Universidad de Colima

Doctorado en Ciencias. rea: Biotecnologa

EFICIENCIA DE MORFOESPECIES DE HONGOS FORMADORES DE MICORRIZA ARBUSCULAR AISLADOS EN LA RIZOSFERA DE

Jacaratia mexicana A. DC. PARA PROMOVER LA ABSORCIN DE FSFORO

Tesis Que para obtener el grado de Doctor en Ciencias. rea: Biotecnologa
Presenta

Ramn Zulueta Rodrguez

Asesores: Dr. Sergio Aguilar Espinosa Dra. Luca Varela Fragoso Coasesores: Dra. Roco Flores Bello Dr. Javier Faras Larios

Tecomn, Colima octubre de 2003

AGRADECIMIENTOS
A la Universidad Veracruzana, por la confianza conferida durante el tiempo que me dediqu al posgrado. En especial al M.V.Z. Jos Siliceo Romero, quien durante su estancia en la Direccin General del rea Biolgico-Agropecuaria siempre pugn por la superacin acadmica de los catedrticos universitarios, as como tambin el consecuente e invaluable apoyo manifestado por nuestro actual director, el Mtro. Ernesto Rodrguez Luna. A todo el personal que labora en la Direccin General de Apoyo al Desarrollo Acadmico de la Universidad Veracruzana, por tolerar y comprender mis frecuentes e inquietos bullicios. Mencin exclusiva merece el Dr. Mario Miguel Ojeda Ramrez por sus elocuentes gestiones ante el Programa de Mejoramiento al Profesorado (PROMEP) y la Subsecretara de Educacin Superior e Investigacin Cientfica (SESIC), as como las acertadas y profesionales exhortaciones que a menudo me ha hecho favor de transmitir. A la Universidad de Colima y autoridades que laboran en la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias (FCBA), Campus Tecomn, por haberme permitido interactuar con todos los investigadores que participan dinmicamente en el Posgrado ah ofrecido. Sobre todo la cordialidad en turno exteriorizada por parte de los directores de la FCBA, M.C. Arnoldo Michel Rosales e Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado, as como de los coordinadores del Posgrado Dr. Jaime Molina Ochoa y Dr. Sergio Aguilar Espinosa, incluida la loable atencin de su Secretaria Administrativa, C.P. Evelia Facio Vieyra. A la Dra. Ma. del Roco Flores Bello y Dr. Sergio Aguilar Espinosa por ser quienes me orientaron de manera precisa y perspicaz para nunca perder de vista el objetivo planteado ni el rumbo a seguir en las mltiples actividades de gabinete y campo que se realizaron durante el trabajo donde se evalu el comportamiento de los hongos formadores de micorriza arbuscular y sus respectivas plantas husped, amn de la palpable tica e integridad profesional mostrada al momento de verter sus consejos para la construccin de este documento. De manera singular destaco la ilustre, invaluable, competitiva e inequvoca contribucin hecha por parte de mi director de tesis, la cual afortunadamente no se limit solo al tema especfico indagado. A la Dra. Luca Varela Fregoso por haber formado parte de mi comit tutorial (como directora adjunta) y compartir su amistad, amplia experiencia y conocimientos relacionados con la investigacin de la simbiosis micorrzica. No solo aprecio el tiempo dedicado a la conformacin del rubro taxonmico que aqu se presenta, sino por las sabias e inteligentes opiniones y sugerencias que coadyuvaron para con su culminacin. Ahora comprendo el porqu se reconoce su trayectoria cientfica allende nuestras fronteras.

AGRADECIMIENTOS
Al Consejo Acadmico asignado al Programa donde realic mis estudios de posgrado: Dr. Javier Faras Larios, Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre, Dra. Ma. del Roco Flores Bello, Dr. Sergio Aguilar Espinosa, M.C. Salvador Guzmn Gonzlez y M.C. Arnoldo Michel Rosales, por las acertadas observaciones e indicaciones que de manera sustancial contribuyeron al enriquecimiento del formato y contenido de la versin final de este manuscrito. Asimismo hago patente mi perpetua gratitud y admiracin por la inolvidable probidad e instruida colaboracin que, cuando la requer, nunca dudaron en brindarme mis respetables Dr. Oscar Rebolledo Domnguez y Dr. Roberto Lezama Gutirrez. A los Integrantes del Jurado de mi examen Pre-doctoral (Seminario de Avance): Dra. Ma. del Roco Flores Bello (Presidente), Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre (Secretario), Dra. Luca Varela Fregoso, Dr. Octavio Prez Zamora y Dr. Javier Faras Larios (Vocales) por las atinadas recomendaciones que me permitieron dar cumplimiento a lo sealado en el reglamento General de Estudios de Posgrado de la Universidad de Colima para obtener el grado de Doctor en Ciencias (rea Biotecnologa). A la M.C. Dora Trejo Aguilar y M.C. Miguel ngel Escalona Aguilar quienes con su alta estima y clara percepcin del fenmeno estudiado supieron guiarme por la senda documental y de eventos nacionales e internacionales ms propicios para alcanzar las metas pretendidas al iniciar esta titnica labor. Estoy seguro que su desinteresada labor produjo al menos un nuevo e infinito horizonte donde parece ser viable ahondar en pro del apasionante mundo de la intrnseca simbiosis endomicorrzica de las reas tropicales de Mxico. Al M.C. Juan Ruiz Ramrez por haberme asesorado lcidamente y con absoluto profesionalismo en el anlisis estadstico e interpretacin de la vasta informacin generada en la evaluacin de todos mis bioensayos, as como tambin manifestarme su compaerismo, afecto y confianza. Al respecto sealo el acercamiento y apertura total obtenida en el Laboratorio de Investigacin y Asesora Estadstica (LINAE) de la Universidad Veracruzana, orquestada con extraordinaria precisin por el Dr. Mario Miguel Ojeda Ramrez y la muy perspicaz Mtra. Lorena Lpez Lozada. Ah subrayo la estrecha interaccin con Roony J. Quevedo, alumno de la Facultad de Estadstica, quien continuamente asimil la instruccin recibida de sus maestros para el arreglo adecuado de la informacin obtenida en mis experimentos, la cual se analiz con el paquete SAS 6.12 para Windows.

AGRADECIMIENTOS
Enfatizo la disponibilidad de Florideth Martnez Reyes, alumna de la Facultad de Estadstica, y de la Mtra. Julia Aurora Montano Rivas (Facultad de Estadstica e Informtica de la Universidad Veracruzana, Zona Xalapa) por disipar mis dudas en la interpretacin de los resultados presentados en las alternativas no paramtricas del ANOVA (paquete STATISTICA 6.0 para Windows). A los siguientes Ingenieros Agrnomos (Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa) por ser partcipes en los resultados derivados de esta empresa: Liliana Lara Capistrn (en gabinete y laboratorio), Reyna Daz (en campo y laboratorio), Roberto Chiquito Contreras y Luis Guillermo Hernndez Montiel (en gabinete y campo), as como los Pasantes de Ingeniero Agrnomo Ma. del Carmen Barrientos Cepeda (en campo y laboratorio) y Juanita del Rayo Daz (en campo). Sin embargo de entre todos ellos, mis amigos y colegas, sobresale la dedicacin y la lealtad que en todo momento me confirieron Reyna y Ma. del Carmen. Al Dr. Hctor Lpez Moctezuma (Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa), con quin compart y discut momentos de incertidumbre y de culminacin de mi investigacin doctoral. Valoro sus apreciaciones y concepcin del fenmeno estudiado, as como las conjeturas y recomendaciones que de manera sustancial fortalecieron al presente escrito. A la Universidad Autnoma de Campeche (UACAM) y al Centro de Investigacin Cientfica de Yucatn, A.C. (CICY), por su insoslayable hospitalidad y asistencia durante mi estancia y recorridos de campo por aquellos bellos y paradisacos parajes del sureste mexicano. Reconozco la cooperacin recibida por el Bilogo Celso Gutirrez Bez (UACAM) y los Tcnicos Jos Luis Tapia Muoz y Filogonio May Pat (CICY). En ambas instituciones recib un trato muy corts, y por ello extiendo mi congratulacin al Dr. William J. Folan Higgins (UACAM), Dr. Germn Carnevali Fernndez-Concha (CICY) y Dr. Roger Orellana Lanza (CICY). Al Instituto de Ecologa A.C. (I. de E.) de Xalapa, Veracruz, por condescender el uso de sus Bancos de Informacin florsticos, cartogrficos y bibliogrficos, demostrando as que el cmulo de materiales impresos y electrnicos ah concentrados son de ndole universal. En dicha institucin trasciende el imponderable contacto logrado con: Srita. Rosalinda Ramrez Chan, Dra. Margarita Soto Esparza, Biloga Magda Gmez Columna, Dra. Lilly Gama y Biloga Ma. Elena Abreo (Departamento de Investigacin y Diagnstico Regional [BIOCLIMAS]), Dr. Francisco Gera Lorea Hernndez (Curador del herbario IE-XAL); M.C. Gonzalo Castillo Campos (Departamento de Sistemtica Vegetal); M.C. Felisa Herrador de la Paz, Bilogo Delfino Hernndez Lagunes y al C. Rafael Colorado (Biblioteca).

AGRADECIMIENTOS
A la M.C. Ariadna Escalante Rebolledo y Q.F.B. Teresita de Jess May Mora (Laboratorio de Suelos de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa) no solo por la atinada determinacin y caracterizacin fsica y qumica de los suelos colectados en los parajes donde Jacaratia mexicana A. DC. an vegeta, sino por su especial entusiasmo en discurrir sobre el particular fenmeno bitico y abitico ocurrido en cada uno de los sitios de estudio. Finalmente expreso mi reconocimiento a quienes de alguna forma contribuyeron e influyeron benigna y significativamente en el logro de mi capacitacin y docta formacin. Entre ellas me refiero a las personalidades siguientes: Dr. Ronald Ferrera-Cerrato, M.C. Alejandro Alarcn e Ing. Agr. Gabriela Snchez Viveros del Colegio de Postgraduados, Montecillo, Estado de Mxico, Mxico. Dr. Arturo Estrada-Torres de la Universidad Autnoma de Tlaxcala, Tlaxcala, Mxico. Dr. Christopher Walker del Biological Research and Imaging Laboratory, Bournemouth University, United Kingdom (U.K.). Dr Christian Plenchette (Directeur de Recherche) del Institut National de la Recherche Agronomique [INRA] Dijon, France. Dr. Salvador Paredes Rincn, Ing. Agr. Daniel Utrera Lpez y Q.A. Gonzalo Contreras Herrera del Instituto Tecnolgico Agropecuario nmero 18 de rsulo Galvn, Veracruz, Mxico. Q.A. Jess Guerrero Lpez (Laboratorio de Anlisis Qumico), M.C. Doris Guadalupe Rocha Castillo, (Laboratorio de Suelos), e Ing. Civil Agustn Muoz Ceballos (Laboratorio de Cartografa [LACART]) de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa, Xalapa, Veracruz, Mxico. Dra. Mara del Pilar Ortega Larrocea de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Mxico, D.F. Dr. ngel Trigos Landa, Dr. Mauricio Luna Rodrguez, L.I. Carlos Daz Corts , Q.F.B. Lissete Valenzuela Fabris y Q.F.B. Patricia Alfonseca Armburo del Laboratorio de Alta Tecnologa de Xalapa, S.C. [LATEX], Xalapa, Veracruz, Mxico.

DEDICATORIA
A Daniela y Mariana, por el tiempo y momentos que no tuvimos la oportunidad de compartir, mas en definitiva me sirvieron para descubrir la profusa adoracin y el significado que tienen en mi vida. Ahora entiendo que, hoy y siempre, ustedes han sido y sern mi razn de vivir. A Minerva, por ser la mujer que Dios me mand para hacer de mi un ser cuyos propsitos primordiales obedezcan la cordura y la reflexin. Es para m muy difcil expresar en estas lneas el papel que has desempeado en mi vida y ms aun lo que representas: Has vuelto a ocupar el pedestal que alguna vez guard...para ti. Te reitero mi profunda admiracin, reconocimiento, respeto y amor, el cual tambin ahora s que no era de nadie ms, sino tuyo. A mis padres, Sr. Jos Ramn Zulueta Castillo y O. Gloria Rodrguez Villegas, por haber inculcado en mi sus incontables principios de pensamiento y conducta donde impera la honestidad, la lealtad y el buen discernir. Los venero con toda mi alma y corazn, y me siento muy orgulloso de que su esencia y presencia forme parte de m.

In memoriam
A mis apreciados abuelos Sr. Jos Rodrguez Fano Sra. Ana Villegas Ochoa A mis inolvidables tos Dr. Jos Rodrguez Villegas Dr. Juan Flores Villalobos Sra. Consuelo Rodrguez Villegas Ing. Ricardo Rodrguez Villegas

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NDICE DE CUADROS .................................................................................................. v NDICE DE FIGURAS................................................................................................... vii ANEXOS ..................................................................................................................... ix RESUMEN .................................................................................................................... x ABSTRACT.................................................................................................................. xi 1. INTRODUCCIN................................................................................................... 1 2. REVISIN DE LITERATURA ................................................................................ 5 2.1. Importancia econmica y ecolgica de la Selva Baja Caducifolia.......................... 5 2.1.1. Composicin florstica de la Selva Baja Caducifolia .......................................... 7 2.1.1.1. Aspectos relevantes de Jacaratia mexicana A. DC.: Un rbol tpico de la Selva Baja Caducifolia en Mxico...................................................... 10 2.1.1.1.1. Ecologa y distribucin .......................................................................... 11 2.1.1.1.2. Descripcin de la planta........................................................................ 12 2.1.1.1.3. Posicin taxonmica ............................................................................. 15 2.1.1.1.4. Usos tradicionales, actuales y potenciales ............................................. 16 2.1.1.1.5. Estatus actual....................................................................................... 18 2.2. Diversidad de los hongos formadores de micorriza arbuscular en los ecosistemas terrestres ...................................................................................... 19 2.3. Funcin de los hongos formadores de micorriza arbuscular en las comunidades vegetales ..................................................................................... 21 2.3.1. Trascendencia de los estudios ecolgicos en una asociacin endomicorrzica ............................................................................................ 25 2.3.1.1. Relacin entre los hongos formadores de micorriza arbuscular y las especies forestales ................................................................................... 27 2.3.1.2. Interactividad entre los hongos formadores de micorriza arbuscular y las plantas tropicales ..................................................................................... 28 2.3.1.3. Importancia ecolgica de los hongos formadores de micorriza arbuscular en el trpico seco ..................................................................................... 30 2.4. Los hongos formadores de micorriza arbuscular en la familia Caricaceae ........... 32 2.4.1. Relacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular con Carica papaya .......................................................................................................... 33 2.4.2. Relacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular con Jacaratia mexicana ....................................................................................................... 36 2.5. Capacidad infectiva de los hongos formadores de micorriza arbuscular.............. 36 2.5.1. Efecto de la colonizacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular en el crecimiento y desarrollo de las plantas ................................................. 37 2.5.2. Plantas micotrficas y no micotrficas........................................................... 38 2.5.3. Diversidad y dominancia de especies de hongos formadores de micorriza arbuscular en reas no perturbadas .............................................................. 40

1. INTRODUCCIN
En casi todos los ecosistemas naturales del mundo donde se desarrolla una agrupacin vegetal, la mayor parte de sus componentes se encuentran ntimamente ligados con los hongos del suelo formadores de micorriza, a grado tal que ms del 90% de las especies vegetales conocidas mantienen una estrecha interaccin con ellos (Tsimilli-Michael et al., 2000), de entre los que por su abundancia y universalidad destacan son los micorrizgenos arbusculares (Hodge et al., 2000). Este hecho, innegable por las recientes evidencias fsiles encontradas (Kenrick y Crane, 1997; Redecker et al., 2000 a) y remontable al instante mismo cuando las plantas primigenias iniciaron la invasin de la superficie terrestre (Pirozynski y Malloch, 1975; Remy et al., 1994), ha sido y sigue siendo sumamente decisivo en su evolucin (Cabello, 1995). No obstante, hoy en da su milenaria coexistencia en las reas tropicales se encuentra amenazada por la severa e indiscriminada deforestacin que el hombre infiere a las selvas en todo el mundo (NASA, 1998; Geist y Lambin, 2002), devastacin estimada por la FAO en 14.2 millones de hectreas anuales para el periodo 1990-2000 (FAO, 2001), sin que hasta ahora sean suficientes los conocimientos aportados acerca de la microbiota del suelo en general (Azcn-Aguilar y Barea, 1992; Galicia, 2002) o la descripcin de sus especies micorrizgenas en particular (Varela y Trejo, 2001), ni cuan drsticos pueden llegar a ser las consecuencias directas o indirectas sobre la biodiversidad vegetal y alto grado de endemismo de tan frgiles ecosistemas. Por otro lado, y si bien es cierto que el funcionamiento de los biomas continentales a menudo depende de los grupos de organismos que los conforman, tambin lo es el hecho de que el grueso de los rboles del trpico presentan micorrizas (Janos, 1980 a), toda vez que la baja disponibilidad o inmovilidad de nutrimentos en los suelos de esas regiones clidas generalmente es notable. 1

Numerosas investigaciones realizadas hasta el momento han mostrado que los hongos formadores de micorriza arbuscular (HMA) pueden ser determinantes en la estructuracin de una comunidad vegetal (Allen, 1996 a; St. John, 1998) al afectar directa o indirectamente la capacidad de crecimiento y vigorosidad de las plantas (Cabello, 1999; Hernndez, 2000; Smith et al., 2000), de tal suerte que la identificacin y estudio de los distintos HMAs presentes en un paraje dado es un asunto de absoluta importancia bioecolgica (Streitwolf-Engel et al., 1997; Helgason

et al., 1998), sobre todo por la habilidad que a menudo estos tienen para no solo
favorecer la absorcin de nutrimentos, sino por la peculiar integracin fisiolgica y promocin de respuestas metablicas que redunda en pro de la adaptabilidad y sobrevivencia de su hospedero donde los factores fsicos son extremos y de constante estrs ambiental (Bratek et al., 2002). Sin embargo la respuesta de una planta a la colonizacin simultnea originada por diferentes HMA o por una sola morfoespecie puede ser tan variada (Sylvia et al., 1993 a), que inclusive en ocasiones su efecto individual puede llegar a ser ms benfica cuando acta sola (Gupta et al., 2002) que al hacerlo en consorcio (Gange, 1999). Es precisamente en este tenor donde se requieren investigaciones enfocadas a determinar si las diferencias fisiolgicas entre los aislados se correlacionan con la procedencia geogrfica de los morfotipos (Daniels y Duff, 1978). Al respecto, AzcnAguilar et al. (1986) y Howeler et al. (1987) sugieren conducir bioensayos en invernadero con distintas plantas husped para valorar las respuestas que se generan tras su asocio con HMA nativos de morfologa semejante (morfotipo o morfoespecie) que, al provenir de un mismo tipo de vegetacin pero de zonas geogrficas distantes, pueden diferir en su eficiencia. Lo denotado es aun ms acertado y trascendente cuando se trata de una morfoespecie que exhibe un nmero variado de hospederos (Siqueira y Saggin-Jnior, 2001). 2

En virtud de que hasta el momento las evaluaciones de la eficiencia de las especies de HMA nativos de los suelos tropicales son muy escasas (Gavito y Varela, 1995), y que el reconocimiento de la habilidad de las mismas para llevar a cabo una exitosa colonizacin en un sitio en particular es de gran inters (Lodge et al., 1996 a) y uno de los primeros pasos sugeridos hacia el entendimiento del papel que esta simbiosis tiene sobre todo en el desempeo, preservacin y mantenimiento de las plantas amenazadas (Barroetavena et al., 1998). El propsito primordial de este estudio fue determinar la eficiencia de los morfotipos de HMA cuya presencia fuese discernible y manifiesta en los suelos rizosfricos recolectados en diversos parajes relcticos de la Selva Baja Caducifolia del Golfo de Mxico donde aun vegeta Jacaratia mexicana A. DC., la cual es una especie arbrea filogenticamente relacionada con Carica papaya L. (Badillo, 1971; Aradhya et al., 1999; Olson, 2002) y tpica de las selvas secas del pas que en la actualidad se encuentra en inminente peligro de extincin. As, y tras la premisa de que los ecosistemas tienen grupos de HMA con funciones especficas, y que la desaparicin de un hospedante puede llegar a ocasionar efectos notables e inconcebibles sobre la microbiota rizosfrica, se plante cuantificar su aptitud simbitica con dos plantas tropicales de la familia Caricaceae (papaya [C.

papaya] y bonete [J. mexicana]) en trminos de: 1) El conteo porcentual simple de

colonizacin en sus races, 2) La promocin de algunas variables de crecimiento, 3) La produccin de biomasa seca y de rea foliar, y 4) La asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas.

Hiptesis
Para el desarrollo del presente trabajo se plante la siguiente hiptesis: Las especies de hongos formadores de micorriza arbuscular aisladas en la rizosfera de J. mexicana

en tres comunidades vegetales similares son semejantes en su morfologa, pero distintas en su eficiencia para promover la absorcin de fsforo.

Objetivos
Por esta razn se trazaron como objetivos: 1. Determinar si J. mexicana es micotrfica 2. Aislar e identificar a las morfoespecies de hongos formadores de micorriza arbuscular (HMA) presentes en las muestras de rizosfera de J. mexicana recolectadas en la Selva Baja Caducifolia de los Estados de Veracruz, Campeche y Yucatn (Mxico) 3. Propagar y comparar la eficiencia de la morfoespecie de HMA ms abundante y comn de los tres sitios de muestreo en dos plantas husped: C. papaya y J.

mexicana.

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2.6. Eleccin y obtencin de un inculo esporal de hongos formadores de micorriza arbuscular .......................................................................................... 2.7. Eficiencia de la simbiosis................................................................................... 2.7.1. Factores inherentes a la planta hospedera .................................................... 2.7.2. Factores inherentes al endfito ..................................................................... 2.7.3. Influencia de los factores ambientales........................................................... 2.7.3.1. Clima y suelo ............................................................................................ 2.8. Relacin de la simbiosis con la actividad fotosinttica de la planta..................... 3. MATERIALES Y MTODOS.................................................................................. 3.1. Determinacin de micotrofa en plantas de Jacaratia mexicana.......................... 3.1.1. Fase de campo ............................................................................................. 3.1.2. Fase de invernadero y laboratorio ................................................................. 3.2. Eleccin y descripcin de las reas de estudio................................................... 3.2.1. Sitio 1: Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico) ................................ 3.2.1.1. Suelos ...................................................................................................... 3.2.1.2. Clima ........................................................................................................ 3.2.1.3. Vegetacin ................................................................................................ 3.2.2. Sitio 2: Seybaplaya (Estado de Campeche, Mxico) ...................................... 3.2.2.1. Suelos ....................................................................................................... 3.2.2.2. Clima ........................................................................................................ 3.2.2.3. Vegetacin ................................................................................................ 3.2.3. Sitio 3: Buctzotz (Estado de Yucatn, Mxico) ................................................ 3.2.3.1. Suelos ...................................................................................................... 3.2.3.2. Clima ........................................................................................................ 3.2.3.3. Vegetacin ................................................................................................ 3.3. Muestreo de suelo ............................................................................................ 3.4. Propagacin de esporas nativas en invernadero ................................................ 3.5. Separacin y extraccin de esporas en laboratorio ............................................ 3.5.1. Identificacin de morfoespecies de hongos formadores de micorriza arbuscular .................................................................................................... 3.6. Propagacin de morfoespecies.......................................................................... 3.6.1. Preparacin del sustrato y las macetas trampa.............................................. 3.6.2. Propagacin de las morfoespecies identificadas............................................. 3.6.3. Eleccin y obtencin del inculo.................................................................... 3.7. Ubicacin del rea experimental ....................................................................... 3.8. Establecimiento de los bioensayos .................................................................... 3.8.1. Bioensayo preliminar .................................................................................... 3.8.1.1. Variables medidas en el bioensayo preliminar ........................................... 3.8.1.1.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas .............................................. 3.8.1.1.2. Produccin de biomasa y rea foliar......................................................

41 44 46 47 48 48 50 53 53 53 54 55 56 57 58 58 59 59 61 61 61 61 63 63 63 64 66 67 67 68 69 70 70 71 71 75 75 75

ii

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3.8.1.1.3. Colonizacin de las races ..................................................................... 75 3.8.2. Bioensayos de eficiencia ............................................................................... 76 3.8.2.1. Variables adicionales medidas en los bioensayos finales ........................... 78 3.8.2.1.1. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas ............................. 78 3.8.2.1.2. Acumulacin de P en la biomasa area de las plantas husped ............. 79 3.8.2.1.3. Eficiencia de la simbiosis micorrzica ..................................................... 79 4. RESULTADOS ......................................................................................................80 4.1. Micotrofa en plantas de Jacaratia mexicana...................................................... 80 4.2. Identificacin de morfotipos de hongos formadores de micorriza arbuscular...... 82 4.3. Descripcin de las morfoespecies...................................................................... 82 4.3.1. Glomus intraradices Schenck & Smith ........................................................... 84 4.3.2. Glomus constrictum Trappe .......................................................................... 85 4.3.3. Sclerocystis sinuosa Gerdemann & Bakshi ..................................................... 85 4.3.4. Entrophospora infrequens (Hall) Ames & Schneider ...................................... 86 4.4. Morfotipos de hongos formadores de micorriza arbuscular propagados en invernadero ................................................................................................ 88 4.5. Bioensayo preliminar: Respuesta de Carica papaya a la inoculacin con diferente nmero de esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie .......................................................................................................... 89 4.5.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas ...................................................... 89 4.5.2. Biomasa seca y rea foliar ............................................................................ 89 4.5.3. Colonizacin micorrzica ................................................................................ 91 4.6. Bioensayos de eficiencia ................................................................................... 92 4.6.1. Bioensayo final 1: Respuesta de Carica papaya a la inoculacin con 50 esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie, y de procedencia geogrfica distinta..................................................................... 92 4.6.1.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas.................................................. 92 4.6.1.2. Biomasa seca y rea foliar ........................................................................ 93 4.6.1.3. Colonizacin micorrzica ............................................................................ 96 4.6.1.4. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas ............................... 101 4.6.1.5. Acumulacin de P en la biomasa area ................................................... 103 4.6.1.6. Eficiencia de la simbiosis micorrzica ....................................................... 105 4.6.2. Bioensayo final 2: Respuesta de Jacaratia mexicana a la inoculacin con 50 esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie, y de procedencia geogrfica distinta................................................................... 106 4.6.2.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas................................................ 106 4.6.2.2. Biomasa seca y rea foliar ...................................................................... 107 4.6.2.3. Colonizacin micorrzica .......................................................................... 110 4.6.2.4. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas ............................... 114 4.6.2.5. Acumulacin de P en la biomasa area ................................................... 117

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NDICE
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4.6.2.6. Eficiencia de la simbiosis micorrzica ....................................................... 5. DISCUSIN ....................................................................................................... 6. CONCLUSIONES................................................................................................ 7. BIBLIOGRAFA CITADA ................................................................................... 8. ANEXOS .............................................................................................................

119 120 155 156 201

iv

NDICE DE CUADROS
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Cuadro 1. Tipo de satisfactores que se han obtenido de plantas de la Selva Baja Caducifolia en Mxico ................................................................................... 7 Cuadro 2. Tipos de clima donde se establece ms de la mitad de la Selva Baja Caducifolia en Mxico ................................................................................... 9 Cuadro 3. Tipo de satisfactores que se han obtenido de Jacaratia mexicana en Mxico........................................................................................................ 17 Cuadro 4. Factores que favorecen la erosin gentica en Jacaratia mexicana ............. 18 Cuadro 5. Caracterizacin fsica y qumica del suelo muestreado en Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico) a la profundidad 0-20 cm ................ 58 Cuadro 6. Caracterizacin fsica y qumica del suelo muestreado en Seybaplaya (Estado de Campeche, Mxico) a la profundidad 0-20 cm ............................ 60 Cuadro 7. Caracterizacin fsica y qumica del suelo muestreado en Buctzotz (Estado de Yucatn, Mxico) a la profundidad 0-20 cm ................................ 62 Cuadro 8. Caracterizacin fsica y qumica del del sustrato utilizado para la propagacin de morfoespecies de Veracruz, Campeche y Yucatn en los cultivos trampa ................................................................................ 68 Cuadro 9. Descripcin de los tratamientos evaluados en el bioensayo preliminar ........ 73 Cuadro 10. Descripcin de los tratamientos evaluados en las dos plantas husped: Carica papaya y Jacaratia mexicana ............................................................ 77 Cuadro 11. Lista de taxa de hongos formadores de micorriza arbuscular encontrados en el suelo rizosfrico de Jacaratia mexicana .............................................. 82 Cuadro 12. Criterio discrecional utilizado para elegir a los morfotipos propagados en cultivo monoespecfico ........................................................................... 88 Cuadro 13. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el crecimiento en altura en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya .................... 92 Cuadro 14. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el nmero de hojas en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya ......................... 93 Cuadro 15. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la biomasa area seca de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya ................. 94 Cuadro 16. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la biomasa radical seca de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya ................ 94 Cuadro 17. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya................................... 95 Cuadro 18. Diferencia entre tratamientos para las estructuras micorrzicas observadas en Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi ...................................................... 97 Cuadro 19. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la asimilacin neta de CO2, conductancia estomtica y evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya....................................................... 101 Cuadro 20. Acumulacin de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 30 y 60 ddi................................................. 103

NDICE DE CUADROS
CUADROS Pgina

Cuadro 21. Acumulacin promedio de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya al finalizar el experimento .............. 104 Cuadro 22. Eficiencia de la colonizacin (%) de cada morfoespecie para la incorporacin de P en plantas de Carica papaya ........................................ 105 Cuadro 23. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el crecimiento en altura y nmero de hojas de las plantas de Jacaratia mexicana inoculadas con 50 esporas de Glomus intraradices de distinta procedencia geogrfica ................................................................................................ 106 Cuadro 24. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la biomasa seca area y radical de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana .. 108 Cuadro 25. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana ......................... 109 Cuadro 26. Diferencia entre tratamientos para las estructuras micorrzicas observadas en Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi............................................ 110 Cuadro 27. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la asimilacin neta de CO2, conductancia estomtica y evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana ............................................... 115 Cuadro 28. Acumulacin de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 30 y 120 ddi ...................................... 117 Cuadro 29. Acumulacin promedio de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana al finalizar el experimento ddi............. 118 Cuadro 30. Eficiencia de la colonizacin (%) de cada morfoespecie para la incorporacin de P en plantas de Jacaratia mexicana .................................119

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Figura 1. Ubicacin de los sitios de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico ............................................................................................ 56 Figura 2. Ubicacin geogrfica del rea de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico en la Selva Baja Caducifolia de Veracruz, Mxico ........... 57 Figura 3. Ubicacin geogrfica del rea de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico en la Selva Baja Caducifolia de Campeche, Mxico......... 60 Figura 4. Ubicacin geogrfica del rea de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico en la Selva Baja Caducifolia de Yucatn, Mxico......... 62 Figura 5. Secuencia de imgenes de las faenas de campo seguidas para la obtencin de las muestras de suelo rizosfrico de Jacaratia mexicana en los manchones de Selva Baja Caducifolia de Veracruz, Campeche y Yucatn, Mxico........................................................................................... 64 Figura 6. Secuencia de imgenes del acondicionamiento del sitio y armado de la estructura donde se llev a cabo el experimento.......................................... 72 Figura 7. Estructuras de hongos formadores de micorriza arbuscular observadas en races de Jacaratia mexicana inoculadas con el consorcio micorrzico MTZ-1 a los 60 ddi....................................................................................... 80 Figuras 8 y 9. Estructuras de hongos formadores de micorriza arbuscular observadas en races de plntulas de Jacaratia mexicana inoculadas con el consorcio micorrzico MTZ-1 a los 15 ddi ..................................................................... 81 Figura 10. Glomus sp. 1 proveniente del suelo rizosfrico colectado en Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico)........................................................... 83 Figura 11. Glomus sp. 2 proveniente del suelo rizosfrico colectado en Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico)........................................................... 83 Figura 12. Glomus intraradices ................................................................................... 84 Figura 13. Glomus constrictum................................................................................... 85 Figura 14. Sclerocystis sinuosa................................................................................... 86 Figura 15. Entrophospora infrequens ......................................................................... 87 Figura 16. Crecimiento en altura de las plantas de Carica papaya a 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfo-tipo procedente de Veracruz) ....................................................................... 89 Figura 17. Biomasa area seca de las plantas de Carica papaya a 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfo-tipo procedente de Veracruz) ....................................................................... 90 Figura 18. Biomasa radical seca de las plantas de Carica papaya a 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfo-tipo procedente de Veracruz) ....................................................................... 90 Figura 19. Colonizacin de Carica papaya (tcnica de McGonigle et al., 1990), 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfotipo procedente de Veracruz) ............................. 91 vii

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Figura 20. Crecimiento en altura de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45y 60 ddi...................................................................................... 93 Figura 21. Nmero de hojas en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi ....................................................................................... 94 Figura 22. Biomasa area seca de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi .....................................................................................95 Figura 23. rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi .................................................................................................... 96 Figura 24. Porcentaje de hifas en plantas inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi ....................................................................................................... 98 Figura 25. Porcentaje de arbsculos en plantas inoculadas de Carica papaya a 15, 30,45 y 60 ddi .............................................................................................. 99 Figura 26. Porcentaje de vesculas en plantas inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi ................................................................................................ 100 Figura 27. Formacin de arbsculos registrada a 15, 30, 45 y 60 ddi en tres morfoespecies de Glomus intraradices asociadas con Carica papaya ............ 101 Figura 28. Asimilacin neta de CO2 en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi......................................................................... 102 Figura 29. Conductancia estomtica en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi......................................................................... 102 Figura 30. Evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi............................................................................................. 103 Figura 31. P presente en la biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 30 y 60 ddi........................................................................ 104 Figura 32. P presente en la biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Carica papaya al finalizar el experimento..................................................... 105 Figura 33. Crecimiento en altura de las plantas Testigo 1 y 2 e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi.................................................... 107 Figura 34. Incrementos de altura registrados en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana en cada evaluacin (15, 30, 75 y 120 ddi) ................ 107 Figura 35. Biomasa area seca de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi) ddi)......................................................... 108 Figura 36. rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi) ddi) ........................................................................... 109 Figura 37. Porcentaje de hifas en plantas inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi ........................................................................................ 111 Figura 38. Porcentaje de arbsculos en plantas inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi................................................................................. 112 Figura 39. Porcentaje de vesculas en plantas inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi ................................................................................... 113 viii

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Figura 40. Formacin de arbsculos registrada a 15, 30, 75 y 120 ddi en tres morfoespecies de Glomus intraradices asociadas conJacaratia mexicana ..... Figura 41. Asimilacin neta de CO2 en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi ................................................................. Figura 42. Conductancia estomtica en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi ................................................................. Figura 43. Evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi ................................................................................... Figura 44. Cantidad de P presente en las muestras de biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 30 y 120 ddi .......................... Figura 45. Cantidad promedio de P presente en las muestras de biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana al finalizar el experimento ............................................................................................... ANEXOS
ANEXOS

114 115 116 116 117 118

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1. Caractersticas macroscpicas y microscpicas de la madera de Jacaratia mexicana .............................................................................................................. 201 2. Qu es la Biblioteca Virtual (Consorcio de Bibliotecas del Sureste)?........................ 202 3. Prueba para determinar la inmunidad intrnseca de las especies vegetales a la colonizacin micorrizgena (Mtodo de Tester et al., 1987)........................ 204 4. Tcnica de tincin de races (Mtodo de Phillips y Hayman, 1970)........................ 205 5. Tcnica para la cuantificacin de una raz endfita (Mtodo de McGonigle et al., 1990) ......................................................................................................... 206 6. Tcnica de tamizado hmedo y decantacin para la separacin de esporas del suelo (Gerdemann y Nicolson, 1963)............................................................... 207 7. Tcnica para el establecimiento de cultivos-trampa a partir de esporas de hongos formadores de micorriza arbuscular (Mtodo de Brundrett et al., 1994,;1996) ............... 208 8. Tcnica para la esterilizacin de esporas de hongos formadores de micorriza arbuscular (Mtodo de Bago et al., 2000 b) ......................................................... 209 9. Solucin nutritiva de Hoagland............................................................................. 210 10. Especies de plantas asociadas con Glomus constrictum en Polonia ........................ 211

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RESUMEN
La indiscriminada deforestacin de selvas tropicales sugieren la imperiosa necesidad de reconocer detenidamente cuales son los hongos formadores de micorriza arbuscular (HMA) que, hasta hoy en da, han coevolucionado y colonizado biotrficamente la raz de cada componente vegetal, sobre todo si el hospedero en cuestin se encuentra al borde de la extincin, tal y como sucede con Jacaratia mexicana A. DC. Este estudio fue conducido para: 1) Determinar si dicha especie era micotrfica, 2) Propagar a los HMA presentes en el rizoplano, endorizosfera y ectorizosfera de este espcimen arbreo en tres fragmentos de Selva Baja Caducifolia provenientes de Veracruz, Campeche y Yucatn, Mxico, 3) Aislar e identificar a las morfoespecies de HMA de cada uno de los suelos rizosfricos recolectados, y 4) Evaluar la eficiencia de la morfoespecie de HMA ms abundante y comn de los tres sitios de muestreo, utilizando a Carica papaya y J. mexicana como plantas husped. Tras comprobar que J. mexicana no era intrnsecamente inmune a la presencia del endfito, la toma de muestras en cada paraje se realiz en noviembre de 1999, y el incremento de la poblacin de hongos MA fue factible mediante el establecimiento de cultivos-trampa. Se determin la identidad taxonmica de las morfoespecies y promovi su adecuada propagacin individual. Acto seguido, y previo a la experimentacin final, un bioensayo revel que 50 esporas desinfectadas en su superficie eran suficientes para valorar su eficiencia. Dicha aptitud se cuantific sistemticamente midiendo las variables siguientes: Crecimiento en altura, dimetro, nmero de hojas, produccin de biomasa area y radical seca, rea foliar, tasa de asimilacin neta de CO2, transpiracin de las hojas y porcentaje de colonizacin micorrzica. El comportamiento registrado entre los simbiontes mostr presencia de hifas y arbsculos en ambos hospederos (C. papaya y J. mexicana) 15 das despus de la inoculacin (ddi), as como diferencia estadstica de acuerdo a la prueba de Tukey (P 0.05) para nmero de hojas, rea foliar y biomasa area seca (30 ddi) para el primero, mientras que para el segundo sta fue evidente en la evaporacin y conductancia estomatal a 75 ddi, justo antes de su manifiesta defoliacin (120 ddi). Los resultados obtenidos indican que las distintas morfoespecies de hongos MA evaluadas no difieren en su eficiencia.
Palabras clave: Mxico, Selva Baja Caducifolia, hongos formadores de micorriza arbuscular, eficiencia, Jacaratia mexicana, Carica papaya.

