota pequea de colorante en el centro de un portaobjetos limpio y trasferir las
glndulas a la gota de colorante. Utilice las agujas de diseccin para hacer esta
transferencia, una vez en el colorante las glndulas deben caerse de las agujas.
RECOMENDACIONES: si se saca completamente el extremo de la cabeza de
la larva o si los rganos internos salen desordenadamente o si se rompe la
cutcula muy lejos de la cabeza, es preferible abandonar la diseccin y empezar
con una nueva larva.
11
Si solo es posible localizar una glndula, transfirala sola. No es necesario

hacer una diseccin completamente limpia de las glndulas de otro tejido, este
no interfiere con la preparacin.
Colocacin del cubreobjetos
1.-Tome un cubre objetos por la orilla para evitar dejar huellas en el. Sostenga
la otra orilla del cubreobjetos con su aguja de diseccin y suavemente bjelo
sobre la solucin de aceto-orceina o acetocarmin
Deje reposar la preparacin durante
aproximadamente cinco minutos
observe al microscopio.
Squash de las glndulas salivales
1.-Despus de visualizar las glndulas en el microscopio, coloque la
preparacin en una superficie lisa, coloque sobre el montaje papel secante,
absorbente, o simplemente con su dedo pulgar colquelo sobre el cubreobjetos.
Sin mover el cubreobjetos presione lo ms fuerte posible. Si utiliza dos toallas
de papel dobladas es muy difcil que rompa el cubreobjetos.
Observacin de cromosomas
1.-Observe el montaje contra luz y localice las glndulas salivales aplastadas,
coloque el montaje sobre el microscopio con la glndula aplastada bajo el
objetivo 10x
2.-.-Localice el condensador de su microscopio y la palanca que controla el
diafragma. Abra el diafragma hasta 2/3 partes de la abertura total.
3.-Observe en el microscopio y mueva el condensador hacia arriba y abajo
hasta obtener una iluminacin brillante y homognea en todo el campo
4.-Lentamente mueva el enfoque macromtrico hasta que su montaje este
enfocado. Asegrese de que el enfoque sea del material biolgico y no del
cubreobjetos. Ajuste el enfoque con el tornillo micromtrico
12
5.-Busque lentamente hasta encontrar un ncleo. Los cromosomas deben de

poderse observar claramente aun a bajo poder. Rastree todo el montaje hasta
encontrar un ncleo con los cromosomas bien extendidos.
6.-Cambie a alto poder y observe la preparacin a 40x, o 100x (utilice aceite de
inmersin), tenga cuidado de no sobrepasar demasiado el punto de enfoque o
puede quebrar su montaje y daar el objetivo.
Bibliografa
Castillo, H., Prcticas de Laboratorio Gentica General. Universidad de San
Carlos de Guatemala. 2002
UNAM. 2005.
Salceda V.M., Gallo A., J., 1984, Genetica De Drosophila Tecnicas De
Laboratorio, Limusa, Mexico D.F, Pags. 16-84
Resultados
Observe la larva, identifique y dibuje sus estructuras
Una vez obtenidos los cromosomas politnicos, identifique tantas regiones (puff
o anillos de Balbiani, cromocentro, centromero, brazos cromosmicos,
rearreglos cromosmicos) como le sea posible y esquematice.
13
Cuntos brazos cromosmicos tiene Drosophila sp.? Haga un dibujo y cuente

los extremos libres. Aun cuando un cromosoma fue arrancado del cromocentro,
es posible reconocer el extremo libre debido a que parte del material queda
adherido.
Cuestionario
1. Qu importancia tuvo esta prctica para usted?
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2. Menciona brevemente la importancia de los cromosomas politnicos para la

investigacin gentica
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3. Mencione por lo menos tres descubrimientos importantes relacionados con
cromosomas politnicos
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4. Explica cmo se forman los cromosomas politenicos
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5. Menciona las caractersticas de los cromosomas politenicos

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6. Investiga el origen de los rearreglos cromosmicos y cul es su importancia
en el estudio de la gentica de poblaciones.
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7. En que otros organismos diferentes de Drosophila es posible encontrar
cromosomas politnicos.
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Conclusiones
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PRCTICA 4. AISLAMIENTO DE ADN BACTERIANO
Introduccin
Los anlisis del genoma bacteriano implican desarrollar la habilidad de
aislar y purificar ADN.
Los principales pasos en la
extraccin de ADN
bacteriano incluyen: disponer de cultivos frescos de bacterias, tratarlos con

detergentes para eliminar paredes celulares y membranas, eliminar la accin de
enzimas que interacten con el ADN y precipitarlo con etanol. Existen muchos
mtodos de extraccin, pero todos se basan en estos principios bsicos.
En la actualidad es posible disponer de kits comerciales de extraccin, y
existen un gran nmero de procedimientos sencillos, baratos y prcticos para
que permiten obtener cantidades importantes de ADN para su anlisis.
Eschirichia coli es una de las bacterias mas estudiadas en el campo de
la gentica. La extraccin y purificacin de ADN a partir de este organismo es
parte fundamental del la habilidades que se tienen que desarrollar en el trabajo
de laboratorio de gentica.
El cromosoma de Eschirichia coli es representativo de la mayora de la
eubacterias. Consiste en una sola molcula de ADN circular (es decir que no
tiene extremos libres). Una bacteria tpica como Eschirichia coli contiene cerca
de 4.2 millones de pares de bases, su tamao aproximado es de 1 mm de
longitud pero solo 2 nm de ancho. Su ubicacin dentro de la clula no es
arbitraria y se encuentra confinado a regiones especficas de la clula formando
18
una mancha densa frecuentemente llamada nucleoide, para diferenciarlo del

ncleo verdadero presente en clulas eucariotas.
Objetivo:
Realizar extracciones de ADN
a partir
de cultivos frescos de
Eschirichia coli utilizando procedimientos sencillos y rpidos.

Cuantificar el ADN obtenido mediante espectrofotometra.
Materiales y equipos:
Pipetas de 3 ml.
Tubos ephendor
Tubos de plstico
Hidrxido
de
sodio 0.2N
Microcentrfuga
Mortero con brazo
Punta de micro
pipeta
SDS al 1%
Isopropanol helado
Micropipetas.
varilla de vidrio
Procedimeinto:
1. Se toman 10 ml de cultivo de bacterias crecidas por 24 horas y se
transfieren a un tubo de plstico y se centrifugan a 3000 r.p.m. por 5
minutos.
2. Se descarta el sobrenadante y al precipitado se le agrega 2 ml de NaOH
0.2N y 2 ml de SDS 1% y se agita hasta homogenizar.
3. Se deja reposar por 10 minutos.
4. Se centrfuga a 4 000 r.p.m x 10 minutos (verificar que los tubos no
toquen el rotor).
5. Se transfiere el sobrenadante a otro tubo y se descarta el precipitado.
19
6. Al sobrenadante se le agregan 2 ml de isopropanol helado. Se agita

volteando el tubo suavemente 2 veces. Se observara la presencia de un
condensado blanco en todo el tubo.
7. OPCIONAL. Se puede refrigerar en este paso por 1 minuto en
congelador si no se observan bien las fibras.
8. Se toman 1.5 ml de este condensado y se colocan en un tubo ephendor,
se centrfuga a 13 000 r.p.m x 30 segundos.
9. Se descarta sobrenadante y se deja secar el precipitado invirtiendo el
tubo en papel secante.
10. Se le agregan 150 ul de agua destilada y se da vrtex hasta
homogenizar el precipitado, se refrigera a 20C. Para realizar la
electroforesis.
Bibliografa
UNAM. 2005.
Winchester A.M, Wejks N., Peter J. 1996, Laboratory Manual Of Genetics, Mc
Graw Hill, 4ta Edicin, USA.
20
Resultados
Cuestionario
1. Para poder realizar una extraccin de ADN bacteriano, cuntas
barreras hay que eliminar?
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
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21
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
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2. Menciona de que forma puedes demostrar que lo que has obtenido
despus de llevar a cabo todo el procedimiento es realmente ADN.
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_____________________________________________________________
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3. De qu forma se puede eliminar el riesgo de degradar el ADN obtenido
por la accin de las endonucleasas presentes en la muestra?
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_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
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4. Explica cul es la funcin del isopropanol durante el procedimiento de

extraccin de ADN bacteriano?
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5. Para qu se utiliza el NaOH durante la extraccin?.
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6. Menciona cinco situaciones en las que el estudio del ADN te puedan
apoyar en una investigacin con bacterias.
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Conclusiones
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24
PRCTICA 5. AISLAMIENTO DE ADN DE CELULAS

