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Fisiologa (Kinesiologa)

Membranas biolgicas
Dr. Rodrigo Varas.
rvaraso@yahoo.com

Protenas de membrana:

Son protenas insertas o adjuntas a la membrana de una clula u organelo.


Ms de la mitad de las protenas descritas estn asociadas a membranas biolgicas. Se clasifican en: i) protenas integrales (interaccin directa con la regin hidrofbica de la bicapa).

ii) protenas perifricas (extrnsecas).

Protenas de membrana:
Diversas funciones

Transporte de molculas:
2da Ley Termodinmica
El universo tiende al desorden (entropa)

Todos los sistemas tienden a su menor nivel de energa

Tipos de transporte:
Transporte pasivo: G < 0 Difusin simple (a travs de la membrana). Difusin facilitada (transportadores, canales).

Transporte activo: G > 0

Transporte activo primario (bombas, ATPasas). Transporte activo secundario (acoplado: co- y contra-transportadores).

Cambio conformacional

Cambio conformacional

G1

G2

Transporte pasivo
Difusin simple
Movimiento espontneo y aleatorio de partculas desde una regin de mayor concentracin a una de menor concentracin
Si es a travs de una membrana, depender adems de: i) rea de membrana ii) Solubilidad lipdica. Presenta cintica no-saturada.

Difusin simple a travs de la membrana plasmtica:

Difusin facilitada:

Ayudado por protenas de membrana (canales y transportadores) El transporte por difusin facilitada es: Especfico Pasivo

cintica saturada
Puede haber competencia entre sustratos similares.

Cinticas de transporte pasivo:

Las protenas transportadoras funcionan con una cintica similar a un enzima

Difusin facilitada: transporte de glucosa

Transporte continuo se logra por fosforilacin de la glucosa (mantencin del gradiente)

Transporte Activo
Cataliza el movimiento de partculas en contra de su gradiente electroqumico.

Proceso dependiente de energa (ATP).


Cintica saturada. Transporte Activo Primario: uso directo de energa para el transporte (ATPasas).

Transporte Activo Secundario Acoplado a gradientes electroqumicos existentes.

Transporte Activo: la bomba Sodio Potasio ATPasa

Principales transportadores en una clula prototpica

Transporte y sealizacin celular.

Sealizacin celular y segundos mensajeros:

Excitabilidad celular:
Diferencia de potencial elctrico (V)
Se define como el trabajo necesario para mover una carga de un punto a otro. Se mide en Volts (V) 1 V = 1 Joule/Coulomb

+
Corriente elctrica (I)
Se define como el flujo de partculas cargadas.

Es la tasa a la cual fluyen las cargas a travs de un conductor/solucin electroltica. Se mide en Amperes (A); 1 A = 1 C que pasa a travs de un cable en un segundo.

I = dQ/dt

I= V R

Gradientes electroqumicos y potencial de membrana:


FLUIDO EXTRACELULAR

CITOPLASMA

sodio potasio

aniones orgnicos

Cloro

calcio

El potencial de membrana en reposo


no depende de la concentracin externa de sodio

El potencial de membrana en reposo


no depende de la concentracin externa de sodio

pero depende fuertemente de la concentracin externa de potasio

PERMEABILIDAD SELECTIVADE LA MEMBRANA

El potencial de membrana en reposo:


En reposo, la membrana es ~50 veces ms permeable a K+ que a Na+, por lo que la salida de K+ desde el interior de la clula (canales de fuga) determina el potencial de membrana en reposo. La mayora de los aniones (A-) en la clula son protenas grandes y fosfatos que no pueden atravesar la membrana, as cuando el K+ sale de la clula, deja una carga negativa en el interior.

-70 mV

La bomba Na+ - K+ es esencial para mantener los gradientes electroqumicos de ambos iones.