ABSTRACT
Global deforestation has several extremely important consequences, which are all ecological and environmental interrelated. However the indiscriminate removal of Mexican dry tropical forests suggest the imperious necessity to recognize the arbuscular mycorrhizal (AM) fungi forming mutualistic symbioses with the root systems of plant species that it comes from coevolution, mainly if the host is an endangered specie, such occur with Jacaratia mexicana A. DC. This study was carried out to: 1) Determine if this is a mycotrophic specie, 2) Propagate the AM fungal spores obtained from the rhizoplan, endorhizosphere and ectorhizosphere in three dry deciduous forest patches of Veracruz, Campeche and Yucatan, Mexico, 3) Isolate and identify the AM morphospecies in the rhizospheric zone of soil collected, and 4) Evaluate the effectiveness of the dominant and common morphotype in the three sampling places using Carica papaya and J. mexicana as host plants. After checking that J. mexicana was not intrinsically immune to the endophyte presence, the rhizosphere samples was carried out in each place in november 1999, and transferring to pot-cultures to obtain adequate rates of fungi population growth in culture. The taxonomic identity was determined and the individual morphospecies propagation was starting to assess fungal development. Later on, and previous to the final experimentation, a preliminary bioassay revealed that 50 spores disinfected in its surface were enough to value its effectiveness. This aptitude was quantified measuring the following variables systematically: Growth, number of leaves, shoot and root dry biomass, foliar area, net CO2 assimilation rate, transpiration and percentage colonization in the split-root system. The symbiont behavior registered showed hyphae and arbuscules in both hosts (C. papaya and J. mexicana) 15 days after the inoculation (dai), as well as difference statistic according to the Tukey test (P 0.05) for number of leaves, foliar area and shoot dry biomass (30 dai) for the first one, while for the second this was evident 75 dai in the evaporation and stomatal conductance, just enough defoliation starting (120 ddi). Our results provide information to asseverate that the different VAM morphospecies evaluated don't differ in its efficiency.
Key words: Mxico, Dry deciduous forest, arbuscular mycorrhiza fungi, effectiveness, Jacaratia mexicana, Carica papaya.

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1. INTRODUCCIN
En casi todos los ecosistemas naturales del mundo donde se desarrolla una agrupacin vegetal, la mayor parte de sus componentes se encuentran ntimamente ligados con los hongos del suelo formadores de micorriza, a grado tal que ms del 90% de las especies vegetales conocidas mantienen una estrecha interaccin con ellos (Tsimilli-Michael et al., 2000), de entre los que por su abundancia y universalidad destacan son los micorrizgenos arbusculares (Hodge et al., 2000). Este hecho, innegable por las recientes evidencias fsiles encontradas (Kenrick y Crane, 1997; Redecker et al., 2000 a) y remontable al instante mismo cuando las plantas primigenias iniciaron la invasin de la superficie terrestre (Pirozynski y Malloch, 1975; Remy et al., 1994), ha sido y sigue siendo sumamente decisivo en su evolucin (Cabello, 1995). No obstante, hoy en da su milenaria coexistencia en las reas tropicales se encuentra amenazada por la severa e indiscriminada deforestacin que el hombre infiere a las selvas en todo el mundo (NASA, 1998; Geist y Lambin, 2002), devastacin estimada por la FAO en 14.2 millones de hectreas anuales para el periodo 1990-2000 (FAO, 2001), sin que hasta ahora sean suficientes los conocimientos aportados acerca de la microbiota del suelo en general (Azcn-Aguilar y Barea, 1992; Galicia, 2002) o la descripcin de sus especies micorrizgenas en particular (Varela y Trejo, 2001), ni cuan drsticos pueden llegar a ser las consecuencias directas o indirectas sobre la biodiversidad vegetal y alto grado de endemismo de tan frgiles ecosistemas. Por otro lado, y si bien es cierto que el funcionamiento de los biomas continentales a menudo depende de los grupos de organismos que los conforman, tambin lo es el hecho de que el grueso de los rboles del trpico presentan micorrizas (Janos, 1980 a), toda vez que la baja disponibilidad o inmovilidad de nutrimentos en los suelos de esas regiones clidas generalmente es notable. 1

Numerosas investigaciones realizadas hasta el momento han mostrado que los hongos formadores de micorriza arbuscular (HMA) pueden ser determinantes en la estructuracin de una comunidad vegetal (Allen, 1996 a; St. John, 1998) al afectar directa o indirectamente la capacidad de crecimiento y vigorosidad de las plantas (Cabello, 1999; Hernndez, 2000; Smith et al., 2000), de tal suerte que la identificacin y estudio de los distintos HMAs presentes en un paraje dado es un asunto de absoluta importancia bioecolgica (Streitwolf-Engel et al., 1997; Helgason

et al., 1998), sobre todo por la habilidad que a menudo estos tienen para no solo
favorecer la absorcin de nutrimentos, sino por la peculiar integracin fisiolgica y promocin de respuestas metablicas que redunda en pro de la adaptabilidad y sobrevivencia de su hospedero donde los factores fsicos son extremos y de constante estrs ambiental (Bratek et al., 2002). Sin embargo la respuesta de una planta a la colonizacin simultnea originada por diferentes HMA o por una sola morfoespecie puede ser tan variada (Sylvia et al., 1993 a), que inclusive en ocasiones su efecto individual puede llegar a ser ms benfica cuando acta sola (Gupta et al., 2002) que al hacerlo en consorcio (Gange, 1999). Es precisamente en este tenor donde se requieren investigaciones enfocadas a determinar si las diferencias fisiolgicas entre los aislados se correlacionan con la procedencia geogrfica de los morfotipos (Daniels y Duff, 1978). Al respecto, AzcnAguilar et al. (1986) y Howeler et al. (1987) sugieren conducir bioensayos en invernadero con distintas plantas husped para valorar las respuestas que se generan tras su asocio con HMA nativos de morfologa semejante (morfotipo o morfoespecie) que, al provenir de un mismo tipo de vegetacin pero de zonas geogrficas distantes, pueden diferir en su eficiencia. Lo denotado es aun ms acertado y trascendente cuando se trata de una morfoespecie que exhibe un nmero variado de hospederos (Siqueira y Saggin-Jnior, 2001). 2

En virtud de que hasta el momento las evaluaciones de la eficiencia de las especies de HMA nativos de los suelos tropicales son muy escasas (Gavito y Varela, 1995), y que el reconocimiento de la habilidad de las mismas para llevar a cabo una exitosa colonizacin en un sitio en particular es de gran inters (Lodge et al., 1996 a) y uno de los primeros pasos sugeridos hacia el entendimiento del papel que esta simbiosis tiene sobre todo en el desempeo, preservacin y mantenimiento de las plantas amenazadas (Barroetavena et al., 1998). El propsito primordial de este estudio fue determinar la eficiencia de los morfotipos de HMA cuya presencia fuese discernible y manifiesta en los suelos rizosfricos recolectados en diversos parajes relcticos de la Selva Baja Caducifolia del Golfo de Mxico donde aun vegeta Jacaratia mexicana A. DC., la cual es una especie arbrea filogenticamente relacionada con Carica papaya L. (Badillo, 1971; Aradhya et al., 1999; Olson, 2002) y tpica de las selvas secas del pas que en la actualidad se encuentra en inminente peligro de extincin. As, y tras la premisa de que los ecosistemas tienen grupos de HMA con funciones especficas, y que la desaparicin de un hospedante puede llegar a ocasionar efectos notables e inconcebibles sobre la microbiota rizosfrica, se plante cuantificar su aptitud simbitica con dos plantas tropicales de la familia Caricaceae (papaya [C.

papaya] y bonete [J. mexicana]) en trminos de: 1) El conteo porcentual simple de

colonizacin en sus races, 2) La promocin de algunas variables de crecimiento, 3) La produccin de biomasa seca y de rea foliar, y 4) La asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas.

Hiptesis
Para el desarrollo del presente trabajo se plante la siguiente hiptesis: Las especies de hongos formadores de micorriza arbuscular aisladas en la rizosfera de J. mexicana

en tres comunidades vegetales similares son semejantes en su morfologa, pero distintas en su eficiencia para promover la absorcin de fsforo.

Objetivos
Por esta razn se trazaron como objetivos: 1. Determinar si J. mexicana es micotrfica 2. Aislar e identificar a las morfoespecies de hongos formadores de micorriza arbuscular (HMA) presentes en las muestras de rizosfera de J. mexicana recolectadas en la Selva Baja Caducifolia de los Estados de Veracruz, Campeche y Yucatn (Mxico) 3. Propagar y comparar la eficiencia de la morfoespecie de HMA ms abundante y comn de los tres sitios de muestreo en dos plantas husped: C. papaya y J.

mexicana.

2. REVISIN DE LITERATURA 2.1. Importancia econmica y ecolgica de la Selva Baja Caducifolia

Los bosques tropicales estacionalmente secos tienen una distribucin global amplia (Trejo y Dirzo, 2000) y son ecosistemas que se desarrollan naturalmente en Australia, India, Africa y Amrica (Archibold, 1995). Aunque cubren alrededor del 42% de las zonas intertropicales (Murphy y Lugo, 1995; Pennington et al., 2000) donde los factores ambientales primarios se relacionan con los periodos de abastecimiento de agua y sequedad (Gerhardt , 1996; Eamus, 1999) y las particulares caractersticas fsicas y qumicas de los sustratos sobre los que descansan (Cintrn y Lugo, 1990; Murphy y Lugo, 1990), su incesable perturbacin1 los ha convertido en pequeos enclaves que prosperan de manera aislada (Janzen, 1986) o bien en zonas explcitamente conservadas pero muy poco perceptibles cuyo riesgo de deterioro y destruccin es alto (Mooney et al., 1995). De hecho la alarmante tasa de deforestacin2 e indiscriminado cambio de uso del suelo se consideran la principal fuerza de disturbio que determina la fragmentacin y el destino final de estos ecosistemas (Gillespie, 1999; Beltrn y Gonzlez, 2000). Entre las dinmicas de conversin Toledo et al., (1993), Ceballos y Garca (1995) y Maass (1995) matizan las destinadas para actividades agrcolas y de ganadera. En Latinoamrica Sabogal (1992) y Trejo (1995) reportaron a la Selva Baja Caducifolia (SBC, tambin denominada Bosque Tropical Caducifolio) como el tipo de comunidad vegetal ms extensa que ocupaba inmensas superficies desde el norte de
Basada en mltiples aspectos de ndole social, econmico, poltico y hasta ecolgico (Maass, 1995) 2 En comparacin con los dems ecosistemas terrestres de nuestro pas, la SBC presenta una de las tasas ms altas de deforestacin anual (Masera et al., 1992 a) estimada en 2.02% (Masera et al., 1992 b; 1997).
1

Panam hasta el noroeste de Mxico (Martnez-Yrzar et al., 2000), siendo en este ltimo donde su presencia llegaba a constituir el porcentaje ms alto de la vegetacin tropical (Trejo, 1998), la cual Masera et al., (1992 c) estimaban en alrededor del 8.3% de nuestro territorio, y de los que solo 3.7% an permanecen intactos (Trejo y Dirzo, 2000). De acuerdo con las conclusiones vertidas por Pennington y Sarukhn (1998), la SBC se puede considerar como el lmite trmico e hdrico de los tipos de vegetacin de las zonas clido-hmedas mexicanas, cuyo crecimiento y desarrollo es preponderante en la sombra de montaa de las costas del Pacfico debido a los vientos procedentes del noroeste y este (Murphy y Lugo, 1995). Son comunidades adaptadas a zonas con promedios de temperaturas anuales superiores a 20C y precipitaciones anuales de 1,200 mm como mximo (del orden de 800 mm), con una temporada seca que dura hasta 7 u 8 meses y es muy severa (Pennington y Sarukhn, 1998). En tales circunstancias Lott et al., (1987) y Flores y Gerez (1994) aprecian que dichas selvas tienden a ser florsticamente ms ricas que otros bosques neotropicales similares en virtud de que una proporcin de sus elementos proviene de linajes africanos, asiticos y caribeos actualmente extintos en sus lugares de origen, amn de que en ellas -refirindose especialmente a las carpetas boscosas que an se encuentran en el suroeste de Mxico- coinciden tanto la diversidad de especies como el nmero de endemismos que de inmediato las convierten en reas prioritarias para su conservacin (Gentry, 1995). Pese a la afirmacin de que de este tipo de vegetacin en realidad existe un inters bastante limitado en cuanto a las especies arbreas maderables que son solicitadas para su aprovechamiento industrial3 (Pennington y Sarukhn, 1968; 1998), cabe destacar que de entre los productos provenientes del bosque seco comercializados en los mercados regionales, nacionales e/o internacionales, estudios recientes sugieren
3

Conzattia multiflora y Amphipterygum adstringens (Bye, 1995).

que por lo menos 50 son las especies demandadas para satisfacer necesidades alimentarias, medicinales, condimenticias y de madera para la obtencin de lea (dendroenerga), as como para la construccin y la realizacin de actividades ms que nada artesanales (ebanistera) (Bye, 1995). Al respecto, Guzar y Cedillo (1996) aseveran que a las especies silvestres del trpico seco mexicano se les da al menos uno de los usos consignados en el Cuadro 1, de las que por lo menos citan a 116 especies sin tomar en cuenta su posible utilizacin para la satisfaccin de ms de una necesidad. Cuadro 1. Tipo de satisfactores que se han obtenido de plantas de la Selva Baja Caducifolia en Mxico. Usos conferidos a la flora til del trpico seco mexicano
Materias bsicas para el hombre Materias accesorias Alimento, fibras y maderas [ebanistera, construccin y combustible] Especias y perfumes, estimulantes, medicinas [flores, hojas, frutos, corteza, raz], ceremoniales, venenos, taninos y pigmentos Aceites secantes y jabones Diversas especies de la familia Poaceae (Gramineae), Fabaceae (Leguminosae) y Acanthaceae Algunas especies de la familia Papaveraceae y Anacardiaceae Especmenes de la familia Apocynaceae y Bombacaceae

Materias primas industriales Materias forrajeras

Plantas perjudiciales al hombre [txicas] Plantas ornamentales

Fuente: Guzar y Cedillo, 1996. La organizacin de las familias botnicas se ha redefinido en base a la clasificacin de Takhtajan (1997).

2.1.1. Composicin florstica de la Selva Baja Caducifolia

En opinin de Killeen et al., (1998), las sorprendentes respuestas adaptativas que las especies vegetales de la SBC han desarrollado en tan particular tipo de hbitat para soportar la severa escasez de agua que le caracteriza, no son fruto de la casualidad,

sino de un proceso evolutivo de varios miles de aos que ha permitido a las ms aptas colonizar aquellas regiones donde la sequa estacional por lo general es larga y pronunciada4 (Balvanera et al., 2000). Del mismo modo, los mencionados autores denotan que la importancia de las selvas secas no solo radica en su extensin, sino tambin por el nmero de especies de plantas que albergan, de las cuales en Mxico una elevada proporcin (70% [Trejo, 1998]) son de distribucin endmica (Rzedowski, 1991 a, b). Las reas donde aflora la SBC son esencialmente clidas y subhmedas (70% [Trejo, 1999]) (Cuadro 2), siendo las condiciones de temperatura y humedad determinantes al definir la presencia o ausencia de una especie en un sitio o hbitat dado (Dunson y Travis, 1991). Por otra parte, y aunque son muy variables los sustratos geolgicos de los que se derivan los parajes donde dichas formaciones vegetales se establecen, estas son frecuentes de localizar en terrenos de ladera bastante someros, con textura arenosa o arcillosa y fuerte drenaje superficial (Pennington y Sarukhn, 1998), que muestran una franca preferencia por los suelos poco profundos, calcreos y pedregosos de zonas cerriles que presentan laderas escarpadas de alta pendiente (Rzedowski, 1998). Los ms representativos son los regosoles y los litosoles que sostienen entre el 23 y 30% de estas comunidades caducifolias, respectivamente (Trejo, 1998). Bajo tales circunstancias, y considerando que las dems caractersticas edficas (como naturaleza de la roca madre gnea, metamrfica o sedimentaria marina-, pH de cido a ligeramente alcalino- y contenido de materia orgnica) del vasto territorio nacional pueden influir en la conformacin geogrfico-espacial y biodiversidad local de sus diferentes estratos herbceos, arbustivos y arbreos (Rzedowski, 1998),

Para Pennington et al., (2000), la distribucin de la selva baja caducifolia en los neotrpicos sobre todo obedece a las fluctuaciones climticas que prevalecieron durante el Cuaternario.

Trejo (1998) reporta a 76 familias5 como las ms representativas de las selvas bajas caducifolias de Mxico de entre las que por el aporte de especies neotropicales a su composicin florstica se hallan Fabaceae (Leguminosae) (159), Euphorbiaceae (85), Cactaceae (56), Asteraceae (Compositae) (49) y Burseraceae (48) en 17.0, 9.3, 6.1, 5.3 y 5.2%, respectivamente. Cuadro 2. Tipos de clima donde se establece ms de la mitad de la Selva Baja Caducifolia en Mxico. Superficie ocupada Tipo de clima Descripcin (%)
37.5 El ms seco de los subhmedos, con rgimen de lluvias de verano y cociente P/T menor que 43.2. El porcentaje de lluvia invernal est comprendido entre 5 y 10.2 respecto a la total anual. La temperatura media anual entre 18 y 22 C Clima semirido clido El menos seco de los semiridos BS, con (BS1) rgimen de lluvias de verano y P/T mayor de 22.9. Por el total de precipitacin anual el clima BS es intermedio entre los climas muy ridos (BW) y los hmedos (A y C). La temperatura del mes ms caliente superior a 18 C Clima clido submedo El primero intermedio entre Aw0 y Aw2, con (Aw1 y Aw2) rgimen de lluvias de verano y cociente P/T entre 43.2 y 55.3, y porcentaje de lluvia invernal entre 5 y 10.2 respecto a la total anual. El segundo el ms hmedo de los submedos, con rgimen de lluvias de verano y cociente P/T mayor de 55.3, y porcentaje de lluvia invernal entre 5 y 10.2 respecto a la total anual Clima semiclido Subgrupo semiclido proveniente del grupo subhmedo climtico A, el ms seco de los subhmedos [A(C) w0] con cociente P/T menor de 43.2. La temperatura media anual entre 18 y 22 C y la media mensual del mes ms fro es superior a 18 C Clido subhmedo (Aw0)

14.8

10.8

10.3

Fuente: Los datos (de tipos de clima y valor porcentual) fueron tomados de Trejo (1998; 1999), y su descripcin de Garca (1987), Zulueta (1993) y Soto et al., (1999).

La organizacin de las familias botnicas se ha redefinido en base a la clasificacin de Takhtajan (1997).

De la misma forma Trejo (1998) da a conocer que los rboles de la familia Fabaceae (Leguminosae) y Burseraceae predominan, y comparten sus espacios con los arbustos de Euphorbiaceae, Fabaceae (Leguminosae) y Asteraceae (Compositae), y las lianas y trepadoras de Bignoniaceae, Asclepiadaceae y Convolvulaceae, donde

Bursera y Acacia son los gneros mejor representados con 48 y 21 especies,

respectivamente.

2.1.1.1. Aspectos relevantes de Jacaratia mexicana A. DC.: Un rbol tpico de la Selva Baja Caducifolia en Mxico
Pese a la insistencia de Dirzo y Garca (1992) en considerar que los ecosistemas y sus recursos pueden y deberan- conceptualizarse desde una perspectiva estrictamente econmica ...como un capital ecolgico para poderlos ubicar en la lgica de la produccin y del consumo..., la SBC es una de las asociaciones vegetales que hasta el momento ha sido poco estudiada, a pesar de que sus rasgos bioecolgicos (clima-suelovegetacin) pueden proporcionar una creciente e incalculable cantidad de materiales que da a da nuestra sociedad reclama. En este sentido cabe destacar las mltiples e innumerables cualidades utilitarias que se le confieren al bonete (Jacaratia mexicana A. DC.), el cual es un componente arbreo tpico de la SBC que debido a la acelerada destruccin de su hbitat (Soriano

et al., 1975; Nieves, 1995) e imperceptible regeneracin natural restringen su mbito

de distribucin (Solares, 1991) y por ello se encuentra al borde de la extincin. Si bien la desaparicin de las especies surgidas en el planeta se considera un proceso natural (NRC, 1995; CNR, 2000), una de las medidas directas de las que depende la renovabilidad de J. mexicana es la inmediata conservacin de sus parajes con el propsito de que la diversidad biolgica prevaleciente en los fragmentos de selva baja que an se mantienen sin actividad antrpica en este pas garanticen el sustento y bienestar de las generaciones actuales y futuras. 10

2.1.1.1.1. Ecologa y distribucin

J. mexicana (Caricaceae) es una especie arbrea nativa del neotrpico (Caballero,
1992) y originaria de Mxico (Rzedowski y Equihua, 1987; Lpez y Xolalpa-Molina, 1997) considerada como un componente particular y distintivo de la SBC que puede estar presente en Selva Mediana Subperennifolia y Subcaducifolia (perturbadas) (Barrera, 1981) y/o formar parte de las asociaciones transicionales, en los puntos de contacto de la vegetacin templada y tropical de SBC, y del bosque de conferas y encino (INE/CONABIO, 1995). Para Pennington y Sarukhn (1968; 1998), la SBC constituye el lmite vegetacional trmico e hdrico de los tipos de vegetacin de las zonas clido hmedas. En cuanto a la distribucin geogrfica, esta formacin es particularmente caracterstica de la vertiente del Pacfico mexicano, pudindose encontrar en el extremo sur de Baja California y desde el sur de Sonora y suroeste de Chihuahua hasta Chiapas, as como en el Istmo de Tehuantepec y gran parte de la Depresin Central de Chiapas; mientras que en la vertiente del Atlntico se localizan tres manchones aislados (Rzedowski, 1998): 1) En el sur de Tamaulipas, sureste de San Luis Potos, extremo norte de Veracruz y noreste de Quertaro. 2) En el centro de Veracruz (entre Nautla, Alvarado, Xalapa y Tierra Blanca, incluyendo las inmediaciones del puerto de Veracruz). 3) En la parte norte de la Pennsula de Yucatn, donde ocupa la mayor parte del estado de Yucatn y una fraccin de Campeche. Tambin se reporta para la cuenca del Balsas, Morelos y Puebla (Pennington y Sarukhn, 1998), adems de numerosos y casi imperceptibles enclaves que se 11

intercalan en la zona de matorrales xerfilos localizados en Hidalgo, Quertaro, Guanajuato y San Luis Potos (Rzedowski, 1998).

2.1.1.1.2. Descripcin de la planta

El bonete (J. mexicana) es un rbol cuyo aspecto parece hacerle provenir de una poca remota de la cual no logr evolucionar (Rojas, 1999), descrito por Pennington y Sarukhn (1998) de la manera siguiente: Forma. rbol monopdico hasta de 15 m de altura, tronco cnico cilndrico y dimetro a la altura del pecho (dap) capaz de llegar a 1 m, con pocas ramas ascendentes u horizontales, frecuentemente en verticilos de 3 4 y copa relativamente pequea y poco densa. En rboles jvenes, el tronco da la impresin de ser un poste enterrado en el suelo, ya que el dimetro vara tenuemente en su base donde aparecen de vez en cuando ligeras proyecciones aplanadas, tubulares y angulares conocidas como contrafuertes. Corteza. Externa lisa, de color gris plomizo, que en ocasiones se desprende en pequeas escamas rectangulares cerca de la base del tronco, con anillos horizontales cada 10 a 20 cm. Interna de color crema, fibrosa, con expansiones considerables de parnquima, sin exudado. El grosor total de la corteza puede ser de 1.5 a 2 cm. Barajas-Morales y Len (1989) reportan la presencia de cuantiosas lenticelas de 2 a 3 mm de color gris claro brillante o caf claro o parduzco, a veces organizadas en hileras longitudinales o dispersas, con 8 a 10 mm de espesor total. Madera. De color blanco cremoso, con un alto contenido de agua, esponjosa y blanda, con rayos grandes y bandas gruesas de parnquima paratraqueal. Las caractersticas anatmicas descritas en detalle por Barajas-Morales y Len (1989) son:

12

Caractersticas macroscpicas. Recin cortada se aprecia como un tejido blanquecino exageradamente frgil y acuoso que al secarse prcticamente desaparece, no existiendo la madera como tal. La cualificacin asignada por los citados autores basndose en su color, olor y sabor, lustre, textura, grano, dureza, veteado o figura y anillos de crecimiento se anota en el Anexo 1. Caractersticas microscpicas. En este caso fueron definidos: a) Los vasos, con porosidad difusa, poros circulares, solitarios y en grupos radiales de 2 y 3, muy escasos, 2/mm y algo grandes con dimetro tangencial de 230 m en promedio. Sus elementos (de vaso) son cortos con longitud promedio de 254 m (188-329 m), platina de perforacin simple y transversal, puntuaciones intervasculares opuestas o alternas, muy grandes, con promedio de 18 m de dimetro y algunas muy alargadas de hasta 75 m, formando un retculo. b) El parnquima axial, como el elemento ms profuso de todo el tallo, se distingue como paratraqueal vasicntrico y apotraqueal en bandas uniseriadas debido al menor tamao de sus clulas; con series de 2 a 3 clulas. c) El parnquima radial, donde los radios son poco frecuentes, 2/mm, homogneos, multiseriados de 10 o ms series, formados de clulas procumbentes. Son muy altos, con altura promedio de 3,330 m y difciles de distinguir en la cara tangencial debido a que se confunden con el parnquima axial. Como en este caso no se presentan fibras, se considera como el motivo principal al que se debe la fragilidad del tallo. Pese a ello, su ausencia en el xilema secundario parece ser compensada por gran cantidad de paquetes de fibras en la corteza que, aparte de su grosor, seguramente contribuye a la funcin de sostn del tronco6 (Anexo 1).
En este caso, los habitantes de una determinada comunidad rural conciben la altura de esta especie (hasta 10 15 m) porque su tallo, no maderable, es rollizo.
6

13

Ramas jvenes. Gruesas, lisas, gris plomizo, con lenticelas plidas y grandes cicatrices dejadas por las hojas cadas; al cortarse, las ramas producen un exudado pegajoso de color crema. Hojas. Yemas desnudas, pequeas, glabras, estipulas ausentes. Hojas dispuestas en espiral y aglomeradas en las puntas de las ramas, digitado-compuestas, de 20 a 30 cm de largo incluyendo el pecolo, compuestas de 4-6 fololos, de 5 x 3 a 14 x 6 cm, elpticosa u obovados, con el margen entero u ondulado, pice acuminado, base atenuada, verde claro en el haz, verde plido opaco en el envs; glabras, con escasas y pequeas glndulas estipitadas en los nervios en el envs; pecolos de 4 a 15 cm de largo, glabros, ligeramente pulvinados en la base; pecolulos de 1 a 2 cm de largo, glabros, a veces con una pequea glndula entre la base de cada pecilulo en el envs. Los rboles de esta especie pierden sus hojas en la poca seca. Flores: Especie dioica; flores masculinas en panculas glabras de hasta 10 cm de largo, aglomeradas en las puntas de las ramitas; las femeninas solitarias, flores fragantes, pedicelos de las flores masculinas de 2 mm de largo, pedicelos de las flores femeninas de 2.5 cm de largo, gruesos; flores masculinas de ca. 1.5 cm de dimetro, actinomorfas; spalos 5, ca. 0.5 mm de largo, ovados, con pelos diminutos; ptalos de color verde en la cara exterior, verde cremosos plido en la interior, contortos, 5, ca. 7 mm de largo, oblongos, recorvados, unidos en la parte inferior en un tubo de 1 a 1.2 cm de largo; estambres 10, de color amarillo plido, insertos en 2 series en el cuello de la corola; ovario rudimentario; flores femeninas con ptalos libres, gruesos, de color verde plido, de 3 a 3.5 cm de largo y de hasta 4.5 cm en flores ms viejas, estambres ausentes; ovario spero, verde, hinchado, de hasta 2 cm de largo, formado de 5 carpelos unidos, cada carpelo con muchos vulos; estilo grueso, de hasta 5 mm de largo, con 5 estigmas de color verde plido, ca. 1 cm de largo, torcidos en espiral. Florece de noviembre a febrero, poca en la que entran en escena sus polinizadores: los insectos (Bullock, 1994).

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Frutos. Baya carnosa, pndula, de hasta 15 x 7 cm, de color verde, pice agudo, base truncada, con 5 ngulos o alas laterales; al cortarse producen abundante exudado cremoso pegajoso, y maduran de enero a abril7. Por lo grande y abombados que son hacia abajo, y las costillas delgadas que forman hacia arriba, lo hacen semejar a un bonete8 (Rojas, 1999), trmino del cual procede el nombre vernculo del rbol. En cuanto a las semillas, Moreno (1980) indica que son numerosas y ovoides, de 6 a 7 mm de largo por 4 a 5 mm de ancho (en estado seco), con la esclarotesta moreno clara y lisa. Los conteos realizados durante los primeros cuatro aos de esta investigacin, permiten inferir que cada fruto llega a producir en promedio 500 semillas, las cuales muestran una viabilidad muy alta, cercana al 98%, an despus de seis meses de haber sido separadas de la pulpa y sarcotesta, oreadas en sombra, y mantenidas en oscuridad a 20C.

2.1.1.1.3. Posicin taxonmica

De acuerdo con el Instituto Nacional de Biodiversidad (INBio, 1997), la jerarqua taxonmica de esta especie es la siguiente: Reino Filo Clase Orden Familia Gnero Especie Autor Plantae Magnoliophyta Magnoliopsida (Dicotilednea) Violales Caricaceae

Jacaratia J. mexicana
A. DC. (abreviacin de su nombre)

Sinonimias: Carica mexicana (A. DC.) L.O. Williams, Leucopremna mexicana (A. DC.) Standl. y Pileus mexicanus (A. DC.) I.M. Johnst.) (Moreno, 1980; Missouri Botanical Garden, 2002).
7

Periodo que al menos para las reas de la vertiente del Atlntico recorridas ms bien coincide con el indicado por Daz-Luna y Lomel-Sencin (1997): Diciembre a julio. 8 Prenda de varias hechuras y comnmente de cuatro picos que era usada en la antigedad por eclesisticos, colegiados y graduados para cubrir y abrigar su cabeza.

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2.1.1.1.4. Usos tradicionales, actuales y potenciales

A pesar de la notable importancia utilitaria que estas selvas del trpico pueden tener en cuanto a la apropiacin de su flora regional se refiere (Cuadro 1), parece que hasta el momento solo han logrado llamar la atencin del hombre el henequn (Agave fourcroydes Lem.), por la calidad textil de sus fibras y empleo rutinario en la medicina tradicional), el linaloe (Bursera aloexylon [Schiede] Engl., por su madera aromtica muy justipreciada en artesanas, as como por la esencia que posee y emplea para la fabricacin de perfumes) y el cuachalalate (Amphipterygium

adstringens Schiede ex Schltdl), por las cualidades medicinales de su corteza y races,

y las comestibles del pedicelo alado de sus frutos (Rzedowski y Equihua, 1987; SARH, 1994). Sin embargo y a pesar de que este bosque guarda sorprendentes secretos que poco a poco se podran ir descubriendo, como es el caso del tepescohuite (Mimosa

tenuiflora [Willd.] Poir.) de amplio uso medicinal (SARH, 1994) y alto potencial
forrajero (Barbosa, 1995), la acelerada desaparicin e irreparable afectacin que las selvas secas sufren en la nacin es indiscutiblemente lamentable. Con relacin a J. mexicana, y a pesar de que es una planta cuyo uso se reporta como restringido, histricamente se le ha mencionado como medicinal (Lpez y XolalpaMolina, 1997), y no fue sino a partir de los inicios de la Colonizacin Espaola en Mxico (siglos XVI-XVII) que adquiere cierto estatus econmicamente importante junto con Guazuma ulmifolia, Psidium guajava, Pouteria sapota, Ehretia tinifolia,

Acrocomia mexicana, Annona sisalana, A. purpurea, A. reticulata, A. squamosa y Byrsonima crassifolia, entre otras (Caballero, 1992). En el Cuadro 3 se consignan
algunas de las formas peculiares de uso que el hombre ha dado, y sigue procurando, a esta cariccea.

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Cuadro 3. Tipo de satisfactores que se han obtenido de Jacaratia mexicana en Mxico. Usos tradicionales
Alimentarioa, c, i, j, l, o, p, r: El fruto tierno se utiliza como verdura (caldos y guisos), y cuando est en sazn se le asam para consumir de temporada. Las semillas de un fruto maduro se pueden saborear tostadask. La baya se utiliza para hacer dulces y conservasb. El tallo rayado, reducido a polvo y mezclado con la masa de maz serva para el disfrute cotidiano y bienestar de los antiguos mayasn. Las tortillas as preparadas eran consideradas como un alimento con mayor aporte nutritivoh y, sin combinar, J. mexicana es un buen sustituto de la gramnea para preparar la masa y hacer las tortillasq. No obstante, es una costumbre que al parecer ha cado en desuso. En el Mxico prehispnico las hojas eran utilizadas por los tlahuicas (en Guerrero) y los olmecas (en Oaxaca) para envolver la carne de los animales cazados y, con esto, conseguan ablandarlasg. Actualmente, el abundante ltex que esta especie produce se sigue usando en la cocina para suavizar las carnese. Forrajerod: Las hojas, tallos y frutos son consumidos por equinos, bovinos y porcinosc, as como por los animales criados en el solar. Combustible: Para lear. Medicinalc: Los frutos se emplean como remedio casero en casos de estreimiento, dolor de cabeza y afecciones en los ojos producidas por las cataratasf (opacidad del cristalino o de sus membranas). Para el tratamiento de fuegos en la boca y afecciones de la piel que se relacionan con varios padecimientos drmicos, donde est implicada una erupcin cutnea; popularmente se le emplea en el trato de tlacotes, nacidos, granos enterrados y salpullido, entre otros, cuyas causas pueden ser picaduras de insectos, alimentos en mal estado, aireo o enfriamientos. Se reportan propiedades antihelmnticas en el ltex de J. mexicana, por la mexicana contenidab (o sea, como agente que expulsa o destruye los gusanos intestinales, ya sean scaris, oxiuros o tenias), y se le administra como remedio para la dispepsia. Esta planta es protegida en huertos familiaresm y en parajes naturales donde los frutos recolectados son para autoconsumo, o bien se les vende en los mercados locales y regionales.

Usos potenciales
Farmacutico-industriales: En virtud de que el fruto y las hojas contienen ltex con gran actividad proteoltica (proteasa aislada llamada mexicana), superior a la de la papana de Carica papaya, sus proteinasas pueden ser utilizadas en la industria alimentaria, cervecera y textil, entre otrasg. Fuente: Modificada y adaptada de Zulueta et al., (1998). En el presente estudio se aadieron los siguientes autores: aRamrez (1991), bGallardo et al., (1992), cFlores y Acosta (1998), dAvendao y Snchez (1999), eRojas (1999), fFlores et al., (1997), gCorts y Briones (1991), hDIF (1992), iLpez y
m

Xolalpa-Molina (1997), jVzquez y Cuevas (1995), kPennington y Sarukhn (1998), lBenavides (1995), Herrera (1994), nMoreno (1980), Daz-Luna y Lomel Sencin (1997), oSouza (1935), pSouza (1945), q Barrera et al., (1977), y rCastillo-Campos et al., (1997).

17

2.1.1.1.5. Estatus actual

Nieves (1995) considera a J. mexicana un espcimen vulnerable a la desaparicin debido precisamente a la elevada tasa anualizada de devastacin de su hbitat, as como a su casi nula reproduccin natural. En el Cuadro 4 se apuntan algunos factores a los que se atribuye mantener a esta especie al borde de la extincin. Con relacin al primero de los puntos asentados Bullock (1981) asevera que la fecundidad en J. mexicana no depende tanto de su tamao, sino ms bien de su xito en la polinizacin y acumulacin de nutrimentos. Cuadro 4. Factores que favorecen la erosin gentica en Jacaratia mexicana. J. mexicana necesita varias polinizaciones para lograr la produccin mxima de
semillas, lo cual frecuentemente no sucede (Nieves, 1995). Al respecto Mack (1997) afirma que si hay una baja densidad de individuos dioicos en un fragmento de selva, como a menudo ocurre con esta especie, hay una probabilidad alta que la polinizacin no se lleve a cabo. Meave y Kellman (1994) han sugerido que la fragmentacin puede tener un efecto nocivo en las plantas dioicas (J. mexicana tiene flores imperfectas. O sea, flores masculinas y femeninas en diferentes individuos), separacin de sexos al parecer desventajosa en hbitats aislados. Ampliacin de la frontera agrcola y ciclos agrcolas de uso intensivo que directa o indirectamente se convierten en factores de deterioro y destruccin de los ecosistemas tropicales. Disturbios antropognicos tales como obtencin de lea, fuego y apertura de reas destinadas para la ganadera (Murphy y Lugo, 1986; Trejo y Dirzo, 2000).

De la misma forma Baker (1976) considera que la actividad de insectos pequeos como vectores (p. ej. mosquitos, moscas y trips) suele ser mejor para una flor pistilada, a diferencia del dao que a sus estructuras femeninas florales pudieren llegarle a inferir otros de porte mayor como seran las abejas y las mariposas. Adems, las observaciones hechas durante la recoleccin de frutos de J. mexicana (1998-2001) en diversos parajes de SBC localizados en el estado de Veracruz

18

consienten la formacin de conjeturas relacionadas con el impacto real que la herbivora pudiese tener durante la fase inicial de establecimiento de sus plntulas en general, as como en la particular sobrevivencia de las mismas en estadios posteriores.

2.2. Diversidad de los hongos formadores de micorriza arbuscular en los ecosistemas terrestres
A pesar de que la compatibilidad mostrada entre las plantas y los HMA a travs del tiempo encuentra fuertes evidencias evolutivas que la convierten en un fenmeno interactivo de ndole ancestral (Pirozynski y Malloch, 1975; Koske et al., 1985; Pankow et al., 1991 a; Gianinazzi-Pearson, 1996) que se remonta a ms de 400 millones de aos (Remy et al., 1994; Dodd et al., 1996; Parniske, 2000; Redecker et

al., 2000 b; Franken y Requena, 2001) y fue utilizado como un instrumento eficaz
para poblar la superficie terrestre (Fitter, 1985; Simon et al., 1993; Selosse y Le Tacon, 1998; St. John, 2000; Heckman et al., 2001; Redecker, 2002), an hace falta precisar el papel de estas asociaciones en los diversos ecosistemas que conforman el planeta. Basndose en estudios realizados sobre la filogenia e historia evolutivo-interactiva de los HMA9 con las plantas primigenias, Kenrick y Crane (1997) y Redecker et al., (2000 a; 2000 b) deducen que los hongos micorrizgenos ancestrales -que probablemente pertenecieron al gnero Glomus (Simon et al., 1993)- aparecieron hace unos 480 a 460 millones de aos, en el perodo Ordovcico de la Era Paleozoica inferior10, junto

Denominacin que Walker (1992) y St. John (2000) asumen ms apropiada de utilizar en atencin a que las vesculas no son estructuras universales en las colonizaciones formadas por los hongos Glomales, pero que a veces sigue siendo referida en la literatura como vesculo-arbuscular (Fitter y Moyersoen, 1996). 10 Aunque todava son de suma importancia los fsiles encontrados por Stubblefield et al., (1987) en los estratos Trisicos de la Antrtica (Era Mesozoica) porque muestran a los arbsculos perfectamente estructurados y organizados, tal y como ahora se conocen.