EUCARIONTES
Introduccin
La extraccin de ADN de clulas eucariotas se basa en los mismos
principios que aquellos descritos para las clulas procariotas, sin embargo a
diferencia de las bacterias, las clulas eucariotas tambin requieren la
eliminacin de la membrana nuclear para liberar los cidos nuclecos, lo cual no
implica mayores complicaciones. Para la extraccin de ADN, animal o vegetal,
se puede disponer de una gran variedad de tejidos y por lo general en
cantidades pequas.
Los procedimientos han sido depurados y por lo general
no existen grandes problemas que impidan hacer extracciones existosas. El

anlisis de ADN de clulas eucariotas es ampliamente requerido, no solo para
el conocimiento del nmero de bases y orden de sus secuencias (genmica),
sino con otros muchos fines que incluyen aspectos tan importantes como la
taxonoma, la evolucin, la genmica comparativa, la Ingenieria gentica entre
otros campos de la biologa.
Existen un gran nmero de procedimientos para extraccin de ADN.
Estos varian de acuerdo al tejido del que se hace la extraccin, el grado de
pureza que se requiere y los fines que se persiguen. En la actualidad es posible
obtener muestras de ADN de huesos, manchas de sangre, semn, saliva, lo
25
que ha permitido que los estudios de ADN se conviertan en herramientas

importantes para la medicina legal y forense, asi como para la criminalstica.
Auque es posible disponer de procedimientos comerciales, rapidos y
efectivos, las tcnicas de extraccin tradicionales siguen siendo extensamente
utilizadas en los laboratorios.
Objetivo:
Realizar extracciones de ADN de clulas eucariotas (a partir de tejido
animal y vegetal) y comprobar su presencia por medio de espectrofotometra y
electroforesis en geles de Agarosa.
Mtodo 1:
SANGRE PERIFRICA
Materiales, equipo y reactivos:
3 tubos de plstico 12 ml
Agua destilada
Varilla de vidrio
SDS al 1%
Pipeta Pasteur
Sangre 3 ml.
Tubos Ephendor
NaCl 0.1 M
Centrifuga
Isopropanol fro
Tritn X-100 al 1%
Procedimiento:
1. Centrifugar 2.5 ml de sangre (fresca de preferencia) con anticoagulante
para separar el plasma de los elementos formes de la sangre. Separar
con una pipeta Pasteur la capa blanca (clulas blancas) entre plasma y
los eritrocitos. Llevar las clulas blancas a un tubo de centrfuga y
agregar 10 ml de agua. Tapar el tubo con una tapn de hule e invertir el
tubo 3 veces.
26
2. Centrifugar 10 minutos a 5000 r.p.m. y decantar el sobrenadante.

3. Al sedimento (pequeo botn blanco) se le agrega 10 ml de Tritn X-100
al 1%. Tapar el tubo y agitar suavemente de manera constante durante
unos minutos.
4. Cetrifugar durante 10 minutos a 5000 r.p.m. Decantar el sobrenadante
5. Al sedimento se le agregan 10 ml de SDS al 1% (agitar suavemente
teniendo cuidado de que quede bien resuspendido). Vaciar en un matraz
y agitar suavemente durante unos minutos ms.
6. Agregar 10 ml de NaCl 0.1 M. Agitar y dejar reposar unos minutos
7. Se le agrega 10 ml de isopropanol fro permitiendo que se desplace por
las paredes del tubo. Al cabo de unos minutos, observar como
precipitan los
se
filamentos de
ADN (Fig 9).

8. Si no se alcanza a observar
los
filamentos
de
ADN
simple vista, repita el paso 5.
Fibras
9. Colectar el ADN con una

varilla
de
vidrio
ADN
(girndola
Visualizacin
detubo
ADN pequeo
suavemente) y resuspender en 0.2Fig.
ml 8de
agua en un
(ephendor) que ser proporcionado por el maestro.
10. El ADN aislado se guarda a 20C, resuspendido en agua para ser
utilizado en la practica de electroforesis de cidos nucleicos.
Mtodo 2 :
27
de
HIGADO DE RES O DE POLLO

Pipetas de 3 ml.
Tubos de plstico
Hidrxido de sodio
0.2N
Puntillas
de
micropipeta
Tubos ephendor
Microcentrifuga
Mortero y pistilo
Hgado de pollo.
SDS al 1%
Isopropanol helado.
Micropipetas.
Varilla de vidrio
Procedimiento
1. Se toman 2 gramos de hgado de pollo y se colocan en el mortero, se
agregan 6 ml de NaOH 0.2N y 6 ml de SDS 1%. Se macera el tejido
fuertemente.
2. Se transfiere el macerado a un par de tubos de plstico equitativamente
y se le agrega a cada tubo 3 ml de NaOH 0.2N y 3 ml de SDS 1% y se
agita con la varilla de vidrio hasta homogenizar el macerado.
toquen el rotor).
6. Al sobrenadante se le agregan 3 ml de isopropanol helado. Se agita
consensado blanco en todo el tubo.
OPCIONAL. Se puede refrigerar en este paso por 1 minuto en congelador si no
se observan bien las fibras.
se centrfuga a 13 000 r.p.m x 30 segundos.
28


electroforesis.
Mtodo 3:
ADN DE CEBOLLA
1 cebolla
rebanada
1 licuadora
2 tubos de ensaye
de plstico
2 tubos ephendor
Sol. Lisis (jabn)
1 soporte universal
2 palillos de
madera
1 embudo para
filtro
Isopropanol
2 filtros
Centrfuga
Tubos de
centrfuga de 50
ml
Procedimiento:
1. Corte la cebolla y ponga en la licuadora.
2. Agregue 60 ml de agua.
3. Licuar 30 segundos en bajo para moler la cebolla.
4. Licue la mezcla 10 segundos, haga una pausa y verifique si hay una
partcula grande y licue si es necesario.
5. Repita el 4to paso dos veces. La cebolla debe estar liquida ahora.
6. Ponga 7 ml de mezcla de la cebolla en el tubo de 15 ml.
29
7. Agregue 7 ml de la solucin para Lisis celular; invirtiendo la mezcla. No