Difusin:
Al colocar una membrana permeable, qu ocurre con las concentraciones de la especie en ambos compartimentos?

t=0

Difusin:
Al colocar una membrana permeable, qu ocurre con las concentraciones de la especie en ambos compartimentos?

t= Se lograr un equilibrio* en el cual se igualarn las concentraciones a ambos lados de la membrana. El flujo neto a travs de la membrana ser cero.

Fuerza responsable del transporte de especies no cargadas

Gc = -RT ln (Ce/Ci)
e i

t=

Habr flujo neto de la especie si y slo si Ce Ci.


Qu ocurre si la especie tiene carga elctrica (iones)?

Fuerza responsable del transporte de especies cargadas


Generacin del potencial de membrana:

Ejemplo clsico: una sal en solucin (KCl 1M en agua destilada)

K+ Cl-

t=0
La membrana es permeable a los cationes (+) pero no a los aniones (-). [K]e = 0.01M [K]i = 1 M.

Fuerza responsable del transporte de especies cargadas


Generacin del potencial de membrana:

Ejemplo clsico: una sal en solucin (KCl 1M en agua destilada)

K+ Cl-

t=

+
El flujo de iones a travs de la membrana genera una corriente inica.
Un flujo infinitesimal de K+ genera una diferencia de potencial Vm. La acumulacin de cargas positivas (Vm) dificulta el flujo de K+.

Fuerza responsable del transporte de especies cargadas


Generacin del potencial de membrana:

G = -zFV

K+ Cl-

t=

+
z = valencia (carga) del in. F = Cte Faraday (~96500 C/mol). V = a travs de la membrana (volts).
Se establece un equilibrio dinmico?

Fuerza responsable del transporte de especies cargadas


Generacin del potencial de membrana:

G = Gc K+ Cle i

t=

+
Se establece un equilibrio dinmico cuando la fuerza del gradiente de concentracin sea equivalente a la del gradiente elctrico.

El flujo neto a travs de la membrana ser cero.

Fuerza responsable del transporte de especies cargadas


Generacin del potencial de membrana:

G = Gc K+ Cle i

t=

zFV = RT ln (Ce/Ci) V = RT ln (Ce/Ci) zF

El potencial de equilibrio de Nernst:

EK = RT ln (Ke/Ki) zF
La ecuacin de Nernst permite calcular el potencial de equilibrio para cada in presente en la solucin, es decir el valor del potencial de membrana al cual el movimiento neto de ese in a travs de la membrana es cero.
recordar que R, z y F son constantes: A 37 C y para iones monovalentes; Vcation = 61.5 mV x log [cation]e / [cation]i Vanion = 61.5 mV x log [anion]i /[anion]e A 25 C, Vcation = 58 mV x log [cation]e /[cation]i
Walther H .Nernst (1864-1944)

El potencial de equilibrio de Nernst


Volviendo al ejemplo Se establece un equilibrio dinmico?

K+ Cl-

+
A 37 C, VK = 61.5 mV x log [0.01]e /[1]i VK = -123 mV Si, se establece un equilibrio dinmico en el cual el Vm generado previene la difusin de K+ a favor de su gradiente de concentracin.

El potencial de equilibrio de Nernst


y si ahora la diferencia de concentraciones de K+ es de 10 mM y 100mM?

K+ Cl-

+
A 37 C, VK = 61.5 mV x log [0.01]e /[0.1]i VK = -61.5 mV

El potencial de equilibrio de Nernst

Gc

representa un balance entre el gradiente de concentracin y la diferencia de voltaje a travs de la membrana

El potencial de Nernst depende de las concentraciones inicas a ambos lados de la membrana

Registros intracelulares
de la diferencia de potencial de membrana

0 -60 mV +60

Vi

Vo

- - - - -Vm = Vi - Vo = 0 mV

Registros intracelulares
de la diferencia de potencial de membrana

0
-60 mV +60

- - -Vi - -

Vo Vm = Vi - Vo = -60 mV

El potencial de membrana:

En reposo hay una separacin de cargas con un saldo negativo hacia el compartimento intracelular

Recapitulando:
Definicin de potencial de membrana:

Energa almacenada (V = J/C).