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con las plantas vasculares ms viejas que se establecieron sobre la superficie terrestre: las Psilophytales (Butler, 1939). Si este binomio ha evolucionado desde entonces para formar una valiosa simbiosis (Fries et al., 1997; Barker et al., 1998) que por lo general es positiva (Lewis, 1973) y se le considera cosmopolita (Abbott y Gazey, 1994; Jackson y Taylor, 1996), resulta pertinente asentar que los patrones de diversidad en todos los niveles organizacionales evocan un equilibrio paulatino y coevolucin de los micobiontes y su pareja vegetal que les confiere una alta probabilidad de sobrevivir a travs del tiempo geolgico y del espacio (Morton et al., 1995; Barker et al., 2002). Si bien en la actualidad se estima que existen cerca de 150 especies de HMA descritas en todo el mundo (Walker, 1992), muy poca es la informacin relacionada con su riqueza y abundancia en la mayor parte de los ecosistemas naturales (Brundrett y Abbott, 1995). Sin embargo evidencias obtenidas a partir de estudios morfolgicos de las esporas permiten inferir la posibilidad de encontrar entre 5 y 20 especies diferentes en una determinada comunidad (Sanders et al., 1996). En Mxico la diversidad taxonmica de los HMA ha sido pobremente estudiada, y por ello nicamente se conocen 44 especies de hongos registrados ms que nada de sistemas agrcolas (establecidos en 11 estados de nuestro territorio nacional), de las cuales solo siete de ellas han sido citadas de ambientes naturales (Varela y Trejo, 2001). Asimismo las mencionadas autoras apuntan que en la SBC se ha reportado Glomus

gerdemanii Rose, Daniels & Trappe G. glomerulatum Sieverding y G. magnicaule Hall

para Jalisco, y G. intraradices Schenck & Smith para Jalisco y Tlaxcala. Por tal motivo, y sobre todo porque los ecosistemas del trpico seco estn siendo transformados de manera alarmante, urge se intensifique la exploracin taxonmica de sus HMA.

20

En dicho tenor Morton et al., (1995) sugieren efectuar la identificacin precisa de las especies de HMA para definir su composicin a escala regional o local, y Ohtonen et

al., (1997) consignan la imperiosa necesidad de conocer y describir la diversidad

biolgica de los suelos, toda vez que las comunidades de macro y microorganismos que los conforman son elementales en el funcionamiento de casi todos los ecosistemas (van der Heijden et al., 1998 a).

2.3. Funcin de los hongos formadores de micorriza arbuscular en las comunidades vegetales
Aunque al parecer todava se carece de una definicin clara del trmino micorriza, Fitter y Moyersoen (1996) y Slezack et al., (1999) se concretan a considerar que esta es una interaccin biotrfica ante todo sostenible, y no patognica, entre un hongo y una raz. Del mismo modo, se hacen estudios cada vez ms minuciosos para esclarecer si bajo condiciones apropiadas ocurre una asociacin preferencial entre ciertos HMA y sus hospederos (Sylvia, 1988; Sieverding, 1989; Peterson y Farquhar, 1994) donde la unin se regule recproca y hermticamente tanto a niveles estructurales como fisiolgicos (Ruiz-Lozano et al., 1995; Kapulnik et al., 1996). Por el momento autores como Schepp et al., (1994), Killing y Jacobsen (1998) y Bidartondo et al., (2002) aseguran que dichos endosimbiontes son capaces de asociarse con gran cantidad de plantas (entre 225,000 y 240,000 segn Law y Lewis [1983] y Bonfante y Perotto [1995]), situacin que en la mayora de los casos representa su estado natural de crecimiento en un suelo donde las races no tienen la plasticidad morfolgica requerida para la absorcin discreta de los nutrimentos disponibles (Tibbett, 2000). A pesar de que ciertas especies de HMA son eficaces al asociarse con un hospedero en particular (St. John, 1996 a; del Val et al., 1999; Boucher et al., 1999). Autores 21

como Richardson et al., (2000) indican que de existir dicha cualidad hospederopreferencial muy pocas seran las plantas comprometidas en una relacin micorrzica donde sus socios fngicos fuesen realmente especficos. Si bien es cierto que ha progresado el conocimiento sobre algunos de los mecanismos que regulan la accin recproca entre ambos socios durante la simbiosis (Gianinazzi y Gianinazzi-Pearson, 1994; Solaiman et al., 1999; Toro et al., 2000; Ruiz-Lozano y Azcn, 2000), las evidencias disponibles son ms que suficientes para concluir que a pesar de la indiscutible complejidad del fenmeno y del alto costo energtico que la asociacin representa para la planta, esta parece tener carcter mutualista en la mayora de las ocasiones (Lewis, 1973; Fitter, 1991; Chacn y Cuenca, 1993; Harrison et al., 1999; Eom et al., 1999; Herre et al., 1999), pues en muchos de los ecosistemas terrestres y en una amplia variedad de hbitats predominan las plantas micotrficas (Brundrett, 1991; Brundrett y Abbott, 1991; St. John, 1996 b). Para Fitter (1989, 1991), Gianinazzi-Pearson et al., (1994) y Hodge et al., (2000) los hongos micorrizgenos ms comunes en casi todas las zonas climticas del mundo son los arbusculares, opinin compartida por Lingua et al., (1999) al aseverar que este tipo de micorriza se encuentra ampliamente reconocida en la colonizacin radical de infinidad de plantas con las cuales forman una relacin simbitica tan ntima que, al ser mantenida en la naturaleza por al menos 90% de sus componentes (Fontana, 1998; Perry et al., 1989; Bagyaraj, 1991; Lanfranco et al., 1997; Schachtman et al., 1998; Sahai, 1999; Tsimilli-Michael et al., 2000; Diouf et al., 2003), es improbable que no participen dentro de los procesos funcionales de una comunidad (Fitter, 1989; St. John, 1998; 2000). La literatura cientfico-especializada reporta que los efectos de esta asociacin mutualista en la fase de crecimiento vegetativo y reproductivo de las plantas son mltiples (Stanley et al., 1993; Lu y Koide, 1994).

22

As se ha concluido que el micelio hifal de los HMA no solo interviene en la agregacin de las partculas del suelo11 (Douds y Millner, 1999; St. John, 2000; Miller y Jastrow, 2000) y la funcionalidad de los ecosistemas terrestres (Sanders y Fitter, 1992 a; Ewel, 1987; Franken y Requena, 2001), sino tambin en la adquisicin ms apropiada de agua y nutrimentos12 de algunos de sus componentes florsticos (Marschner y Dell, 1994; Klopatek 1995, Smith y Read, 1997; Lapointe y Molard, 1997; Dickson et al., 1999 a). La simbiosis puede llegar a conferir a las plantas tolerancia a la sequa13 (Safir et al., 1971; Sylvia y Williams, 1992; Sylvia et al., 1993 b; Ruiz-Lozano et al., 1995; Cruz et

al., 2000) y a la salinidad (Bagyaraj y Varma, 1995; Ruiz-Lozano y Azcn, 2000),

proteccin contra hervibora (Janos, 1980 a; Pedersen y Sylvia, 1997; Gange y Bower, 1997; Gange y Brown, 2001), iones txicos (Garbaye, 1991; Read, 1991; Dugassa et al., 1996) y ataque de agentes patgenos del suelo (Trufem y Bononi, 1985; Caron et al., 1986; Nilsson et al., 1995; Torres-Barragn et al., 1996; Norman et al., 1996; Sylvia, 1999; Elsen et al., 2001; Larsen y Bdker, 2001; Forge et al., 2001). Del mismo modo se ha demostrado que al formarse la micorriza se reduce en un alto grado el estrs ambiental que predispone a la planta a las enfermedades (Allen, 1982; Fitter, 1989; Azcn-Aguilar y Barea, 1997; Bratek et al., 2002), se modifica el nivel endgeno de las fitohormonas relacionadas con el crecimiento vegetal (Hetrick, 1991; Hirsch et al., 1997; Solaiman e Hirata, 1997) y se adecua la capacidad fotosinttica del hospedero para satisfacer la demanda de carbono que existe al

Donde la glomalina que el sistema hifal produce une a las partculas minerales entre s y a las races para mantener la estructura de los suelos (Wright y Upadhyaya, 1998; St. John, 1998; Rillig et al., 2001). De acuerdo con Tisdall (1994), una hifa micorrzica es virtualmente estabilizadora de microagregados cuando su dimetro es > 250 m. 12 Ms que nada los poco mviles (Gianinazzi-Pearson y Azcn-Aguilar, 1991; Guo et al., 1996; Ortas et al., 1996; Hinsinger, 2001; Ferrol et al., 2002) o de lenta difusin en los suelos (George et al., 1992). 13 La cual es inducida por la especial absorcin de fsforo (P) que efectan las plantas micorrizadas (Huang et al. 1985; Nelsen 1987).

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asociarse con estos hongos (Kucey y Paul, 1982; Dighton y Mason, 1985; Graham et

al., 1991; Louche-Tessandier et al., 1999).

A pesar de lo asentado con antelacin, Francis y Read (1995) y Franken y Requena (2001) hacen notar que expertos en la biologa de estos micobiontes reconocen la presencia de circunstancias especiales donde no existen obvios beneficios para uno de los socios, contexto que se ha observado cuando: 1) Las plantas se encuentran demasiado colonizadas (Gange y Ayres, 1999)14, 2) La interaccin ocurre en suelos frtiles (Kiernan et al., 1983; Frey y Ellis, 1997) o cuando los niveles de P son altos (Graham y Abbott, 2000; Sylvia et al., 2001; Pardi et al., 2002), 3) Los hongos micorrizgenos reciben pocas retribuciones energticas tras asociarse con races de plantas clorticas (Leake, 1994), o 4) El costo-beneficio de la simbiosis se haya desequilibrado, tal y como ocurre en la mayora de los suelos txicos (Enkhtuya et al., 2000). Por ello Francis y Read (1995), Berta et al., (1995) y Feldmann et al., (1998) denotan la conveniencia de detectar la influencia real o potencial de los HMA en la morfogenesis y/o en las respuestas fisiolgicas de las plantas. En este tenor resulta conveniente recordar las observaciones de Lambert et al., (1980); las de George et al., (1994), Ravnskov y Jakobsen (1995), del Val et al., (1999), Rajan et al., (2000) y Siqueira y Saggin-Jnior (2001); y las de Blanco y Salas (1997) y Bethlenfalvay et al., (1999), ya que para los primeros la eficiencia neta del provecho que las plantas logran obtener en una asociacin con cierto tipo de HMA depende de un conjunto particular de condiciones edficas y ambientales; para los segundos la eficiencia del micobionte puede variar de acuerdo con la interaccin entre ambos factores con un determinado husped, y para los terceros la repuesta de

Esto en virtud de que algunos autores han propuesto que la relacin entre el beneficio de la planta y la colonizacin de los HMA sigue una funcin curvilnea (Gange y Ayres, 1999), pero que de ninguna manera puede ser acogida como una regla (Hurst et al., 2002).

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las plantas a los HMA puede ser influida por la micro y macrobiota del suelo con las cuales interacta el micelio de los endosimbiontes. En consecuencia y sin contradecir que una simbisis micorrizgena puede conexionarse con los factores citados (Watkinson, 1998; Zangaro et al., 2000) o la combinacin de estos durante el desarrollo de las plantas (Grime et al., 1987), Johnson et al., (1992 a) y Francis y Read (1995) consideran extraordinario que la asociacin conlleve algn efecto benfico en las plantas que, tal y como se indic previamente, no puede calificarse como un hecho consumado (Francis y Read, 1994; McGonigle y Miller, 2000). Las evidencias hasta ahora conocidas sugieren que la biotrofa entre los hongos y las plantas no solo influye sobre la capacidad nutricia (competitividad) de la hospedera (Gange et al., 1990; Wilson y Hartnett, 1997; Maldonado-Mendoza y Harrison, 1999; Freckleton y Watkinson, 2000; Sylvia et al., 2001) y la funcionalidad de los ecosistemas (Molina et al., 1992; St. John, 1996 a), sino tambin incidir en la diversidad biolgica de la comunidad vegetal (Helgason et al., 1998; van der Heijden

et al., 1998 b; Eriksson, 2001; Bever, 2002).

La simbiosis micorrizgena establecida en ocasiones es tan estrecha e ntima que en un momento dado pudiere ser referida en trminos de especificidad ecolgica o compatibilidad funcional entre diferentes especies de plantas y HMA (Tommerup, 1988; McGonigle y Fitter, 1990; Read, 1998; Smith et al., 2000), o bien contrastar con los reportes donde se asevera que ms bien son las primeras las que determinan la composicin y actividad de los segundos (Johnson et al., 1992 b; Wardle et al., 1997).

2.3.1. Trascendencia de los estudios ecolgicos en una asociacin endomicorrzica

La importancia ecolgica de la micorriza arbuscular est avalada ms que nada por su presencia en prcticamente todos los climas y suelos de la tierra, donde el 25

funcionamiento adecuado de cada ecosistema en gran medida depende de la actividad microbiana que en ellos se verifica (Srivastava, 1992; St. John, 2000). De esta manera no solo el ciclo biogeoqumico de los nutrimentos es propulsado por los microorganismos, sino que adems los componentes microbiticos del suelo protagonizan diversas acciones que la mayor parte de las veces producen beneficios para las plantas con las que se asocian (Hflich et al., 1994; Goverde et al., 2000). La simbiosis mutualista establecida con los HMA del suelo usualmente involucra la colonizacin biotrfica de una raz de la cual, poco a poco y sin causar dao alguno a la planta husped, llegan a ser fisiolgica y morfolgicamente parte integrante, (Carneiro et al., 1998; Rausch et al., 2001). As el micelio externo, desarrollado y funcionando a modo de sistema radical complementario y altamente eficaz (Pfeffer et al., 1999), incrementa el volumen total de suelo explorado (Bentivenga et al., 1997; Xavier y Germida, 1999) a tal grado que se le considera como la parte metablicamente ms activa de absorcin de las plantas (Kling y Jakobsen, 1998). Sin embargo en reciprocidad el hetertrofo requerir de un intercambio permanente de seales (Gianinazzi-Pearson, 1996; Vierheilig et al., 1998), del suministro continuado de nutrimentos y energa (Valentine

et al., 2001) y de un nicho ecolgico protegido e ideal dentro de la raz hospedera

para que el micobionte pueda desempear debidamente su funcin (Vierheilig et al., 2000 a). Para Pankow et al., (1991 a) la importancia ecolgica de las micorrizas radica ms que nada en la funcin que las mismas deben tener en las etapas finales de una sucesin al intervenir en el ciclaje de los nutrimentos y prevenir la prdida de recursos dentro de un ecosistema que, hasta antes de alcanzar su clmax, se encuentra en vas de crear, controlar y estabilizar sus propias condiciones microclimticas y edficas (Pankow et al., 1991 b). 26

Es precisamente dentro de las fases terminales de la sucesin donde la mayor parte de los recursos disponibles en un ecosistema se han incorporado en la biomasa y, por lo tanto, los recursos restantes sern usados principalmente para el mantenimiento y la proteccin de las perturbaciones (Loreau et al., 2002). De ah la pertinencia en resaltar que el principal significado ecolgico de la simbiosis micorrzica radica en salvaguardar la dinmica funcional del ecosistema (Pankow et

al., 1991 b), papel que por su naturaleza interactiva (factores biticos, abiticos,
tiempo y espacio) es compleja de valorar (Titus y Leps, 2000).

2.3.1.1. Relacin entre los hongos formadores de micorriza arbuscular y las especies forestales
En cuanto a la adaptabilidad ambiental se refiere los HMA se caracterizan por su amplia distribucin y gran plasticidad para el uso de los recursos disponibles, de tal forma que especies fngicas similares pueden encontrarse en parajes donde el clima, la vegetacin y el tipo de suelo son distintos (Rosendahl y Sen, 1994; Sanders et al., 1996). Asimismo es indudable que las asociaciones micorrzicas ah presentes juegan un papel crucial tanto en la nutricin mineral de las especies forestales, como en los mecanismos de conservacin de los elementos biogeoqumicos de los ecosistemas (Redhead, 1980; Janos, 1983). Por tal motivo no debe causar extraeza que las plantas tiendan a mostrar una variada gama de habilidades [o estrategias ecofisiolgicas] que con frecuencia les permiten asociarse con aquellos hongos de la rizsfera que de una u otra manera les son tiles, y por esta razn se ha sugerido que la composicin de una comunidad vegetal puede hallarse estrechamente relacionada e influida por los hongos micorrizgenos presentes en un ecosistema (Janos, 1980 a; Newsham et al., 1995 a), los cuales en un momento dado pudieren llegar a mostrar una colonizacin preferencial hacia un hospedero (Bever et al., 1996; Douds y Millner, 1999), y por 27

eso la magnitud en la cual este se beneficia depende de las especies fngicas involucradas en la simbiosis (Miller et al., 1987; Boerner, 1992; Hodge, 2000). As el efecto de la micorriza sobre la capacidad competitiva de una planta en las distintas etapas cronosecuenciales de una sucesin puede ser determinante (Janos, 1980 b; Gange et al., 1993; Tisserant et al., 1998; Titus y del Moral, 1998).

2.3.1.2. Interactividad entre los hongos formadores de micorriza arbuscular y las plantas tropicales
De acuerdo con Janos (1980 b; 1983), Pritchett y Fisher (1987) y Zangaro et al., (2000), los HMA juegan un destacado papel en el proceso de sucesin natural de los biomas tropicales al participar en el establecimiento de especies vegetales donde los suelos presentan una fertilidad y disponibilidad de fsforo (P) bajas (Diop et al., 1994; Newsham et al., 1995 b). Aun cuando las condiciones ambientales y de compleja adaptabilidad son reinantes en el trpico (Toledo, 1976; Garca, 1976) y la baja disponibilidad de nutrimentos en sus suelos favorece el establecimiento de una simbiosis micorrizgena (Pritchett y Fisher, 1987), el patrn para formar asociaciones especializadas con determinados HMA podra considerarse las ms de las veces raro (Molina et al., 1992; Cannell et al., 1997; 1998). De esta manera las especies de esas reas boscosas que son susceptibles a la colonizacin y dependen de la la formacin de micorrizas para su crecimiento adecuado mejoran el funcionamiento de su sistema radical (Barker et al., 1998; Moyersoen et al., 2001; van der Heijden y Kuyper, 2001) y la habilidad para adquirir sus nutrimentos (Janos, 1983). As la presencia de los HMA parece ser crucial para el incremento de la biomasa (Howeler et al., 1987; Burgess et al., 1994; Toro et al., 1997; Munyanziza et al., 28

1997) y el mantenimiento de los ms altos ndices de diversidad en bosques tropicales no perturbados (Lodge et al., 1996 b), lo cual es una realidad apreciable en todo el mundo (Malloch et al., 1980; Ortega, 2001). Sin embargo las plantas que son mictrofas obligadas dependen del suministro de productos derivados de la fotosntesis (carbohidratos) para conservar una apropiada simbiosis micorrzica (Lesica y Antibus, 1990; Rivas y Warner, 2000; Zangaro et al., 2000), de tal modo que el costo energtico de la mutualidad a menudo se convierte en un requerimiento ineludible para la planta husped (Brundrett, 2002). Mas en opinin de Kitajima y Fenner (2000) y Hurst et al., (2002), hay veces que las plntulas en la sombra dependen ms de las bajas concentraciones de P en el suelo y de su adecuado suministro para su sobrevivencia, en comparacin con la irradiacin requerida para concretar su fotomorfognesis (Aphalo y Lehto, 1997). Janos (1980 a) afirma que mientras las especies arbreas del nivel emergente y del dosel de un bosque maduro tienden a ser obligadamente micotrficas15, muchas de las especies vegetales pioneras y de las etapas sucesionales tempranas son facultativamente micotrficas o no micorrzicas y, por lo tanto, su establecimiento es ms exitoso donde el disturbio fue suficiente para eliminar o reducir la presencia de los HMA en el suelo (Francis y Read, 1995). En dicho tenor Janos (1980 a; 1983) considera que las especies tropicales leosas fuertemente dependientes de los HMA con regularidad despliegan un formidable sistema radical que aumenta al mximo sus probabilidades de hospedar al micosimbionte y de esta manera sobrevivir. Por ello tal comportamiento casi siempre estar concatenado con la etapa sucesional, la composicin de especies vegetales y

Individuos cuya presencia depende de su interaccin con los HMA, sin los cuales no es capaz de crecer (Janos, 1984). Adems, se considera una condicin natural que fortifica la dominacin hegemnica de la(s) especie(s) (Hartnett y Wilson, 1999).

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29

susceptibilidad de sus races a la colonizacin, as como el tipo de suelo donde se encuentre establecida la vegetacin (Johnson et al., 1992 b; Zangaro et al., 2000). Con referencia al factor edfico, Moyersoen (1993) opina que la variacin horizontal y vertical de sus propiedades delimita la distribucin espacial de los HMA, de tal manera que a juicio de Janos (1983), Allen (1996 a) y Moyersoen et al., (2001) en una comunidad forestal del trpico podrn dominar los individuos preferencialmente micotrficos o no micotrficos en funcin a la disponibilidad de propgulos nativos (esporas y fragmentos de races colonizadas), as como al tipo de especmenes vegetales dominantes en cada paraje y etapa seral (Brown, 1999). Mas dicha disponibilidad no necesariamente se concatena con una alta diversidad de hongos MA, tal y como lo demostr Janos (1975) al evaluar la importancia de la micotrofa en 28 especies tropicales del noroeste de Costa Rica (Estacin Experimental La Selva) donde a pesar de reconocer la coexistencia de solo 4 especies de hongos MA -en el inculo de cacaotal usado- estos fueron capaces de interactuar con 24 hospederas pertenecientes a 16 familias botnicas (Janos, 1980 a). Lo denotado no se aparta mucho de los hallazgos de Carrillo et al., (2000) quienes en sus recolecciones de suelo y rizsfera asociada a palmas tropicales de una zona natural del estado de Quintana Roo, Mxico, con marcada estacionalidad encontraron seis especies de HMA en Bactris balanoidea (Acaulospora scrobiculata, Glomus

geosporum, Scutellospora sp., Gigaspora margarita, Glomus sp. 1 y Glomus sp. 2),
dos en B. mexicana (Acaulospora scrobiculata, Glomus sp. 1 y Glomus sp. 2) y dos en

Desmoncus quasillarius (Acaulospora scrobiculata yGlomus geosporum).

2.3.1.3. Importancia ecolgica de los hongos formadores de micorriza arbuscular en el trpico seco
Junto al proceso evolutivo que las especies vegetales han debido sortear para tolerar las contrastantes condiciones ambientales relacionadas con la desigual distribucin de 30

la precipitacin y reserva de humedad en los ecosistemas del trpico seco a lo largo del ao (Trejo, 1995; 1999; Gerhardt, 1996), destacan las estrategias de sobrevivencia implementadas por los HMA. La pronunciada estacionalidad climtica16 y carencia de nutrimentos del suelo prevaleciente en la SBC actan como factores que limitan el crecimiento continuo de este tipo de vegetacin (Murphy y Lugo, 1986; Moyersoen, 1993; Campo et al., 1998; Rincn et al., 1999) y restringen tanto su productividad primaria neta como el establecimiento de las plntulas al inicio de la temporada de lluvias (Huante et al., 1993; Pennington et al., 2000). De la misma forma los factores de impacto mencionados influyen sobre la dependencia micorrzica y el tipo de asociacin simbitica que pudiere predominar en ese hbitat (Janos, 1983), donde el agua se torna en un firme controlador de la proliferacin radicular (Kavanagh y Kellman, 1992) y la eficiencia de los HMA (Allen y Allen, 1986). Adems cuando un sitio es invadido por especies pioneras, en un momento dado estas pueden ser no micorrzicas ya que debido a su transitoria estancia en el paraje parecen prescindir de la asociacin con cualquier tipo de HMA17, condicin que obviamente depender de la intensidad del disturbio (Francis y Read, 1995) y, con seguridad, no es la misma cuando la masa arbolada ha iniciado su progresin hacia una condicin sucesional climxica (Janos, 1983). En s la dinmica micorrzico-interactiva que les permite soportar la sequa y las altas temperaturas fue descrita con bastante propiedad por Janos (1980 b) y recin
Periodos prolongados de sequa en los que el suelo puede no presentar agua de disponibilidad inmediata en sus capas superiores ( 200 cm) (Kavanagh y Kellman, 1992). 17 Donde la red hifal y senescente sistema radical micorrizado es primordial en suelos con poco disturbio (Jasper et al., 1989; Klironomos et al., 1993) pero insignificante cuando la actividad antrpica es intensa (McGee et al., 1997; Nehl et al.,1999).
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confirmada por Huante et al., (1993) y Rincn et al., (1999) al concluir que los HMA realmente son importantes para el crecimiento y desarrollo de las especies arbreas tropicales de la selva baja. Gerhardt (1996) destaca su participacin en la adquisicin de humedad y nutrimentos durante la estacin seca, los cuales son determinantes para la supervivencia de las plntulas que se encuentran cobijadas bajo un dosel de copas (Gerhardt, 1998), y Huante et al., (1993) enfatizan su desempeo en las etapas serales tardas de la sucesin.

2.4. Los hongos formadores de micorriza arbuscular en la familia Caricaceae

La familia Caricaceae est distribuida en los trpicos de Amrica y frica (Olson, 2002). Comprende cuatro gneros y alrededor de 37 especies, de los cuales tres son americanos (Jarilla, Carica y Jacaratia) y se encuentran representados en Mxico por 8 especies (Daz-Luna y Lomel-Sencin, 1997). Aunque de las especies mexicanas solo los frutos de Carica cnidoscoloides Lorence & R. Torres no son comestibles (Daz-Luna y Lomel-Sencin, 1997), parece ser que en la actualidad nicamente tienen importancia econmica las bayas producidas por las diferentes variedades hortcolas de Carica papaya L. (Samson, 1986) y/o por la papana industrializable que procede del secado del ltex (Peres et al., 2000; CGCOF, 2000), si bien otros miembros de la familia son fuente tradicional de enzimas proteolticas (Tookey y Gentry, 1969; Soriano et al., 1975; Inei-Shizukawa et al., 1976; Corts y Briones, 1991; Glibota et al., 2000). Al sobresalir el cultivo de C. papaya en nuestro pas (ASERCA, 1999) y en la mayor parte de las zonas tropicales del mundo donde el rea para la produccin potencial an es vasto (Morton, 1987), es obvio que el grueso de las indagaciones cientficas y biotecnolgicas se han centrado en el estudio integral de su comportamiento

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agronmico (Mortensen y Bullard, 1970), donde se incluyen aspectos relacionados con la inoculacin micorrzica. Finalmente, y de entre la insuficiente informacin donde reportan la incidencia de colonizacin endomicorrzica en especies arbreas nativas del trpico estacional, Zangaro et al., (2002) revelan la ausencia de estructuras micorrzicas en Jacaratia

spinosa (Aubl.) A. DC. (Caricaceae) en las etapas iniciales de la sucesin progresiva

dentro del rea semidecdua del Parque Estadual Mata dos Godoy en Londina, Puerto Rico, donde se le cataloga como un espcimen secundario tardo y climxico.

2.4.1. Relacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular con

Carica papaya

A principios de los 70s existan muy pocas referencias acerca del efecto que los HMA pudieran tener sobre el comportamiento del papayo (Carica papaya L.) en vivero y campo (Wilhelm, 1973). En Amrica tropical es considerada como una de las especies nativas ms importantes de su familia botnica (junto con C. pubescens Linne & Koch) dado el aprecio que el hombre ha tenido por consumir su fruto (Ricker y Daly, 1998; Cruz et al., 2000). El inters por estudiar el comportamiento de los endfitos en hospederos de zonas tropicales fue posterior al emprendido en los pases templados (Taylor et al., 1999), y hasta el momento se ha reconocido que la micotrofa de innumerables especies vegetales es muy comn con los HMA (St. John, 1980; Carneiro et al., 1998; Siqueira

et al., 1998; Rajan et al., 2000; Siqueira y Saggin-Jnior, 2001).

Muchas de ellas son de importancia econmica (Khasa et al., 1992), entre ellas la papaya (Jaizme-Vega y Azcn, 1995).

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De esta manera no solo se ve favorecido su crecimiento y desarrollo (Jaizme-Vega y Azcn, 1995), sino tambin se incrementan enormemente sus posibilidades de sobrevivencia bajo condiciones de estrs ambiental (Janos, 1980 a; Siqueira y Saggin-Jnior, 1995). Sobre todo porque la capacidad del micelio formado en la micorrizacin puede contravenir serios daos en las plantas cuando el agua del suelo no puede ser absorbida por sus races, o bien esta no es de disponibilidad inmediata (Janos, 1980 a; Wang, 1996; Cruz et al., 2000). Por otro lado y aun cuando en las races de C. papaya se ha determinado la existencia de aceites de mostaza estos no limitan que los HMA formen sus apresorios y las colonicen, cosa que en la familia Brassicaceae no sucede debido a la aparente liberacin de mirosinasa (Tester et al., 1987), una enzima presente en al menos otras 15 familias ms [Rodman, 1991 a; Rodman et al., 1998]) que se relaciona con diversas actividades biolgicas y de propiedades bioqumico-toxicolgicas (sistema mirosinasa-glucosinolato) an debatibles hoy en da (Rodman, 1991 b; Bones y Rossiter, 1996; Visvalingam et al., 1998; Bridges et al., 2002). Entre las investigaciones realizadas para evaluar el comportamiento de la endomicorriza arbuscular en el manejo agronmico de este frutal se citan las siguientes: Ramirez et al., (1975) indican que tras haber evaluado la respuesta del papayo a la inoculacin con HMA (Gigaspora calospora y Glomus macrocarpus) la asociacin simbitica se estableci despus de 28 das sin poderse apreciar diferencias de crecimiento en altura a los 30, misma que tras 40 das despus de la inoculacin (ddi) fue significativa en el suelo fertilizado con 10 mL semanales de la solucin nutritiva de Hoagland. Un comportamiento similar reportan Lara et al., (1998) en papayo tipo Cera y variedad Maradol roja a 40 das de haber realizado su respectiva inoculacin con el 34

consorcio nativo RIN-1 y MTZ-1, respuesta que disminuy hasta en 20 das el tiempo necesario para ser trasplantables a campo. Alarcn et al., (2002) apreciaron que el efecto de Glomus claroideum en el rea foliar de C. papaya cultivar (cv.) Maradol roja super a la registrada en las plantas testigo, favoreci la actividad enzimtica de la fosfatasa cida soluble y extractable en la raz, e increment 3.4 veces la poblacin de Azospirillum brasilense cepa VS-7 (una rizobacteria promotora del crecimiento vegetal) en la rizsfera. Jaen y Ferrera-Cerrato (1989) ya haban hecho importantes observaciones en ensayos efectuados con 19 cepas de HMA, y enfatizan que al inocular el cultivar (cv.) tipo Cera con Glomus sp. Zac-19 y al tipo Solo con Glomus sp. Zac-6 la respuesta fue como si se les hubiese fertilizado con 15-10-10 kg ha-1 de nitrgeno (N), P y potasio (K). Padma y Randasamy (1990) lograron cuantificar que las necesidades de P llegaron a disminuir en alrededor del 75% de la dosis ptima recomendada para este cultivo, cuando el fertilizante fosfatado se mezcl con un inculo micorrzico formado por

Glomus mosseae, G. fasciculatum y Gigaspora margarita. Mohandas (1992) observ

una respuesta similar en invernadero al inocular plntulas de papayo (Carica papaya cv. Coorg Honey Dew) con G. mosseae y G. fasciculatum. Por otra parte Mamatha et al., (2002) concluyen que sus resultados de campo demuestran que las plantas de papaya (Carica papaya L. var. Solo) responden a la inoculacin con hongos MA eficaces (p. ej. G. mosseae y G. caledonium con 140 y 1,736 propgulos infectivos/g, respectivamente) que la aplicacin de fertilizante fosforado puede reducirse un 50% sin reducir el rendimiento. Tomando en cuenta que el papayo es un frutal cuya propagacin en semillero y estancia en vivero son prcticas culturales imprescindibles en el establecimiento de 35

una plantacin comercial (Mortensen y Bullard, 1970; Samson, 1986), y que la mayor viabilidad econmica de la inoculacin se presenta en plantas cultivables que requieren de una fase en semillero y/o vivero (Blanco y Salas, 1997), el uso de la simbiosis micorrzica se convierte en una alternativa muy viable18 (Martins et al., 2000; Klingeman et al., 2002).

2.4.2. Relacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular con

Jacaratia mexicana

Tras haber efectuado una bsqueda bibliogrfica exhaustiva en la Biblioteca Virtual del Instituto de Ecologa A.C. (Xalapa, Veracruz, Mxico), en la Unidad de Servicios Bibliotecarios y de Informacin (USBI) de la Universidad Veracruzana (Xalapa, Veracruz, Mxico) y en el Sistema Bibliotecario de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico (Mxico, D.F.) donde se tiene la posibilidad de consultar las fuentes especializadas de informacin impresas y va Web (Red Mundial de Comunicacin Electrnica o World Wide Web) ms completas y actualizadas del pas19 donde pudiera haberse reportado la presencia y el efecto de los HMA en J. mexicana, no se logr encontrar ningn tipo de evidencia relacionada con este tpico dentro del periodo comprendido entre 1980 y 2002 (mes de septiembre).

2.5. Capacidad infectiva de los hongos formadores de micorriza arbuscular

Abbott y Robson (1981 a) opinan que la capacidad infectiva de una especie micorrizgena se refiere a la habilidad que cada una de ellas tiene para penetrar y proliferar en las races bajo ciertas circunstantes ambientales y de vegetacin, sin que dicha cualidad necesariamente se relacione con su eficiencia (Evans y Miller, 1990;
Toda vez que los costos del biofertilizante son menores y la colonizacin de las races puede llegarse a mantener y desarrollar posteriormente en el cultivo (Blanco y Salas, 1997). 19 Anexo 2.
18

36

Sanders y Fitter, 1992 b; Wilson y Tommerup, 1992; Mason et al., 2000 a; Smith et

al., 2000), situacin que por diversas razones puede llegar a variar incluso en
aislamientos individuales de un HMA dado (Sylvia et al., 1993 a; Braunberger et al., 1996; Koide et al., 2000). De ah la posibilidad que no siempre son igualmente de infectivos en cualquier especie de planta y, por ende, su interaccin fisiolgica y derivacin funcional ciertamente podr variar en cada hospedero (B et al., 2000; Huat et al., 2002), condicin al parecer incuestionable en el caso de aquellos micosimbiontes adaptados a sobrevivir y colonizar plantas que crecen en suelos donde las condiciones no son del todo las ms adecuadas para que se formen este tipo de asociaciones (Cabello, 1995). As, la posibilidad de que las especies infectivas sean o no abundantes en las regiones tropicales depender de una intrincada serie de interacciones donde inevitablemente intervengan sus habilidades fisiolgicas y competitivas (Gavito y Varela, 1995).

2.5.1. Efecto de la colonizacin de los hongos formadores de micorriza arbuscular en el crecimiento y desarrollo de las plantas
Si bien la existencia de una verdadera convivencia biolgica mutualista entre los HMA y las plantas todava es debatible, sobre todo por la falta de evidencias experimentales que comprueben al fenmeno en su totalidad (Fitter et al., 1999), Dekkers y van der Werff (2001) afirman que si la colonizacin arbuscular (CA) es considerada como un indicador de los beneficios de la micorriza hacia el hospedero, y la colonizacin micorrzica arbuscular (CMA) como un indicador del costo invertido por la planta en la produccin de la biomasa fngica (que en todo momento depende de los carbohidratos provedos por aquella [Nehl et al., 1999; Ravnskov et al., 1999]), entonces la proporcin CA/CMA puede ser una medida confiable donde se ve

37

reflejada la relacin beneficio/costo, misma que al parecer en ambos convendra fuese prolongada y equilibrada (Schwab et al., 1991; Louche-Tessandier et al., 1999). En ciertas ocasiones se ha comprobado que bajo determinadas circunstancias los mictrofos facultativos presentan una depresin en su crecimiento ocasionada por el mayor gasto de carbono demandado por sus races (Peng et al., 1993) y el sistema micelial (interno y externo) del hongo (Frey y Ellis, 1997). Condicin que es mas bien privativa de aquellas plantas sin un claro rasgo de dependencia micorrzica (Hetrick et

al., 1993).
Por otra parte Bagyaraj (1991) y Bidartondo et al., (2002) aseveran que los HMA son capaces de formar conexiones hifales entre plantas de la misma y de diferentes especies para transferir nutrimentos de una planta a otra, de tal manera que si los enlaces existentes son numerosos entonces el funcionamiento de las micorrizas y el desempeo de las plantas se manifiestan en el paraje (Fitter, 1991).

2.5.2. Plantas micotrficas y no micotrficas

El fenmeno de la colonizacin micorrzica ha sido amplia y profundamente investigado, toda vez que se pretende reconocer cuales son los factores o mecanismos que determinan la susceptibilidad e intensidad de las relaciones simbiticas en las plantas vasculares (Tester et al., 1987). En cuanto a la serie de eventos de sealizacin que pueden llevarse a cabo para formalizar una simbiosis micorrzica exitosa (Bago et al., 2000 a; Barker et al., 2002; Giovannetti et al., 2003), resulta claro e innegable que una vez iniciada la germinacin de las esporas de resistencia en el suelo (Bolan y Abbott, 1983) el primer paso notable debe ser la unin franca entre los dos organismos (Schwab y Leonard, 1984; Bonfante y Perotto, 1992) que por lo general se inicia cuando una

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hifa del hongo contacta a la raz del hospedero y forma un apresorio que reconoce las paredes celulares epidrmicas sin traspasar la superficie celular cortical o vascular (Harrison, 1999) y culmina con la invaginacin del plasmalema de la clula vegetal y la formacin de arbsculos dentro de las raicillas de una planta husped (Koide y Schneider, 1992; Gianinazzi-Pearson et al., 1996; Varela, 2000; Versaw et al., 2002), donde se asume que tiene lugar el intercambio bidireccional de nutrimentos entre ambos socios (Dickson et al., 1999 a; Marsh y Schultze, 2001). Los exudados radicales juegan un papel fundamental durante todo el ciclo de vida de las plantas al actuar como reguladores de la funcin y crecimiento microbianos (Bowen y Rovira, 1991; Hairiah et al., 2001), y poseer molculas que controlan directamente los procesos que refuerzan la captacin y asimilacin de nutrimentos en la rizsfera (Bansal y Mukerji, 1994; Dakora y Phillips, 2002). Aunque algunas exudaciones tienen la posibilidad de modificar las caractersticas del pH rizosfrico (Dakora y Phillips, 1996), de afectar el crecimiento de las hifas (Tawaraya et al., 1996; Pinior et al., 1999) o de inducir la profusin de efectos aleloptico-negativos capaces de reducir el crecimiento de la raz (al inhibir la actividad metablica en la zona meristemtica) y la presencia de pelos absorbentes (Francis y Read, 1995), parece ser que la composicin qumica de la pared celular de las races del hospedero es modificada por medios fsicos o enzimticos promovidos por el hongo para alterar sus estereotipados procesos fisiolgicos (Tester et al., 1987), coadyuvar en desarrollo, ramificacin y penetracin de la hifa infectiva (Elias y Safir, 1987; Harley, 1994; Bue et al., 2000; Nagahashi y Douds, 1999; 2000) y de esta manera propiciar la endosimbiosis (Tawaraya et al., 1998; Parniske, 2000). Generalmente las complejas y variadas secreciones radicales producidas promueven el crecimiento de las plantas y el mantenimiento de la asociacin mutualista con los HMA (Schwab y Leonard, 1984; Garbaye, 1991; Siqueira et al., 1991; Vierheilig et al., 1998). 39

En los ltimos aos los aspectos fisiolgicos del paso y circulacin de materiales escenificado entre la planta y el hongo han sido objeto de cuantiosos estudios, y actualmente se acepta que dicho suceso ocurre en el mbito de la interfase arbuscular (Ezawa et al., 2001; 2002) e implica procesos de transporte activo dirigidos por la H+-ATPasa de la membrana plasmtica de ambos simbiontes (Ferrol

et al., 2000; 2002).