agite.
8. colocar en bao mara a 60-65C por 15 min.
9. Colocar un filtro en el tubo de 50 ml. Agregue despacio la mezcla lisada
de cebolla en el filtro. Permita que el liquido rosa se filtre por goteo en el
tubo.
10. Agregue lentamente un volumen de solucin de precipitacin de ADN
(etanol) previamente enfriada dejndolo caer sobre las paredes del tubo.
Precaucion:
ADN no puede deshacerse en carrete si la precipitacin de ADN se mezcla con
la solucin del filtro. Sostenga el tubo a un ngulo ligero, vierta la solucin de la
precipitacin suavemente, poniendo de lado el tubo para asegurarse que no se
salpique el filtro.
11. La solucin de la precipitacin de ADN clara dividir la mezcla. Los
filtrados rosas claros, estarn en el fondo de la mezcla, y el ADN de la
solucin de la cebolla aparecer en el interfase de la solucin del ADN y
el filtrado. El ADN se parecer una fina nube de hilos viscosos.
12. Use la varilla de madera y girndolo suavemente forma un carrete de la
nube de ADN. Colcalo en un tubo ephendor.
Mtodo 4
GERMINADO DE ALFALFA
30
Pipetas de 3 ml.
Germinado de alfalfa
Tubos de plastico
Tubos ephendor
Microcentrifuga
Varilla de vidrio
Micropipetas
Mortero con brazo
Hidroxido de sodio
0.2N
SDS al 1%
Isopropanol helado
Punta de micropipeta
Procedimiento:
1. Se toman 2 gramos de germinado de alfalfa y se colocan en el mortero,
se agregan 3 ml de NaOH 0.2N y 3 ml de SDS 1%. Se macera el
germinado fuertemente.
2. Se transfiere el macerado a un par de tubos de plstico equitativamente
y se le agrega a cada tubo 3 ml de NaOH 0.2N y 3 ml de SDS 1% y se
agita con la varilla de vidrio hasta homogenizar el macerado.
toquen el rotor).
6. Al sobrenadante se el agregan 2 ml de isopropanol helado. Se agita
consensado blanco en todo el tubo.
7. OPCIONAL. Se puede refrigerar en este paso por 1 minuto en
congelador si no se observan bien las fibras.
se centrfugo a 13 000 r.p.m x 1 minuto.
31

electroforesis.
Bibliografia
Graw Hill, 4ta Edicion, Usa
Griffiths J. F. Anthony., Gelbart M. William., Miller H. Jeffrey., Lewontin C.
Richard.
Rosas M. L., 1990, Manual De Investigaciones De Laboratorio Y Campo
Para El Curso De Biologia 1, Unam, Mexico D.F. Pags 61
Resultados
1. Mtodo 1
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2. Mtodo 2
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3. Mtodo 3
33
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4. Mtodo 4
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Cuestionario
34
1. Menciona que precauciones se deben tomar para realizar un anlisis de

ADN confiable en casos clnicos o legales.
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2. Que consideraciones existen para el transporte y almacenamiento de
ADN de un sitio de un crimen a un laboratorio para ser analizado.
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3. Explica como es posible obtener ADN de una colilla de cigarro o de un
cabello humano para la identificacin de un individuo.
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4. El anlisis de ADN puede tener muchas aplicaciones en diferentes

campos de la biologa de cualquier organismo vivo. Menciona cinco
ejemplos donde los estudios de ADN hayan aportado informacin
relevante en cualquier aspecto relacionado con la especie.
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5. Conociendo los fundamentos de la extraccin de ADN de clulas
eucariotas, disea un experimento casero que te permita obtener ADN
de tejidos vegetales o animales, valindote de insumos que se
encuentres en tu casa.
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Conclusiones
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Bibliografa consultada.
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PRCTICA 6. CUANTIFICACIN DE ADN
Introduccin
37
Despus de aislar el ADN,

muestra que ha sido extrada.
es necesario determinar la cantidad de

Existen diferentes mtodos que permiten
cuantificar la cantidad de ADN presente en una muestra. Los procedimientos

clsicos se basan en reaccin de colorante usando el reactivo difenilamina, este
mide el azcar deoxipentosa liberada despus de hervir los cidos nucleicos en
presencia de cido sulfrico concentrado a una longitud de onda de 540 nm.
Durante los ltimos aos han surgidos procedimientos muy prcticos,
econmicos y rpidos, algunos de los cuales no requieren de equipo
sofisticado. Por otro lado,
la tecnologa ha permitido disponer de equipos
capaces de cuantificar cidos nucledos a diversos niveles y adicionalmente

proporcionar informacin sobre el grado de pureza y contenido de otras
molculas en la muestra.
Este tipo de estimaciones se han convertido en una prctica cotidiana en
los laboratorios de gentica, que ante la implementacin de tecnologas como la
reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), secuenciacin o microships, se
ven en la necesidad constante de tener proporciones adecuadas y en pequeas
cantidades para poder acceder de manera precisa a estas ultimas tecnologas.
Objetivo:
Conocer las diferentes tcnicas disponibles que permiten la
cuantificacin de ADN.
38
Mtodo 1
PRUEBA DE LA DIFENILAMINA
NaCl-0.1M
Acido Actico
15 tubos de ensaye
de 12 x 100
Pipetas
Citrato trisodico
0.015M
Papel parafilm
Difenilamina
cido Sulfrico
Gradilla metlica
Procedimiento:
1.
Preparar la difenilamina disolviendo 1 gr. de difenilamina en 98 ml de

cido actico glacial. Luego agregar 2 ml de cido sulfrico concentrado.
2. Colocar 2.5 ml de difenilamina preparada de la manera sealada en el
paso 1 en cada uno de los 12 tubos de ensaye, cuidando etiquetar cada
una de las muestras de acuerdo a lo que se indica en la tabla 1.
3. Realizar diluciones de las muestras de ADN en la solucin salina de
citrato (cloruro de sodio 0.1M + citrato trisdico 0.015 M; pH 7) de
acuerdo a la siguiente tabla:
Muestra
Tubo
Extracto (ml)
Sol. Sal Cit
Fac. de
Dilucin
39
ADN bacteriano
ADN vegetal
ADN animal
0.1
1.9
20
0.1
3.9
40
0.1
5.9
60
0.1
1b
0.1
1.9
20
2b
0.1
3.9
40
3b
0.1
5.9
60
4b
0.1
1c
0.1
1.9
20
2c
0.1
3.9
40
3c
0.1
5.9
60
4c
0.1
4. Agregar 1 ml de cada una de las diluciones (1a, 2a, 3a, 4a, 1b, 12b,
) al tubo que correspondiente, preparado en el paso 2. A los tubos
4a, 4b, 4c, solo aadir solucin amortiguadora para que sirvan de blanco.
5. Calentar los tubos en un bao Maria con agitacin a 37 C, durante 5
minutos. Los tubos que contengan ADN viraran a color azul.
6. Posteriormente leer en un espectrofotmetro a una absorbancia de 540
nm. Cada tubo que contiene una muestra de ADN debe ser ledo
despus de el blanco.
40
7. Comparar la lectura con la curva estndar
proporcionada por el
profesor. La determinacin de la concentracin de ADN en cada dilucin

que entra dentro del valor de la curva estndar.
8. La concentracin total de ADN de cada tubo se obtiene multiplicando el
valor total determinado en el paso anterior por el factor de dilucin
Mtodo 2
CUANTIFICACIN EN PLACA
Placas de
cuantificacin
Agua
Tubos de dilucin (1 ml.)
Micropipetas
Colorante BLU (Carolina

Biol)
ADN Lamda
Procedimiento:
1. Disponer de ADN aislado ya sea de bacterias, plantas o animales.
2. Realizar las siguientes diluciones de ADN lambda para que sirva de
referencia.
a. 5 l de ADN Lambda
b. 5 l de ADN Lambda + 5 l de agua destilada
c. 5 l de dilucin b + 5 l de agua destilada
d. 5 l de dilucin c + 5 l de agua destilada
e. 5 l de dilucin d + 5 l de agua destilada
Utilizar tubos ephendor y etiquetar claramente cada dilucin.
3. Realizar un esquema que muestre la posicin de cada una de las
diluciones as como las de las muestras a cuantificar
41
4. Colocar 2 l de cada una de las diluciones en los recuadros de las cajas

de cuantificacin de acuerdo a lo establecido en el diseo.
5. Colocar 2 l de cada una de las muestras que se requieran cuantificar en
recuadros separados considerando lo ya establecido.
6. Reposar durante tres minutos para permitir que el ADN de cada muestra
drene dentro de cada recuadro.
7. Verter suficiente sol. de tincin
BLU (Carolina BLU) sobre las cajas
de cuantificacin
para cubrir las
muestras de ADN y permitir que se

tian durante cuatro minutos. Una
vez transcurrido el tiempo, regresar
la solucin al contenedor.
Fig. 9 Cajas de corrimiento
8. Enjuagar la placa en agua destilada durante cuarenta a cincuenta

minutos para eliminar el exceso de colorante ( Se pueden dejar
destiendo durante toda la noche )
9. Una vez desteida la placa, comparar las diferentes muestras con las
diluciones del ADN Lambda de acuerdo a la diluciones realizadas. (fig. 9)
Bibliografa
Richard.
42

Resultados
1. Mtodo 1
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2. Mtodo 2
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44
Cuestionario
1. Por qu es importante cuantificar ADN que ha sido extraido?