Capacidad de generar trabajo que tiene un sistema. Para utilizar dicha energa: clula excitable.

Cmo se utiliza dicha energa almacenada?

Canales inicos

Un canal inico es una protena integral, con un poro acuoso que atraviesa la membrana plasmtica.
El tamao del poro y la densidad de cargas en su interior determinan su selectividad.

Su apertura depende de estmulos especficos (potencial de membrana, ligandos qumicos, luz, estiramiento, etc).
Inmersos en el contexto celular: regulados por quinasas, segundos mensajeros, etc.

Los canales activados por voltaje se abren cuando se despolariza la membrana

Modelo de funcionamiento del canal de Na+

Tres estados conformacionales: ABIERTO, CERRADO e INACTIVADO Qu sucede cuando se abre un canal de sodio?

El potencial de accin del axn de calamar: El mecanismo de generacin.


Hodgkin & Huxley, 1952. -9 mV

Vm
-65 mV

Itotal + TTX

Itotal

Im

Itotal + TEA
-1 0 1 2 3 4 5
Tiempo desde el comienzo del pulso (ms) Hodgkin & Huxley: tanto el Na+ como el K+ contribuyen significativamente a las corrientes inicas que subyacen el potencial de accin (axn de calamar).

El potencial de accin :

El potencial de accin

El potencial de accin:

Potencial generador (local, etc.) Origen diverso (receptores, canales) Gradual (proporcional al estmulo). Local (no se propaga)*

Su intensidad y cintica depender de las corrientes reclutadas por el estmulo


Umbral de excitacin. Por definicin es el potencial mnimo necesario para desencadenar un P.A Ley del todo o nada. Puede variar dependiendo del estado de activacin de los canales (ejem: perodo refractario).

El umbral de excitacin representa el valor de voltaje al cual se activan masivamente los canales involucrados en la generacin del potencial de accin

El potencial de accin:
El perodo refractario.

Se define como el tiempo en el cual la clula es incapaz de repetir la respuesta. Durante el perodo refractario absoluto no es posible generar un segundo potencial de accin. Durante el perodo refractario relativo es posible generar un nuevo potencial de accin, el cual sin embargo ser de menor amplitud.

P.R. Absoluto

P.R. Relativo

Porqu ocurre este fenmeno? Vm (mV) Esto se debe a que la mayora de los canales Na+ estn en su estado inactivado.

O C I

tiempo (ms)

Determinantes del potencial de accin:

de que depende el curso temporal del potencial de accin? de que depende la amplitud del potencial de accin?

Diversidad de potenciales de accin: corazn.

Propiedades pasivas de la membrana

Potenciales locales (subumbral):

Seales elctricas locales (no se propagan). Amplitud variable (graduados). No tienen perodo refractario. Se suman. Potencial de placa (msculo estriado) Importantes en la integracin sinptica Potencial postsinpticos Potencial de receptor

Comparacin potencial de accin y potencial local


Potencial de accin
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Todo o nada. Cdigo de frecuencias. No se suman. Sin decremento. Umbral de disparo. Perodo refractario. Largas distancias. Despolarizacin. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Potencial local
Graduado. Cdigo de amplitud. Se suman. Con decremento. Sin umbral. Sin perodo refractario. Distancias cortas. Despolarizacin /hiperpolarizacin.

porqu un potencial electrotnico no se propaga a grandes distancias?

Propagacin (pasiva) de potenciales locales:

Prdida de corriente (fuga) a lo largo de un segmento celular (axn).


Disminucin de la amplitud del potencial local con la distancia:

Propagacin de potenciales locales:


Constante de espacio (longitud):

V(X)= VOe-x/ = Rm/Ri

Se define la constante de espacio como la distancia a la cual el potencial a disminuido a un 37% de su valor original.