Por otra parte, y si bien es cierto que en la evolucin de los taxa parece haber ocurrido la condicin de no micotrofa, en realidad se trata de un fenmeno poco frecuente en la naturaleza (Siqueira y Moreira, 1997; Barker et al., 1998). As, mientras Brundrett y Abbott (1991) aseguran que las plantas con estrategias nutritivas especializadas son ms bien no-micotrficas, Allen (1996 b), Cornelissen et

al., (2001) y Siqueira y Saggin-Jnior (2001) puntualizan que la micotrofa/no

micotrofa de una especie vegetal es una expresin que se aplica en funcin a las caractersticas intrnsecas que las mismas desplieguen en favor de su adaptacin ecolgica.

2.5.3. Diversidad y dominancia de especies de hongos formadores de micorriza arbuscular en reas no perturbadas
Los factores biticos y abiticos que determinan la distribucin, presencia y predominio de los HMA en las distintos ecosistemas terrestres son mltiples (Allen, 1996 b), y su diversidad poblacional adquiere profundas implicaciones en el papel que estos hongos tienen en cada una de las etapas cronosecuenciales de una sucesin vegetal, la cual tambin es posible que influya sobre el reemplazo de las comunidades fngicas asociadas en este proceso (Bever et al., 2001). En dicho contexto Eriksson (2001) hace notar que a menudo la dinmica poblacional de los micosimbiontes se encuentra en extrema relacin con los procesos 40

sucesionales locales, donde el reemplazo de los microorganismos y la composicin florstica interna vara en sincronizacin con el espacio y el tiempo, a la par de las modificaciones paulatinas que ocurren en el ambiente particular de cada ecosistema (Gmez-Pompa y Vzquez-Yanes, 1985). De este modo el gradual y continuo devenir de eventos determina la disponibilidad y extensin de la red hifal que se considera de gran vala e instancia para el establecimiento inicial, y subsecuente, de la vegetacin (Read, 1994; van der Heijden

et al., 1998 b).

Si bien existen reportes donde se menciona a una determinada especie de HMA (Glomus

deserticola

G.

constrictum

[Blaszkowski,

1993],

Scutellospora

dipurpurascens [Blaszkowski, 1994], G. macrocarpum y G. etunicatum [Aziz et al.,

1995]), se describen las condiciones particulares de los sitios donde estas se desarrollan y por ser dominantes se espera que las mismas colonicen a las plantas en primer lugar, de ninguna manera su alta frecuencia garantiza que tambin son las ms eficaces (Sieverding, 1989). Respecto a la especificidad bitica o edfica que los HMA pudieren llegar a tener (apartado 2.3.), St. John (2000) resalta que por ser el pH del suelo el factor ms significativo para la seleccin natural de las especies fngicas no resulta muy cuestionable el porqu Glomus intraradices es un microsimbionte cuya presencia es muy pertinaz en suelos cuyo pH oscila entre 6 y 9, del mismo modo que Glomus

etunicatum lo llega a ser en condiciones donde la cantidad de acidez del suelo es

mayor.

2.6. Eleccin y obtencin de un inculo esporal de hongos formadores de micorriza arbuscular

De entre las evidencias que en la literatura especializada se reportan como indispensables para evaluar la eficiencia de los HMA destacan los siguientes: 41

Dado que en la actualidad existe un inters especial y creciente por el uso de los HMA en los modernos sistemas de multiplicacin de plantas donde pueden ser utilizados (Davies et al., 2000), resulta de vital importancia reconocer que son varios los tipos de estructuras fngicas capaces de actuar como propgulos y, por esa razn, todas ellas adquieren un valor extraordinario en la conformacin de un inculo micorrzico (St. John, 1996 a). As, y desde un punto de vista de ndole funcional (Ruiz-Lozano y Azcn, 2000), los propgulos infectivos de los HMA bsicamente incluyen a las esporas, a los fragmentos de raz colonizados20 y al micelio del hongo que sale de las races y aumenta su superficie de absorcin (Sylvia, 1990; Brundrett y Abbott, 1995; Cabello, 1997; Smith y Read, 1997). Sin embargo en muchas ocasiones las primeras son consideradas como la principal estructura fngica infectiva de los HMA (Toro et al., 2000) por su capacidad de involucrarse en la dispersin y supervivencia del hongo a largo plazo (Klironomos et

al., 1993), de permanecer inalteradas en el suelo por mucho tiempo21 (Hernndez,

2000) y de restablecer un micelio funcional (Braunberger et al., 1996). Adems pueden ser fcilmente reconocidas y separadas del suelo (Daft, 1983) para la posterior esterilizacin de su superficie (Sylvia, 1994). En este sentido, y mientras Morton et al., (1993) recomiendan excluir partculas de suelo, fragmentos de raz o hifas que en un momento dado pudieren interferir en la valoracin de la capacidad infectiva de una especie micorrizgena, Aziz y Sylvia (1991) y Khasa et al., (1992) aconsejan consumar el cuidadoso aislamiento de las esporas presentes en un consorcio con la finalidad de comparar su habilidad
Propgulos cuya capacidad infectiva tiende a ser limitada en ausencia de vesculas (Biermann y Linderman, 1983). 21 En comparacin al colapso que en 2 a 4 semanas ocurre a las hifas cuando no encuentran a una raz hospedadora (Bolan y Abbott, 1983).
20

42

individual para coadyuvar con la absorcin de nutrimentos e incremento en el crecimiento de su planta husped. De la misma forma Sylvia (1998, 1999) acenta la necesidad de hacer su desinfeccin y asptica manipulacin (sin contaminacin) con el fin de valorar y seleccionar aqullas cuyo desempeo sea exitoso por su comprobada habilidad para penetrar y extenderse en las races (capacidad infectiva), as como de mejorar el crecimiento o la tolerancia del hospedero al estrs (eficiencia). Eom et al., (2000) comentan que una de las ventajas de propagar debidamente a las estructuras esporales elegidas en cultivos-trampa radica en que las clulas reproductoras extradas sern de aqullas especies que haban estado creciendo en la asociacin simbitica promovida bajo manejo. De hecho Brundrett et al., (1994; 1999 a) y Morton et al., (1995) consideran que el uso de macetas de propagacin es uno de los medios actualmente disponibles para mantener y abastecer de material apropiado y necesario para sinfn de propsitos de investigacin y de aplicaciones prcticas. Para la separacin, transferencia y formacin de grupos discretos de esporas se recomienda el uso de pipetas Pasteur con punta de apertura 0.2-0.5 mm y un microscopio de diseccin, 1 a 2 das antes de la inoculacin (Morton et al., 1993). Por otro lado Schubert y Hayman (1986) y Swift (2002) estiman que los niveles de P contenidos en un suelo donde se pretende conocer esencialmente la eficiencia de los HMA deben mantenerse en alrededor de las 50 ppm, para lo cual insisten en la imperiosa necesidad de realizar de manera anticipada un anlisis del sustrato que ser utilizado en la evaluacin. Aunque Daft y Nicolson (1969) consideran suficiente la presencia de solo una espora viable o infectiva- para iniciar la colonizacin de las races nutricias, Sanders y Sheik (1983) opinan que la ntima unin de los simbiontes en un suelo y hospedero dados 43

de alguna manera se encuentra relacionada con la cantidad de propgulos fngicos presentes en el sustrato, lo cual resalta el por qu es importante conocer la densidad y capacidad infectiva de los inculos.

2.7. Eficiencia de la simbiosis

Para percatarse de la amplia acepcin que existe al concebir la eficiencia de una especie de HMA, parece ineludible admitir que los caracteres fundamentales de un determinado beneficio en s dependern del poder funcional de las hifas para la exploracin de sitios ricos en nutrimentos que han quedado fuera del alcance del sistema radical (Okeefe y Sylvia, 1991; Sylvia et al., 1993 b; Hamel, 1996; Reid, 1997; Clark et al., 1999; Rosewarne et al., 1999; Tibbett, 2000), seguida por su translocacin a la planta y posterior transferencia a travs de la interfase apoplstica planta-hongo (Jakobsen, 1997; Dickson et al., 1999 b). Si bien entendido est que no hay ninguna slida correspondencia entre el grado de colonizacin y el beneficio potencial de un determinado hospedero (Hetrick et al., 1992; Hernndez et al., 2000), y que las variaciones en la respuesta simbitica deben valorarse exclusivamente en trminos relacionados con el crecimiento de las plantas (Abbott et al., 1994; St. John, 2000), parece factible concebir que el provecho fisiolgico derivado de las cualidades manifiestas entre ambos socios puede traducirse de manera directa en un incremento de su capacidad para crecer y desarrollarse con vigorosidad (Stanley et al., 1993; Smith et al., 2000; Hernndez, 2000; Kiers et al., 2002). No obstante en ocasiones el provecho se recibe progresiva e indirectamente a travs de diversas adaptaciones fisiolgicas o morfolgicas en los que se encuentra involucrado el micosimbionte (George et al., 1992; Requena et al., 2002), entre los que sobresale una colonizacin bien establecida y la produccin de hifas externas

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capaces de proveer activamente de P y otros macro y micronutrimentos a las interfases simbiticas (Marschner y Dell, 1994; Clark y Zeto, 2000), o bien por el mejoramiento paulatino de las condiciones naturales del suelo, efecto que de acuerdo con St. John (2000) es an ms significativo. De esta manera, y tratando de considerar que el significado prctico de la eficiencia de los HMA bajo diferentes condiciones ambientales conlleva a un beneficio que puede ser tangible a travs de la absorcin de nutrimentos (Smith et al., 1994; Bagyaraj et al., 1988; Ravikumar et al., 1997; Ruiz-Lozano y Azcn, 2000) y del crecimiento vegetal (Bowen y Rovira, 1991; Gavito y Varela, 1995; Ruiz-Lozano et al., 1995; Green et al., 1999), parece ser que los rasgos de integracin morfolgica y de compatibilidad funcional entre ambos organismos se tornan obvios al permitir que las hifas de los micosimbiontes penetren y formen arbsculos dentro de las races de las plantas en algn momento del ciclo de colonizacin (Bagyaraj, 1991; Morton y Bentivenga, 1994; Rajapakse y Miller, 1994). De ah que con frecuencia se estudie la eficiencia de un HMA en trminos del mejoramiento en el desarrollo de plantas, medida como produccin de materia seca (Plenchette et al., 198322; Ellis et al., 1985; Cabello, 1995) y, de esta manera, poder cuantificar el carbono adicional fijado por ellas en sus tejidos (Tinker et al., 1994). Kahiluoto y Vestberg (1997) ratifican esto al afirmar que para evaluar la eficiencia de las distintas especies de hongos en una simbiosis es preciso conocer la diferencia del peso seco (PS) (o la captacin total de P) de las plantas micorrizadas (mic+) y nomicorrizadas (mic-) expresada como el porcentaje de peso seco (o captacin de P) de las plantas de micorrizadas, o eficiencia micorrzica= (PSmic+ - PSmic-) x 100%/PSmic+. Mas concebir que tales atributos son solo el resultado de la absorcin intensificada de un determinado macro o micronutrimento no se considera acertado, puesto que la
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Trmino definido por estos autores como dependencia micorrzica.

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modificacin y/o adecuacin de algunas de las propiedades qumicas, fsicas y biticas del suelo a menudo influyen en la respuesta de las plantas a la asociacin fngica (Sylvia, 1990; Frey y Ellis, 1997) ya sea al propiciar una marcada supresin de la microbiota micorrizosfrica, o bien mediante la activacin de mecanismos sistmicos que impiden la colonizacin de una raz (Vierheilig et al., 2000 b). Es as que la habilidad intrnseca de los hongos capaces de formar micorriza arbuscular puede variar en el tiempo y en el espacio, de tal manera que una estirpe llega a ser tan efectiva o tan ineficiente de acuerdo con su origen (Coperman et al., 1996), la planta hospedera (Ravnskov y Jakobsen, 1995; Hoeksema, 1999), el uso que le den a los carbohidratos asignados (Abbott y Robson, 1985 a; Rajan et al., 2000), y/o las condiciones ambientales (clima y suelo) que predominan en un sitio dado (Sieverding, 1989; Harley, 1994; Requena et al., 1997).

2.7.1. Factores inherentes a la planta hospedera

Aunque en la micorrizacin de las races participan los HMA y las plantas, estudios recientes han dilucidado que la magnitud global de este proceso se encuentra administrado primordialmente por estas ltimas (Sylvia, 1988; Fitter y Merryweather, 1992; Barker et al., 1998; Harrison, 1999; Siqueira y Saggin-Jnior, 2001), de tal manera que las plantas husped son capaces de regular los patrones de abundancia y esporulacin de ciertas especies de HMA en la micorrizsfera (Eom et al., 2000; Troeh y Loynachan, 2003) e influir en la produccin secuencial de micelio fngico (Fitter, 1989). Autores como Johnson et al., (1991 b) y Sanginga et al., (1999) han corroborado que algunos cultivos consiguen propender su actividad simbitica con un determinado HMA, de tal manera que los arreglos topolgicos logran influir sobre la composicin de las comunidades fngicas de una zona agrcola. Asimismo del Val et al., (1999) denotan que dentro de las nuevas visiones aplicables al concepto de especificidad se debe tomar en consideracin la tasa de crecimiento 46

de las races, ya que esta parece ser crtica en la concurrencia y la propagacin natural de varias especies de HMA (Grundon, 1999).

2.7.2. Factores inherentes al endfito

A menudo se considera como un hongo eficaz a aquel que tiende a producir el beneficio ms grande en cuanto al aumento en la adquisicin de P se refiere, pero con el mnimo costo -expresado como gasto de carbono- para el mantenimiento de las micorrizas (Graham y Eissenstat, 1994; Ferrol et al., 2002). Sin embargo, y con relacin a la participacin que los HMAs pudiesen llegar a tener en su formacin (Douds et al., 1998), Gianinazzi-Pearson et al., (1996) y Siqueira y Saggin-Jnior (2001) comentan que si las evidencias relacionadas con la especificidad entre los simbiontes an no son claras o contundentes, entonces la susceptibilidad de una determinada especie vegetal a la colonizacin puede atribuirse ms bien a las caractersticas intrnsecas de los hospederos (genoma), y no a las del endfito. Aunque en cierto modo dicha enunciacin parece contraponerse a lo expresado por Eom et al., (2000) al certificar que, cuando menos en mltiples experimentos de laboratorio e invernadero, muchas especies de HMA pueden colonizar a cualquier planta que es capaz de formar micorrizas. Lodge (2001) explica que si la preferencia de hospedero existiese en la naturaleza esta pudiere ser distinta en los bosques templados y en los tropicales debido a la diversidad arbrea, predominancia de especies individuales y la densidad de cada una de ellas por unidad de superficie, amn de encontrarse expuestas a una comunidad microbiana cambiante y muy heterognea (Chanway et al., 1991). De todos modos el crecimiento de las especies vegetales en un ambiente determinado estar supeditado tanto al contenido genmico de la planta como al del

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hongo (Franquen y Requena, 2001). No obstante, el efecto de una determinada morfoespecie de HMA puede variar y llegar a ser hasta ms benfica para una planta cuando acta sola (van der Heijden et al., 1998 a; Gupta et al., 2002), que al hacerlo en compaa de otro componente formador de micorriza (Frank, 1996; Gange, 1999). Y es justamente en este tenor donde resaltan reportes en el que detallan reacciones indiferenciadas en el contenido protenico del maracuy23 (Passiflora edulis f. Flavicarpa Deg.) colonizado por un solo tipo de HMA (Gigaspora albida o

Scutellospora heterogama) o en consorcio (mezcla de Gigaspora margarita, G. albida, S. heterogama y Glomus clarum) (Santos et al., 2001), o bien acerca de la ingnita
diversidad funcional de las comunidades micorrizgenas expuesta por Pringle et al., (2000) y Bever et al., (2001).

2.7.3. Influencia de los factores ambientales

La colonizacin de las plantas parece ocurrir como una respuesta a los mltiples factores biticos y abiticos existentes en la naturaleza, entre los que adems del filogentico destaca el ambiental (Miller et al., 1999). As, y en virtud de los efectos directos o indirectos que sobre los seres vivos puede llegar a ejercer, solamente se les aborda para entender la relacin que tanto el clima como el suelo tienen en la interaccin simbitica acontecida entre los HMA y las plantas.

2.7.3.1. Clima y suelo

Si bien el proceso de seleccin natural ha favorecido la formacin y diseo de atributos especializados de la simbiosis y simbiontes que son apropiados para una serie particular de condiciones ambientales (Varela y Trejo, 2001; Hibbett, 2002), muchas son las especies de HMA que parecen mostrar innmeras respuestas a su entorno
23

Por lo que sera necesaria la purificacin del extracto de la raz para mostrar sus posibles alteraciones cuantitativas (Santos et al., 2001).

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climtico y edfico (Abbott y Robson, 1991), lo cual de cierta manera revela que los requisitos ambientales trascienden sus necesidades por un determinado hospedero (Read, 1991), y el por qu su presencia no se encuentra circunscrita solo a los trpicos (Sieverding, 1989) o a alguna otra zona de la biosfera en particular (Fitter, 1989). Aun cuando son numerosas las especies de Glomales ubicuistas capaces de sobrevivir y reproducirse en varios tipos de climas y suelos, es evidente que las plantas son localmente capaces de influir en su distribucin, y las propiedades fsicas y qumicas del suelo de restringir o cambiar el tamao y la composicin de una comunidad de HMA (Leyval et al., 1995; Varela y Trejo, 2001). Sin embargo ello no es precepto universal (Diop et al., 1994). Al respecto Siqueira (1986) advierte la presencia de varias especies de HMA en diversos parajes naturales de acuerdo ms que nada con las caractersticas qumicas (pH) de los suelos muestreados en la regin de Minas Gerais (Brasil), corroboracin hecha por Mosse y Hepper (1975), Wood et al., (1989) y St. John (1996 a; 2000) al confirmar que la presencia y actividad de algunos HMA efectivamente varan con las propiedades del suelo, en particular de acuerdo con su pH, y por ello sugieren que los hongos seleccionados deben ser apropiados para las condiciones qumicas del suelo usado en el invernadero y el que tienen los sitios donde se harn las plantaciones definitivas. Entre tanto Day et al., (1987) reportan haber comprobado que aparte del pH, la fertilidad, textura, humedad y contenido de materia orgnica del suelo afectan de algn modo el crecimiento, distribucin y sobrevivencia de los HMA, mientras que Klironomos et al., (1993) demuestran que el pH del suelo y su contenido de materia orgnica son reguladores importantes de la esporulacin. En el mismo tenor Benjamin et al., (1989) mencionan que un alto contenido de Ca y Mg pueden ser variables que junto con el pH actan sobre la representatividad limitada de esporas de distintos hongos MA en un paraje dado.

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Por ello Abbott et al., (1994) mencionan que la importancia del trmino eficiencia o de los adjetivos similares usados para describir el impacto de los HMA en las plantas (apartado 2.7.) deber aplicarse ms que nada a un determinado ambiente edfico, fuera del cual su contexto sera limitado o incierto, amn de que las relaciones encontradas entre las caractersticas de un suelo y la calidad de la simbiosis no son siempre consistentes (Mrtensson y Carlgren, 1994).

2.8. Relacin de la simbiosis con la actividad fotosinttica de la planta

Considerando que en la naturaleza la simbiosis entre los HMA y las plantas es un fenmeno de mutualidad muy frecuente y generalizada de todo ecosistema terrestre donde estas tienen la oportunidad de extender sus races (Fontana, 1998; Ahn-Heum

et al., 1999; Richardson et al. 2000), parece evidente que la unin habitual existente
entre ambos seres vivos juega un papel trascendental en el ciclaje biogeoqumico que ocurre en los suelos (sobre todo en los poco perturbados) donde la transferencia de nutrimentos minerales y agua del microsimbionte hacia la planta demanda a cambio sustratos energticos y carbohidratos derivados de la fotosntesis (Hernndez, 2000; Ferrol et al., 2002). Diversos estudios relacionados con la simbiosis micorrzica reportan incrementos tanto en la produccin de biomasa como en la tasa fotosinttica (Cintrn y Lugo, 1990; Lewis y Strain, 1996) atribuibles probablemente a la optimizada captacin de nutrimentos (Pardi et al., 2002; Huat et al., 2002). Del mismo modo destaca el flujo directo o redistribucin de una fraccin significativa de los fotoasimilados (carbono fijado) de la planta husped hacia las races24 (Blanco y Salas, 1997) para que, en concordancia de las condiciones ambientales reinantes y la compatibilidad funcional establecida entre los socios, se mantenga la actividad de
Estimada de 4 al 20% en los sistemas radicales colonizados (Bago et al., 2000 a; Khaliq y Sander, 2000).
24

50

las estructuras micorrzicas formadas (Jakobsen y Rosendahl, 1990; Pearson y Jakobsen, 1993; Ravnskov y Jakobsen, 1995; Watkins et al., 1996; Burleigh y Bechmann, 2002). Por ello, y no obstante en la actualidad se acepte en trminos fisiolgicos que un descenso en la tasa de asimilacin de CO2 por unidad de rea foliar se relaciona con los cambios ocurridos en la conductancia estomtica (Jones, 1992), la cual indica tanto el grado de apertura que tienen los estomas como la tasa de asimilacin neta de CO2 derivada de la fotosntesis y el intercambio gaseoso (Lawlor y Cornic, 2002)25, tambin lo es el hecho de que los efectos en el abastecimiento hdrico de los rganos vegetales cloroflicos derivados de una asociacin micorrzica no son perpetuamente tan expresos ni contundentes (Green et al., 1998), tal y como a menudo sucede en la absorcin de P y el crecimiento de los hospederos (Carey et al., 1992; Aug, 2001). Segn Aug (2001) la hidratacin de los tejidos y el intercambio de CO2 y O2 en las hojas es una circunstancia sutil, transitoria y probablemente muy especfica de cada simbionte que de manera sustancial repercute en su habilidad competitiva y en su sanidad. Drge y Schnbeck (1992) y Koch et al., (1997) refieren que el crecimiento en altura de las plantas micorrizadas se debi a un incremento de su actividad fotosinttica, de tal manera que la elevada tasa de asimilacin de CO2 registrada se relacionaba ms que nada con cambios en el nivel de endgenos de las hormonas vegetales (especialmente citocininas) que intervienen de manera significativa en los movimientos estomatales y, por ende, en la eficiencia del aparato fotosinttico26 de la mayor parte de las especies vegetales (Fort et al., 1998).

25

Proceso donde los valores negativos expresan actividad metablica neta.

26

Ya que dichas sustancias hormonales son, junto con el cido abscico transportado hasta las hojas, imprescindibles durante el intercambio gaseoso ocurrido en la fotosntesis (Fort et al., 1998).

51

Mason et al., (2000 b) evaluaron la conductancia estomatal de Eucalyptus globulus no micorrizada y micorrizada con cultivos puros de Laccaria fraterna 1 (ex E.

globulus, Tasmania), L. Fraterna 6 (ex E. globulus, Escocia) y Pisolithus tinctorius (ex E. globulus, Tasmania), parecindoles convincente considerar que bajo condiciones
de estrs hdrico el hongo asociado suministra la suficiente cantidad de agua como para permitir que los estomas permanezcan abiertos durante un periodo ms prolongado que, a final de cuentas, redunda en una fotosntesis neta y rea foliar mayores. Dicha aseveracin es bastante coherente dada la amplificacin del potencial que adquiere la raz colonizada por estos hongos para explorar un mayor volumen de suelo en busca del preciado lquido (Marschner y Dell, 1994; Schachtman et al., 1998; Ingham y Zarb, 1999; Fidelibus et al., 2001) cuya absorcin mantiene la turgencia de las hojas (Subramanian et al., 1996) y mejora significativamente la conductancia estomtica, la transpiracin y el contenido de clorofila (Ruiz-Lozano et

al., 1995; Masri et al., 1998).

Estudios realizados con resonancia magntica nuclear y marcaje isotpico han mostrado que el principal compuesto carbonado adquirido por el HMA en el mbito de la interfase simbitica es la glucosa (Pfeffer et al., 1999), la cual es posteriormente metabolizada en las hifas intrarradicales a compuestos tpicamente fngicos (trealosa y glucgeno) y lpidos de reserva (Shachar-Hill et al., 1995; Bago

et al., 1998 b; 2002). Sin embargo Pfeffer et al., (1999) aseguran que a pesar de su
importancia an no se conocen los mecanismos implicados en este proceso. Mas por comparacin homloga con lo ocurrido en otras simbiosis mutualistas se cree que este proceso pudiere implicar el eflujo pasivo de los carbohidratos desde el fitosimbionte hacia el espacio interfacial existente entre ambos organismos, seguido de su absorcin activa por parte del micosimbionte (Jakobsen, 1999).

52

3. MATERIALES Y MTODOS 3.1. Determinacin de micotrofa en plantas de Jacaratia mexicana

Para evaluar si J. mexicana era capaz de entablar una simbiosis mutualista con los HMA se realizaron las actividades siguientes:

3.1.1. Fase de campo

En esta fase se llevaron a cabo diversas acciones para contar con el suficiente material radical que permitiese precisar si esta cariccea se asociaba o no con los hongos micorrizgenos del suelo: 1) La recoleccin de races en enero, marzo, mayo y julio de 1999 de 3 individuos silvestres maduros de J. mexicana que fueron marcados en su tronco en tres distintos lugares localizados en la porcin central del estado de Veracruz, Mxico: La Bandera (19 27 50 de latitud norte y 96 33 12 de longitud oeste), Plan de La Higuera (19 26' 30 de latitud norte y 96 32' 16 de longitud oeste) y Palo Gacho (19 23' 56 de latitud norte y 96 37' 53 de longitud oeste). 2) Mediante la aplicacin de riego por goteo (en julio de 1999) se indujo la aparicin de numerosas raicillas en 3 especimenes silvestres juveniles de J.

mexicana en La Bandera, las cuales fueron recolectadas para su valoracin.

3) El traslado de tres plantas (tocones de J. mexicana con dimetro medio de 10 cm desinfectados con hipoclorito de sodio [cloro al 5% x 15 min]) de Plan de La Higuera a un invernadero para procurar la formacin de raicillas adventicias.

53

4) La recoleccin de frutos de J. mexicana en Plan de La Higuera en la primera semana de junio de 1999 para obtener semillas y realizar su propagacin bajo condiciones controladas de luz, temperatura y humedad.

3.1.2. Fase de invernadero y laboratorio

En esta fase los materiales provenientes de Plan de La Higuera se colocaron dentro de sus respectivos contenedores desinfectados previamente con hipoclorito de sodio (cloro al 5% x 30 min) y preparados con un sustrato de suelo y arena 1:1 (v/v) esterilizado con bromuro de metilo donde: 1) Mediante el uso de riego por aspersin los tocones de J. mexicana formaron raicillas que fueron inoculadas con 10 g del consorcio micorrzico nativo MTZ127 cuyos propgulos eran 100% infectivos. 2) Se pusieron a germinar 50 semillas de J. mexicana tratadas con antelacin en su superficie con hipoclorito de sodio (cloro al 10% x 15 min [Duncan y Howard, 2000; Zhu et al., 2000]) y se enjuagan con agua destilada estril durante 15 min antes de ser sembradas en contenedores especiales (de 48.5 x 35 x 13.5 cm de polietileno de alta densidad y con perforaciones de 3/8 en la base para drenaje y aireacin) que se mantuvieron en una estufa a 30C y humedad constante hasta la emergencia de la radcula. Cuando las plntulas presentaron su primer par de hojas verdaderas en grupos de 9 se les trasplant a macetas de 2 kg de capacidad que contena un sustrato de suelo y arena 1:1 (v/v) pasteurizado mediante vapor (2 das x 1 hora a 90C [Brundrett et

al., 1994; 1996]) y aireado durante dos semanas para reducir cualquier tipo de
Aislado de suelos cultivados con papaya (Carica papaya) en Martnez de la Torre, Veracruz, Mxico, donde se identificaron los siguientes HMA: Glomus mosseae, Glomus macrocarpum, Glomus geosporum, Glomus sp., Gigaspora sp. y Acaulospora sp. (D. Trejo y L. Lara, comunicacin personal, junio de 1999).
27

54

fitotoxicidad derivada de su calentamiento (Rovira y Bowen, 1966), donde tambin se les inocul con 10 g del mencionado consorcio micorrzico. De esta manera y en ambos casos se prob su inmunidad micorrizgena (Tester et al., 1987) (Anexo 3). Finalmente, y para poder observar de manera apropiada la colonizacin de las races en los segmentos que se preparaban cada cinco das, estas se tieron de acuerdo con la tcnica de Phillips y Hayman (1970) (Anexo 4), y el porcentaje de colonizacin (presencia de hifas, arbsculos y/o vesculas dentro de la raz) se determin a 200X en un microscopio compuesto Nikon modelo PFX Optiphot-2 por el mtodo de McGonigle et al., (1990) (Anexo 5).

3.2. Eleccin y descripcin de las reas de estudio

Los sitios en donde se recolect el suelo rizosfrico de J. mexicana fueron precisados basndose en los datos de distribucin que los colectores incluyeron en las etiquetas de cada uno de los ejemplares botnicos depositados en los herbarios de las siguientes instituciones: Centro de Investigaciones Cientficas de Yucatn (CICY) Instituto Politcnico Nacional (ENCB) Universidad Autonma de Campeche (UCAM) Universidad Nacional Autnoma de Mxico (MEXU) Instituto de Ecologa, A.C. (IE-XAL).

Dicha informacin se complement con la existente en el Banco Computarizado de Datos Florsticos del IE-XAL y de esta manera se lograron conocer las coordenadas geogrficas de los parajes donde J. mexicana se ha encontrado vegetando en la vertiente del Golfo de Mxico, las cuales se circunscribieron nica y exclusivamente a los estados de Veracruz, Campeche y Yucatn (Fig. 1). 55

Sitio 3 Sitio 2 Sitio 1

Figura 1. Ubicacin de los sitios de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico.

Con el fin de conocer las caractersticas ecolgicas y biolgicas de cada uno de los sitios elegidos por su condicin de escasa o nula perturbacin, la informacin relacionada con su ubicacin geogrfica, tipos de suelo, clima y vegetacin se recab primordialmente en las fuentes bibliogrficas impresas y fuentes iconogrficas no proyectables consultadas en la Universidad Veracruzana (Laboratorio de Cartografa de la Facultad de Ciencias Agrcolas, Campus Xalapa), en el Instituto de Ecologa, A.C. (Departamento de Diagnstico Regional, sede Xalapa), y en el Instituto Nacional de Estadstica, Geografa e Informtica (Centro de Consulta Bibliogrfica-Xalapa) sitas en la ciudad de Xalapa, capital del Estado de Veracruz, Mxico.

3.2.1. Sitio 1: Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico)

Plan de La Higuera es una pequea comunidad perteneciente al municipio de Actopan, Veracruz, Mxico, situada en la provincia fisiogrfica denominada Llanura Costera del

56

Golfo de Mxico, especficamente en la subprovincia de la Llanura Costera Veracruzana (INEGI, 1987 a) que ocupa una extensin de 27,001.17 km (37.29% de la superficie total estatal [INEGI, 2002]) y presenta una serie de montculos naturales en los que se desarrolla un manchn de Selva Baja Caducifolia (SBC) entre los 160 y 220 msnm. Ah la recoleccin de muestras de la rizsfera de J. mexicana se llev a cabo entre los meridianos 96 33' 42 y 96 34' 17 de longitud oeste y entre los paralelos 19 25' 50 y 19 26' 16 de latitud norte (Fig. 2).

rea de recoleccin de las muestras (Escala 1: 1 000 000) Figura 2. Ubicacin geogrfica del rea de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico en la Selva Baja Caducifolia de Veracruz, Mxico (Adaptada de INEGI, 1988).

3.2.1.1. Suelos
En la regin los tipos de suelo dominantes son los vertisoles plicos28, de clase textural fina con predominio de arcillas y muy pedregosos (INEGI, 1998), seguidos de los feozem hplicos y lvicos (INEGI, 1993). En el caso particular del suelo colectado a una

28

Que en la nueva clasificacin taxonmica de la World Referente Base (WRB) for Soil Resources ya no se considera como tal y, sobre todo por sus peculiares caractersticas, correspondera al denominado vertisol clcico (Spaargaren, 1994).

57

profundidad de 0-20 cm en el rea de estudio, en el Cuadro 5 se presentan sus principales caractersticas fsicas y qumicas. Cuadro 5. Caracterizacin fsica y qumica del suelo colectado en Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico) a la profundidad 0-20 cm. Determinacin Valor referencial Designacin 54.5% arcilla, 18% limo y 27.5% arena Grupo textural Arcilloso pH en agua (relacin 1:2) 6.26 Ligeramente cido Carbono (%) 3.64 Bueno Materia orgnica (%) 9.5 Rico Nitrgeno (%) 0.475 Extremadamente rico Relacin C/N 7.66 Bajo Fsforo (ppm) ND Extremadamente bajo 447.68 Bajo Potasio (ppm) Calcio (ppm) 14,288 Alto Magnesio (ppm) 1,934.4 Alto Sodio (ppm) 96.6 Normal Densidad aparente (g/cm3) 0.78 Bajo Capacidad de campo (%) 69.20 Muy alta
Fuente: Anlisis realizado por personal del Laboratorio de Suelos de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa (Veracruz, Mxico), utilizando mtodos estandarizados de anlisis de suelo y las especificaciones del PROY-NOM-021-RECNAT-2000 (SEMARNAT, 2000). ND = No detectado (Mtodo Bray P1-KitsonMellon). Corresponden a la fraccin soluble ms la fraccin intercambiable.

3.2.1.2. Clima
El tipo de clima predominante en algunas de las partes ms bajas de la Llanura Costera del Golfo (Garca, 1989), y particularmente en esta zona es clido subhmedo Aw0(w) (INEGI, 1987 b), el ms seco de los subhmedos, con rgimen de lluvias de verano, cociente P/T menor que 43.2 (Garca, 1987; Soto y Garca, 1989), y porcentaje de lluvia mayor de 10.2 (INEGI, 1987 b) respecto a la total anual.

3.2.1.3. Vegetacin
En el relicto donde se realiz la recoleccin de materiales para este estudio se identificaron los siguientes componentes del estrato arbreo: Palo mulato (Bursera

58

simaruba), ceiba o pochota (Ceiba pentandra), bonete (Jacaratia mexicana), jcaro

(Crescentia cujete), cacaloschil (Plumeria rubra), guaje (Leucaena leucocephala), tepeguaje (Lysiloma acapulcencis), trompillo (Cordia dodecandra), cedro (Cedrela

odorata), primavera (Tabebuia chrysantha), cuajilote (Parmentiera aculeata), jabn

(Piscidia piscipula) y cocote (Gliricidia sepium), entre otros.

3.2.2. Sitio 2: Seybaplaya (Estado de Campeche, Mxico)

Seybaplaya es un pueblo de apenas 7,795 habitantes que pertenece al municipio de Champotn, Campeche, Mxico, y se localiza al sureste de la ciudad de Campeche, a 40 km de la carretera federal 180 que va rumbo a Champotn. Est situado en la provincia fisiogrfica denominada Pennsula de Yucatn, especficamente en la subprovincia Carso y Lomeros de Campeche (INEGI, 1987 c). Dicho municipio presenta pequeos lomeros de norte a sur, no mayores de 300 m de altura, en los cuales se conjugan una serie de factores ambientales que favorecen el establecimiento y desarrollo de la SBC. La recoleccin de muestras rizosfricas de J. mexicana se hizo en varios puntos localizados entre 80 a 100 m de altitud, en un relicto que prcticamente entra en contacto directo con el litoral. Sus ejes geogrficos son 90 40 58 - 90 42 19 de longitud oeste, y 19 38 11 - 19 39 36 de latitud norte (Fig. 3).

3.2.2.1. Suelos
En esta regin el suelo dominante son los litosoles, de clase textural media con predominio de limos, seguidos de las rendzinas y de los luvisol crmicos (SPP, 1981; INEGI, 1988). Las principales caractersticas fsicas y qumicas del suelo colectado en el rea de estudio a una profundidad de 0-20 cm se dan a conocer en el Cuadro 6.

59

rea de recoleccin de las muestras (Escala 1: 1 000 000) Figura 3. Ubicacin geogrfica del rea de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico en la Selva Baja Caducifolia de Campeche, Mxico (Adaptada de INEGI, 1988).

Cuadro 6. Caracterizacin fsica y qumica del suelo colectado en Seybaplaya (Estado de Campeche, Mxico) a la profundidad 0-20 cm. Determinacin Valor referencial Designacin 32% arcilla, 39% limo y 29% arena Grupo textural Franco arcilloso pH en agua (relacin 1:2) 6.55 Ligeramente cido Carbono (%) 3.81 Bueno Materia orgnica (%) 12.18 Extremadamente rico Nitrgeno (%) 0.609 Extremadamente rico Relacin C/N 6.26 Bajo Fsforo (ppm) ND Extremadamente bajo Potasio (ppm) 235.99 Muy bajo Calcio (ppm) 15,718 Alto Magnesio (ppm) 2,140.8 Alto 131.1 Normal Sodio (ppm) Densidad aparente (g/cm3) 0.92 Bajo Capacidad de campo (%) 42.37 Alta
Fuente: Anlisis realizado por personal del Laboratorio de Suelos de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa (Veracruz, Mxico), utilizando mtodos estandarizados de anlisis de suelo y las especificaciones del PROY-NOM-021-RECNAT-2000 (SEMARNAT, 2000). ND = No detectado (Mtodo Bray P1-KitsonMellon). Corresponden a la fraccin soluble ms la fraccin intercambiable.