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2. Qu ventajas y desventajas observaste entre los dos mtodos utilizados?
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3. Qu otros mtodos de cuantificacin existen?
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4. Entre los mtodos automatizados, que otros parmetros te pueden brindar?

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5. Qu factores pueden afectar una cuantificacin por los dos mtodos
utilizados?
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Conclusiones
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46
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47
PRCTICA 7. ELECTROFORESIS DE ADN

Introduccin
Mediante la electroforesis es posible separar molculas biolgicas en
dependencia fundamentalmente de su carga bajo la influencia de un campo
elctrico. Se dio una visin general de la electroforesis en geles de
poliacrilamida para protenas en condiciones nativas o desnaturalizadas, se
incorporaron nuevos conocimientos tomados de la literatura reciente a los
conceptos tradicionales de este mtodo, como son la adicin de compuestos de
restriccin de la difusin y que aumentan la estabilidad de los geles. Se
ejemplific
el
comportamiento
anmalo
de
algunas
protenas
en
la
determinacin del peso molecular por electroforesis en geles de poliacrilamida

en condiciones desnaturalizadas. Fue empleado por primera vez por Tiselius
sp. en el ao 1937. Raymond y Weintraub en 1959 emplearon como soporte
para la electroforesis un gel de poliacrilamida (PAGE), posteriormente el
mtodo fue perfeccionado por varios investigadores como Davis y Ornstein.
La electroforesis es la migracin de solutos inicos bajo la influencia de
un campo elctrico; estas partculas migran hacia el ctodo o nodo (electrodos
- y +), en dependencia de una combinacin de su carga, peso molecular y
estructura tridimensional. La velocidad de migracin electrofortica depende de
la densidad de carga de la molcula (relacin carga / peso), del voltaje aplicado
y de la porosidad del gel de electroforesis. (1)
48
Objetivo:
El alumno utilizar las tcnicas de corrimiento electroforetico para la
demostrar la presencia de ADN en las muestras obtenidas en prcticas
anteriores
Caja de
electroforesis
Puntas de 5 a 40 ul
Transiluminador de
UV2
Papel adherente
Fuente de poder de
120 V
Bromuro de etidio1
Micropipeta
Buffer TBE 1x
Buffer de carga de
ADN
Guantes de ltex
Papel parafilm
Procedimiento:
1. Se prepara la agarosa al 0.8% calentando hasta que disuelva bien. Se le
agregan 50 ul de bromuro de etidio1 y se agita suavemente. Se coloca
sobre la base que se encuentra en la caja de electroforesis previamente
sellada con cinta adhesiva y se vierte la agarosa. Se deja que solidifique.
2. Ya slido se coloca dentro de la caja y se le agrega buffer TBE 1x hasta
cubrir el gel 1 cm por arriba.
3. Se descongelan las muestras de ADN y el buffer de carga.
4. para hacer la mezcla, se colocan sobre un papel aluminio pequeo 10 ul
de buffer de carga para cada muestra, separando las gotas.
5. Se ajusta la micropipeta a 10 ul y se toman la muestra de ADN, con la
muestra en la punta se ajusta con cuidado la micropipeta a 20 ul. Se
presiona el botn hasta que l liquido casi se derrame de la punta para
49
sacar el aire y se toma la muestra de buffer de carga. En este momento

se mezclan sobre el papel con cuidado
y se tendr un volumen final
de 20 ul
6. Con cuidado se elimina cualquier burbuja de aire y se carga el primer
poso del gel deslizando el botn despacio y se observa como la muestra
se va acomodando en el fondo del pozo.
7. Ya cargados los posos se tapa la caja y se conectan los cables
correctamente y se enciende la fuente de poder a 120 v o mximo
voltaje.
8. Se realiza el corrimiento hasta que la marca de azul de bromofenol llegue
a del inicio del gel.
NOTA IMPORTANTE
Para realizar la observacin se cortara un fragmento de plstico adherente
un poco ms grande que el gel y usando guantes se apaga la fuente de poder y
se saca el gel tomndolo por la base de plstico. Con cuidado se desliza sobre
el plstico y se observa bajo luz UV2. Si las bandas de ADN presentan muy
poco corrimiento se permite que se coloque en corrimiento hasta del inicio del
gel y se observa de nuevo.
1
El Bromuro de etidio es un agente intercalante muy fuerte que es considerado
cancerigeno. De deber usar guantes de ltex obligatoriamente y evitar al mximo el

contacto con este agente. Las puntas s debern neutralizar en hipoclorito de sodio.
2
La luz ultravioleta se deber trabajar con cuidado por tener la caracterstica de ser
mutgeno. Se preferencia los observadores debern usar lentes de proteccin para UV,
bata y guantes de ltex para los que manipulen el gel.
50
Bibliografia
Richard.
Smit-Keary, 1982, Genetica Estructura Y Funcion, Publicaciones Cultural S.A.
1era Reimpresion Mexico D.F, Pags. 84
Resultados
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Cuestionario
1. Menciona que otros procedimientos se utiliza para separar molculas
sujetas a campos elctricos
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2. Adems de la agarosa, que otros sustratos se utilizan en el corrimiento
electroforticos?
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3. Qu ventajas y desventajas presenta el uso de otros sustratos
diferentes de la agarosa?
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Conclusiones
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53
PRCTICA 8. AISLAMIENTO DE PLASMIDOS
Introduccin
Los plsmidos son fragmentos extracromosmicos de ADN circular
responsables de conferir propiedades especiales a las bacterias, entre ellas la
capacidad transferir informacin gentica y la resistencia a los antibiticos. Un
plsmido bacteriano tpico puede contener hasta 100 genes. A partir de los
aos setentas fue posible aislarlos y manipularlos convirtindose en
herramientas
importantes en ingeniera gentica. Actualmente es posible
cortarlos en pequeos fragmentos e introducirles genes ajenos. Debido a que

son capaces de duplicarse independientemente del ADN cromosmico y
transferirse a otras bacterias mediante conjugacin, es posible utilizarlos como
medios para clonar genes de inters o como vectores para la insercin de
nuevos genes a las bacterias, ya que algunos de ellos tienen la capacidad de
insertarse dentro del ADN bacteriano junto con los genes ajenos que le
confieren nuevas propiedades a las bacterias.
Objetivo:
Hacer la extraccin del plsmido para anlisis de secuencias por medio
de enzimas de restriccin y recuperar los plmidos despus de una
transformacin bacteriana.
54
Materiales, equipo y reactivos

Solucin A:
50mM de glucosa
25mM Tris Cl
Solucin B
0.2 N de NaOH
Solucin C
60 ml de Acetato
Potasio
1% de SDS
12.5 ml de cido
10mM EDTA
actico glacial
28.5 ml de agua
Fenol-cloroformo en
volmenes iguales
saturados con tris
cloro pH 7.6
TE 10 mM tris cloro
pH 8, 1 mM EDTA
Micropipeta
Etanol absoluto
Centrfuga para
ephendor
Vrtex
Bacterias
transformadas
Ephendor
Etanol 70%
Procedimiento:
1. Colocar 1.5 ml de medio de cultivo en un ephendor y centrifugar a 3500
r.p.m por 30 segundos a 4C.
2. Remover sobrenadante con micropipeta tratando de no tocar el botn.
3. Resuspender el botn con 100 micro litros de la solucin A fra y dar
vrtex.
4. Adicionar 200 micro litros de la solucin B, cerrar los tubos y agitar
suavemente sin vrtex.
5. Colocar en hielo en los pasos siguientes.
6. Adicionar 150 micro litros de solucin C fra y dar vrtex suavemente.
7. Incubar en hielo por 4 minutos.
55
8. Centrifugar a 12000 r.p.m por 5 minutos a 4C.