Curso temporal de los cambios de potenciales locales:

63%
37% carga

descarga

V(t)= Vmax(1- e-t/)

V(t)= Vmaxe-t/

El Potencial no cambia instantneamente en respuesta a un cambio en la corriente. (curso temporal dependiente de )

= Constante de tiempo

Sumacin temporal de potenciales locales

Teora de cable:
membrana citoplasma

membrana

Rm

Cm

Ri

La conduccin pasiva de cargas elctricas en un axn es anloga a lo que ocurre en los cables de cobre. La corriente inica se reduce con la distancia, fenmeno dependiente de la resistencia de membrana (Rm) y de la resistencia axial (interna Ri) del cable. La prdida de corriente con la distancia se traduce en una disminucin de la amplitud de los potenciales electrotnicos.

Teora de cable:

El modelo: varios circuitos RC en paralelo. Cada circuito RC representa un parche de membrana. Cules son los parmetros claves para caracterizar como y cuanto se propaga de la seal?

La propagacin del potencial de accin:


El axn no es buen conductor, pierde cargas (iones). En una corta distancia, el flujo de cargas elctricas est muy disminudo.

La propagacin de un potencial de accin depende tanto de la activacin de los canales dependientes de potencial como de la propagacin electrotnica.

La propagacin del potencial de accin:


El potencial de accin es regenerado a lo largo de todo el axn, como en una serie de estaciones de relevo. Flujos localizados de corriente desde la regin activa, despolarizan regiones adyacentes de la membrana. Canales de Na+ dependientes de voltaje responden con la apertura de sus compuertas de activacin. Un nuevo potencial de accin es gatillado en la membrana adyacente. Esta secuencia se repite a lo largo de todo el axn (dendrita, etc.). Los potenciales de accin no decaen en intensidad mientras se conducen a lo largo del axn.

La propagacin del potencial de accin:

Corrientes localizadas despolarizan las regiones adyacentes

porqu el potencial de accin no se propaga en ambas direcciones?

La propagacin del potencial de accin es unidireccional

El potencial de accin se propaga en una direccin, desde el cono axonal hacia las terminaciones nerviosas. La regin por la cual recin pas el potencial de accin no puede volver a ser estimulada por el flujo de corrientes locales.

Durante la repolarizacin, los canales de Na+ dependientes de voltaje permanecen inactivados, impidiendo el flujo de Na+ incluso ante una nueva despolarizacin.

Perodo refractario

La propagacin del potencial de accin:

La propagacin en fibras mielnicas

Propagacin en fibras mielnicas.

Muchas neuronas (vertebrados) tienen una capa aislante alrededor de su axn llamada mielina, la cual es producida por clulas de Schwann (periferia) y oligodendrocitos (central).

Al ser una capa aislante (fosfolpidos), la mielina aumenta significativamente la Rm, posibilitando el flujo de cargas en el interior del axn sin que ocurra fuga de cargas.

La propagacin saltatoria:
La capa de mielina es interrumpida por parches de membrana desnuda llamada Ndulos de Ranvier, en donde los canales de iones estn altamente concentrados. Los potenciales de accin saltan de un ndulo a otro sin despolariza la regin aislada por la mielina. Este fenmeno se llama Propagacin saltatoria.

La capa de mielina y la propagacin saltatoria aumentan significativamente la velocidad de conduccin del impulso nervioso. Esto permite que neuronas con axones de dimetro pequeo conduzcan el impulso rpidamente

Velocidad de conduccin:

Velocidad de conduccin:

~360 Km/hr!!

Los axones delgados tienen constantes de espacio pequeas. El potencial graduado se propaga una distancia corta. La conduccin del impulso nervioso es lenta. Los axones ms gruesos tienen constantes de espacio grandes. El potencial graduado se propaga a una gran distancia. La conduccin del impulso nervioso es rpida.

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