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3.2.2.2. Clima
Por su ubicacin en la zona intertropical, escasa altitud y relieve llano o ligeramente ondulado, el tipo de clima predominante en esta zona es clido subhmedo Aw0(x), con rgimen de lluvias de verano y porcentaje de lluvia invernal mayor de 10.2 (INEGI, 1988) respecto a la total anual.

3.2.2.3. Vegetacin
En este relicto de SBC se lograron identificar los siguientes componentes: Chaca (Bursera simaruba), bonete (Jacaratia mexicana), cedro (Cedrela odorata), ramn (Brosimum alicastrum), guaje (Leucaena leucocephala), pukt (Bucida buceras), jabn (Piscidia piscipula), Diospyros anisandra, Acacia cornigera, Karwinskia humboldtiana y

Annona squamosa, entre otros.

3.2.3. Sitio 3: Buctzotz (Estado de Yucatn, Mxico)

La recoleccin de muestras rizosfricas de J. mexicana se llev a cabo en un paraje del litoral norte del estado de Yucatn, a 186 km del poblado de Buctzotz, nombre que ostenta tanto el municipio como su divisin administrativa gubernamental. El relicto de SBC elegido por sus atributos naturales se encontraba vegetando a muy baja altitud (no ms de 30 msnm), entre los meridianos 88 33' 26 y 88 39' 37 de longitud oeste y entre los paralelos 21 10' 22 y 21 12' 32 de latitud norte (Fig. 4), a 105-107 km en direccin noreste de la ciudad capital, Mrida, dentro de la provincia fisiogrfica denominada Pennsula de Yucatn, en la subprovincia Carso Yucateco (INEGI, 1987 c).

3.2.3.1. Suelos
En esta regin domina la rendzina y los litosoles, de clase textural media y predominio de limos, con fase fsica ltica y sin fase qumica (INEGI, 1988). El Cuadro 7 muestra la 61

caracterizacin fsica y qumica del suelo colectado en el rea de estudio a una profundidad de 0-20 cm.

rea de recoleccin de las muestras (Escala 1: 1 000 000) Figura 4. Ubicacin geogrfica del rea de recoleccin de ejemplares de herbario y de suelo rizosfrico en la Selva Baja Caducifolia de Yucatn, Mxico (Adaptada de INEGI, 1988).

Cuadro 7. Caracterizacin fsica y qumica del suelo colectado Yucatn, Mxico) a la profundidad 0-20 cm. Determinacin Valor referencial 12% arcilla, 52.5% limo y 35.5% arena Grupo textural pH en agua (relacin 1:2) 6.28 Materia orgnica (%) 15.23 Carbono (%) 3.65 Nitrgeno (%) 0.761 Relacin C/N 4.8 Fsforo (ppm) ND Potasio (ppm) 537.62 Calcio (ppm) 8,640 Magnesio (ppm) 2,737.2 Sodio (ppm) 115.0 3 Densidad aparente (g/cm ) 0.75 Capacidad de campo (%) 72.48

en Buctzotz (Estado de Designacin Franco limoso Ligeramente cido Extremadamente rico Bueno Extremadamente rico Bajo Extremadamente bajo Bajo Normal Muy alta Normal Baja Muy alta

Fuente: Anlisis realizado por personal del Laboratorio de Suelos de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa (Veracruz, Mxico), utilizando mtodos estandarizados de anlisis de suelo y las especificaciones del PROY-NOM-021-RECNAT-2000 (SEMARNAT, 2000). ND = No detectado (Mtodo Bray P1-KitsonMellon). Corresponden a la fraccin soluble ms la fraccin intercambiable.

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3.2.3.2. Clima
El tipo de clima predominante en esta zona corresponde a un clido subhmedo Aw0(x), con rgimen de lluvias de verano y porcentaje de lluvia invernal mayor de 10.2 respecto a la total anual (INEGI, 1988 ).

3.2.3.3. Vegetacin
En este manchn de selva baja, que se desarrolla prcticamente en una regin de escaso relieve y con altitud prxima al nivel del mar, se reconocieron los siguientes componentes: Chaca o hukup (Bursera simaruba), bonete (Jacaratia mexicana), pochota o yaax-ch (Ceiba aesculifolia), jabn (Piscidia piscipula), kaantemo (Acacia

angustissima), chimay (Acacia pennatula), xbesiinik ch (Alvaradoa amorphoides), kaan chunuup (Thouinia paucidentata), nuum tsuutsuy (Acanthocereus pentagonus),
chaay (Cnidoscolus aconitifolius), tulipn de monte o taman chiich (Malvaviscus

arboreus), yaaxnik (Vitex gaumeri), beeb (Pisonia aculeata), nikte (Plumeria obtusa)
y Aphelandra scabra, entre otros.

3.3. Muestreo de suelo

En cada uno de los parajes descritos se tomaron muestras del material rizosfrico de

J. mexicana (noviembre de 1999) y, mediante la adicin sucesiva de submuestras

obtenidas a no ms de 20 cm de profundidad (Fig. 5), se reunieron 30 kg de suelo para iniciar la propagacin de sus hongos micorrizgenos en invernadero. Una vez hecha la mezcla y homogeneizacin de los suelos se les guard en bolsas de polietileno que, debidamente etiquetadas y selladas, se acomodaron en recipientes porttiles especialmente diseados para funcionar trmicamente (12C) durante su traslado a la ciudad de Xalapa (estado de Veracruz, Mxico) para su propagacin. 63

a)

b)

f) e) d) c) g)

Figura 5. Secuencia de imgenes de las faenas de campo seguidas para la obtencin de las muestras de suelo rizosfrico de Jacaratia mexicana en los manchones de Selva Baja Caducifolia de Veracruz, Campeche y Yucatn, Mxico. (a) A partir de un rbol selecto o rbol de referencia se identifican las races secundarias y terciarias (b, c, d, e), mismas que distantes de la zona de goteo hasta en 8 10 m (f) sirvieron para ir almacenando el suelo que se encontraba por debajo de estas (aproximadamente a unos 5 10 cm de profundidad), as como tambin el que prcticamente les rodeaba (g). (Fotografas: Ramn Zulueta Rodrguez).

Finalmente, y a tenor de lo sugerido por Flores-Bello et al., (2000), durante los siguientes 10 das que precedieron a su utilizacin, las muestras de suelo rizosfrico se mantuvieron en refrigeracin (a 10C) con el objeto de romper la latencia de las esporas all contenidas.

3.4. Propagacin de esporas nativas en invernadero

Para incrementar la poblacin de HMA recolectados en el campo, en el Laboratorio de Organismos Benficos (LOB) de la Facultad de Ciencias Agrcolas (FCA) de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa (estado de Veracruz, Mxico) se montaron diez macetas de propagacin de cada una de las procedencias ya descritas, siguiendo

64

los protocolos sugeridos por Morton (1988; 1990 b) denominados comnmente como establecimiento de cultivos-trampa (Sieverding, 1991). Para ello el sustrato preparado fue una mezcla 2:1 (v/v) de suelo rizosfrico nativo (de la SBC de Veracruz, Campeche y Yucatn) y arena de ro pasteurizada mediante vapor (2 das x 1 hora a 90C [Brundrett et al., 1994; 1996]) y aireada durante dos semanas para reducir cualquier tipo de fitotoxicidad derivada de su calentamiento (Rovira y Bowen, 1966), el cual sirvi para sembrar y activar el proceso germinativo de semillas de maz (Zea mays L.), frijol (Phaseolus vulgaris L.), sorgo (Sorghum

bicolor [L.] Moench.), alfalfa (Medicago sativa L.), trbol (Trifolium sp.), avena
(Avena sativa L.) y bonete (Jacaratia mexicana A. D.C.) tratadas en su superficie, tal y como se puntualiz en el apartado 3.1.2. Por lo dems, y tras haberse manifestado un exitosa germinacin (>98%), se procedi a su trasplante en macetas de propagacin de 2 kg de capacidad que se haban llenado y desinfectado (cloro al 5% x 30 min) con los materiales arriba mencionados. Una vez terminada la etapa descrita, todas las macetas se vigilaron durante seis meses en uno de los invernaderos que el LOB tiene dentro de las instalaciones de la FCA. Se les coloc plstico en su superficie (calibre RN-400 pigmentado en color negro, de larga duracin y resistente a los rayos ultravioletas y oxidantes) para reducir la evaporacin y minimizar el riesgo de contaminacin (Brundrett et al., 1996; Dickson et al., 1999 a). Para mantener el sustrato a capacidad de campo y evitar su desecacin, se hicieron riegos controlados con agua destilada cada tercer da. De este modo las races tendran oportunidad de penetrar y aprovechar el contenido de humedad y nutrimentos para el buen desarrollo de las plntulas. Los cultivos-trampa fueron mantenidos por seis meses. 65

3.5. Separacin y extraccin de esporas en laboratorio

Transcurridos los seis meses se tomaron 30 porciones de suelo (50 g por muestra) de las macetas trampa con un sacabocados limpio y esterilizado en autoclave (120C x 30 min) para asegurar que las esporas de los HMA propagadas en el invernadero y separadas, extradas y determinadas en el laboratorio provenan nica y exclusivamente del sitio geogrfico de donde se les haba recolectado. As, las esporas fueron separadas del suelo mediante las tcnicas de tamizado hmedo y decantacin (Gerdemann y Nicolson, 1963), y centrifugacin en gradiente de sacarosa (20/60%) (Daniels y Skipper, 1982) (Anexo 6). Posteriormente, y con la intencin de hacer las primeras indagaciones en microscopio estereoscpico (Nikon SM5), se les verti a una caja de Petri para formar grupos discretos de acuerdo con caractersticas visualizables de tipificacin morfolgica (Abbott y Robson, 1979; Talukdar, 1993; Guerrero, 1996) como tamao, color, sanidad y apariencia uniforme, tipo de hifa de sostn, y estructura de la pared (Morton y Bentivenga, 1994; Varela, 2000; Kleikamp, 2002), entre otras, las cuales son cruciales en los criterios que sirven de base para la clasificacin e identificacin de los distintos morfotipos de esporas de HMA (Sanders et al., 1996). Se hicieron preparaciones permanentes con 10 a 25 esporas colocadas por medio de pipetas Pasteur en el extremo de un portaobjetos nuevo. El exceso de agua se elimin mediante jeringas de plstico estril BD *Plastipak* ultra-finas (29G x 13 mm [1/2]). Antes de colocar el cubreobjetos se les aplic una gota de alcohol polivinlico lactoglicerol (PVLG) (Koske y Tessier, 1983) o bien PVLG mezclado 1:1 (v/v) con reactivo de Melzer, para hacer una ligera presin capaz de romper la pared esporal y permitir su adecuada y minuciosa observacin bajo un microscopio microscopio compuesto Nikon modelo PFX Optiphot-2.

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3.5.1. Identificacin de morfoespecies de hongos formadores de micorriza arbuscular

La identificacin de las morfoespecies de HMA se hizo con un microscopio compuesto Nikon modelo PFX Optiphot-2 y la ayuda del Manual de Schenck y Prez (1990), la literatura especializada, y la pgina y tabla de colores del INVAM (International Culture Collection of Arbuscular & Vesicular-Arbuscular Mycorrhizal Fungi) (tcI) disponibles en la Red Mundial. Todas las preparaciones permanentes se depositaron en el Herbario de la Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas (ENCB) del Instituto Politcnico Nacional (IPN).

3.6. Propagacin de morfoespecies

Con el fin de propagar solo a las morfoespecies cuyo predominio y abundancia fuese manifiesto en los cultivos-trampa establecidos, el nmero de porciones de suelo tomado y valorado de cada una de las procedencias geogrficas en estudio se increment a 50 (50 g por muestra). Para verificar este hecho las esporas fueron separadas del suelo (Gerdemann y Nicolson, 1963; Daniels y Skipper, 1982) y transferidas en cajas de Petri para realizar su conteo sistemtico bajo un microscopio estereoscpico (Carneiro et al., 1996; Pringle y Bever, 2002). Para continuar el proceso depurativo se establecieron nuevos cultivos-trampa nica y exclusivamente con las morfoespecies predominantes, donde la contaminacin externa prcticamente fue nula (Sieverding, 1991; Walker y Vestberg, 1994). Adems durante la manipulacin de los materiales usados en el invernadero se evitaron

67

salpicaduras durante el riego, y las macetas siempre estuvieron separadas y a distancia prudente (10 cm) (Morton et al., 1993) de acuerdo con su procedencia.

3.6.1. Preparacin del sustrato y las macetas trampa

El sustrato utilizado para la propagacin de las morfoespecies de HMA en los cultivos trampa fue, independientemente de su origen geogrfico, una mezcla 2:1 (v/v de suelo de la SBC de Veracruz y arena de ro pasteurizados mediante vapor durante 2 das x 1 hora a 90C [Brundrett et al., 1994; 1996]) aireada para reducir cualquier tipo de fitotoxicidad derivada de su calentamiento (Rovira y Bowen, 1966). Sus principales caractersticas fsicas y qumicas se denotan en el Cuadro 8. Cuadro 8. Caracterizacin fsica y qumica del sustrato utilizado para la propagacin de morfoespecies de Veracruz, Campeche y Yucatn en los cultivos trampa. Determinacin Valor referencial Designacin 17% arcilla, 10% limo y 73% arena Grupo textural Franco arenosa pH en agua (relacin 1:2) 7.8 Ligeramente alcalino Materia orgnica (%) 4.30 Medio Carbono (%) 2.58 Bueno Nitrgeno (%) NDt --Relacin C/N NDt --Fsforo (ppm) ND Extremadamente bajo Potasio (ppm) 208.8 Muy bajo Calcio (ppm) 9,780 Normal Magnesio (ppm) 348.0 Muy bajo Sodio (ppm) NDt --3 Densidad aparente (g/cm ) NDt --Capacidad de campo (%) NDt --Fuente: Anlisis realizado por personal del Laboratorio de Suelos de la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa (Veracruz, Mxico), utilizando mtodos estandarizados de anlisis de suelo y las especificaciones del PROY-NOM-021-RECNAT-2000 (SEMARNAT, 2000). NDt= No determinado. ND= No detectado (Mtodo Bray P1-KitsonMellon). Corresponden a la fraccin soluble ms la fraccin intercambiable.

Con dicho sustrato se llenaron cinco macetas de propagacin de 2 kg de capacidad por cada morfoespecie y procedencia, previamente desinfectadas con hipoclorito de sodio (cloro al 5% x 30 min), en las cuales se depositaron semillas de maz (Zea 68

mays L.), pasto orchard (Dactylis glomerata L.) y bonete (Jacaratia mexicana A. D.C.)
activadas natural y anticipadamente en su proceso germinativo, cuyo tratamiento y manejo preemergente fueron denotados en el apartado 3.1.2.

3.6.2. Propagacin de las morfoespecies identificadas

Una vez precisada la identidad taxonmica de las morfoespecies de HMA se procedi a la cuidadosa conformacin de grupos discretos bajo un microscopio estereoscpico. Adems, y con el propsito de anular toda posible actividad biolgica en su superficie (Mosse, 1962; Ames et al., 1987; Bianciotto et al., 1996; Tawaraya et al., 1996; Giovannetti et al., 1999; Bianciotto et al., 2000), en forma paralela a su aislamiento y separacin se les esterilizaba su contorno (Bago et al., 2000 b) (Anexo 7). Al concatenar las sugerencias vertidas por Morton (1990 a) y de conformidad con las indicaciones metodolgicas propuestas por Brundrett et al., (1994; 1996) (Anexo 8), las esporas tratadas se fueron depositando en un sustrato esterilizado donde se pusieron a crecer sus plantas husped. Cuando las macetas quedaron listas para la propagacin de las morfoespecies electas se les llev al invernadero del LOB con el fin de repetir el manejo descrito en el apartado 3.4. No obstante, en esta etapa se construyeron unas estructuras especiales de madera y malla fabricada con monofilamentos de polietileno de alta densidad calibre 10 (15 x 28 milsimas de pulgada el claro entre hilos), tratados con absorbedor de luz ultravioleta y antioxidante para resistir un mnimo de cuatro aos expuestos a la intemperie, los cuales estn diseados para evitar la entrada de insectos tan

69

pequeos como los fidos (1 mm), sin impedir una iluminacin y ventilacin adecuadas. As la puerta deslizable de cada una de ellas solo se abra cada tercer da para hacer los riegos controlados con agua destilada para mantener el sustrato a capacidad de campo adicionndose, a partir de los 60 das y hasta los 180, la solucin nutritiva de Hoagland menos fsforo (P)29 (Graham y Fardelmann, 1986; Al-Garni y Daft, 1990; Graham et al., 1991), modificada en su frmula original por Fernndez y Johnson (1986) al contener fierro (Fe) en forma de quelato (Anexo 9).

3.6.3. Eleccin y obtencin del inculo

Con la finalidad de generar informacin sobre el comportamiento e interaccin que los grupos discretos de HMA elegidos pudieran presentar en la colonizacin micorrizgena de las plantas husped escogidas para realizar este estudio (papaya F1 [Carica papaya WP 171] y bonete [Jacaratia mexicana A. DC.])30, las esporas fueron separadas de los cultivos-trampa despus de seis meses (apartado 3.5.) y esterilizadas en su superficie (Anexo 7) para valorar su potencial infectivo (Al-Garni y Daft, 1990; Abbott y Robson, 1991) bajo las condiciones ambientales y de manejo particulares en que se conduciran los bioensayos donde sera evaluada la eficiencia simbitica de cada morfotipo.

3.7. Ubicacin del rea experimental

La investigacin sobre la eficiencia de las morfoespecies de HMA se llev a cabo dentro del campo experimental La Bandera (perteneciente a la Facultad de Ciencias Agrcolas de la Universidad Veracruzana, Campus Xalapa) que se encuentra ubicado
29 30

En este caso 250 mililitros (mL) mensuales. Hbrido [Lote 377.034.284 F] de Western Seed Internacional B.V. y de origen silvestre, respectivamente.

70

en el municipio de Actopan, Veracruz, a 10.6 km del camino pavimentado La Bocana a Actopan (carretera federal 180 Mxico-Veracruz, a 37.4 km de la ciudad de Xalapa) y 0.1 km del entronque hacia Idolos. El clima que prevalece en la zona es tropical subhmedo Awo(w)(i)gw (Vzquez et

al., 1992) caracterizado por presentar un rgimen de lluvias de verano, cociente P/T
menor de 43.2, poca oscilacin trmica, marcha anual de temperatura tipo Ganges y sequa intraestival (Garca, 1987), con temperatura media anual de 24.8C y precipitacin pluvial cercana a los 900 mm al ao (Zulueta, 1993). Los suelos predominantes son cambisoles (hmicos, hmico-vrticos), feozems (calcricos, calcrico-vrticos) y leptosoles (lticos, rndzicos y mlicos) (Castaeda, 2000).

3.8. Establecimiento de los bioensayos

Para alcanzar los objetivos pretendidos en este estudio la investigacin se dividi en dos etapas, en las cuales se trat de agregar mayor vala biolgica a los bioensayos al conducir las evaluaciones bajo un manejo y estricta asepsia controladas en una estructura construida ex profeso a 192734 de latitud norte, 963411 longitud oeste y 190 msnm (Fig. 6), donde las condiciones de luminosidad, temperatura y humedad relativa son propias del trpico seco. Los bioensayos implementados en cada etapa se describen a continuacin:

3.8.1. Bioensayo preliminar

Tal y como Graham y Abbott (2000) lo exteriorizan, este tipo de valoraciones son trascendentes para verificar y calibrar el potencial de colonizacin radical de todo hongo MA aislado. Por ello el bioensayo preliminar efectuado fue precedido por la siembra de semillas desinfectadas con hipoclorito de sodio (cloro al 10% x 15 min [Duncan y Howard, 71

2000; Zhu et al., 2000]) y enjuagadas con agua destilada estril durante 15 min antes de ser colocadas en cavidades de unicel reforzado (de 34.0 x 67.0 x 7.0 cm) donde se activara su proceso germinativo. a)

d)

b)

c)

Figura 6. Secuencia de imgenes del acondicionamiento del sitio y armado de la estructura donde se llev a cabo el experimento: Se colocan varios polines de madera para dejar firme la malla metlica exterior y de esta manera evitar el ingreso de organismos y materiales no deseados que pudieren contaminar a los bioensayos (a). Se forra por dentro con malla antifidos (ver caractersticas en apartado 3.6.2.) (b). Panormica del sitio donde se llev a cabo el experimento (8.0 x 2.0 m en su interior) (c). Puerta de acceso para llevar a cabo el control de los bioensayos y la toma de datos (d). (Fotografas: Ramn Zulueta Rodrguez).

El da 4 de junio de 2001 se trasplantaron 70 plntulas de papaya F1, que posean un par de hojas verdaderas, a contenedores individuales convermex no. 16 (de 9.0 cm de dimetro y 12.9 cm de alto) llenados hasta en 2 terceras partes de su capacidad con 450 g del sustrato preparado con suelo de SBC de Veracruz y arena de ro (1:1, v/v) esterilizados con basamid (ingrediente activo dazomet [tetrahidro-3,5-dimetil-2H1,3,5-tiadizin-2-tiona]) (Thingstrup, 1998; Olsson et al., 1999; ONeill y Mitchell, 1999) en dosis de 400 kg ha-1 (Rosenstein, 1998). As, y con la intencin de discernir sobre cual sera el nmero de esporas y la necesidad o no de desinfectar su superficie para anular toda posible actividad 72

biolgica ajena a la interaccin entre los simbiontes, se condujo un bioensayo preliminar con un arreglo combinatorio simple y distribucin de tratamientos completamente al azar, donde el nmero de tratamientos dependi bsicamente de la combinacin existente entre la cantidad de esporas (10, 50 100) y el recibir o no un trato previo en su superficie (Cuadro 9). Cuadro 9. Descripcin de los tratamientos evaluados en el bioensayo preliminar. Factor Espora esterilizada en su superficie No No Si No Si No Si

Nmero de esporas del morfotipo HMA 0 10 10 50 50 100 100

Tratamientos T1 (Testigo) T2 (10 eGise) T3 (10 eGie) T4 (50 eGise) T5 (50 eGie) T6 (100 eGise) T7 (100 eGie)

En el bioensayo preliminar solo se evaluaron las esporas del morfotipo procedente de Veracruz. En todos los tratamientos el contenido de P asimilable era de 4 ppm. Los cdigos entre parntesis indican la composicin de cada uno de ellos donde 10, 50 y 100= nmero de esporas recibidas, eGise= esporas de Glomus intraradices sin esterilizar y eGie= esporas de Glomus intraradices esterilizadas.

Para evitar la contaminacin de los grupos de esporas tipo formados de acuerdo con los rasgos caractersticos previamente definidos y tratamiento asignado31 mediante el uso de pipetas Pasteur con punta de apertura de 0.2-0.5 mm se fueron transfiriendo de las cajas de Petri a su respectiva bolsa de plstico (de 11.0 x 7.0 cm que contena 2 g de arena estril como sustrato portador) dentro de una cabina de flujo laminar. El total de tratamientos evaluados (7 con 10 repeticiones) permiti la toma de datos en las 70 plantas de C. papaya WP 171 que durante el mes de junio de 2001 se

31

Ver en Anexo 7 el procedimiento para esterilizar la superficie de las esporas.

73

manejaron en el sitio experimental acondicionado (Fig. 6) donde se presentaron entre 28.0 y 30.2C de temperatura y 49.1% de humedad relativa ambientales naturales promedio. En este caso las variables ponderadas en cada unidad experimental (1 planta) fueron crecimiento en altura, nmero de hojas, produccin de biomasa area seca32, rea foliar y porcentaje de colonizacin radical a los 5, 10, 15 y 20 das despus de la inoculacin (ddi). El efecto de los tratamientos sobre las primeras cuatro variables de respuesta se examinaron aplicando el anlisis de varianza (ANOVA) de SAS 6.12 para Windows y para la comparacin de medias de los tratamientos se us la prueba de Tukey, ya que a travs de ella se puede hacer una comparacin muy confiable para cualquier nivel de significancia propuesto (Camacho y Camacho, 1992). En este caso del 5% (= 0.05). Dicha valoracin se hizo mediante un diseo de dos vas de clasificacin donde el factor nmero de esporas y su esterilizacin se consider como anlogo del factor bloques con el fin de separar el efecto que pudieran llegar a tener estas en la respuesta emanada de cada tratamiento. En vista de que la colonizacin de las races fue muy inconstante (incluso dentro de un mismo tratamiento) y los datos no tuvieron una distribucin normal ni homogeneidad en las varianzas requeridas en un ANOVA (St. John y Koske, 1988; Alvarez-Santiago et al., 1996), esta ltima variable se analiz mediante la prueba de Kruskal-Wallis (= 0.05) de STATISTICA 6.0 para Windows por ser considerada la alternativa no paramtrica para una prueba F de anlisis de varianza en un diseo completamente aleatorizado (Gange et al., 1999; Daz, 2001).

32

Base seca no recomendable de referir en el sistema radical de plntulas pequeas, para efectuar un anlisis ms preciso de su colonizacin (Rajapakse y Miller, 1994).

74

3.8.1.1. Variables medidas en el bioensayo preliminar

Cada cinco das se tomaban los datos de crecimiento en altura y nmero de hojas de las plantas, su produccin de biomasa y rea foliar, y la colonizacin de las races de la siguiente manera:

3.8.1.1.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas

La altura se midi con un escalmetro metlico A.W. Faber-Castell 853-HP-A (en cm) partiendo de la base hasta el ngulo superior del domo apical (meristemo apical) donde se forman los primeros primordios foliares. El nmero de hojas se obtuvo mediante observacin directa sin tomar en cuenta a las hojas cotiledonales.

3.8.1.1.2. Produccin de biomasa y rea foliar

El peso seco de la biomasa se determin con una balanza digital modelo Precisa 125 ASC5 (Swiss Quality, ISO 9001) cuando los tejidos vegetales mantenidos a 70C en una estufa Robertshaw (con doble termostato 50-300C de Robertshaw Controls Company) alcanzaban peso constante. El rea fotosinttica total, expresada como rea foliar, se obtuvo con un medidor porttil CI-202, modelo SE410G (CID, Inc.).

3.8.1.1.3. Colonizacin de las races

Para evaluar la colonizacin de las races se tieron de acuerdo con la tcnica de Phillips y Hayman (1970) (Anexo 4), y el porcentaje de colonizacin radical se determin a 200X en un microscopio compuesto Nikon modelo PFX Optiphot-2 por el mtodo de McGonigle et al., (1990) (Anexo 5).

75

3.8.2. Bioensayos de eficiencia

Con fundamento en las actividades realizadas y directrices marcadas en el bioensayo preliminar descrito en el apartado 3.8.1., y despus de haber inoculado a las plantas husped con la densidad de esporas de los morfotipos de HMA considerada como la ms apropiada para los contenedores individuales mencionados (en este caso 50 y con su superficie estril), las variables de respuesta se midieron en la periodicidad que a continuacin se denota: A los 15, 30, 45 y 60 ddi en el caso de C. papaya (bioensayo final 1), y durante las etapas iniciales de crecimiento de J. mexicana, a los 15, 30, 75 y 120 ddi (bioensayo final 2). Con ello se monitore la interaccin ocurrida entre los simbiontes en ese preciso momento, as como los porcentajes de colonizacin micorrzica alcanzados en cada fecha (Abbott y Robson, 1985 b).

Para evaluar la eficiencia de las morfoespecies de HMA en los dos bioensayos finales, los experimentos se condujeron con un arreglo simple y distribucin de tratamientos en bloques al azar, en donde el nmero de tratamientos dependi de la aplicacin de P (Bolan et al., 1984; Peng et al., 1993; Chacn y Cuenca, 1993; Johnson et al., 1997; Cuenca et al., 1998), la procedencia geogrfica del morfotipo, y la inoculacin con esporas de los HMA en densidad conocida (Al-Garni y Daft, 1990) y con su superficie desinfectada (Cuadro 10). Al mismo tiempo las esporas de cada morfotipo y procedencia utilizadas en ambos bioensayos se manipularon de acuerdo con lo sugerido por Bago et al., (2000 b) para evitar su contaminacin, y por ello dentro de una cabina de flujo laminar se les fue depositando en sus respectivas bolsas de plstico (de 11.0 x 7.0 cm con 2 g de sustrato estril) mediante el uso de pipetas Pasteur con punta de apertura de 0.20.5 mm.

76

Cuadro 10. Descripcin de los tratamientos evaluados en las dos plantas husped: Carica papaya y Jacaratia mexicana. Factor Procedencia del morfotipo de las esporas de los HMA Testigo 1 Testigo 2 Veracruz Campeche Yucatn

Nmero de esporas con su superficie estril 0 0 50 50 50

Aplicacin de P (50 ppm) No Si Si Si Si

Tratamientos

T1 (Testigo 1) T2 (Testigo 2) T3 (50 eGie V) T4 (50 eGie C) T5 (50 eGie Y)

El aporte de P se determin basndose en las recomendaciones de Schubert y Hayman (1986) y Swift (2002). En este caso a partir de una solucin de 50 ppm de fosfato de calcio dibsico (CaHPO4), y se excluy en T1 (Testigo 1). Los cdigos entre parntesis indican la composicin de cada uno de ellos donde 50= nmero de esporas recibidas, eGie= esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie, y las letras V, C y Y= su respectiva procedencia: Veracruz, Campeche y Yucatn.

El total de tratamientos y bloques evaluados entre octubre de 2001 y febrero de 2002 fueron 5 en cada caso, y los datos se tomaron en 100 plantas de C. papaya y de J.

mexicana en sus respectivos bioensayos. Las unidades experimentales (1 planta) se

agruparon en estratos perpendiculares al gradiente de luminosidad que prevaleca en el sitio donde se llev a cabo el experimento (entre 353.16 y 827.28 lx de las 8:00 a las 13:00 horas) (fotmetro General Electric modelo 214). La temperatura y humedad relativa ambientales promedio fueron 25.5C y 50%, respectivamente. En los dos bioensayos finales citados el efecto de los tratamientos sobre las primeras cuatro variables de respuesta tambin se examinaron mediante un ANOVA de SAS 6.12 para Windows y la prueba de Tukey (= 0.05) para la comparacin de medias. Su valoracin se hizo mediante un diseo en bloques al azar y la combinacin de las fechas de muestreo. Con relacin al procedimiento empleado para comparar la distribucin de las estructuras formadas por el micosimbionte en las races de su socio fotosinttico en 77

cada uno de los tratamientos inoculados se utiliz la prueba no paramtrica de Friedman (= 0.05) de STATISTICA 6.0 para Windows, por ser la alternativa ms viable para analizar las mediciones obtenidas en un diseo en bloques aleatorizados (Daz, 2001). Finalmente y conforme llegaba cada uno de los das preestablecidos para secuenciar el procesamiento de las muestras, en las plantas seleccionadas se determinaron las variables de crecimiento en altura y nmero de hojas, produccin de biomasa seca, rea foliar, asimilacin neta de CO2, transpiracin de las hojas y colonizacin de las races de la siguiente manera:

3.8.2.1. Variables adicionales medidas en los bioensayos finales

Como el crecimiento en altura, nmero de hojas, produccin de biomasa area y radical (peso seco), rea foliar y colonizacin de las races se evaluaron conforme a lo descrito en el bioensayo preliminar (apartado 3.8.1.1.), a continuacin se har alusin a los aspectos metodolgicos ah no especificados. Por consiguiente se incluyen nicamente los referentes a la asimilacin neta de CO2, transpiracin de las hojas, acumulacin de P en la biomasa area de las plantas husped y la evaluacin de la eficiencia de la simbiosis micorrzica.

3.8.2.1.1. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas

Las proporciones de asimilacin neta de CO2 (fotosntesis y respiracin) y de transpiracin (apertura estomtica y evaporacin) de las hojas se midieron in situ con la unidad manual de luz del analizador de gas CO2/H2O TPS-1 (de PP Systems). De este modo se asegura un valor constante de energa (0-1,500 micromol/m/s) en la cmara de hoja (PLC Universal) donde la funcin se efecta bajo el principio de

78

sistema abierto basado en la diferencia que se da entre las concentraciones del aire que entra (aire de referencia) y el que sale (aire del anlisis).

3.8.2.1.2. Acumulacin de P en la biomasa area de las plantas husped

La cantidad de P (digestin va seca) presente en los rganos areos de las plantas husped se midi por el mtodo colorimtrico del cido ascrbico sin ajustar pH, determinndose en un espectrofotmetro UV/VIS Lambda 40 Perkin Elmer (Chapman y Pratt, 1991; Alcntar et al., 1992). Para el caso particular de este elemento nutricional, en cada bioensayo el anlisis de laboratorio se realiz a un total de 50 muestras de biomasa area de plantas de C.

papaya (bioensayo final 1) y de J. mexicana (bioensayo final 2) tomadas a los 30 y 60

ddi, y 30 y 120 ddi, respectivamente. Los datos obtenidos fueron examinados aplicando el ANOVA de SAS 6.12 para Windows y estimando las diferencias entre los tratamientos por medio de la prueba de Tukey con un nivel de significancia del 5% (= 0.05).

3.8.2.1.3. Eficiencia de la simbiosis micorrzica

Con base en los argumentos expresados por Kahiluoto y Vestberg (1997), la eficiencia de la simbiosis micorrzica (ESM) se determin de la manera siguiente: ESM = (PSmic+ - PSmic-) x 100%/PSmic+ donde: PSmic+ = Peso Seco (o la captacin total de P) de las plantas colonizadas y PSmic-= Peso Seco (o la captacin total de P) de las plantas no inoculadas

79

4. RESULTADOS 4.1. Micotrofa en plantas de Jacaratia mexicana

Aunque en ninguna de las races recolectadas en campo se apreci la formacin de estructuras de hongos MA, en las plantas transferidas al invernadero e inoculadas con el consorcio micorrzico MTZ-1 se constat su presencia a los 60 ddi (Fig. 7), lo cual revela que J. mexicana no es una especie exenta de colonizacin por HMA bajo circunstancias favorables.

a)

b)

b)

Figura 7. Estructuras de hongos formadores de micorriza arbuscular observadas a 40X en races de Jacaratia mexicana inoculadas con el consorcio micorrzico MTZ-1 a los 60 ddi. (a) Hifas y (b) Arbsculos (rea con tonos azules visiblemente ms fuertes). (Fotografa: Ramn Zulueta Rodrguez).

Por otro lado, las plntulas de J. mexicana emergidas de las semillas recolectadas en Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico) y que fueron sometidas a la prueba de inmunidad micorrizgena propuesta por Tester et al., (1987) revelaron su capacidad de asociacin con los HMA a partir de los 15 ddi (20% de colonizacin), afinidad que a los 20 das fue de 80% y a los 25 de 100% (Figs. 8 y 9).

80

c) b)

a)

c)
Figura 8

a)

a) c)

b)

c) b)

Figura 9 Figuras 8 y 9. Estructuras de hongos formadores de micorriza arbuscular observadas a 100 y 40X, respectivamente, en races de plntulas de Jacaratia mexicana inoculadas con el consorcio micorrzico MTZ-1 a los 15 ddi (20% de colonizacin). (a) Hifas, (b) Arbsculos y (c) Vesculas.
(Fotografas: Ramn Zulueta Rodrguez).

81

4.2. Identificacin de morfotipos de hongos formadores de micorriza arbuscular

En el Cuadro 11 se muestra la lista de morfotipos encontrados, as como su arreglo taxonmico. Se identificaron seis morfoespecies que corresponden con tres de los seis gneros reportados para el Orden Glomales, siendo Glomus el ms ampliamente representado con cuatro de ellas, mientras que Entrophospora y Sclerocystis33 solamente figuraron con una. Cuadro 11. Lista de taxa de hongos formadores de micorriza arbuscular encontrados en el suelo rizosfrico de Jacaratia mexicana. Orden Glomales Suborden Glomineae Familia Glomaceae Acaulosporaceae Morfoespecies
Glomus intraradices Glomus constrictum Glomus sp. 1 Glomus sp.2 Sclerocystis sinuosa Entrophospora infrequens

Morfoespecie/Localidad
Glomus intraradices Glomus constrictum Glomus sp. 1 Glomus sp.2 Sclerocystis sinuosa Entrophospora infrequens += Presente, -= Ausente

Presencia de la morfoespecie Veracruz Campeche Yucatn + + + + + + + + + +

4.3. Descripcin de las morfoespecies

En este apartado solo se hace referencia a aquellas morfoespecies cuyo nmero de esporas propagadas o de inconfundibles caractersticas permitieron su descripcin (p. ej. Sclerocystis sinuosa y Entrophospora infrequens).
Actualmente todas las especies que estaban incluidas en este gnero han sido transferidas a Glomus (Schler et al., 2001). Asimismo, y con base en los avances referidos a tcnicas moleculares y su relacin con caractersticas morfolgicas de las esporas se han propuesto dos nuevas familias de Glomales (Archaeosporaceae y Paraglomaceae) con sus respectivos gneros: Archaeospora y Paraglomus (Morton y Redecker, 2001).
33

82

De las Glomaceae halladas en Veracruz no se consignan Glomus sp 1 (5.45%, Fig. 10) y Glomus sp. 2 (4.08%, Fig. 11) pero se les considera porque fueron encontradas en el paraje muestreado (Cuadro 11). Adems, la primera de ellas parece ser que todava no se ha descrito (Varela, L. comunicacin personal, junio de 2000).

No definida
Figura 10. Glomus sp. 1 (Fotografa: Ramn Zulueta Rodrguez)

No definida
Figura 11. Glomus sp. 2 (Fotografa: Ramn Zulueta Rodrguez)

83

Los materiales esporales estudiados provenan de Plan de La Higuera (Estado de Veracruz, Mxico), Seybaplaya (Estado de Campeche, Mxico) y Buctzotz (Estado de Yucatn, Mxico) (Cuadro 11), y los ejemplares de referencia se encuentran depositados en el Herbario de la ENCB del IPN. El diagnstico taxonmico de las morfoespecies identificadas fue el siguiente:

4.3.1. Glomus intraradices Schenck & Smith (Fig. 12)

Esporas solitarias o formando agrupaciones laxas en el suelo o dentro de la raz, globosas a subglobosas, de color amarillo paja a amarillo, y en ocasiones con tintes verdosos (0/0/10/0)tcI, (0/0/40/0)tcI a (20/40/100/0)tcI, de 82.5 -120 m. Pared formada por tres capas. La capa 1 (C1) es evanescente, por lo que solo se observa en esporas jvenes. Dicha capa se tie de rosa (20/60/20/0)tcI a prpura (20/80/20/0)tcI con el reactivo de Melzer. La capa 2 (C2) es unitaria y hialina. La capa 3 (C3) es laminada, y se encuentra formada por varias subcapas que no se separan al aplicar una presin ligera. Hifa de sostn recta, cilndrica de 9-15 m de grosor, subhialina a amarillo paja.

ca.
12 m
Figura 12. Glomus intraradices (Fotografa: Ramn Zulueta Rodrguez)

84

4.3.2. Glomus constrictum Trappe (Fig. 13)

Esporas solitarias formadas en el suelo, globosas a subglobosas, de 180 a 300 m, de color caf oscuro (60/80/100/10)tcI a negro brillosas. Pared de la espora formada por dos capas: La capa 1 (C1) unitaria, hialina, y la capa 2 (C2) laminada, de color caf oscuro. Hifa de sostn recta frecuentemente con una constriccin por abajo del punto de unin con la espora. La pared de la hifa amarillenta a caf amarillento cerca de la espora, volvindose hialina conforme se aleja de ella.

ca.
37 m
Figura 13. Glomus constrictum (Fotografa: Ramn Zulueta Rodrguez)

4.3.3. Sclerocystis sinuosa Gerdemann & Bakshi (Fig. 14)

Esporas formadas en el suelo en esporocarpos compactos de color caf anaranjado (0/60/100/10)tcI, globosas subglobosas a irregulares de 220 a 360 m y con un peridio grueso formado por hifas sinuosas.