9. El plsmido debe estar en el sobrenadante.
10. Transferir el sobrenadante con cuidado a un tubo limpio.
11. Adicionar volmenes iguales de fenol-cloroformo al tubo con el
sobrenadante y dar vrtex.
12. Centrifugar a 12000rpm por 2 minutos a 4C y el plsmido debe estar en
el sobrenadante.
13. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo.
14. Adicionar 2 volmenes de Etanol fro, absoluto al sobrenadante y dar
vrtex.
15. Centrifugar a 12000rpm por 5 minutos remover el sobrenadante con
cuidado.
16. Invertir el tubo en papel secante por algunos minutos.
17. Lavar el botn con 1 ml de etanol al 70% y centrifugar a 12000rpm.
18. Invertir el tubo nuevamente hasta que seque.
19. Resuspender el ADN en 15 a 50 micro litros de TE.
20. Guardar el plsmido a 20C
Bibliografia
Smit-Keary, 1982, Genetica Estructura Y Funcion, Publicaciones Cultural S.A.
1era Reimpresion Mexico D.F, Pags. 84
Graw Hill, 4ta Edicion, Usa.
Resultados
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Conclusiones
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59
PRCTICA 9. TRANSFORMACION Y EXPRESION DE

PLASMIDOS
Introduccin
Dentro de los procesos que tienen las bacterias para recombinarse esta
la conjugacin, la unin natural
de dos bacterias en la cual una
transfiere segmentos de DNA a
la
otra.
bacteriana
Pero
una
clula
tiene
tambin
capacidad de captar DNA
la
del
medio e incorporarse este DNA

algunas veces en su propio
cromosoma. Este proceso se
Foto 2. Protena verde fluorescente(GFP) de

Aequorea victoria con glicina 80 reemplazada
denomina transformacin y fue demostrado por primera vez en 1928 cuando

Frederick Griffith consigui transformar de una forma permanente una estirpe
no encapsulada y no virulenta de la bacteria Pneumococcus
en otra
encapsulada y virulenta aadiendo a la primera estirpe un extracto de clulas

muertas de la segunda. Despus en 1944 Oswald Avery mediante la adicin
solo de DNA puedo cambiar el fenotipo y el genotipo de clulas bacterianas,
demostrando as de forma convincente que el DNA en el material gentico.
(Griffiths, 2000)
60
Objetivos
Emplear el mtodo de transformacin bacteriana mediante un plasmido
para expresar una protena en especifica.
Cloruro
50mM
calcio
Bacterias crecidas
por 18 horas en
medio LB
Vial de 20 micro
gramos
/
20
microlitros
de
plasmido pGreen
Tubos de ensaye
Medio luria
Hielo
Placas de medio LB
con
50microgramos/ml
de ampicilina
Varilla de vidrio en
forma de L
de
Procedimiento:
1. Marcar dos tubos uno (+) y otro (-) conteniendo bacterias centrifugadas y sin
medio de cultivo.
2. Transferir al botn 250 microlitros de cloruro de calcio (CaCl2).
3. Agitar hasta que se haga una mezcla lechosa.
4. Agregar 10 microlitros de ADN al control +.
5. Incubar en hielo 15 minutos.
6. Pasado los 15 minutos transferirlo rpidamente por 90 segundos a un bao
de agua a 42C. Agitar suavemente.
7. Inmediatamente transferir el tubo a hielo.
8. Agregar 250 microlitos de medio luria y dejar 10 minutos antes de la
recuperacin.
61
9. Despus de los 10 minutos remover 100 microlitros de la muestra y

colocarlos sobre las placas con agar luria con AMP se debern marcar las
cajas como control + y control -.
10. Se colocan los 100 microlitros en el centro de la placa y se expande con la
varilla de vidrio previamente esterilizada.
11. Las placas se colocaran de 24 a 36 horas a 37C en una incubadora o de 40
a 72 horas a temperatura ambiente.
Bibliografia
Richard.
Resultados
62
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Conclusiones
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64
PRCTICA 10. CORPUSCULO DE BARR
Introduccin
En muchos grupos de plantas y animales existe una determinacin
gentica del sexo, de tal manera que hembras y machos pueden diferenciarse
por sus cromosomas. Las hembras de los mamferos (y de algunos otros
grupos) poseen
dos cromosomas sexuales denominados XX y los machos
poseen una constitucin XY. Por lo tanto las hembras tienen un cromosoma X
ms que los machos. Este cromosoma
es mucho ms grande que el
cromosoma Y, por lo que se podra suponer que las hembras podran disponer
de ms informacin gentica que los machos. Hoy se sabe que no es as.
Hace mas de 50 aos se reconoci una masa heterocromatica que
frecuentemente se encontraba en el borde de la membrana nuclear y solo
apareca en las hembras, llamndolo y se le denomino
corpsculo de Barr en honor a su descubridor.
cromatina sexual o
Posteriormente
Mary Lyon
planteo que exista una relacin entre esta cromatina sexual y el nmero de
cromosomas X, y planteo la hiptesis que indicaba que la cromatina sexual era
el resultado de la inactivacin de uno de los cromosomas femeninos, quedando
el otro en forma funcional y era el encargado de sintetizar las protenas
presentes en estos cromosomas. De esta forma se planteaba la idea de la
compensacin de Dosis, la cual tambin implica una igualdad de expresin de
genes presentes entre hembras y machos en relacin al cromosoma X. Este
fenmeno presetna diversas modificaciones en otros grupos, pero todos recaen
65
en las mismas consecuencias. Igualdad de expresin de genes relacionados al

sexo.
Objetivos
Que el alumno observe y conozca la evidencia citolgica de la presencia
del cromosoma X inactivo en preparaciones de clulas de descamacin
de la mucosa oral y en linfocitos de sangre perifrica de las hembras de
los mamferos
Que el alumno conozca el proceso de inactivacin del cromosoma X
Que el alumno entienda las manifestaciones fenotpicas de la
inactivacin del cromosoma X
Que el alumno describa la relacin entre el nmero de cromosomas X
presentes en el genoma y la heterocromatina del cromosoma Y
Materiales
Abatelenguas o hisopo Papel absorbente
estril
Portaobjetos
Cubreobjetos
Vasos de plstico
Microscopio ptico
Mechero
Solucin
Material
biolgico:
clulas del epitelio de

Giemsa,
aceto-orceina
2%
acetocarmin al 2%
descamacin
mucosa
oral.
de
la
Sangre
perifrica
Aceite de inmersin
Procedimiento
Preparacin de clulas de la mucosa oral
1.-Enjuagarse la boca repetidas veces con agua potable y con un isopo
previamente humedecido con agua, raspar cuidadosamente la parte interna de
la mejilla.
66
2.-Hacer un frotis del raspado sobre un portaobjetos

3.-fijar al calor cuidando no sobrecalentar.
4.- agregar giemsa preparado al 2% en solucin amortiguadora de sorensen y
teir durante 8-12 minutos.
5.- posteriormente eliminar el colorante con agua destilada y secar al aire.
6.-Observar al microscopio ptico con el objetivo de 10x hasta encontrar un
campo en donde se localicen clulas. Observar despus de 40x y finalmente a
100x usando aceite de inmersin para identificar el corpsculo de Barr el cual
se aprecia como una mancha obscura adherida a la membrana nuclear que se
tie ms intensamente.
7.-Las clulas daadas o sobrepuestas no se consideran en el anlisis.
Preparacin del frotis sanguneo
1.- Desinfectar el dedo anular frotando alcohol etlico con una gasa y dejar
secar.
2.-con una lanceta pinchar el dedo para la obtencin de la muestra de sangre.
3.-Eliminar la primera gota de sangre y la segunda colocarla en el extremo de
un portaobjetos perfectamente limpio.
4.-realizar
el
frotis
sanguneo
desplazando
la
muestra
de
sangre
homogneamente sobre el portaobjetos.