85

 Esporas clavadas a obovadas arregladas radialmente alrededor de un plexo central de hifas. Pared de la espora formada por una sola capa laminada ms gruesa en la base y en ocasiones tambin en el pice.

ca.
45 m
Figura 14. Sclerocystis sinuosa (Fotografa: Ramn Zulueta Rodrguez)

4.3.4. Entrophospora infrequens (Hall) Ames & Schneider (Fig. 15)

Esporas solitarias en el suelo, globosas a subglobosas, de 117.5-185 X 115-182.5 m, de color caf anaranjado claro a caf anaranjado oscuro (0/40/80/0)tcI a (0/60/100/10)tcI. Pared de la espora formada por cuatro capas: La capa 1 (C1) es hialina, continua con la pared del sculo, evanescente por lo que desaparece al madurar la espora y desprenderse del sculo. Esta capa se tie de color rosa (0/60/20/0)tcI a prpura (20/80/10/0)tcI con el reactivo de Melzer. La capa dos (C2) es hialina, y frecuentemente evanescente.

86

a
ca.
54 x 53 m

b
ca.
50 x 49 m

Figura 15. Entrophospora infrequens. Apariencia de las esporas bajo un microscopio estereoscpico. Todas las capas se forman secuencialmente durante la diferenciacin de la pared de la espora (a y b) Esporas jvenes, (c y d) Esporas maduras, (e y f) Esporas con PVL + Melzer (Fotografas:
Ramn Zulueta Rodrguez).

La capa tres (C3) es amarillenta (0/20/60/0)tcI a caf amarillenta (0/30/80/0)tcI con proyecciones de 1.5 a 5.0 m de alto y de 1.5 a 3.0 m de ancho. Dichas proyecciones presentan una depresin en el centro. 87

 La capa cuatro (C4) hialina, membranosa, se separa de las otras capas al aplicar una ligera presin a la pared. Hifa de sostn hialina que termina en un sculo globoso, el cual llega a medir hasta 185 m. La distancia entre el sculo y la espora es de 12-14 m.

4.4.

Morfotipos de hongos formadores propagados en invernadero

de

micorriza

arbuscular

Aun cuando Glomus intraradices y Sclerocystis sinuosa fueron los nicos morfotipos comunes en los tres manchones de SBC donde se recogieron las muestras rizosfricas de J. mexicana (Cuadro 11), la eminente dificultad existente para recolectar esporocarpos de S. sinuosa donde las esporas no estn vacas y/o muertas (Walker, C. comunicacin personal, mayo de 2002), independientemente del tiempo requerido para su exitosa propagacin, prcticamente hicieron imposible su inclusin en este estudio. No obstante la cuantificacin esporal de la primera confirm que G. intraradices sera la nica morfoespecie elegible para su propagacin en cultivo puro toda vez que, al prevalecer de manera categrica en los cultivos-trampa establecidos (Cuadro 12), cumpla cabalmente con el postulado precisado como necesario para proceder a la valoracin de su eficiencia. Cuadro 12. Criterio discrecional utilizado para elegir a los morfotipos propagados en cultivo monoespecfico: Su prevalecimiento. Presencia del morfotipo identificado (%) Localidad
Veracruz Campeche Yucatn

Glomus intraradices
90.136 71.911 97.246

Sclerocystis sinuosa
0.324 28.088 0.419

88

4.5. Bioensayo preliminar: Respuesta de Carica papaya a la inoculacin con diferente nmero de esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie 4.5.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas
Transcurridos 20 ddi la mejor altura correspondi a las plantas del tratamiento 100 eGise (Fig. 16), pero su comportamiento estadstico fue similar al obtenido en las plantas de los tratamientos 50 eGise y 100 eGie. En cambio, la menor altura se registr en las plantas testigo que no fueron inoculadas.

6 5
Altura (cm)
ab c bc a ab

4 3 2 1 0

Testigo

10 eGise

10 eGie

50 eGise

50 eGie

100 eGise

100 eGie

Tratamientos Figura 16. Crecimiento en altura de las plantas de Carica papaya a 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfotipo procedente de Veracruz). Para cada tratamiento, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

En cuanto al nmero de hojas se refiere, el ANOVA no estableci diferencia significativa (P0.05) entre los tratamientos evaluados dado que Pr>F = 0.5442.

4.5.2. Biomasa seca y rea foliar

Las plantas del tratamiento 50 eGie fueron las que mostraron una mayor capacidad para convertir la energa y los nutrimentos disponibles en biomasa seca area y

89

radical (Figs. 17 y 18), si bien en la segunda variable no existi diferencia estadstica con el resto de los tratamientos evaluados (P0.05, Pr>F = 0.4947).
0.05 0.045 0.04 0.035 0.03 0.025 0.02 0.015 0.01 0.005 0

Biomasa area seca (g)

ab b

a ab ab ab ab

Testigo

10 eGise

10 eGie

50 eGise

50 eGie 100 eGise 100 eGie

Tratamientos
Figura 17. Biomasa area seca de las plantas de Carica papaya a 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfotipo procedente de Veracruz). Para cada tratamiento, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

0.007 0.0068 0.0066 0.0064 0.0062 0.006 0.0058 0.0056 0.0054 0.0052

Biomasa radical seca (g)

a a a a a a

Testigo

10 eGise

10 eGie

50 eGise

50 eGie 100 eGise 100 eGie

Tratamientos
Figura 18. Biomasa radical seca de las plantas de Carica papaya a 20 das de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfotipo procedente de Veracruz). Para cada tratamiento, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

Por otra parte, en el rea foliar de las plantas tampoco se detect diferencia significativa entre los tratamientos (P0.05) dado que Pr>F = 0.2129. 90

4.5.3. Colonizacin micorrzica

La cuantificacin de la colonizacin en las races de C. papaya cada 5 ddi permiti establecer que la actividad entre los simbiontes comenz a los 20 ddi, dinamismo que no obstante haber tenido una intensidad de colonizacin mayor en las plantas de los tratamientos 50 eGise (3.90%) y 50 eGie (3.0%), la eficiencia interactiva parece haberse evidenciado ms bien en este ltimo, donde las plantas lograron la mayor produccin de biomasa seca area (0.043 g, Fig. 17) y radical (0.00665 g, Fig. 18). En contraste los valores de colonizacin ms bajos fueron hallados en las plantas donde solo se haban utilizado 10 esporas para su inoculacin (tratamiento 10 eGise [1.0%] y 10 eGie [0.90%]), aunque sin diferencia estadstica con las preparaciones examinadas de los dems tratamientos (Kruskal-Wallis= 5.300, P= 0.5059) (Fig. 19). 6 5
Colonizacin (%)

4 3 2 1 0
Testigo 10 eGise 10 eGie 50 eGise 50 eGie 100 eGise 100 eGie

Tratamientos
Figura 19. Colonizacin de Carica papaya (tcnica de McGonigle et al., 1990), 20 das despus de haberse iniciado la evaluacin del potencial infectivo de Glomus intraradices (morfotipo procedente de Veracruz). Para cada tratamiento, las lneas verticales en cada columna son el error estndar ().

De esta manera se logr discernir que el tratamiento 50 eGie era el ms adecuado para valorar posibles cambios morfolgicos o fisiolgicos que las plantas husped

91

seleccionadas pudiesen mostrar tras su privativo asocio con cada una de las morfoespecies cuya procedencia geogrfica es distinta.

4.6. Bioensayos de eficiencia 4.6.1. Bioensayo final 1: Respuesta de Carica papaya a la inoculacin con 50 esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie, y de procedencia geogrfica distinta 4.6.1.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas
El ANOVA estableci diferencias para la variable altura de las plantas a los 30 ddi (P0.05) y a los 60 ddi (P0.01) (Cuadro 13). Cuadro 13. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el crecimiento en altura en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya (ANOVA, P0.05). Das despus de la C.V. F calculada Pr>F R2 Variable (%) inoculacin 15 0.3528 0.35 11.06 1.19NS Altura (cm) 30 45 60
NS= No significativo (P0.05)
*

0.0222 0.5121 0.0040

Significativo (P0.05)

0.54 0.46 0.62

**

8.74 10.79 8.13

3.86* 0.85NS 5.93**

Altamente significativo (P0.01).

Adems al finalizar el experimento hubo contraste estadstico entre el testigo 1 y los dems tratamientos evaluados (Fig. 20). Para el caso del nmero de hojas, en el Cuadro 14 se indican los niveles de significancia entre los tratamientos evaluados (ANOVA P0.05). A los 45 ddi las plantas del testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y superaban a las del testigo 1 en sus respectivos incrementos en el brote del follaje del 45.45, 45.45, 54.54 y 92

68.18%, de los cuales al finalizar el experimento (60 ddi) fue ms evidente en el ltimo de los tratamientos sealados (50 eGie Y) al culminar con un aumento del 66.66% con respecto a las plantas sin inocular testigo 1 (Fig. 21).

8 7 6 A ltura (cm) 5 4 3 2 1 0
15 30 45
a a a a a b ab a ab ab a a a a a b

a a a

60

Testigo 1

Das despus de la inoculacin Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C

50 eGie Y

Figura 20. Crecimiento en altura de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

Cuadro 14. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el nmero de hojas en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya (ANOVA, P0.05). Variable Das despus Pr>F R2 C.V. F calculada de la (%) inoculacin 15 0.0467 0.47 15.64 3.07* Nmero de hojas
*

30 45 60
**

0.0126 0.0004 0.0281

0.65 0.72 0.49

13.35 12.93 22.06

4.50* 9.64** 3.60*

Significativo (P0.05)

Altamente significativo (P0.01)

4.6.1.2. Biomasa seca y rea foliar

El ANOVA marc diferencias significativas entre los tratamientos a partir de los 30 ddi (P0.05) para la biomasa area seca de las plantas (Cuadro 15), mientras que en la biomasa seca radical no las hubo en ninguna de las fechas valoradas (Cuadro 16). 93

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0

ab ab a a a a a a a a ab b ab b b a a a

ab

Nmero de hojas

15

30

45

60

Testigo 1

Das despus de la inoculacin Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C

50 eGie Y

Figura 21. Nmero de hojas en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

Cuadro 15. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la biomasa area seca de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya (ANOVA, P0.05). Variable Das despus Pr>F R2 C.V. F calculada de la (%) inoculacin 15 0.8916 0.35 57.29 0.27NS Biomasa area seca (g) 30 45 60
*

0.0365 0.0099 0.0006

Significativo (P0.05)

0.57 0.56 0.71

**

23.43 24.18 22.39

3.33* 4.78** 8.69**

NS= No significativo (P0.05)

Altamente significativo (P0.01).

Cuadro 16. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la biomasa radical seca de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya (ANOVA, P0.05). Variable Das despus Pr>F R2 C.V. F calculada de la (%) inoculacin 15 0.3397 0.35 37.42 1.22NS Biomasa radical seca (g) 30 45 60 0.2862 0.1680 0.5110 0.28 0.43 0.18 33.27 32.38 42.74 1.38NS 1.85NS 0.86NS

NS= No significativo (P0.05).

94

De esta manera las diferencias estadsticas entre las plantas del tratamiento testigo 1 y los dems tratamientos se hizo evidente a partir de los 30 ddi, siendo las plantas del tratamiento 50 eGie C las que lograron una mayor productividad neta (127.27%) y las del tratamiento 50 eGie V la menor (39.39%) con respecto a las testigo 1 (Fig. 22). 0.09 0.08 Biomasa area seca (g) 0.07 0.06 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 0
15 30 45 60
a a a a a b a a ab ab ab b ab ab c a ab a abc bc

Testigo 1

Das despus de la inoculacin Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 e Gie Y

Figura 22. Biomasa area seca de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

El rea foliar de las plantas exhibi un comportamiento similar al indicado para la biomasa area seca, pudindose observar diferencias significativas (ANOVA, P0.05) a partir de la segunda fecha de muestreo (Cuadro 17). Cuadro 17. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya (ANOVA, P0.05). Variable Das despus Pr>F R2 C.V. F calculada de la (%) inoculacin 15 0.0578 0.47 25.92 2.86NS rea foliar (cm2) 30 45 60
NS= No significativo (P0.05)
*

0.0137 0.0007 0.0006

0.54 0.68 0.70

**

21.15 25.74 30.51

4.40* 8.46** 8.91**

Significativo (P0.05)

Altamente significativo (P0.01).

95

El anlisis estadstico indic que a partir de los 30 ddi las plantas de los tratamientos testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y superaban a las testigo 1 en la formacin de superficie fotosinttica que a los 60 ddi culmin con incrementos del 159.56, 133.90, 284.75 y 201.86%, respectivamente (Fig. 23).

30
a

25
a

rea foliar (cm)

20 15 10 5 0
ab b

a ab ab ab

a a ab ab a a a

a ab

b b b

15

30

45

60

Das despus de la inoculacin Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 23. rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

4.6.1.3. Colonizacin micorrzica

La prueba de Friedman (= 0.05) revel diferencias entre los tratamientos inoculados para las estructuras micorrzicas observadas en las races endfitas de C. papaya a los 15, 30, 45 y 60 ddi (Cuadro 18). Cabe resaltar que a partir de los 15 ddi se apreci que el micelio de las tres morfoespecies endosimbiticas evaluadas haba logrado colonizar las races (Fig. 24), aumentando a partir de los 45 ddi, fecha en la que la produccin de hifas fue siempre menor en la morfoespecie de Veracruz respecto a la capacidad mostrada por las morfoespecies de Yucatn y Campeche. 96

Cuadro 18. Diferencia entre tratamientos para las estructuras micorrzicas observadas en Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi (Friedman, P0.05). Estructuras de Das despus Diferencia X20.05 P hongos MA de la entre inoculacin tratamientos 15 20.00 0.0005 Si 30 17.97 0.0012 Si Hifas 45 20.00 0.0005 Si 60 18.98 0.0007 Si 15 20.00 0.0005 Si 30 19.32 0.0006 Si Arbsculos 45 20.00 0.0005 Si 60 19.82 0.0005 Si 15 ND ND ND 30 20.00 0.0005 Si Vesculas 45 19.48 0.0006 Si 60 20.00 0.0005 Si
ND= No disponible por la ausencia total de estructuras en esa fecha

De esta manera, y mientras que el patrn de formacin de arbsculos dentro de las clulas corticales de la planta husped (Fig. 25) fue semejante al indicado para las hifas (Fig. 24), la produccin de vesculas en el parnquima cortical colonizado fue mayor en la morfoespecie de Veracruz a los 30 y 60 ddi, en comparacin con la registrada para las otras dos morfoespecies mencionadas (Fig. 26). Por otro lado en la Figura 27 se aprecia que la morfoespecie de Yucatn fue la primera en formar arbsculos en el interior de las clulas de la corteza media e interna de su planta husped a los 15 ddi (0.60%), y que a pesar de haber sido un poco menor a los 30 ddi (3.33%) en relacin con la morfoespecie de Veracruz (4.0%) y Campeche (3.66%), en general se trat de una condicin que prevaleci tanto a los 45 como a los 60 ddi. As la primera de las morfoespecies citadas produjo un 27.1 y 43.0% de hifas dentro de las clulas corticales de su planta husped (morfoespecie de Yucatn) en comparacin con estas ltimas, las cuales solo alcanzaron a producir 14.1 y 33.7% (morfoespecie de Veracruz) y 21.4 y 40.7% (morfoespecie de Campeche), respectivamente. 97

Presencia de hifas (15 ddi) 1.4

Mnimo-Mximo

1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 -0.2

25%-75% Valores de la mediana

X = 0.85 X = 0.66

X = 1.00

Testigo 1

Testigo 2

50 e Gie V Tratamientos

50 e Gi e C

50 e Gi e Y

Presencia de hifas 30 ddi 6.5

Mnimo-Mximo

5.5 4.5 3.5 2.5 1.5 0.5 -0.5

25%-75% Valores de la mediana

X = 5.25 X = 4.50 X = 4.50

Testigo 1

Testigo 2

50 e Gi e V Tratamientos

50 e Gi e C

50 e Gi e Y

Presencia de hifas (45 ddi) 40 35 30 25 20 15 10 5 0 -5

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

X = 32.80 X = 25.50 X = 15.50

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de hifas (60 ddi) 55

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

45

X = 47.50
35

X = 47.80

X = 37.60
25

15

-5

Testigo 1

Testigo 2

50 e Gi e V Tratamientos

50 e Gi e C

50 e Gi e Y

Figura 24. Porcentaje de hifas en plantas inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi.

98

Presencia de arbsculos (15 ddi ) 0.7

Mnimo-Mximo

0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 -0.1

25%-75% Valores de la mediana

X = 0.60

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de arbsculos (30 ddi) 5.5

Mnimo-Mximo 25%-75%

4.5

Valores de la mediana

3.5

X = 4.00
2.5

X = 3.66

X = 3.33

1.5

0.5

-0.5

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de arbsculos (45 ddi) 30

Mnimo-Mximo

26 22 18 14

25%-75% Valores de la mediana

X = 27.10

X = 21.40 X = 14.10

10 6 2 -2

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de arbsculos (60 ddi) 55

Mnimo-Mximo 25%-75%

45

Valores de la mediana

35

X = 40.70 X = 33.70

X = 43.00

25

15

-5

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 25. Porcentaje de arbsculos en plantas inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi.

99

Presencia de vesculas (15 ddi) 1.0

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

0.5

0.0

-0.5

-1.0

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de vesculas (30 ddi) 2.2

Mnimo-Mximo 25%-75%

1.8

Valores de la mediana

1.4

1.0

X = 1.50

0.6

0.2

-0.2

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de vesculas (45 ddi) 0.40

Mnimo-Mximo

0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 -0.05

25%-75% Valores de la mediana

X = 0.30

X = 0.30

Testigo 1

Testigo 2

50 e Gie V Tratamientos

50 eGie C

50 e Gie Y

Presencia de vesculas (60 ddi) 3.2

Mnimo-Mximo 25%-75%

2.6

Valores de la mediana

2.0

X = 2.50

1.4

0.8

X = 0.90 X = 0.80

0.2

-0.4

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 26. Porcentaje de vesculas en plantas inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi.

100

Formacin de arbsculos (%)

50 40 30 20 10 0
15

Mor foespecie de Veracruz Morfoespecie de Campeche Morfoespecie de Yucatn

30

45

60

Das despus de la inoculacin

Figura 27. Formacin de arbsculos registrada a 15, 30, 45 y 60 ddi en tres morfoespecies de Glomus intraradices asociadas con Carica papaya.

4.6.1.4. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas

Si bien el ANOVA no mostr diferencias significativas entre tratamientos (P0.05) para la asimilacin neta de CO2, conductancia estomtica y evaporacin medidas en

C. papaya a los 15, 30, 45 y 60 ddi (Cuadro 19), en la Figura 28 se muestran las
tendencias que pudieran atraer la atencin desde un punto de vista fisiolgico, toda vez que las plantas inoculadas 50 eGie C, 50 eGie Y y 50 eGie V fueron las que ostentaron la mayor asimilacin neta de CO2 a los 60 ddi. Cuadro 19. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la asimilacin neta de CO2, conductancia estomtica y evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya (ANOVA, P0.05). Variable Das despus de la Pr>F R2 C.V. F inoculacin (%) calculada 15 0.1730 0.45 102.52 1.83NS Asimilacin 30 0.1603 0.42 58.07 1.90NS neta de CO2 45 0.5098 0.26 68.00 0.86NS (micromol CO2/m/s) 60 0.4726 0.35 59.51 0.93NS 15 0.2181 0.62 31.18 1.62NS Conductancia 30 0.2145 0.49 107.89 1.63NS estomtica 45 0.2004 0.58 45.40 1.69NS (milimol/m/s) 60 0.8955 0.21 120.34 0.27NS 15 0.1653 0.56 29.85 1.87NS Evaporacin 30 0.2491 0.47 98.42 1.50NS 45 0.2382 0.57 43.85 1.54 NS (milimol/m/s) 60 0.9149 0.22 109.85 0.23 NS
NS= No significativo (P0.05).

101

0 -1

15

Das despus de la inoculacin

30 45

60

A similacin neta de CO2

(micromol CO 2/m /s)

-2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 -10
I) 29.84%>Control 1 22.77%>Control 2

II) 72.25%>Control 1 62.87%>Control 2 III) 71.20%>Control 1 61.88%>Control 2

I)

III) II)

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 28. Asimilacin neta de CO2 en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi. La lnea punteada y los porcentajes sealados indican la superioridad funcional de las plantas inoculadas con respecto a las no inoculadas al finalizar el experimento.

Con respecto a las plantas testigo 1 dicha superioridad fue de 72.25, 71.20 y 29.84% y de 62.87, 61.88 y 22.77% en las plantas testigo 2, respectivamente (Fig. 28). Del mismo modo las Figs. 29 y 30 atestiguan su vala en relacin con el significado que tanto la apertura y cierre de los estomas como la evaporacin tienen en la formacin de materia seca en las plantas.

120 Conductancia estomtica 2 (milimol/m /s) 100 80 60 40 20 0

15 30 45 60

Das despus de la inoculacin Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 29. Conductancia estomtica en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi.

102

3.5 3 (milimol/m /s) Evaporacin

2

2.5 2 1.5 1 0.5 0

15 30 45 60

Testigo 1

Das despus de la inoculacin Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 30. Evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 15, 30, 45 y 60 ddi.

4.6.1.5. Acumulacin de P en la biomasa area

El ANOVA estableci diferencias altamente significativas (P0.01) para las muestras de biomasa area (hojas y tallo) de C. papaya a los 30 y 60 ddi (Cuadro 20), siendo precisamente al final del experimento (60 ddi) donde el contenido de P en las plantas inoculadas (50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y) fue mayor al de las plantas testigo 1 y 2 (Fig. 31). Cuadro 20. Acumulacin de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 30 y 60 ddi (ANOVA, P0.05). Variable Das despus Pr>F R2 C.V. F calculada de la (%) inoculacin Acumulacin 30 0.0059 0.77 3.00 6.24** de P en la 60 0.0001 0.99 2.85 302.40** biomasa area (ppm)
**

Altamente significativo (P0.01).

A travs de los anlisis realizados a las muestras foliares se determin que la morfoespecie de Yucatn result ser la ms hbil de todas para incrementar en 103

ambas fechas la absorcin de este nutrimento bajo las condiciones en las que se condujo este experimento (Fig. 31). P en biomasa area (ppm) 5000 4500 4000 3500
ab a ab ab b c b a

3000 2500

30

60

Das despus de la inoculacin Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 31. P presente en la biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Carica papaya a 30 y 60 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

De igual forma el ANOVA (P0.05) mostr diferencia significativa entre las muestras de C. papaya valoradas espectrofotomtricamente (Cuadro 21). Cuadro 21. Acumulacin promedio de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Carica papaya al finalizar el experimento (60 ddi) (ANOVA, P0.05). Variable Das despus Pr>F R2 C.V. F calculada de la (%) inoculacin Acumulacin de P en la 60 0.0001 0.99 2.94 186.83** biomasa area (ppm)
Altamente significativo (P0.01)

**

En la Fig. 32 se aprecia que la superioridad de todas ellas fue patente al finalizar el experimento respecto a las respuestas conseguidas durante el mismo periodo por las plantas testigo.

104

Acumulacin promedio de P en la biomasa area (ppm)

5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0

60

Das despus de la inoculacin (Periodo total evaluado)

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 32. P presente en la biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Carica papaya al finalizar el experimento (60 ddi). Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

4.6.1.6. Eficiencia de la micorrizacin

La morfoespecie proveniente de Yucatn fue importante para la incorporacin de P en C. papaya a los 30 y 60 ddi, aunque en esta ltima no mostr diferencia significativa con respecto a la actividad realizada por las otras dos morfoespecies de hongos MA (Fig. 31). Pese a ello, y despus de considerar el proceso global de interrelacin surgido entre estos simbiontes durante todo el bioensayo (60 das), la morfoespecie de Yucatn fue la mejor de todas (Cuadro 22). Cuadro 22. Eficiencia de la micorrizacin (%) de cada morfoespecie para la incorporacin de P en plantas de Carica papaya. Procedencia de la morfoespecie de Testigo 1 Testigo 2 Testigo 1 Testigo 2 HMA 30 ddi 60 ddi 30 ddi 60 ddi A los 60 ddi Veracruz -3.33 0.0 40.4 34.0 23.37 20.7 Campeche Yucatn

-6.89 3.125

-3.44 6.25

40.4 42.8

34.0 36.7

22.36 27.1

19.73 24.69

Las estimaciones se presentan en relacin con la absorcin de P en las plantas de los tratamientos testigo 1 y 2 a 30 y 60 ddi, as como al finalizar el experimento (60 ddi).

105

4.6.2. Bioensayo final 2: Respuesta de Jacaratia mexicana a la inoculacin con 50 esporas de Glomus intraradices esterilizadas en su superficie, y de procedencia geogrfica distinta 4.6.2.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas
El ANOVA no estableci diferencia significativa entre los tratamientos para el crecimiento en altura y nmero de hojas de J. mexicana (P0.05) a lo largo de los 120 das que dur el estudio (Cuadro 23). Cuadro 23. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el crecimiento en altura y nmero de hojas en las plantas de Jacaratia mexicana inoculadas con 50 esporas de Glomus intraradices de distinta procedencia geogrfica (ANOVA, P0.05). Das despus de la Pr>F R2 C.V. F calculada Variable inoculacin (%) 15 0.1212 0.40 11.55 2.15NS Altura (cm) 30 75 120 15 Nmero de hojas 30 75 120 0.5364 0.3790 0.0893 0.3343 0.1601 0.2087 ND 0.36 0.37 0.45 0.33 0.36 0.36 ND 16.76 13.63 15.53 20.09 23.65 121.08 ND 0.81NS 1.13NS 2.44NS 1.24NS 1.90NS 1.66NS ND

NS= No significativo (P0.05) ND= No disponible debido a la cada natural de las hojas

A partir de los 30 ddi, la altura de las plantas en los tratamientos testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y siempre super a la alcanzada en las testigo 1 (Fig. 33). Asimismo a los 46 ddi la dimensin vertical de las plantas en los tratamientos inoculados sobresali por arriba de las testigo 2 (Fig. 33), despunte real que fue observado en la altura de las plantas inoculadas a los 120 ddi (Figs. 33 y 34).

106

10 Altura (cm)

Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

46 ddi

6
15 30 75 120

Das despus de la inoculacin

Figura 33. Crecimiento en altura de las plantas testigo 1 y 2 e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi.

Incrementos de altura (cm) en Jacaratia mexicana

4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0

Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

15 ddi

Tratamientos 30 ddi 75 ddi

120 ddi

Figura 34. Incrementos de altura registrados en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana en cada evaluacin (15, 30, 75 y 120 ddi).

4.6.2.2. Biomasa seca y rea foliar

En el Cuadro 24 se puede apreciar que el ANOVA solo marc diferencias altamente significativas entre los tratamientos a los 15 ddi (P0.05) para la biomasa area seca de las plantas, mientras que no fue as para su biomasa radical seca.

107

Cuadro 24. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la biomasa seca area y radical de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana (ANOVA, P0.05). Das despus C.V. F calculada de la Pr>F R2 Variable (%) inoculacin 15 0.0058 0.65 22.56 5.44** Biomasa area seca (g) 30 75 120 15 Biomasa radical seca (g) 30 75 120
NS= No significativo (P0.05)
**

0.1382 0.4330 0.5554 0.6597 0.8942 0.9561 0.1776

0.42 0.27 0.17 0.28 0.16 0.15 0.39

21.62 34.17 33.38 82.06 41.29 51.83 44.83

2.03NS 1.23NS 0.78NS 0.61NS 0.27NS 0.16NS 1.80NS

Altamente significativo (P0.01).

Ahora bien, la biomasa area seca de las plantas testigo 2 e inoculadas (50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y) siempre super a la formada en las plantas del testigo 1 desde los 30 ddi hasta la finalizacin del experimento (Fig. 35). 0.18 0.16 Biomasa area seca (g) 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0
15 30 75 120
a ab ab b a a a a a a a a a a a a a a a a

Testigo 1

Das despus de la inoculacin Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C

50 eGie Y

Figura 35. Biomasa area seca de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

108

En cuanto al rea foliar de las plantas de J. mexicana se refiere, y a pesar de que result ser una variable ms en la que tampoco se detectaron diferencias significativas entre los tratamientos (P0.05) (Cuadro 25), cabe destacar la defoliacin total iniciada en las plantas del testigo 1 a los 75 ddi, fecha en la que todas las dems aun posean hojas fotosintticamente activas las cuales cayeron a los 120 ddi (Fig. 36). Cuadro 25. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para el rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana (ANOVA, P0.05). Das despus de la Pr>F R2 C.V. F calculada inoculacin (%) 15 0.0874 0.43 22.74 2.46NS 30 0.0572 0.48 21.73 2.87NS 75 0.1174 0.45 94.42 2.18NS 120 ND ND ND ND NS= No significativo (P0.05)ND= No disponible debido a la cada natural de las hojas.

80 70 rea foliar (cm) 60 50 40 30 20 10 0

15 30
a a a a a a a a a a a a a a a a

a a a

75

120

Testigo 1

Das despus de la inoculacin Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C

50 eGie Y

Figura 36. rea foliar de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

109

4.6.2.3. Colonizacin micorrzica

La prueba de Friedman (= 0.05) mostr diferencias entre los tratamientos inoculados y sin inocular para las estructuras micorrzicas observadas en el sistema radical de J. mexicana a los 15, 30, 75 y 120 ddi (Cuadro 26). Cuadro 26. Diferencia entre tratamientos para las estructuras micorrzicas observadas en Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi (Friedman, P0.05). Estructuras de Das despus Diferencia 2 X 0.05 P hongos MA de la entre inoculacin tratamientos 15 19.32 0.0006 Si 30 20.00 0.0005 Si Hifas 75 20.00 0.0005 Si 120 20.00 0.0005 Si 15 20.00 0.0005 Si 30 20.00 0.0005 Si Arbsculos 75 19.32 0.0006 Si 120 20.00 0.0005 Si 15 ND ND ND 30 ND ND ND Vesculas 75 20.00 0.0005 Si 120 20.00 0.0005 Si
ND= No disponible, por ausencia total de estructuras.

En este caso el micelio de las tres morfoespecies endosimbiticas evaluadas tambin logr encontrar y penetrar a su raz hospedadora desde los 15 ddi, fecha a partir de la cual la produccin de hifas fue constante y en la morfoespecie de Yucatn nunca decreci, cosa que no sucedi con las de Veracruz y de Campeche donde se detectaron disminuciones del orden de 11.97 y 33.82% a los 30 ddi, y de 1.79 y 50.30% a los 120 ddi, respectivamente (Fig. 37). Por otro lado la acentuada formacin de arbsculos a los 75 ddi en las morfoespecies de Veracruz y Campeche fue superada a los 120 ddi por la de Yucatn (Fig. 38). Entre tanto la produccin de vesculas ocurrida en los extremos de las hifas de la morfoespecie de Veracruz prevaleci sobre las procedentes de Campeche y Yucatn a los 75 y 120 ddi (Fig. 39). 110

Presencia de hifas (15 ddi) 4.5

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

3.5

X = 3.80 X = 3.40

2.5

1.5

X = 1.42
0.5

-0.5

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de hifas (30 ddi) 16

Mnimo-Mximo

14 12 10 8 6 4 2 0 -2

25%-75% Valors de la mediana

X = 13.60

X = 1.25
Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V Tratamientos Presencia de hifas (75 ddi)

X = 2.25
50 eGie C 50 eGie Y

55
Mnimo-Mximo 25%-75% Valor de la mediana

45

X = 46.30 X = 39.00

35

25

X = 32.60

15

-5

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de hifas (120 ddi) 55

Mnimo-Mximo 25%-75%

45

Valores de la mediana

X = 45.00
35

X = 38.30
25

15

X = 23.00

-5

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 37. Porcentaje de hifas en plantas inoculadas de Jacaratia mexicana a los 15, 30, 75 y 120 ddi.

111

Presencia de arbsculos (15 ddi) 3.5

Mnimo-Mximo

3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5

25%-75% Valores de la mediana

X = 3.00

X = 0.20
Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V Tratamientos Presencia de arbsculos (30 ddi) 50 eGie C 50 eGie Y

1.6
Mnimo-Mximo

1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 -0.2

25%-75% Valores de la mediana

X = 1.30

X = 0.50 X = 0.25

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de arbsculos (75 ddi) 40

Mnimo-Mximo

35 30 25 20 15 10 5 0 -5

25%-75% Valores de la mediana

X = 29.50

X = 30.30

X = 20.00

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de arbsculos (120 ddi) 35

Mnimo-Mximo

30 25 20 15 10 5 0 -5

25%-75% Valores de la mediana

X = 28.50 X = 20.30 X = 17.50

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 38. Porcentaje de arbsculos en plantas inoculadas de Jacaratia mexicana a los 15, 30, 75 y 120 ddi.

112

Presencia de vesculas (15 ddi) 1.0

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

0.5

0.0

-0.5

-1.0

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de vesculas (30 ddi) 1.0

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

0.5

0.0

-0.5

-1.0

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de vesculas (75 ddi) 1.4

Mnimo-Mximo

1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 -0.2

25%-75% Valores de la mediana

X = 1.00 X = 0.60

X = 0.80

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V Tratamientos

50 eGie C

50 eGie Y

Presencia de vesculas (120 ddi) 28

Mnimo-Mximo 25%-75% Valores de la mediana

22

16

X = 23.30

10

-2

X = 1.50
Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V Tratamientos 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 39. Porcentaje de vesculas en plantas inoculadas de Jacaratia mexicana a los 15, 30, 75 y 120 ddi.

113

Finalmente, y aunque la formacin de arbsculos en esta husped arbrea ocurri en todas las plantas a los 30, 75 y 120 ddi, la relacin establecida con la morfoespecie de Yucatn fue incrementando e intensificndose paulatinamente hasta alcanzar un 28.5% a los 120 ddi, mientras que en la morfoespecie de Veracruz la interaccin decreci al 20.3% y en la de Campeche al 17.5% con referencia al 30.3 y 29.5% de estructuras arbusculares que ambas ostentaban a los 75 ddi (Fig. 40). 35 Formacin de arbsculos (%) 30 25 20 15 10 5 0 -5
15 30 75 120 Morfoespecie de Veracruz Morfoespecie de Campeche Morfoespecie de Yucatn

Das despus de la inoculacin

Figura 40. Formacin de arbsculos registrada a 15, 30, 75 y 120 ddi en tres morfoespecies de Glomus intraradices asociadas con Jacaratia mexicana.

4.6.2.4. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas

Mientras que el ANOVA en ningn momento detect diferencia significativa entre los tratamientos (P0.05) para la asimilacin neta de CO2 en J. mexicana, su conductancia estomtica y evaporacin si la manifestaron a los 75 ddi (Cuadro 27). Mas dicha actividad no fue posible de corroborar nuevamente en la cuarta fecha (120 ddi) debido al desprendimiento generalizado de sus hojas (Cuadro 27). De cualquier modo algunas tendencias interesantes de discutir en el mbito fisiolgico derivado de la interaccin entre J. mexicana y los hongos MA evaluados parece ser la mayor asimilacin neta de CO2 registrada en las plantas inoculadas respecto a las testigo 1 y 2 a partir de los 15 ddi y durante todo el experimento. 114

Cuadro 27. Niveles de significancia en cada fecha de muestreo para la asimilacin neta de CO2, conductancia estomtica y evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana (ANOVA, P0.05). Variable Das despus de Pr>F R2 C.V. F calculada la inoculacin (%) 15 0.9795 0.32 91.06 0.10NS Asimilacin 30 0.8719 0.30 62.41 0.30NS neta de CO2 75 0.0837 0.44 118.84 2.50NS (micromol CO2/m/s) 120 ND ND ND ND 15 0.5817 0.26 56.56 0.73NS Conductancia 30 0.4811 0.30 81.26 0.91NS estomtica 75 0.0231 0.57 116.89 3.81* (milimol/m/s) 120 ND ND ND ND 15 0.4927 0.29 44.70 0.89NS Evaporacin 30 0.3655 0.32 61.01 1.16NS (milimol/m/s) 75 0.0218 0.56 113.43 3.88* 120 ND ND ND ND
NS= No significativo (P0.05) * Significativo (P0.05) ND= No disponible, por cada natural de las hojas

Mencin especial merecen las plantas del tratamiento 3 (50 eGie V), cuyo comportamiento en general denot una actividad fotosinttica sobresaliente (Fig. 41).
Das despus de la inoculacin 0 Asimilacin neta de CO2 (micromol CO2/m /s) -5 -10
0a

15

30
0c 0b Ib IIb IIIb

75
IIc IIIc Ic

120

0a) 113.75%>Control 1 142.42%>Control 1 Ia) 25.20%>Control 2 IIIa IIa) 116.78%>Control 1 2.66%>Control 2 IIa IIIa) 114.45%>Control 1 0.61%>Control 2

0b) Ib)

114%>Control 1 160%>Control 1 40.35%>Control 2

0c)

216%>Control 1

436%>Control 1 Ic) 101.85%>Control 2 IIc) IIIc) 248%>Control 1 14.81%>Control 2 244%>Control 1 12.96%>Control 2

-15 -20
Ia

IIb) 146.66%>Control 1 28.64%>Control 2 IIIb) 145.33%>Control 1 27.48%>Control 2

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 41. Asimilacin neta de CO2 en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi. La lnea punteada y los porcentajes sealados indican la superioridad funcional de las plantas inoculadas (I, II y III, subndices a, b y c) con respecto a las no inoculadas al finalizar el experimento, as como tambin la preponderancia de las plantas del tratamiento testigo 2 sobre las del testigo 1.

115

En positivo paralelismo con la apertura estomatal (Fig. 42) y la evaporacin (Fig. 43). Al mismo tiempo, el predominio funcional de las plantas testigo 2 sobre las testigo 1 fue marcado e incuestionable a los 15, 30 y 75 ddi (Fig. 41).
180 160 140 120 100 80 60 40 20 0
15 30 75 12 0

Conductancia estomtica

(milimol/m /s)

Das despus de la inoculaci n Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 42. Conductancia estomtica en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi.

5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0

15 30 75 120

Evaporacin (milim ol/m 2/s)

Das despus de la inoculacin Testigo 1 Testigo 2 50 eGie V 50 eGie C 50 eGie Y

Figura 43. Evaporacin en las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 15, 30, 75 y 120 ddi.

116

4.6.2.5. Acumulacin de P en la biomasa area

El ANOVA (P0.01) revel diferencia altamente significativa para los valores de biomasa area de J. mexicana a los 30 ddi y 120 ddi (Cuadro 28). Cuadro 28. Acumulacin de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 30 y 120 ddi (ANOVA, P0.05). C.V. F calculada Variable Das despus Pr>F R2 (%) de la inoculacin Acumulacin 30 0.0001 0.98 2.86 210.00** de P en la 120 0.0001 0.97 4.10 108.32** biomasa area (ppm)
Altamente significativo (P0.01).

**

Las plantas del tratamiento 4 (50 eGie C) incorporaron ms P a los 30 y 120 ddi (4,900 y 3,600 ppm, respectivamente) (Fig. 44). En la segunda evaluacin solamente se utiliz el tallo para su determinacin analtica debido a la total ausencia de hojas acaecida en todas las plantas para esa fecha (Cuadro 23 y apartado 4.6.2.2.). 6000 P en biomasa area (ppm) 5000 4000 3000 2000 1000 0
30 120
b b b a a c c b b c

Das despus de la inoculacin

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 44. Cantidad de P presente en las muestras de biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana a 30 y 120 ddi. Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

117

De igual manera el ANOVA confirm la existencia de diferencia altamente significativa de P en las muestras de J. mexicana medidas en el espectrofotmetro (Cuadro 29). Cuadro 29. Acumulacin promedio de P en la biomasa area de las plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana al finalizar el experimento (120 ddi) (ANOVA, P0.05). Variable Das despus C.V. F calculada Pr>F R2 (%) de la inoculacin Acumulacin de P en la 120 0.0001 0.98 3.40 273.09** biomasa area (ppm)
Altamente significativo (P0.01).

**

En la Fig. 45 se puede apreciar que la absorcin de este elemento hasta los 120 ddi fue superior en las plantas inoculadas con la morfoespecie procedente de Campeche, mientras que las interactuantes con la morfoespecie de Yucatn fue la menos eficiente, aun incluso por debajo del ocurrido en las plantas no inoculadas (testigo 1 y 2).

Acumulacin promedio de P en la biomasa area (ppm)

5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 120
a

bc

b c

Das despus de la inoculacin (Periodo total evaluado)

Testigo 1

Testigo 2

50 eGie V

50 eGie C

50 eGie Y

Figura 45. Cantidad promedio de P presente en las muestras de biomasa area de plantas testigo e inoculadas de Jacaratia mexicana al finalizar el experimento (120 ddi). Para cada fecha, columnas con la misma letra son estadsticamente iguales entre s (Tukey P0.05). Las lneas verticales son el error estndar ().

118

4.6.2.6. Eficiencia de la micorrizacin

En este caso la morfoespecie proveniente de Campeche promovi una mayor absorcin de P en J. mexicana a los 30 y 120 ddi, lo cual qued de manifiesto al considerar el periodo total en que ambos organismos mantuvieron su relacin (120 das) (Cuadro 30 y Fig. 45). Cuadro 30. Eficiencia de la micorrizacin (%) de cada morfoespecie para la incorporacin de P en plantas de Jacaratia mexicana. Procedencia de la Testigo 1 Testigo 2 Testigo 1 Testigo 2 morfoespecie de HMA 30 ddi 120 ddi 30 ddi 120 ddi A los 120 ddi Veracruz Campeche Yucatn

-6.06 28.57 -16.66

27.58 41.6 8.69

0 32.65 -10

3.44 22.22 -21.73

9.67 34.11 -5.66

1.61 28.23 -15.09

Las estimaciones se presentan en relacin con la absorcin de este elemento en las plantas de los tratamientos testigo 1 y 2 a 30 y 120 ddi, as como al finalizar el experimento (120 ddi).

119

5. DISCUSIN 5.1. Micotrofa en plantas de Jacaratia mexicana

Sea cual fuere la funcin fisiolgica y la importancia ecolgica de una asociacin simbitica, entre la comunidad cientfica parece estar claro que en la mayora de los bosques naturales de todo el mundo las races de sus componentes florsticos son casi invariablemente micotrficas y por consecuencia, al ser ste un fenmeno ancestral derivado de la simultnea evolucin compartida con las plantas herbceas y leosas de los distintos ecosistemas terrestres del planeta, los hongos micorrizgenos son considerados prcticamente ubicuos. Es por ello frecuentemente inferido que las micorrizas estn constituidas, conforme a toda probabilidad, por las especies ms idneas para iniciar su asocio en las condiciones ambientales preponderantes de un hbitat dado, entre los que por lgica deduccin se incluyen los del trpico seco donde a juzgar por Murphy y Lugo (1986), la vulnerabilidad es evidente durante sus procesos sucesionales. De este modo, y aunque las floras tropicales albergan una formidable diversidad de especies que se distribuyen en una amplia gama de microambientes y despliegan una infinidad de respuestas a la variacin en el ambiente fsico (Reich y Borchert, 1988), la competencia por un volumen del suelo explorado para la adquisicin de agua y posiblemente algn elemento nutricional tiene efectos decisivos en el desempeo de las plntulas encargadas de la regeneracin natural de las agrupaciones vegetales donde la estacionalidad es bastante marcada (Gerhardt, 1996) y la actividad metablica muy eficiente (Marschner et al., 2002), puesto que en todo momento la sequedad afecta indirectamente a los microorganismos en la rizosfera al promover el crecimiento vertical de la raz para aprovechar la humedad residual (Sharp y Davies, 1979; Liang et al., 1999) o al cambiar las propiedades de los exudados radicales (Neumann y Rmheld, 2001; Marschner et al., 2002). 120

Lo asentado restringe las posibilidades de que los hongos MA encuentren la oportunidad para iniciar una endosimbiosis (Parniske, 2000), y por lo tanto el estrs hdrico reduce la diversidad funcional microbiana (Deggens, 1998) que, en el caso particular de los organismos fngicos que nos atae, conlleva a la formacin de estructuras de resistencia, como las esporas (Potts, 1994), hasta que las condiciones llegan a ser propicias para germinar y formar la red miceliar que en un momento dado ser la encargada de colonizar no solo a las races de J. mexicana, sino tambin a las de otras especies arbreas, arbustivas y herbceas con las que esta cohabita. Si bien son contados los reportes donde se hace alusin a la micotrofa de las especies vegetales en los trpicos, an resulta ms escasa la informacin en lo tocante a las selvas deciduas con pronunciada estacionalidad climtica de Norteamrica (Huante et al., 1993) y prcticamente nula a lo menos si se trata de los manchones de Selva Baja Caducifolia (SBC) que se localizan en la vertiente del Atlntico mexicano. Es exactamente aqu donde se cumple con el primero de los objetivos planteados al poner de manifiesto que J. mexicana es capaz de asociarse con los hongos del suelo formadores de micorriza arbuscular durante sus fases iniciales de desarrollo (15 a 120 das despus de la aparicin de sus hojas cotiledonales). Por ende ser indispensable que los factores biticos y abiticos concurrentes en su paraje se perfilen para que la relacin espacio-temporal entre ambos organismos acontezca, mxime si la presencia y dinamismo de la colonizacin depende de las mltiples interacciones ecolgicas ah reinantes (Guerrero, 1996; Miller et al., 1999). Aunque Huante et al., (1993) y Rincn et al., (1999) han confirmado en sendos estudios que los HMA influyen en el crecimiento y desarrollo de las especies arbreas tropicales de la selva baja, cabe resaltar el hecho de que no obstante J. mexicana es un espcimen micotrfico y sus semillas muestran una viabilidad excepcional 121

(apartado 2.1.1.1.2) no parecen ser estos los puntos medulares que, en trminos estrictamente naturales, la mantienen al borde de la extincin. As, y conforme a lo indicado por Grime (1982), la problemtica dinmico-poblacional de esta especie pudiere surgir a partir de las estrategias juveniles que implementan para su establecimiento entre las que sinfn de funciones interrelacionadas ocurren durante la obtencin de nutrimentos, el mantenimiento, reemplazo y crecimiento de races y brotes, y la supervivencia individualizada de cada una de ellas ante la misma presin selectiva. Por consiguiente resultara demasiado aventurado teorizar en cuanto al efecto que pudiere producirse entre los simbiontes. En especial al considerar ineludible la necesidad de precisar de que modo la interaccin de los micobiontes y los descendientes juveniles, intermedios y maduros de esta especie arbrea logran combinar sus estrategias para determinar cuales son los componentes fngicos idneos de hospedar durante las diferentes etapas de su ciclo de vida.

5.2. Morfoespecies descritas

Aun cuando el nmero de morfoespecies encontradas, identificadas y descritas en el presente estudio fue bajo y concuerda con lo expresado por Janos (1980 b) y Tiwari y Adholeya (2002) para los suelos tropicales, Hodge (2000) destaca cun valioso puede ser su papel ecolgico en la dinmica del carbono y la translocacin de los nutrimentos in situ, sobre todo al tomar en cuenta su interactividad con otros microorganismos del suelo (Bever, 2003). Por ello un aspecto loable y meritorio de la investigacin consumada radica en reconocer la concurrencia de seis morfoespecies en la micorrizsfera de J. mexicana (Cuadro 11) y que la mayor parte de las esporas fngicas recuperadas de las tres reas de estudio pertenecen al gnero Glomus (Cuadro 11 y apartado 4.3). 122

La predominancia de dicho gnero coincide con los resultados obtenidos por Anderson et al., (1984) en la Reserva Natural de la Pradera del Lago Goose cerca de Morris, Illinois, y por Vestberg (1995) en diferentes regiones geogrficas de Finlandia y por Abu-Zeyad et al., (1999) en tres sitios arbolados de Australia. Asimismo refuerzan la presuposicin de Boddington y Dodd (1998) del por qu los micorrizlogos acostumbran usar a las especies de Glomus en sus experimentos. De esta manera se fortalece la asercin hecha por Gerdemann y Trappe (1974) de que este es el ms difundido de todos los Glomales en las praderas y bosques nativos del mundo. Acepcin que Talukdar y Germida (1993) extienden a infinidad de zonas agrcolas donde su abundancia es extrema34. Tanto Gerdemann y Trappe (1974) como Stahl y Christensen (1982) consideran que estos son los hongos del suelo ms comunes y por ello a menudo se les encuentra en los cultivos-trampa, argumento que lo complementan su fcil mantenimiento y reproduccin sin demrito sbito de su potencial infectivo (Dodd y Thomson, 1994). Lo anterior se concatena con los resultados de Anderson et al., (1984) y Vestberg (1995) quienes en sus respectivos estudios identificaron que en los 32 sitios con actividad micorrizgena funcional muestreados en la mencionada Reserva Natural y en los aislamientos finlandeses el 99.9 y 87.1% de las esporas recuperadas eran justamente del gnero Glomus, como con los valores de predominancia mostrados en el Cuadro 12 para Veracruz y Yucatn. En consecuencia lo expresado en cierta forma justifica y respalda que el criterio discrecional utilizado para elegir a G. intraradices como el morfotipo idneo para su propagacin en cultivo monoespecfico y evaluacin en los ensayos de eficiencia fue el adecuado.
34

Entre las que el impacto de la intensidad de uso del suelo se descartan ciertos agroecosistemas de Europa Central (Francia, Alemania y Suiza) (Oehl et al., 2003).

123

Por otra parte y mientras que en la micorrizsfera de J. mexicana nicamente Glomus

intraradices y Sclerocystis sinuosa fueron comunes en los tres sitios de muestreo, Glomus sp. 1 y Glomus sp. 2 se circunscribieron para el mismo hospedero en el
paraje de Veracruz y lo propio ocurri con Entrophospora infrequens y Glomus

constrictum de Yucatn.
Al respecto, y a sabiendas de que todava hace falta ahondar acerca del papel de estos endfitos arbusculares en la dinmica y homeostasia de los ecosistemas tropicales (Johnson et al., 1992 b; Zangaro et al., 2000), la necesidad de comprender y determinar si el mutualismo entre los hongos micorrizgenos y sus plantas husped tiene un efecto clave en el funcionamiento de un bosque seco tropical es imperiosa. Lo enunciado pudiere transponerse para tratar de determinar si la variacin entre las morfoespecies aisladas es significativa y se correlaciona con la compatibilidad funcional de una planta husped (Johnson et al., 1991 a; Lodge y Cantrell, 1995). O bien se trata de una especificidad ecolgica propia y an por discernir entre las diferentes especies de plantas y hongos MA de los ecosistemas estudiados (Tommerup, 1988; McGonigle y Fitter, 1990; Smith et al., 2000). Aunque la posibilidad de que los hongos fuesen hospedero-especficos se concepta remota en los ambientes tropicales, hipotetizar casos donde el carcter interactivo de las relaciones que no se circunscriben al mbito microbiolgico produjesen extinciones mltiples, o que la prdida del organismo endfito asociado tuviese un efecto serio en la supervivencia de una planta husped son especulaciones que en un momento dado, y en conformidad con lo apuntado por Cannon et al., (2000), pudieran coadyuvar a priorizar la proteccin de reas naturales y poblaciones particulares de plantas cuyo peligro de extincin es evidente en todo el orbe. As y en virtud de que los materiales utilizados para el inventario e identificacin de las morfoespecies micorrizgenas referidas en este estudio se produjeron en macetas 124

de propagacin con tres diferentes plantas trampa (apartado 3.6.1), de antemano se asume que la diversidad es innegablemente perfectible. Especialmente si la posibilidad de ocurrir un reflejo de la combinacin de estrategias fenolgicas o reproductivas entre los hongos MA y sus hospedadoras existe (Bever et al., 1996; Brundrett et al., 1999 b). Entretanto se insta a encaminar acciones inmediatas para la realizacin de intensos muestreos de rizosfera en las selvas bajas de Mxico que por un lado no fuesen tan dirigidos a una sola especie vegetal ni sus estructuras esporales puestas a propagar solamente en cultivos-trampa, tal y como ocurri en esta ocasin para cumplir con los objetivos aqu trazados, y por el otro que abarcasen tanto la poca seca como la hmeda ya que con seguridad la sistematizacin propuesta ampliara y complementara satisfactoriamente la informacin registrada. No obstante el haber realizado las exploraciones en ecosistemas naturales del trpico donde en este mismo instante se consignan como inexistentes (Varela y Trejo, 2001) acrecienta el valor derivado del empeo esmerado para coadyuvar en el conocimiento de la diversidad taxonmica de los hongos MA en Mxico la cual es, en opinin de Varela y Estrada-Torres (1997), posiblemente una de las ms altas del mundo. Con relacin a lo denotado, a continuacin se mencionan algunos datos que de seguro sentarn las bases para subsecuentes indagaciones donde nuevamente se aborde y contribuya a ampliar el insuficiente saber que an se tiene de los micosimbiontes y sus plantas husped en la SBC de nuestro pas en general, y de la vertiente del Atlntico en particular.

5.2.1. Glomus intraradices Schenck & Smith

Glomus intraradices fue descrita por Schenck & Smith en 1982, y consignada como
una de las especies ms comunes en Florida. 125

Adems la virtud que G. intraradices tiene para su asocio con especies como Carica

papaya, Lycopersicon esculentum, Apium graveolens var. dulce, Citrus sp., Arachis glabrata, Stylosanthes sp., Zea mays, Phaseolus vulgaris, Fragraria chiloensis var. ananassa, Daucus carota var. sativa, Solanum tuberosum, Hordeum vulgare, Avena sativum y Triticum vulgare es realzada por Walker y Trappe (1993).
Algunas investigaciones recientes respaldan el hecho de que G. intraradices ciertamente es prolfica pues sus esporas extrarradicales e intrarradiculares (esterilizadas superficialmente con una solucin de cloramina-T y estreptomicina, sembradas en distintas diluciones de suelo:vermiculita + agar agua + cido 2-(Nmonofolin) etano sulfnico (MES) poseen una gran capacidad germinativa (Venedikian et al., 2002). En nuestro pas es inequvoca la persistencia de G. intraradices en matorrales secundarios de Tlaxcala y SBC de Jalisco (Varela y Trejo, 2001), y por ello es la primera vez que se le seala de parajes relcticos de selva decidua en los estados de Veracruz, Campeche y Yucatn.

5.2.2. Glomus constrictum Trappe

Esta especie fue descrita por Trappe (1977) con materiales recolectados en Mxico bajo Cocos nucifera, y posteriormente se hizo patente su habitual estancia en los huertos de California del Sur (Nemec et al., 1981; Blaszkowski, 1989). Menge et al., (1977) la catalogan un micosimbionte dominante en las races de ctricos, y Miller et al., (1985) la han encontrado con regularidad en plantaciones de manzano (Malus domestica) establecidas en varios Estados de la Unin Americana. En Europa los primeros registros provienen de Polonia, donde se encontr en 49 (27.84%) de 176 muestras de suelo tomadas en plantas cultivadas y silvestres de 22 126

gneros y 25 especies pertenecientes a 10 familias botnicas35 (Blaszkowski, 1990), y en nuestro pas se ha particularizado de Hidalgo, Chiapas, Tabasco y Veracruz (Varela y Trejo, 2001), pero no se le haba mencionado para la SBC de Yucatn.

5.2.3. Sclerocystis sinuosa Gerdemann & Bakshi

Sclerocystis sinuosa fue descrita en 1976 por Gerdemann y Bakshi, como resultado
del vasto estudio referido a las especies arbreas de los bosques de la India que mantienen contacto con las endomicorrizas nativas. Dichos autores refieren que los esporocarpos se encontraron a lo largo del ao en la rizosfera y suelos de Agathis robusta, Cupressus torulosa, Podocarpus gracilior,

Acrocarpus fraxinifolius, Juniperus procera, Albizzia odoratissima, Cinnamomum camphora, Diopyros peregrina, Fraxinus uhdei, Litsea glutinosa, Syzygium cumini, Dalbergia sisoo, Tectona grandis, Taxodium mucronatum, Cryptomeria japonica y Salix fragilis en los siguientes parajes indes donde predominan las conferas y los
rodales de madera dura: Dehra Dun, Nainital, Uttar Pradesh, Rajahmundry, Andhra Pradesh, Godhra, Gujarat, Kulu y Sawra, Himachal Pradesh, Amarkantak y Bori, y Madhya Pradesh. En Mxico S. sinuosa nada ms se ha citado de Morelos y Tlaxcala (Varela y Trejo, 2001), y hasta ahora se le da a conocer de los ecosistemas naturales del trpico seco de Veracruz, Campeche y Yucatn.

5.2.4. Entrophospora infrequens (Hall) Ames & Schneider

Esta especie fue hallada en Nueva Zelanda (Hall, 1977) y posteriormente en la costa central de California (Ames y Schneider, 1979). Estos ltimos son quienes describen a

35

Anexo 10.

127

Entrophospora como nuevo gnero en la familia Endogonaceae, con E. infrequens

(Hall) Ames & Schneider como la especie tipo. A la par Ames y Schneider (1979) dan a conocer que este endosimbionte se asocia con lamos (Populus sp.) y cultivos de soya y maz en Iowa, Illinois y Wisconsin (EUA). Tambin la han encontrado entre races de Macroptilium sp. en Florida (Schenck y Smith, 1982), debajo de Bouteloua gracilis y Agropyron smithii en Wyoming (Stahl y Christensen, 1982), y en pastos de praderas y trigo invernal cultivado en Kansas (Hetrick y Bloom, 1983) y Agave spp. en las montaas de Santa Catalina, Arizona (Bloss y Walker, 1987). Los primeros registros para Europa provienen de suelos de Polonia recolectados en sitios donde se desarrollan especies como Juniperus communis, Festuca rubra,

Sorghum sudanense, Trifolium repens, Rosa canina y un pasto no identificado

(Blaszkowski, 1989). En Mxico se le ha reportado exclusivamente de Tlaxcala (Varela y Trejo, 2001), sin precisar si las muestras provienen de un sistema natural o manejado por el hombre. Por ello, y al igual que lo sucedido con G. constrictum, es vez primera que se le designa para la selva decidua del trpico seco de Yucatn.

5.3. Respuesta de Carica papaya a la inoculacin con diferente nmero de esporas de Glomus intraradices esterilizadas o no en su superficie
De entre las evidencias documentales consultadas para efectuar un bioensayo preliminar donde sera posible elegir y obtener un inculo esporal de hongos MA adecuado para evaluar su eficiencia resaltan la acepcin y los atributos denotados por Sylvia (1998) (apartado 2.6) y las indicaciones de St. John (2000), as como los

128

argumentos de Mason et al., (2000 a) y de Smith et al., (2000) que la distinguen de su innata cualidad infectiva. As y tras considerar que la colonizacin del sistema radical de una planta seguramente depende de la dispersin estocstica de las esporas y de las eventuales condiciones ocurrentes entre el hospedero, el suelo y el ambiente (Morton et al., 1995; Mala, 2000), su abundancia a lo mejor no refleja la importancia funcional de un determinado hongo MA en la simbiosis micorrizgena (Toro et al., 2000; Eom et al., 2000). Sobre todo porque no siempre existe una relacin clara entre el nmero de esporas y la magnitud de colonizacin de una raz en el campo (Ebbers et al., 1987; Troeh y Loynachan, 2003). Sin embargo Sylvia (1994), Feldmann et al., (1998) y St. John (2000) opinan que el xito de una inoculacin obedece al contacto que el sistema radical creciente tiene con las esporas introducidas en un sustrato y, en consecuencia y bajo este privativo contexto, el inicio de la colonizacin de una raz depender de la cantidad de esporas ah presentes. Por otro lado y aunque el efecto de una densidad esporal depende, entre otros factores, del hospedero (Cavalcante et al., 2002), una sola espora infectiva es capaz de iniciar una asociacin mutualista (Daft y Nicolson, 1969) o inculos con gran nmero de esporas viables promover niveles de colonizacin mayores (Burrows y Pfleger, 2002). En este sentido Al-Garni y Daft (1990) consideran que 4 esporas g-1 de suelo es una concentracin bastante alta, e Ingham (2003) estima que 1 a 5 esporas seran suficientes para asegurar una colonizacin. Con base a lo denotado a continuacin se abordan y tratan de contextualizar las variables medidas de este bioensayo: 129

5.3.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas en plantas de papayo

Como era de esperarse, el crecimiento en altura en todas las plantas que recibieron esporas superaron a las testigo a los 20 ddi (Figura 16), fecha en la que probablemente la reciprocidad entre las plantas husped y el hongo endfito se haba consumado. En este sentido autores como Medina et al., (1988 a, b), Habte et al., (1987), Davies

et al., (1996) y Al-Karaki (1998) opinan que en muchas ocasiones y circunstancias el

establecimiento de una simbiosis micorrzica trae consigo una serie de cambios fisiolgicos y/o morfolgicos en la planta hospedera que casi siempre las hace crecer y responder con ms xito a las tensiones ambientales, en comparacin con las plantas no inoculadas. Igualmente resultan valiosas las apreciaciones de Abbott y Robson (1985 a) al asegurar que bajo circunstancias favorables Glomus intraradices consigue colonizar y aumentar rpidamente la captacin de P y Cu hacia su hospedero debido ms que nada a su acelerada produccin de hifas extrarradicales. Lo advertido concuerda con las declaraciones de Sylvia (1988; 1989), Cooperband et

al., (1994) y Cabello (1999) quienes estiman que el efecto inicial de la formacin de
micorrizas se puede reflejar en el crecimiento del organismo hospedante, aunque hay reportes donde la colonizacin redujo la altura. Principalmente si la disponibilidad de P en el suelo es alta y los costos de la micotrofa exceden sus beneficios (Graham et

al., 1997; Johnson, 1998; Scullion et al., 1998), o bien su concentracin en los
rganos de la planta es baja (Thomson et al., 1986). En este caso los resultados obtenidos para la variable altura en cierto modo concuerdan con los de Koomen et al., (1987) al concluir que los aislados nativos no

130

son necesariamente los ms eficaces en cuanto a la respuesta micorrzica de crecimiento se refiere, aun y cuando la evaluacin se verifique en los suelos de su origen. Para Johnson et al., (1997), la ausencia de respuestas o disminuciones en el crecimiento pueden sobrevenir dependiendo de las combinaciones y relaciones individuales establecidas entre los simbiontes en el tiempo y en el espacio, donde las condiciones de disponibilidad nutrimental, temperatura e intensidad de la luz hasta cierto punto son determinantes. En lo tocante al nmero de hojas, el anlisis de varianza no logr establecer diferencia significativa entre los tratamientos evaluados (P0.05) puesto que los valores promedio obtenidos fueron de 5.5 para las plantas que no recibieron esporas (testigo) y las que se inocularon con 10 y 50 esporas esterilizadas en su superficie. Mas ello no dista mucho de los registrados en los tratamientos donde las esporas no fueron acondicionadas y el resultado en las plantas de los tratamientos 10 eGise, 50 eGise y 100 eGise fue ligeramente superior al ya sealado (de 5.6, 5.7 y 5.7, respectivamente). Aun cuando en todos los documentos cientficos consultados no se hace referencia al nmero de hojas de las plantas husped cuando se asocian con los hongos MA, bien vale la pena resaltar que Janos (1980 a) tampoco hall significancia en cuanto al promedio de hojas presentes en C. papaya despus de cinco semanas de haber sido inoculadas con races de cacao cortadas y esterilizadas. As, y pese a que ambos resultados no concuerdan con los de Smith et al., (2000) al referir que las plantas de Medicago truncatula micorrizadas tuvieron cerca de 50% ms hojas que las plantas no inoculadas e indican que al asociarse con Scutellospora

calospora la variabilidad en el nmero de hojas fue menor que el mostrado con

131

Glomus caledonium, parece factible que ahondar en este particular aspecto pudiese
ser interesante en situaciones donde las plantas son urgidas de mecanismos alternos y diversos que les permitan adaptarse a condiciones de sequa, entre las que seguramente figura la reduccin del rea que se expone a la prdida de agua por transpiracin (Davies et al., 1996).

5.3.2. Biomasa seca y rea foliar en plantas de papayo

Si bien es cierto que la importancia de una simbiosis no puede inferirse solamente al valorar aumentos de la biomasa en las plantas (Wilson y Hartnett, 1998), en la que algunas veces incluso se manifiesta una depresin (Francis y Read, 1994), lo que si parece irrefutable es que el carbono adicional fijado en una planta micorrizada se convierte en materia seca (Bethlenfalvay et al., 1982; Tinker et al., 1994). Por tal motivo es admisible la comparacin de esta u otras medidas similares simples de crecimiento entre las plantas inoculadas y su respectivo testigo (Harley, 1994). En el caso que nos ocupa, las plantas del tratamiento 50 eGie fueron las que mostraron una mayor capacidad para transformar la energa y las materias primas en biomasa seca radical y area (Figs. 17 y 18). Sin embargo en la primera de las variables citadas no existi diferencia estadstica entre los tratamientos evaluados, y en la segunda la separacin de medias de Tukey (P0.05) indic que el mejor tratamiento para valorar la eficiencia de las distintas morfoespecies seleccionadas en esta investigacin fue el denominado 50 eGie (ver descripcin del tratamiento en el Cuadro 9). Resultados similares expresan Scullion et al., (1998) quienes encontraron que ordinariamente la colonizacin redujo la biomasa radical de los trboles (Trifolium

repens L. cv. Menna). En contraste Aziz y Habte (1987) afirman que en funcin del
132

tiempo el peso seco de la biomasa area del caop (Vigna unguiculata var. California Black Eye) inoculado fue mayor que el de las no inoculadas. De igual manera las plantas de Lotus corniculatus L. (Fabaceae) inoculadas lograron incrementar su biomasa hasta 44 veces ms en comparacin con su testigo (Goverde

et al., 2000).
No obstante, y desde una perspectiva fundamentalmente ecolgica, van der Heijden

et al., (1998 a, b) juzgan imprescindible conocer cual es el endfito que coloniza a

una determinada planta toda vez que su biomasa puede variar en funcin de las morfoespecies de hongos MA que ocupan sus races. En este bioensayo el rea foliar de las plantas evaluadas no mostr diferencia significativa entre los tratamientos (P0.05, Pr>F = 0.2129), lo cual posiblemente se debi al poco tiempo transcurrido entre la inoculacin y el inicio de la colonizacin radical (20 das) e impidi se manifestasen cambios notorios en las plantas husped. Pero el haber registrado los valores ms bajos para esta variable en las plantas testigo (T1= 19.04 cm) sugiere la existencia de algn mecanismo de respuesta a la asociacin con el micosimbionte, de entre los que sobresale la expansin de la superficie fotosinttica de las plantas husped del tratamiento 50 eGie (T5= 22.69 cm). La tendencia observada se apega a lo afirmado por Green et al., (1998), quienes aseveran que la simbiosis micorrzica puede ocasionar cambios en algunos factores foliares intrnsecos, entre los que justamente destaca el tamao de las hojas en las plantas husped. As, y en este contexto, los registros de Amerian et al., (2001) confirman que el rea foliar de las plantas de maz (Zea mays) inoculadas con Glomus mosseae y G.

133

intraradices definitivamente fue superior a la de las plantas no inoculadas (testigo),

an bajo las condiciones de estrs moderado y severo a las que fueron sometidas durante 98 das.

5.3.3. Colonizacin micorrzica en plantas de papayo

La recoleccin de races permiti establecer que, al menos bajo las condiciones en las que se llevara a cabo este bioensayo, la colonizacin del morfotipo HMA en la planta husped elegida podra establecerse a partir de los 20 das despus de la inoculacin con 50 propgulos fngicos esterilizados en su superficie y colocados en su respectivo contenedor donde el contacto con el sistema radical de los individuos trasplantados sera factible (Cuadro 9 y Fig. 19). Lo acontecido permiti discernir que el tratamiento 50 eGie sera el ms adecuado para valorar los posibles cambios morfolgicos o fisiolgicos que pudiesen mostrar C.

papaya y J. mexicana despus de su asociacin con las tres morfoespecies

seleccionadas. No obstante el resultado obtenido parece no concordar con el de Sanders y Sheik (1983) pues para ellos el inicio de la colonizacin est directamente relacionado con la cantidad de propgulos fngicos que se encuentran presentes en el suelo. Tal apreciacin de alguna manera es compartida por Nehl et al., (1999) al indicar que si su densidad en el suelo es baja, entonces la micorrizacin es lenta. Sin embargo ninguna ponderacin derivada del presente bioensayo puede ser concluyente dado que la intensidad de colonizacin porcentual de la morfoespecie de

G. intraradices, cuantificada en las races nutricias de C. papaya en cada uno de los

tratamientos evaluados fueron estadsticamente similares (Prueba de Kruskal-Wallis: H= 5.300, P=0.5059).

134

Por lo pronto llama la atencin detectar que una mayor capacidad infectiva del hongo micorrizgeno no necesariamente se traduce en un dominio funcional, pues al comparar el grado de colonizacin de las races en las plantas del tratamiento 50 eGise (3.90%) con las del tratamiento 50 eGie (3.0%), la produccin de biomasa seca area y radical en las primeras fue menor (0.036 y 0.00579 g) respecto a la almacenada en las segundas (0.043 y 0.00665 g) (Figs. 17 y 18). Estos resultados coinciden con lo reportado por Hernndez et al., (2000) quienes precisan que Glomus mosseae fue capaz de promover prdigamente el crecimiento de Vigna luteola sin importar que los porcentajes de colonizacin radical de

Scutellospora fulgida eran mayores.

As que si el micelio extrarradical (o externo) comienza a desarrollarse profusamente entonces el volumen de suelo explorado se incrementa, como lo consignan Bentivenga et al., (1997), reciprocidad que muchas veces culmina en el desarrollo de estructuras fngicas especficas dentro de la raz hospedera (Vierheilig et al., 2000 a), lugar desde donde se espera que el micosimbionte realice su funcin. Por esta razn el micelio formado podr tener acceso a los nutrimentos del suelo que no logran ser explorados por las races de una planta no inoculada (Bolan, 1991), caso en el cual seran tiles de evaluar en investigaciones futuras la densidad, distribucin y actividad fisiolgica del micelio (Hodge, 2000; Hart y Reader, 2002 a). Ello puede ser de gran utilidad para determinar la eficiencia de un simbionte fngico en las fases tempranas del desarrollo de las plntulas, lo cual a juzgar por Green et

al., (1994) es importante de relacionar con el grado de colonizacin radical existente.

En consecuencia distinguir entre lo que se concibe como capacidad infectiva o eficiencia es importante, ya que el primer trmino se refiere a la cantidad de

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estructuras HMA que el hospedero presentan tras su colonizacin y el segundo a la respuesta que tiene la planta a la colonizacin (Sylvia, 1998). Lo predicho permite inferir que los hongos MA son capaces de diferir tanto en los niveles de colonizacin de un sistema radical como en su impacto en la captacin de nutrimentos del suelo, las cuales son consideradas por Abbott y Robson (1981 b) sus habilidades innatas.

5.4. Bioensayos de eficiencia en las plantas husped

Aunque ambas caricceas fueron sensibles a la colonizacin endomicorrzica con las tres morfoespecies de G. intraradices de procedencia geogrfica distinta, los tratamientos evaluados tanto en C. papaya como en J. mexicana mostraron una igualdad estadstica generalizada, lo cual concuerda con lo asentado por van der Heijden et al., (2003) al no encontrar diferencia significativa en sus experimentos donde valoraron tres taxa dismiles pertenecientes al mismo gnero (Glomus) pero provinientes de una sola localidad geogrfica de Suiza. Mas lo apuntado es advertido por Hart y Klironomos (2002) y Hart y Reader (2002 b) al indicar que la variacin en el crecimiento parece ser mayor cuando se valoran respuestas a nivel de gnero y no de aislados a nivel de morfoespecies. Lo denotado probablemente se explica por la complementariedad de efectos y estrategias que pueden existir entre hongos MA pertenecientes a distinto gnero (Smith et al., 2000) la cual es una asepcin que refuerza y armoniza con las desigualdades apreciadas por Cooperband et al., (1994) al valorar el papel de los hongos MA de plantaciones de cacao (donde dominan Acaulospora y Glomus) en tres especies de la regin tropical hmeda de Costa Rica: Erythrina berteroana, Paspalum

conjugatum y Homolepsis aturensis.

136

Mas numerosos estudios realizados con antelacin haban demostrado que la asociacin entre distintas especies de hongos MA y plantas husped eran capaces de manifestar variaciones en su eficiencia (Cooperband et al., 1994), misma que en un momento dado y en ciertas hospedadoras pudiere ser positiva, y menos significativas o inclusive deletreas en otras (Boerner, 1990; 1992; Perry et al., 1992; Tawaraya et

al., 1999).

5.4.1. Respuestas de Carica papaya 5.4.1.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas en plantas de papayo
Si bien para el crecimiento en la altura de las plantas el anlisis estadstico estableci diferencia significativa entre las testigo 2, 50 e Gi e V, 50 e Gi e C y 50 eGie Y con respecto al testigo 1 a partir de los 30 ddi (Cuadro 13), esta fue morfomtricamente visible hasta los 60, tal y como se indic en el apartado 4.6.1.1. y se ilustr en la Fig. 20. As, y de conformidad con las anotaciones puntualizadas en el apartado 5.3.1., era de esperarse que las plantas del testigo 1 tuviesen un crecimiento en altura inferior al de todas las dems (Fig. 20). Pues aparte de no haber contenido ningn inculo esporal, tampoco recibi el P adicionado a todos los dems tratamientos (testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y) (Apartado 2.6 y Cuadro 10). De esta manera, y despus de que la aplicacin de 0.100035 mg de fosfato de calcio dibsico (CaHPO4) aportaran las 50 ppm de P que se deseaban en el sustrato de cada uno de los contenedores donde se llevara a cabo este bioensayo (contenedores individuales convermex no. 16 con 450 g de sustrato [ver apartado 2.6]), el resultado analtico de las muestras de laboratorio indic que nada ms estaran disponibles 13 ppm para las plantas debido a la peculiar inmovilizacin de P que caracteriza al suelo utilizado para la preparacin del sustrato (suelo nativo de SBC de Veracruz, con

137

trazas de material calcreo), tal y como lo atestiguan los detallados anlisis y evaluacin integral de sus caractersticas morfolgicas, fsicas, qumicas y de fertilidad de cada unidad y subunidad edfica cartografiadas por Castaeda (2000). No obstante, el nivel de fosfatos que qued disponible en el suelo fue suficiente para que las races de las plantas del testigo 2 buscasen la manera de procurarse la mayor superficie de contacto posible con las fuentes del suelo donde pudiesen ser absorbidos (Wild, 1992; Skene et al., 1996), suministro que en las plantas inoculadas (50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y) se asume amplificaron las hifas extrarradicales de los hongos MA al favorecer la biodisponibiliad del P intercambiable (GianinazziPearson et al., 1981; Morel y Plenchette, 1994). Tal actividad es ataida a las estructuras miceliares formadas en una colonizacin (Li

et al., 1991; Khan et al., 1995) que ha sido confirmada por varios autores, entre los
que figuran Hernndez et al., (2000) al valorar la inoculacin micorrzica en suelos con una alta capacidad de fijacin de P, nutrimento que con mucha frecuencia es el menos mvil y disponible para ser aprovechado por las plantas, as como el principal o incluso primer factor que limita su crecimiento (Jackson y Taylor, 1996; Hinsinger, 2001). En s, y desde el punto de vista de las peculiaridades indicadas, las plantas inoculadas con las morfoespecies de hongos MA de Veracruz, Campeche y Yucatn despuntaron de las del testigo 2 en incrementos en altura del 4.27, 5.41 y 3.13%, respectivamente (Fig. 20). Refirindose al nmero de hojas y las diferencias significativas que se presentaron a partir de los 15 ddi (Cuadro 14) sobresale la superioridad entre las plantas del testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y con respecto a las del testigo 1. Supremaca numrica que a los 45 ddi era evidente (>45% en todos los casos) y a los 60 ddi del 58.33, 62.50, 62.50 y 66.66%, respectivamente (Fig. 21). 138

Lo expuesto se convierte en un evento biolgico que discrepa con los resultados de Janos (1980 a) denotados en el apartado 5.3.1., los asemeja a los de Smith et al., (2000) y conmina a la realizacin de nuevas evaluaciones donde se determine con precisin cuales son los factores que influyen en su disimilitud, aun cuando las plantas se mantuvieron bajo condiciones controladas y a capacidad de campo.

5.4.1.2. Biomasa seca y rea foliar en plantas de papayo

En cuanto a la biomasa area seca se refiere, la acumulada en las plantas del testigo 1 siempre fue inferior a la de los dems tratamientos (Fig. 22), lo cual se aviene perfectamente a lo reportado por Bagayoko et al., (2000) en la interaccin de caop (Vigna unguiculata), sorgo (Sorghum bicolor [L.] Moench) y mijo perla (Pennisetum

glaucum L.) con un aislado de Glomus mosseae bajo condiciones controladas y

disponibilidad de 10 ppm de P. Por otro lado destac la fijacin de carbono en los tejidos de las plantas testigo 2 a partir de los 15 ddi, misma que a los 60 ddi solo fue superada por el almacenamiento de energa realizado en las plantas inoculadas con la morfoespecie de hongo MA de Campeche (tratamiento 50 eGie C >20.96%), sin tomar en cuenta que las primeras hayan producido mayor cantidad de biomasa radical seca (testigo 2 >21.42%, datos no presentados) con respecto a la de estas ltimas. De esta forma dicho acontecimiento permite teorizar que el beneficio ciertamente provino de las hifas producidas por dicha morfoespecie, y cuyo poder funcional y absorbente fue definitivo para la apropiacin ms eficiente de agua y nutrimentos. Con respecto al rea foliar fue evidente que el incremento registrado en las plantas de los testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y super al de las testigo 1 a partir de los 30 ddi. Asimismo que el rea foliar de las plantas de C. papaya inoculadas con la morfoespecie de hongo MA de Campeche fue la mayor de todas (Fig. 23), lo cual

139

directa e indiscutiblemente apoya la acotacin revelada para la biomasa area seca en este apartado.