5.- proceder de acuerdo a los pasos del 3 al 7 del procedimiento anterior.
Bibliografa
Peguero, J. cromosoma X Pontifica Universidad Catlica Madre y Maestra
(http://www.pucmmsti.edu.do/cienciasfisiologicas. Febrero de 2009)
Rodrguez, A. R., et al. Manual de prcticas de gentica y cuaderno de
trabajo.UNAM. 2005
67
Resultados
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Cuestionario
1. En qu clulas se deben buscar los corpsculos de Barr?
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2. Qu diferencias se observan entre
clulas de la mucosa oral y sangre
perifrica?
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3. En qu fase del ciclo celular son visibles los corpsculos de Barr?
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4. Qu tipo de molculas tie la aceto-orceina, acetocarmin y Giemsa?
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5. Por qu es importante enjuagarse la boca antes de tomar la muestra?

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6. Explicar el mecanismo de inactivacin de un cromosoma X
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7. Menciona las caractersticas del cromosoma X inactivo
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8.-Explicar por que algunos genes del cromosoma X escapan a la inactivacin

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9. Cuntos corpsculos de Barr esperara encontrar en los siguientes
organismos?
Condicin gentica
# de corpsculos de Barr por clula
XY
XX
XXX
XO
XXXY
XXXX
XXY
Conclusiones
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72
PRCTICA 11. ESTRUCTURA DE LOS CROMOSOMAS

Introduccin.
Un primer paso en el anlisis y conocimiento de los cromosomas de las
especies eucariotas es
reconocer su naturaleza estructural, sus formas y
funciones. Los cromosomas son las partculas fsicas que portan la informacin
gentica
contenida en el ADN. A lo largo del ciclo celular muestran un
comportamiento muy variable y solo es posible reconocerlas como estructuras

compactas en forma de equis durante la divisin celular y particularmente
durante la metafase. Durante la interface los cromosomas se descondensan y
forman grandes fibras con diversos niveles de empaquetamiento que van desde
molculas desnudas de ADN (durante la duplicacin que ocurre en la sntesis o
cuando los genes se expresan) hasta grandes complejos de ADN asociados a
protenas histnicas y no histnicas (heterocromatina) y que son reconocibles
en clulas teidas convencionalmente.
La mitosis permite a la clula eucariota dividirse en dos y esto implica
compactar la informacin gentica y distribuirla equitativamente. En esta etapa
los cromosomas
muestran sus caractersticas mas sobresalientes y
particularmente en la metafase es posible conocer con precisin el nmero y la

forma que pueden presentar los cromosomas, tambin es posible reconocer
regiones como los tallos y satlites y en su defecto, detectar anormalidades
estructurales, lo que ha permitido utilizarlos como herramientas en clnica
para el estudio de la mutagnesis, entre otras cosas.

Ademas de establecer el nmero y forma tpica que guardan los
73
cromosomas en cada especie, existen otros parmetros importantes que son

relevantes en los anlisis taxonmicos y evolutivos.
Objetivos
Reconocer las partes que conforman la morfologa de los cromosomas
eucariontes
Materiales
Tijeras
Pegamento
Libros de gentica
Procedimiento
Contesta y realiza las actividades indicadas en cada uno de los esquemas.
Bibliografa
Barch, M.J. et al. The AGT Cytogenetics Laboratory Manual. 3ed.LippincottRaven. Philadelphia New York. 1997.
74
Cuestionario
1. Dibuja los diferentes niveles de organizacin del ADN, y escribe su concepto
2. escribe la definicin que se pide e identifica y selala en el cromosoma.
75
3. Identifique y seale en el siguiente diagrama un cromosoma metacntrico,

submetacentrico, submetacentrico con zona satlite acrocentrico
4. A continuacin se muestra un esquema
que representa diversos
cromosomas de acuerdo con la posicin del centromero. Indica cuales son

metacntricos (M), submentacentricos (SM) y acrocentricos (AC). Completar el
esquema con los cromosomas que faltan.
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Conclusiones
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77
PRCTICA 12. MITOSIS
Introduccin
La mitosis es un proceso biolgico en el que una clula eucariota origina otras
dos que son cuantitativa y cualitativamente iguales y por lo tanto la
informacin
gentica contenida en sus cromosomas se conserva. El fenmeno de la mitosis

ha sido objeto de estudio desde finales del siglo XVIII y en la actualidad sigue
siendo de inters para muchos investigadores, debido a que, a pesar de el
desarrollo de la biologa molecular, persisten muchas dudas sobre el fenmeno.
Por otro lado el anlisis de la mitosis permite hacer inferencias sobre los efectos
que el ambiente tiene sobre este proceso. Es as que se han convertido en
herramientas de estudio para evaluar los efectos mutagnicos o genotxicos de
las sustancias qumicas, fsicas o biolgicas que se encuentran en el medio.
Tradicionalmente la mitosis ha sido dividido en
cuatro etapas: profase,
metafase, anafase y telofase, sin embargo no es un proceso esttico, sino

contino y que puede ser observado con relativa facilidad en clulas vegetales,
sobre todo en tejidos proliferativos como las races o en los meristemos apicales.
Especies como la cebolla y las habas presentan pocos cromosomas y muy
grandes, los que los hace los objetos preferidos para observar y analizar el
fenmeno de la mitosis.
En animales es mucho mas complicado y no existen
procedimientos lo suficientemente prcticos para su visualizacin.

Objetivos
Que el alumno comprenda la importancia gentica de la mitosis
Que el alumno observe las diferentes y diferencie las diferentes etapas de
la mitosis
78
Que el alumno reconozca la importancia de la determinacin del ndice

mittico para fines prcticos en el cultivo de clulas y estudios de
genotoxicidad.
Materiales
portaobjetos
papel secante
Fijador de Carnoy (3
cubreobjetos
vidrio de reloj Aceite
partes de metanol: 1
lpiz con goma
de inmersin
parte de acido actico)

Microscopio
Alcohol etlico
mechero de alcohol
Barniz
navaja de bistur
compuesto
de
uas
transparente
pinzas
Aceto-orceina 2%
tijeras
Acido actico al 45%
recipientes de vidrio
Acido clorhdrico 1N
o tubos homeopticos
Material
Races
biolgico:
de
cebolla
(Allium cepa)
Races de ajo (Allium
sativum)
Procedimiento
1.-Germinar las races de cebolla y los bulbos de ajo. Para el crecimiento de las
races, colocar los bulbos en tubos o frascos con agua de la llave, evitando que las
races toquen el agua, de esta manera crecern ms rpido. Dejar que las races
crezcan durante tres das.
2.-Posteriormente cortar aproximadamente 1 cm de las races y colocarlas en un
vidrio de reloj con aceto-orceina 2%, y con cuidado pasarlas al fuego de una
lmpara de alcohol para realizar la hidrlisis durante 15 minutos. Evite que se
seque el colorante agregando cuanto sea necesario.
3.-Transcurridos 15 minutos colocar cada raz en un portaobjetos y con la ayuda
de las agujas de diseccin desprenda las capas de clulas de la raz, cuide de no
eliminar los primeros dos milmetros del extremo de la raz (que corresponde a la
regin meristematica).
4.-finalmente
coloque
el cubreobjetos y realice
el extendido de las clulas
(squash) con la finalidad de obtener una sola capa para facilitar la revisin al
79
microscopio. Para esto las preparaciones se colocan en una superficie plana y con
ayuda de un lpiz nuevo, golpee el cubreobjetos en forma de espiral. Sellar las
preparaciones con barniz de uas transparente.
5.-Observar al microscopio ptico a un aumento de 10X para localizar las zonas
que contienen clulas en mitosis. El anlisis se realiza a 100X, cuantificando el
nmero de clulas en mitosis
Bibliografa
Peguero, J. cromosoma
X Pontifica Universidad Catlica Madre y Maestra
(http://www.pucmmsti.edu.do/cienciasfisiologicas. Febrero de 2009)

UNAM. 2005
Resultados
Observe y dibuj las diferentes fases de mitosis (profase, anafase, metafase,
telofase) en ajo y cebolla anotando de qu fase se trata.
Llenar el siguiente cuadro indicando el nmero de clulas que estn en cada fase
y calcular el ndice mittico.
Fase
No. de clulas
Interface
Profase
Metafase
80
Anafase
Telofase
Cuestionario
1. Por qu es importante determinar el ndice mittico?
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2. Qu diferencias existen entre la eucromatina y la heterocromatina?
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3. Para cada uno de los eventos descritos abajo describir el nombre del evento en
la lnea en blanco y ordnalos cronolgicamente.
Nombre
del
Orden
evento
del
evento
El citoplasma se divide y el contenido celular se
separa en dos clulas
Los cromosomas se alinean a lo largo de la placa
ecuatorial de la clula.
81
Ocurre la replicacin de los cromosomas

La migracin de las cromatidas, hermanas a los
polos se completa.
Los
cromosomas
condensarse
replicados
llegan
ser
comienzan
visibles
bajo
a
el
microscopio
Las cromatidas hermanas migran hacia los polos de
la clula.
Conclusiones
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82
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83
PRCTICA 13. CULTIVO DE LINFOCITOS Y ANALISIS DE

CROMOSOMAS
Introduccin.
Los linfocitos son las clulas responsables de las respuestas inmunitarias
(inmune, del latn, 'estar libre de carga'). Se desarrollan a partir de progenitores
linfoides inmaduros y se dividen en dos grandes grupos, linfocitos B y linfocitos T,
segn que estos progenitores linfoides maduren en la mdula sea (B) o en el
timo (T), respectivamente. Los linfocitos B estn especializados en la produccin
de anticuerpos. Los linfocitos T son responsables de las respuestas inmunes
mediadas por clulas, as como de funciones de cooperacin para que se
desarrollen todas las formas de respuestas inmunes, incluida la respuesta de
anticuerpos por los linfocitos B.
Las sub-poblaciones de linfocitos, de las que existen ms de 130, se
pueden diferenciar por lo que, genricamente, se denominan antgenos de
diferenciacin de leucocitos humanos y se designan como CD (cluster of
differentiation; el trmino cluster hace referencia al grupo de anticuerpos
monoclonales que los detectan). (3)
Los linfocitos han sido intensamente estudiados y desde hace muchos aos
son utilizados para una gran diversidad de investigaciones
biolgicas. En el
campo de la gentica los linfocitos han sido de gran utilidad, particularmente para
la obtencin de cromosomas mitticos, cuyo estudio
representan la parte
fundamental de la citogentica. El cultivo de linfocitos, por lo tanto es una prctica

rutinaria en un gran nmero de laboratorios de gentica.
84
Las tcnicas para cultivar linfocitos se basan en la capacidad que tienen

estas clulas para proliferar en presencia de agentes inductores de la divisin
celular (mitgenos) y el desarrollo de un gran nmero de medios de cultivos
(RPMI-1650. MEM, McCoy 5A, etc.).
Objetivos
Que el alumno conozca y se familiarice con el procedimiento para la
elaboracin de cariotipos a partir de linfocitos de sangre perifrica.
Materiales
Torundas de algodn
Tapones de hule
Mecheros de alcohol
humedecidas con
Pinzas
Medio
Cajas petri
modificado
alcohol
Liga de torniquete
Jeringa
desechable
estril de 3ml
Jeringa
desechable
Mc
Coy
Penicilina/estreptomicina
Papel parafilm
Colchicina [ ] 10g/l
Vaso de precipitado
Cloruro de Potasio
Pipetas de 3ml
estril de insulina de Pipetas pasteur
0.075 M a 37 C
1ml
Acido actico
2 jeringas
desechables estriles
de 5 ml con aguja verde
Mecheros de alcohol
Encendedor o cerillos
Portaobjetos
Metanol
Guantes de ltex
Marcador
con
indeleble
Alcohol de caa
Etanol
Heparina
Fitohemaglutinina
5A
tinta
Campana
de
flujo
laminar
Incubadora
Bomba de vacio
Centrifuga
Tubos de ensayo
Gradilla
85
Procedimiento
Obtencin de la muestra
1.-Con una jeringa de 5 ml heparinizada se toma una muestra de 4ml de sangre
perifrica
Esterilizacin
2.-Se limpia la campana de flujo laminar con etanol, se coloca dentro de la
campana las cajas de petri, las jeringas limpias, el medio Mc Coy 5 A, la
fitohemaglutinina, la penicilina-estreptomicina, los corchos se colocan dentro de
un vaso de precipitado con etanol. Finalmente se enciende la campana de flujo
laminar y se roca el material con etanol.
Siembra
1.-En condiciones estriles, utilizando guantes, se colocan los tubos de ensayo
en una gradilla, de manera que queden verticalmente y se preparan con 1ml
de medio Mc Coy 5 A, o.o2 ml de fitohemaglutinina, una gota de penicilinaestreptomicina.
2.- A cada tubo se le agregan 8 gotas de sangre (sin aguja). A cada tubo se
coloca un corcho de plstico (previamente flameado), se coloca papel parafilm
alrededor.
3.- Finalmente se aprieta el corcho y se etiquetan (moviendo lo menos posible
los tubos). Los cultivos se mantienen en una incubadora a 37C durante 72
horas.
Cosecha
1.-En ambiente estril, y con guantes, se sacan los tubos de la incubadora y se
colocan en una gradilla dentro de la campana de flujo laminar.
86
2.-a cada tubo se le agregan 0.2ml (3 gotas) de colchisina [10g/ml] y se dejan

incubar a 37C durante 20 minutos
3.-posteriormente se centrifuga a 800rpm, 8 minutos. Transcurrido el tiempo se
colocan en una gradilla.
4.- a cada tubo se le retira el sobrenadante, tratando de no romper el paquete
celular.
5.- se adicionan 5 ml de KCl a 37C. Inclinando suavemente los tubos.
6.-Se vuelven a incubar a 37C durante 20 minutos. Transcurrido el tiempo se
centrifuga a 800rpm por 8 minutos
7.-se elimina nuevamente el sobrenadante y se adiciona 1ml de metanol acido
actico 3:1,
y se resuspende rpidamente, se adiciona mas metanol acido
actico hasta obtener 5ml aproximadamente y mezclar.

8.-se centrifugan los tubos a 800rpm/ 8 minutos
9.- se desecha el sobrenadante, nuevamente se agrega fijador y se vuelve a
centrifugar a 800rpm/ 8 minutos. Este paso se repite hasta que el sobrenadante
quede transparente
Preparacin de laminillas
1.-Par
realizar
las
preparaciones
eliminar
el
sobrenadante
dejando
aproximadamente 1 ml de fijador
2.-se resuspende el paquete celular y se dejan caer 2 o 3 gotas sobre una
laminilla limpia, fra y hmeda
3.- se secan a la flama (evitando sobrecalentar las laminillas)
4.- se guardan para su posterior tincin.
87
Bibliografa
Verma, R.S., y Babu, A.1995.
Human Chromosomes. Principles and
Techniques. 2 Ed. Mc Graw-Hill. Estados Unidos. 419p.
Resultados
Cuestionario
1. Qu funcin cumplen los siguientes reactivos en el cultivo de linfocitos?:
Heparina________________________________________________________
_______________________________________________________________
Estreptomicina-Penicilina___________________________________________
_______________________________________________________________
88
Fitohemaglutinina_________________________________________________
_______________________________________________________________
Cloruro de potasio al 0.075M _______________________________________
_______________________________________________________________
Medio Mc Coy 5 modificado ________________________________________
_______________________________________________________________
2. Explique por qu se debe incubar los linfocitos por 72 horas
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
3. En qu estado del ciclo celular se encuentran los linfocitos
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
4. Mencione por lo menos 3 tipos de medios de cultivo celular adems del
utilizado para el cultivo de linfocitos
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
89
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
5. Que se necesita para que un cariotipo de cualquier especie sea publicado?
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
Mencione las reglas o criterios bsicos para elaborar un cariotipo.
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
Conclusiones
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
90
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
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________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
91
PRCTICA 14. USO Y LIMPIEZA DE MATERIAL DE

LABORATORIO
Objetivos
El alumno aprender a preparar y esterilizar el material de laboratorio,
segn sus caractersticas y su uso.
El alumno preparar y
utilizara sustancias qumicas para eliminar
cualquier tipo de residuo impregnado en el material de laboratorio

El alumno conocer la importancia de la limpieza y lavado del material
de laboratorio
Materiales
4 cubetas o recipientes
Jabn neutro
Autoclave
Probeta
Acido Clorhdrico
Estufa
Guantes
Cloro
Termmetro
Agua destilada
Procedimiento
Instrucciones
1.- siempre que lave material deber utilizar guantes
2.- Todo el material deber ser lavado y preparado exclusivamente con agua
destilada.
92
3. -El materia debe ser lavado con jabones neutros. Est prohibido utilizar jabones
comerciales, ya sea en polvo, lquido o pastilla.
Nota: si el material contena residuos orgnicos (tejido, medio de cultivo.), se
debe esterilizar el material y desechar el residuo orgnico en el lugar indicado,
para evitar una posterior contaminacin.
Lavado de material
1.- Lave y enjuague todo el material con un escobilln de cerdas suaves, enjuague
con agua del grifo
2.-Proceda a preparar las soluciones segn el mtodo de lavado que vaya a
utilizar, y colquelas en las cubetas o recipientes segn las soluciones y
cantidades utilizadas, colocar el material que vaya a lavar.
Resultados
Dibuja a manera de diagrama el procedimiento que empleaste para el lavado y
secado del material de laboratorio
FECHA
MATERIAL LAVADO
FIRMA
DEL
RESPONSABLE
1.2.NOTA: para que el responsable firme, se le deber indicar el material que ha sido
completamente lavado, preparado y esterilizado.
Bibliografa
Material-de-laboratorio www.scribd.com/doc/3246492/
Manual de laboratorio de Gentica. Biologia.ICB. UACJ.2008
93
Cuestionario
1.- Qu finalidad tiene el lavar el material que se empleara en la realizacin de
prcticas?
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- Qu proceso de limpieza empleaste?
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- Qu tipo de jabn se utiliza y por qu?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
94
4.- Menciona 2 marcas de jabn diferente al que utilizaste.

__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
5.- Qu diferencia existe entre el lavado de material y la esterilizacin de este?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
6.- Qu finalidad tiene el empacado
o preparacin del material antes de la
esterilizacin?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
95
7.- Por qu crees que sea indispensable la esterilizacin del material despus de
haberlo lavado?
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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8.- Menciona los diferentes mtodos para saber la calidad de lavado de material
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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Conclusiones
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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96
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__________________________________________________________________
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMDICAS

MANUAL DE PRCTICAS DE GENTICA

Ciudad Jurez, Chihuahua

M. en C. Emilio Clarke Crespo

D. Ph. Antonio de la Mora Covarrubias

Dr. Alejandro Martnez Martnez

M.C. Hugo Staines Orozco

Aprobados por la Academia de Biologa, 2011

PRCTICA 1. MEDIOS DE CULTIVO PARA Drosophila sp.

puede desarrollarse en una

amplia variedad de medios en fermentacin, incluyendo

descomposicin (uva, pltano, ciruela, papaya), y ocasionalmente crece en

condiciones mas adecuadas que deberan considerarse en la elaboracin del

nutrientes balanceados y conservadores que facilitan su

preparacin y almacenamiento, es importante aprender a preparar medios

especies del genero

El alumno conocer y aplicara las tcnicas de lavado, preparacin y

vidrio Gasa, algodn

Acido propi nico

5.-Cuando la mezcla suelte el primer hervor bajar la temperatura y cocinar

o esterilizarla, se torna azul al

adicionarle agua, el color hace fcil la observacin del desarrollo de los

formula 4-24 y agua

destilada, procurando no sobrepasar 1/3 del recipiente contenedor. Cuidar no

PRCTICA 2. CICLO BIOLGICO Y SEXADO DE Drosophila sp.

prolongados pero reduce la viabilidad.

hembra empieza a depositar huevos en

cantidades que van de 50 a 75 a los 2 das de haber emergido, y sostener esta

presentan un dimorfismo sexual muy asentuado, en el cual es

posible distinguir desde que se encuentra en estado de pupa. En estado adulto

para sujetar a la hembra

adquiera la habilidad de en el manejo, cruzas,

y mantenimiento de los organismos en sus diferentes

Fly Nap, Sal de Uvas o Material biolgico:

frascos con cultivos de

fenotipo en un frasco con medio de cultivo. No olvide rotular sus frascos

pupas, sealando las

trqueas y poseen un par de espirculos

PUPA (3mm); La pupa es considerada la fase

Dibuja al adulto indicando la estructura general de la cabeza, trax y segmentos

Observa y esquematiza las diferencias fenotpicas que presenta Drosophila sp.

3. Los estudios con Drosophila nunca se han limitado a machos y hembras

es la ms conocida en Gentica, sin embargo

existen otras especies del gnero Drosophila igualmente valiosas. Menciona

6. Explica la posible razn del dimorfismo sexual que presentan el gnero

PRCTICA 3. CROMOSOMAS POLITENICOS

diferencialmente en los ncleos de las glndulas salivales de algunos insectos,

como, los tbulos de Malpigio,

autosomas y un par son cromosomas sexuales.

difieren en morfologa y amplitud, tal que el patrn de bandeo de cada

ensanchamientos o pufs que muestran que los genes estn transcribindose

Lpiz con goma

RECOMENDACIONES: La solucin en la que coloque la larva

secarse, agregue cada vez que sea necesario. Si la solucin se le seca,

Si solo es posible localizar una glndula, transfirala sola. No es necesario

aproximadamente cinco minutos

5.-Busque lentamente hasta encontrar un ncleo. Los cromosomas deben de

Cuntos brazos cromosmicos tiene Drosophila sp.? Haga un dibujo y cuente

2. Menciona brevemente la importancia de los cromosomas politnicos para la

5. Menciona las caractersticas de los cromosomas politenicos

PRCTICA 4. AISLAMIENTO DE ADN BACTERIANO

Los principales pasos en la

bacteriano incluyen: disponer de cultivos frescos de bacterias, tratarlos con