5.4.1.3. Colonizacin micorrzica en plantas de papayo

En este caso la deteccin de estructuras micorrzicas en las races de las plantas inoculadas con las morfoespecies objeto de estudio fue positiva a partir de los 15 ddi (Cuadro 18), aunque en esa fecha no se lograron observar vesculas en ninguna de las preparaciones examinadas bajo un microscopio compuesto a 200X. A partir de los 30 ddi la proliferacin de hifas intrarradicales present un patrn similar al de la formacin de arbsculos. Sin embargo a los 45 y 60 ddi la produccin de ambas estructuras fue excelsa en las morfoespecie de hongos MA de Campeche (64.51 y 26.32% de hifas, y 51.77 y 20.77% de arbsculos) y Yucatn (111.61 y 27.12 de hifas y 92.19 y 27.59 de arbsculos) en comparacin con la procedente de Veracruz (Fig. 24 y 25). Entre tanto, y al considerar a los arbsculos como los mejores indicadores de la intensidad del mutualismo (no sin controversia [Blee y Anderson, 1998; Bago, 2000]) por ser el sitio celular donde se lleva a cabo el intercambio bidireccional de nutrimentos entre la planta y el hongo MA (Smith y Smith, 1990; Titus y Leps, 2000), en verdad esta ltima fue la morfoespecie que en ambas fechas (45 y 60 ddi) los produjo con mayor profusin (Fig. 27). Por tal motivo era de esperarse que, tras haberles precedido una red hifal funcional y un costo-beneficio equilibrados, fuesen precisamente estas las plantas ms beneficiadas en la interaccin simbitica. En cambio si la reciprocidad no fuere compartida y se hubiese tornado ms que nada en un costo energtico desmedido para el hospedero, con seguridad la presin de

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seleccin se encargara de reducir drstica e inmediatamente los niveles de colonizacin en sus plantas husped (Fitter, 1991; Fitter y Merryweather, 1992). As y sin objetar que la presencia de vesculas en las races de las plantas asociadas con la morfoespecie de hongo MA de Veracruz no fue cuantiosa (entre 1.5 y 2.5%), al menos super a las otras dos morfoespecies asociadas con C. papaya a los 30 y 60 ddi (Fig. 26). Mas discurrir si tras finalizar el experimento (60 ddi) tales hinchamientos (usualmente terminales) de las hifas limitaron la acumulacin de biomasa area (Figura 22) y radical secas (<14.28%, <21.31% y <29.41% con respecto a las plantas de los tratamientos 50 eGie C, 50eGie Y y testigo 2, pero >11.62% en comparacin con las testigo 1 [datos no presentados]) en sus hospedadoras, por ahora pudiere ser un dislate. La presuncin que de momento se tiene es que las estructuras vesiculares operan en el almacenaje de recursos (Johnson, 1993; Diouf et al., 2003) y son indicadoras de consumo de carbono (Harrier, 2000), pese a que su funcionamiento y desempeo no se han podido interpretar del todo debido a sus patrones de formacin estacional en campo (Fitter, 1991). Tal y como sucede con la diversidad funcional y fisiolgica de las dems estructuras fngicas que se encuentran involucradas en la colonizacin micorrzica dentro y a travs de los ecosistemas (Allen et al., 1995).

5.4.1.4. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin en plantas de papayo

Aunque la asimilacin neta de CO2 y transpiracin de las hojas no mostraron diferencia significativa (ANOVA, P0.05), las tendencias registradas permiten inferir que a los 60 ddi las plantas inoculadas con las distintas morfoespecies de hongos MA asimilaron ms CO2 en comparacin con la sntesis de compuestos del carbono ocurrida en las plantas de ambos testigos (Fig. 28). Propensin manifesta en las

141

morfoespecies de Campeche y Yucatn desde los 45 ddi, mas no en la de Veracruz (Fig. 28). Sin embargo dicha supremaca fotosinttica (procedida de la regulacin de sus movimientos estomatales y la evaporacin) lograron una transformacin de materia seca que durante todo el experimento super solo a las plantas del testigo 1 y no a las del testigo 2 (Fig. 22), las cuales fueron aventajadas por los efectos provenidos de la morfoespecie de hongo MA de Campeche. Como oportunamente se indic en el apartado 5.4.2. Lo ocurrido parece concordar con el reporte de Al-Karaki (1998) quien al comparar plantas micorrizadas y no inoculadas descubri que las asociadas con los HMA a menudo eficientizan el uso de agua. Por ese motivo, y sin ser los resultados obtenidos en este bioensayo una excepcin, al parecer todos los hongos MA evaluados fueron capaces de aumentar la habilidad del sistema radical para absorber la humedad del suelo y, en correspondencia a la apertura estomatal mantenida en las hojas, reforzar la produccin de biomasa seca. En s la sntesis de materiales orgnicos areos fue ms elocuente en las plantas asociadas con la morfoespecie de Campeche (>20.96%, Fig. 22). Entre tanto las diferencias encontradas en los tratamientos donde se evaluaron las morfoespecies de Veracruz y Yucatn no trascendieron debido a la probable variabilidad en las secuencias del gen ribosomal dable entre aislamientos de una misma morfoespecie de distinto origen geogrfico (Sanders et al., 1996). Condicin que sin duda alguna valdra la pena dilucidar ms adelante.

5.4.1.5. Acumulacin de P en la biomasa area de plantas de papayo

El contenido de P en las plantas de C. papaya inoculadas super al incorporado en las plantas testigo a los 60 ddi (Figs. 31 y 32), lo cual coincide con las apreciaciones de 142

St. John (1996 b), Scullion et al., (1998), Aguilera-Gomez et al., (1999) y Sylvia (1999) referentes a la eficiencia que los hongos MA ostentan para su absorcin. Del mismo modo Green et al., (1998) aseguran que la concentracin de fosfatos en las hojas de una planta micorrizada son parte de los cambios intrnsecos que los micosimbiontes son capaces de producir a nivel foliar. Los anlisis de laboratorio determinaron que la morfoespecie de Yucatn fue la ms hbil de todas para incrementar la absorcin de este nutrimento a los 30 y 60 ddi (Fig. 31), resultado que de manera rotunda fortalece la presuncin de que las estructuras hifales y arbusculares favorecieron la incorporacin y transferencia ms efectiva de P en las plantas husped (Fig. 32). Adems se acrecent la acumulacin de materia seca radical (>27.08% que la morfoespecie de Veracruz y >8.92% que la morfoespecie de Campeche), sin que ello fuese necesariamente proporcional con la acumulacin de biomasa area seca (Fig. 22). Por este motivo, y basndose en las propuestas hechas por Boddington y Dodd (1998) al comparar el desarrollo y actividad metablica de las micorrizas formadas por Acaulospora tuberculata (BEG41), Gigaspora rosea (BEG111) y Glomus manihots (BEG112) en Pueraria phaseoloides L. (CIAT 9900) y Desmodium ovalifolium L. (IPB 13089), sera muy interesante puntualizar cuales son los mecanismos que controlan la transferencia de los fosfatos hacia el hospedero.

5.4.1.6. Eficiencia de la simbiosis micorrzica

De acuerdo con el concepto definitorio de Kahiluoto y Vestberg (1997) referente a la virtud y facultad que los HMA pueden producir en pro o en contra de su planta

143

husped, en esta ocasin la interaccin fue positiva en todos los casos. Pero parece incuestionable que la morfoespecie de hongo MA proveniente de Yucatn fue la ms eficaz de todas en virtud de la maximizada incorporacin de P en las plantas husped durante todo el experimento (Figs. 31 y 32, Cuadro 22).

5.4.2. Respuestas de Jacaratia mexicana 5.4.2.1. Crecimiento en altura y nmero de hojas en plantas de bonete
Aunque a los 120 ddi no hubo diferencia significativa entre los tratamientos para el crecimiento en altura (ANOVA, P0.05), fue obvio que despus de los 46 ddi esta ciertamente fue mayor en las plantas de los tratamientos 50 e Gi e V, 50 eGie C y 50 eGie Y en comparacin con las testigo 1 y 2 (Fig. 33). As, al finalizar el experimento (120 ddi) el incremento en la altura de las primeras (plantas inoculadas) super a la registrada en estas ltimas (plantas no inoculadas) (Fig. 34). De esta manera los resultados obtenidos para esta variable en la interaccin de J.

mexicana con las morfoespecies evaluadas se avienen y ajustan con las acotaciones
mencionadas en el apartado 5.3.1. y los aspectos pormenorizados en el apartado 5.4.1. Por esta razn era de esperarse que las plantas del testigo 1 tuviesen el menor crecimiento en altura (Fig. 33). Ventaja que a partir de los 46 ddi se registr en las plantas del testigo 2, las cuales fueron superadas a los 75 y 120 ddi en todas las plantas inoculadas. Del orden de 2.33 y 19.06% en la morfoespecie de hongo MA de Veracruz, de 3.27 y 5.11% en la de Campeche y de 3.03 y 5.81% en la de Yucatn, respectivamente (Fig. 33). En opinin de Wilson y Hartnett (1998) y Siqueira y Saggin-Jnior (2001) el registro sistematizado de las plantas a la colonizacin con hongos MA aislados bajo condiciones controladas es un valioso aporte donde no solo se determina la 144

importancia potencial de la simbiosis en la naturaleza, sino que tambin se convierte en un meritorio primer paso encaminado hacia el entendimiento de la dinmica de los ecosistemas terrestres y coyuntura propicia para el trpico seco mexicano donde al menos J. mexicana es una especie tpica que se encuentra en inminente peligro de extincin. Para el nmero de hojas no se encontr diferencia significativa entre los tratamientos (ANOVA, P0.05) al finalizar el experimento (120 ddi). Y a lo sumo pudiere hacerse hincapi en que a los 75 ddi las plantas del testigo 2, 50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y an posean hojas, mientras que las del testigo 1 lucan totalmente defoliadas. No obstante en la ltima fecha evaluada, las plantas de todos los tratamientos haban perdido sus hojas a pesar de haber contado con humedad suficiente (capacidad de campo) para realizar sus funciones vitales. Por lo tanto pudiere resultar muy desacertado hacer conjeturas pues toda evidencia indica que J. mexicana es una especie que se desprende de sus hojas durante la temporada seca, que se prolonga hasta por 8 meses (octubre-mayo) en su hbitat natural. De tal forma que sera indispensable indagar si solamente se trata de una estrategia adaptativa que le permite aliviar el estrs hdrico, o bien se requiere determinar cuan realmente es su dependencia hacia los HMA, y si los patrones fenolgicos de esta especie arbrea se encuentran relacionados con alguna de las funciones y/o cambios en el balance fitohormonal que los hongos MA regulan en las plantas. Ello pudiera complementar el trabajo realizado por Davies et al., (1996) en laboratorio quienes demostraron que tal y como sucede en condiciones de campo, las plantas que se asocian con hongos MA tienden a reforzar la abscisin de las hojas para adaptarse a las condiciones de sequa, lo cual en definitiva le ayuda a mantener un estado de hidratacin potencialmente ms favorable, amn de que se incrementa el radio de accin de su raz o el desarrollo de races laterales.

145

5.4.2.2. Biomasa seca y rea foliar en plantas de bonete

En relacin con la biomasa area y radical seca solamente se determin diferencia significativa a los 15 ddi para la primera de las variables citadas (ANOVA, P0.05), fecha donde las plantas del testigo 1 lograron acumular tal cantidad de materia orgnica que logr superar a la de todas las dems (Fig. 35). Circunstancia que si bien no tiene ninguna explicacin argible a una posible heterogeneidad de las plntulas al momento de iniciar este bioensayo (toda vez que los valores de altura [6.49 0.5 cm], dimetro [2.46 0.12 mm] y nmero de hojas [0.99 0.02] fueron similares en todos los tratamientos), de modo alguno se vincula con el rea foliar que las plantas de ese tratamiento tuvieron en la fecha acotada (Fig. 36) en la que solo fueron superadas por la superficie fotosinttica desplegada en las plantas del tratamiento 50 eGie Y (>8.41%). A partir de los 30 ddi y hasta la finalizacin del experimento, en las plantas del testigo 1 los depsitos de energa fueron menores que los registrados en las plantas de los tratamientos inoculados y en las del testigo 2 (Fig. 35), siendo precisamente en estas ltimas donde se concentr la mayor cantidad de biomasa area seca a los 120 ddi (>36.04%). En cuanto a las plantas inoculadas se refiere, la biomasa formada en las interactuantes con la morfoespecie de hongo MA de Yucatn (>24.71%) super a la de Veracruz (>14.88%) y Campeche (>2.12%), secuencia que para la fecha indicada coincidi con la biomasa radical seca acumulada en las plantas de los tratamientos testigo 2 (>87.05%, la mayor) y 50 eGie C (>9.37%, la menor). Al mismo tiempo y a pesar de que en los tratamientos 50 eGie V y 50 eGie Y el orden de las ganancias en peso seco se invirti (>39.06% y >17.10%), todos ellos fueron preeminentes respecto a las plantas testigo 1. 146

Lo expresado hace suponer que las races procuraron una superficie mayor de contacto con las fuentes de fosfato en el suelo y por ello la cabellera radicular aument su volumen. Sin embargo el desarrollo de una elevada densidad de races no fue suficiente para obtener un suministro adecuado de P hacia la planta, pese a que su fuente de abastecimiento son tambin los fosfatos isotpicamente cambiables del suelo (Morel y Plenchette, 1994) de tal manera que, al igual y como sucedi en las plantas de C. papaya, las hifas de los hongos MA fueron valiosas para ampliar la biodisponibiliad del P en las plantas de J. mexicana (Fig. 45). Aun cuando la medicin del sistema asimilatorio (rea foliar) de una planta es una variable que depende de la magnitud de las diferentes hojas para su cuantificacin (Goenaga y Singh, 1996), parece ser que su presencia en estas hospederas obedece ms a sus patrones fenolgicos e interaccin con las variaciones de humedad y temperatura estacional que de las funciones y/o cambios en el balance fitohormonal que los hongos MA pudiesen regular (ver comentarios plasmados en el apartado 5.5.1). De esa manera el resultado obtenido solo marc que las plantas del testigo 1 se defoliaron antes que todas las dems (a los 75 ddi, Fig. 36), lo cual permite entender que ello en cierto modo fue el resultado de una deficiente apropiacin de recursos que se tradujo en una biomasa area y radical secas que en comparacin con la acumulada en las plantas de los dems tratamientos fue menor a los 120 ddi (Fig. 35; <9.37%, <17.18%, <39.06% y <87.50% con respecto a las plantas de los tratamientos 50 eGie C, 50eGie Y, 50eGie V y testigo 2 [datos no presentados]).

5.4.2.3. Colonizacin micorrzica en plantas de bonete

Aunque las estructuras micorrzicas aparecieron en las races de todas las plantas de los tratamientos inoculados (50 eGie V, 50 eGie C y 50 eGie Y), solamente a los 75 y

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120 ddi hubo cierta similitud en los patrones de formacin de hifas y arbsculos en las tres morfoespecies evaluadas (Figs. 37 y 38). En cambio las vesculas se presentaron justamente en las dos fechas mencionadas y sobre todo en proporcin mayor dentro de las races colonizadas por la morfoespecie de hongo MA de Veracruz a los 120 ddi (Fig. 39). La opinin vertida por Titus y Leps (2000) sobre la intensidad del mutualismo (apartado 5.4.3) y la de Smith et al., (2000) relativa al contenido de P y la promocin del crecimiento en Medicago trunculata asociada con un aislado de Scutellospora

calospora no conviene del todo con la eficiencia de la morfoespecie de Yucatn para

la absorcin de P en J. mexicana bajo las condiciones en las que se condujo este experimento (Figs. 40, 44 y 45), a pesar de la progresiva produccin de hifas intrarradicales y arbsculos mostrada durante todo el experimento (Fig. 38). Al contrario, resultados similares a los aqu presentados son reportados por Dickson et

al., (1999 a, b) en Allium porrum y S. calospora.

De ah se desprenden varias interrogantes que pudieren ser interesantes de abordar para tratar de explicar las diferencias observadas en la respuesta de J. mexicana an bajo condiciones ambientales propias de su hbitat natural y asepsia total. Pues una vez iniciada la colonizacin de una planta husped es necesario reconocer que el hongo micorrizgeno se mueve en dos ambientes contrastantes: El micelio interno (MI) y el micelio externo (ME), relacin ME/MI de gran importancia por cuanto es un indicador de la actividad micorrzica (Guerrero, 1996). En consecuencia el hongo MA tiene un componente interno y otro externo a la raz que parecen compartir caractersticas morfolgicas y fisiolgicas similares en las que su simultnea accin frecuentemente complica su anlisis. Las ms de las veces cuando se intenta progresar en el conocimiento y evaluacin de los mecanismos y

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causas que determinan la dualidad extra e intrarradical de las bases que rigen a la simbiosis micorrizgena (Bago et al. 2000 c). No obstante Bago et al., (1998 a) lograron describir en detalle el desarrollo de la fase externa de la micorriza arbuscular, y sealan que si la simbiosis se establece con xito el hongo MA adquiere nuevo vigor y despliega profusamente en el medio sus hifas exploradoras primarias. Mismas que dan origen a las hifas exploradoras de rdenes superiores (secundarias, terciarias, etc.) que se bifurcan dicotmicamente para dar lugar a las estructuras ramificadas de absorcin (branched absorbing structures, BAS) e incrementan an ms el volumen de suelo explorado (Bago et al., 1998 b). De esta manera favorecen la concretizacin de dos de las funciones ms relevantes del micelio externo: i) La bsqueda y captacin de nutrimentos minerales, y ii) La relacin de las hifas extrarradicales con su entorno (Bago et al. 2000 c). Ahora bien, y si estas ltimas son responsables de los procesos de absorcin y transporte de P (Harrison y van Buursen, 1995), es factible que los resultados obtenidos en la interaccin simbitica de las plantas husped asociadas con la morfoespecie de Yucatn pudieren estar relacionados con algunas propiedades qumicas, fsicas y/o biticas del suelo que afectaron el adecuado funcionamiento de su micelio externo (Rabatin y Stinner, 1988; Morton y Bentivenga, 1994; Smith et al., 1994) cuya produccin es una capacidad innata en cada HMA (Abbott y Robson, 1985 a) y determinante en su eficiencia para promover la nutricin y el crecimiento de su hospedante (Smith et al., 2000). Por esta razn la inhabilidad de las hifas de la morfoespecie de hongo MA de Yucatn para crecer, diseminarse y absorber los fosfatos bajo las condiciones especficas del sustrato utilizado en la evaluacin es una de las posibles causas que, independientemente de la paulatina y creciente formacin de arbsculos registrada a 149

partir de los 15 ddi (Fig. 40), propiciaron un beneficio poco significativo para las plantas de este tratamiento en cuanto a la produccin de biomasa area (Fig. 35) y radical seca (datos no presentados) se refiere. De igual manera las plantas del tratamiento 5 (50 eGie Y) tuvieron el ms bajo contenido de P en sus hojas y tallo a los 30 ddi y 120 ddi (Fig. 44), y solo en esta ltima lograron superar, por 200 ppm, a la actividad llevada a cabo por las plantas no inoculadas del testigo 1 (Fig. 44). Si bien Sylvia (1992) apunta la apremiante necesidad de clarificar la relacin existente entre la colonizacin radical, la produccin de hifa externa y la respuesta de las plantas husped, resulta categrico reiterar que la captacin de los nutrimentos y su transporte son propiedades atribuibles a la hifa extrarradical (Morton y Bentivenga, 1994), misma que en un hongo MA efectivo puede llegar a mejorar el desarrollo del hospedante en forma directa o indirecta (Bago et al., 2000 c). As es posible que el genotipo del hospedante fuese un factor decisivo en la inmediata respuesta a la micorrizacin en trminos del costo-beneficio total de C (o P) usado(s) en la simbiosis (Smith et al., 1994), ya que las plantas inoculadas con esta morfoespecie fueron las menos eficientes para absorber P de entre todos los tratamientos evaluados, inclusive por debajo del efectuado por las plantas no inoculadas (Fig. 45) y, en consecuencia y basndose en las premisas de Marschner y Dell (1994), ambas caractersticas (las del suelo y la planta) influyeron en el flujo difusivo de los fosfatos hacia las superficies radiculares de estas plantas husped. Por ello hubiese sido interesante discurrir que la principal respuesta de la planta hospedera a la colonizacin MA no se limita solo a una mejora en la nutricin por P (Bethlenfalvay et al., 1989; Marschner y Dell, 1994) y que los dems efectos son simplemente beneficios laterales o adicionales (Guerrero, 1996). Sobre todo porque la simbiosis micorrzica puede ser efectiva al protegerla contra patgenos del suelo y 150

condiciones de estrs, as como incrementar la agregacin de las partculas del suelo y su estabilidad, cualidades en las que el desarrollo hifal es fundamental (Bago et al., 2000 c). Lo denotado hasta cierto punto constata que las afirmaciones de Guerrero (1996) y Miller et al., (1999) (apartado 5.1) tambin son aplicables a las interacciones que se suscitan en un ambiente controlado, tal y como sucedi en este caso. Y en cierta medida conlleva a retomar la proposicin de Cooper (1984) donde manifiesta que an no est claro si los efectos observados en la absorcin de otros nutrimentos distintos al P, relaciones hdricas y alteracin en los niveles hormonales son propiciados directamente por el hongo MA, o indirectamente por alguna alteracin fisiolgica en el hospedero derivada de la mejora en la nutricin de P.

5.4.2.4. Asimilacin neta de CO2 y transpiracin en plantas de bonete

Aunque las proporciones de asimilacin neta de CO2 (fotosntesis y respiracin) y de transpiracin (apertura estomtica y evaporacin) de las hojas medidas in situ no mostraron diferencias estadsticamente significativas (exceptuando la conductancia estomtica y evaporacin a los 75 ddi) (Cuadro 27), las tendencias observadas claramente revelan que a partir de los 15 ddi la asimilacin neta de CO2 en las plantas del testigo 1 y 2 en todo momento fue menor a la registrada en las plantas inoculadas. Los cuales con seguridad pueden relacionarse con el incremento en su tasa fotosinttica, tal y como en sus respectivos estudios lo refieren Allen et al., (1981), Druge y Schonbeck (1992), y Davies et al., (1996) para las plantas micorrizadas. Al respecto Ruiz-Lozano et al., (1995) y Louche-Tessandier et al., (1999) indican que de entre los beneficios ocurridos en una asociacin micorrzica destaca la estimulacin fotosinttica para la captura de carbono que podra compensar la transferencia continua que el micosimbionte demanda de su hospedera. 151

Por esto las apreciaciones de Martins et al., (1997) adquieren relevancia al considerar que el cociente respiratorio (cantidad de CO2 empleado en la respiracin como un porcentaje de la cantidad de CO2 ganado en la fotosntesis) muestra que incluso con la mengua del carbono destinado para el hongo MA, las plantas micorrizadas logran una ganancia y balance favorables que les posibilita equilibrar la prdida. De este modo si la productividad tiende a ser inmejorable cuando las plantas micorrizadas exhiben una alta tasa fotosinttica y las proporciones respiratorias ms bajas (Martins et al., 1997), es posible entender el porqu a partir de la exitosa colonizacin de sus races las plantas de los tratamientos 50 e Gi e V, 50 e Gi e C y 50 eGie Y (tratamientos inoculados) comenzaron a asimilar mayor cantidad de CO2 y a manifestar gradualmente su superioridad en altura (Figs. 33 y 34) en comparacin con las plantas de los testigos (Fig. 41). En este caso tal comportamiento preponder con una mayor cantidad de biomasa area seca acumulada en las plantas de los tratamientos inoculados y en las del testigo 2 respecto a la producida en las plantas del testigo 1 (Fig. 35). En las Figs. 42 y 43 se puede apreciar que la conductancia estomatal y evaporacin de agua en las hojas mostradas por las plantas del testigo 1 fue poco eficiente y, por lo tanto, su actividad y equilibrio energtico quedaron muy por debajo del funcionamiento registrado tanto en las plantas de los tratamientos inoculados como en las del tratamiento 2. Mismas que, pese a la mayor inversin de recursos destinados para su crecimiento y desarrollo, finalmente mostraron un mejor balance costo-beneficio derivado de la superioridad fotosinttica que redund en su porte y sanidad.

5.4.2.5. Acumulacin de P en la biomasa area de plantas de bonete

Respecto a la acumulacin de P en la biomasa area de J. mexicana vale la pena enfatizar los dos aspectos siguientes: 1) Que la morfoespecie de Campeche fue la 152

ms hbil de todas para incrementar la absorcin de dicho nutrimento bajo las condiciones ambientales en las que se condujo este experimento, y 2) Que a los 30 ddi la morfoespecie de Yucatn result ser menos eficiente para capturar P (3,000 ppm) en comparacin a la consumada en las plantas de los tratamientos 50 eGie V (3,300 ppm), testigo 2 (3,300 ppm) y testigo 1 (3,500 ppm), si bien a estas ltimas lograron superarlas en apenas 9.52% a los 120 ddi (Fig. 44). Aunque en diversos estudios se ha demostrado que la incorporacin de fsforo mejora la fisiologa de las hospedadoras y, por ende, su crecimiento y desarrollo se ve comnmente favorecido (Kling, 1997; Valencia et al., 2000), Johnson et al., (1997) y Smith et al., (2000) aseguran que tales acontecimientos en realidad no son un hecho consumado, tal y como sucedi en este bioensayo. La multiplicidad de factores biticos y abiticos conjugados alrededor de sus hojas y races juegan un papel fundamental en las relaciones fisiolgicas hongo MA-plantas husped, de tal suerte que su metabolismo carbonado estar recprocamente controlado durante la simbiosis (Shachar-Hill et al., 1995) y de ello depender el xito o el fracaso de la interaccin. En este sentido Aug (2001) ha enfatizado que a menudo la hidratacin de los tejidos y el intercambio de CO2 y O2 en las hojas, la absorcin de fsforo y el crecimiento de los hospederos derivados de una asociacin micorrzica puede ser una circunstancia sutil, transitoria y probablemente muy especfica de cada simbionte que, a final de cuentas, repercuten de manera sustancial en su habilidad competitiva y en su sanidad.

5.4.2.6. Eficiencia de la simbiosis micorrzica

En este caso la eficiencia de la micorrizacin estimada (vanse apartados 3.8.2.1.3. y 4.6.1.6) demostr que la morfoespecie proveniente de Campeche promovi la absorcin de P en las plantas husped durante los 120 das en que ambos

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organismos mantuvieron su relacin simbitica (Cuadro 30), lo cual sugiere que esta fue la ms eficaz de todas. Sin embargo, y de acuerdo con los resultados obtenidos en este bioensayo, es obvio que los efectos derivados de la absorcin de fsforo en una asociacin micorrzica no en todas las ocasiones redunda en el crecimiento y acumulacin de biomasa de los hospederos, consideraciones que coinciden totalmente con lo sealado por Aug (2001).

154

6. CONCLUSIONES
Basndose en los resultados obtenidos en el presente estudio se llegaron a las siguientes conclusiones:

Jacaratia mexicana es una especie arbrea que durante las fases iniciales de
su desarrollo y bajo circunstancias favorables fue capaz de asociarse con los HMA del consorcio MTZ-1 formado por Glomus mosseae, G. macrocarpum, G.

geosporum, Glomus sp., Gigaspora sp. y Acaulospora sp.

De acuerdo con las variables morfolgicas y fisiolgicas registradas, y bajo las condiciones en las que se llevaron a cabo estos bioensayos, el anlisis estadstico de los datos provee una clara evidencia para aseverar que las distintas morfoespecies de HMA evaluadas no mostraron diferencia significativa en su eficiencia para promover la absorcin de fsforo.

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7. BIBLIOGRAFA CITADA
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8. ANEXOS
ANEXO 1 Caractersticas macroscpicas y microscpicas de la madera de Jacaratia mexicana Caractersticas macroscpicas de la madera de Jacaratia mexicana. Color de la Color del Lustre Textura Grano Dureza Otros Gravedad albura duramen especfica Tejido --------Muy Prcticamente --blanda y acuosa no hay madera

blanquecino

Fuente: Barajas-Morales y Len (1989)

Caractersticas microscpicas de la madera de Jacaratia mexicana Vasos Parnquima axial Tipo Distribucin Porosidad Dimetro(m) Agrupacin
Difusa 230 1, 2 y 3 Paratraqueal, apotraqueal Vasicntrico, bandas uniseriadas

Caractersticas microscpicas... (continuacin) Radios Otros

Tipo Homocelulares Series 10 a + Sin fibras, parnquima axial
Fuente: Barajas-Morales y Len (1989).

Terminologa recomendada por el Comit de Nomenclatura de la Asociacin Internacional de Anatomistas de la Madera (IAWA, 1957). IAWA, 1957. Committee on the Nomenclature; Multilingual glossary of terms used in wood anatomy. Tropical Woods,107, 1-36.

201

ANEXO 2 Qu es la Biblioteca Virtual (Consorcio de Bibliotecas del Sureste)? La Biblioteca Virtual es un conjunto de fuentes electrnicas de informacin que diariamente se actualiza y a travs de ella es posible recuperar textos completos y citas referenciales de todas las reas del conocimiento que provienen de miles de publicaciones acadmicas, arbitradas y de divulgacin, las cuales se convierten en una herramienta capaz de hacernos entrever el estado actual del conocimiento generado hasta el momento en torno a un tema de investigacin. As, cualquier base de datos, centro de recursos o publicacin electrnica disponible en las instalaciones del Instituto de Ecologa A.C. (I. de E.) y/o en la Unidad de Servicios Bibliotecarios y de Informacin (USBI) de la Universidad Veracruzana (ambas ubicadas en la ciudad de Xalapa, Veracruz, Mxico) puede ser consultada las 24 horas de los 365 das del ao, entre ellas: Expanded Academic ASAP. Contiene 2,300 revistas acadmicas publicadas desde 1980 a la fecha, de las cuales 1,300 se encuentran en texto completo y con imgenes. Se actualiza diariamente y a la fecha tiene ms de 8 millones de documentos (Se encontraba disponible en el I. de E.). CSA Complete Collection. Editor de bases de datos bibliogrficas en ciencia y tecnologa ms prestigiado del mundo donde se pueden consultar datos con una amplia cobertura sobre ciencias biolgicas, ingeniera y tecnologa, medio ambiente y conferencias cientficas, entre otras. Adicionalmente se tiene accesibilidad a dos bases de datos especializados: MEDLINE y TOXLINE (Se encontraba disponible en el I. de E.). American Chemical Society. Sociedad cientfica ms grande del mundo y editor ms importante de informacin en el rea de la qumica. Su Divisin de Publicaciones edita ms de 30 ttulos de revistas, las ms citadas y las de mayor factor de impacto en sus respectivas categoras, de las cuales 14 ocupan el primer lugar en 24 reas temticas disponibles en texto completo y ligas a sitios importantes a nivel mundial, entre los que destaca el ChemPort (Divisin de Publicaciones de American Chemical Society) (Se encontraba disponible en el I. de E. y en la USBI). Academic Search Elite. Contiene ndices y resmenes desde 1984 para ms de 2 750 ttulos de publicaciones en diversas disciplinas acadmicas, entre ellas Ciencia y Tecnologa. Con texto completo son 1 600 (en su mayora [1 162] arbitrados desde 1990 ), y su actualizacin es diaria (Se encontraba disponible en la USBI).

En este caso importantes de consultar debido a los reportes de uso potencial de J. mexicana en la industria farmacutica y alimentaria.

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ANEXO 2 (Continuacin...) Academic Search Premier. Es la base de datos Acadmica ms grande del mundo. Contiene ndices y resmenes desde 1984, y en algunos casos se remonta al ao 1965, de ms de 4 300 ttulos de revistas en diversas disciplinas, entre ellas Ciencia y Tecnologa. Con texto completo ms de 3 350, de los cuales 2 560 son ttulos arbitrados. Su actualizacin es diaria (Se encontraba disponible en la USBI). Asimismo, destaca la bsqueda hecha en los siguientes bancos de datos: ISI Web of Science (Science Citation Index Expanded [SCI-Expanded 1992-2002]), Cambdridge Scientific Abstract Internet Database Service (reas temticas: Agrcola, Biological Sciences, Plant Science y Microbiology Abstracts), Annual Review of Microbiology, Annual Review of Plant Biology, Mycorrhizal Information Exchange (Sitio de bsqueda especializada del INVAM [International Culture Collection of Arbuscular & VesicularArbuscular Mycorrhizal Fungi]), Gale Group- InfoTeac one file (1980-2002), Journal of Agricultural and Food Chemistry, Journal of Natural Products, Biochemistry, Chemical Reviews y Kluwer Academic on line, entre otras. Finalmente destaca la minuciosa exploracin hecha en las publicaciones peridicas (Current Contents sobre Agricultura, Biologa y Ciencias Ambientales [1992-2002] impresos y/o electrnicos) del Instituto para la Informacin Cientfica (ISI, por sus siglas en ingls) en las que se incluyen citas sobre tpicos relacionados con diversas reas del conocimiento tales como Microbiologa Aplicada, Micologa, Biotecnologa, Agronoma, Ecologa, Biodiversidad y Conservacin de Recursos Naturales, Silvicultura y Ciencia Vegetal, entre otras.

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ANEXO 3 Prueba para determinar la inmunidad intrnseca de las especies vegetales a la colonizacin micorrizgena (Mtodo de Tester et al., 1987) 1. La prueba de inmunidad micorrizgena de Tester et al. (1987) bsicamente consiste en promover el contacto entre los simbiontes bajo condiciones favorables que coadyuven para con la colonizacin de las races de una planta hospedera y la formacin de micorrizas.

Recoleccin de frutos y obtencin de las semillas de J. mexicana

(Fotografas: Ramn Zulueta Rodrguez)

Ramn Zulueta Rodrguez)

Germinacin, trasplante e inoculacin con propgulos 100% infectivos (Fotografas:

Estructuras de hongos formadores de micorriza arbuscular en J. mexicana

(Fotografas: Ramn Zulueta Rodrguez)

Tester, M., Smith, S.E., y Smith, F.A. (1987). The phenomenon of "nonmycorrhizal" plants. Canadian Journal of Botany, 65, 419-431.

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ANEXO 4 Tcnica de tincin de races (Mtodo de Phillips y Hayman, 1970) 1. Lavar las races con agua de la llave para separar las partculas de suelo adheridas 2. Cortar las races en fragmentos de aproximadamente 1 cm y colocarlas en un tubo de ensaye 3. Aadir KOH al 10% hasta cubrir las races 4. Colocar a bao Mara el tiempo necesario hasta que al tomar las races con una aguja de diseccin stas se doblen 5. Decantar el KOH y lavar abundantemente con agua de la llave hasta eliminar todo el KOH y el agua salga clara 6. Aadir HCl 0.1N y dejar actuar de 5 a 10 min 7. Decantar el HCl y agregar azul de tripano al 0.05% diluido en cido lctico 8. Calentar en autoclave 10 min a 121C 9. Retirar el exceso de colorante y conservarlas inmersas en cido lctico hasta el momento de su observacin al microscopio.

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ANEXO 5 Tcnica para la cuantificacin de una raz endfita (Mtodo de McGonigle et al., 1990) 1. Poner la preparacin en la lmina portaobjetos de un microscopio compuesto equipado con una retcula ocular en cruz 2. Examinar metdicamente un eje de la retcula alineada con el eje largo de cada raz localizada 3. Para hacer un conteo porcentual simple de una raz colonizada por el endofito micorrzico (% RLC), cada vez que una porcin longitudinal de la raz es hallada se considera su presencia o ausencia si alguna de sus estructuras es tocada por el eje de la retcula que cruza a la raz 4. Uno puede anotar el nmero de hifas y los punto de contacto (o de entrada), los arbsculos y las vesculas que se encuentren y observen por el eje de la retcula 5. Es posible lograr una estimacin razonable del % RLC en 25 intersecciones por cada preparacin, aunque la exactitud ser mayor si en cada una de ellas se logran hacer 100 observaciones 6. Los conteos realizados se expresan como porcentajes, de la manera siguiente: % RLC = 100 x Nmero de intersecciones con endofito Nmero total de intersecciones contadas

McGonigle, T.P., Miller, M.H., Evans, D.G., Fairchild, G.L., y Swan, J.A. (1990). A method which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi. New Phytologist, 115, 495-501.

206

ANEXO 6 Tcnica de tamizado hmedo y decantacin para la separacin de esporas del suelo (Gerdemann y Nicolson, 1963) 1. Pesar 50 g de suelo hmedo, y colocarlo en un vaso de precipitados de 1000 mL. Si se pretende determinar el nmero de esporas, se aconseja que el peso de suelo tamizado se correlacione con el peso seco de la muestra. 2. Agregar agua de la llave hasta las partes, y agitar vigorosamente con una varilla de vidrio 3. Dejar reposar de 10 a 20 segundos y decantar el sobrenadante a travs de una serie de 3-5 tamices con abertura de malla de 40 a 500 m. La operacin se deber repetir un mnimo de 5 veces. Sin embargo, y solo en caso de que el suelo llegase a tener partculas de materia orgnica muy grandes, se considera factible utilizar un tamiz con malla de 800 m. 4. Recoger el suelo de cada uno de los tamices con un poco de agua, y colocarlo en cajas de Petri 5. Sacar las esporas con ayuda de una pipeta Pasteur Si el suelo con el que se trabaja tiene gran cantidad de materia orgnica, sta se puede reducir mediante la utilizacin de un gradiente de sacarosa, para lo cual a la muestra obtenida se le deber procesar de la manera siguiente (Daniels y Skipper, 1982): 1. Adicionar 15 mL de una solucin de sacarosa al 20% a tubos de centrfuga de 50 mL 2. Agregar con mucha precaucin e introducir la pipeta hasta el fondo 12 mL de una solucin de sacarosa al 60%, cuidando que sta quede en el fondo 3. Adicional de 10 a 15 mL del suelo tamizado en el punto 3 de la tcnica anterior 4. Centrifugar durante 3 min a 1000 rpm 5. Decantar el sobrenadante a travs de un tamiz pequeo y con nmero de malla de 22 m 6. Lavar con agua de la llave hasta eliminar la sacarosa 7. Vaciar el tamizado a cajas de Petri, utilizando un poco de agua 8. Sacar las esporas con ayuda de una pipeta Pasteur

Gerdemann, J.W., y Nicolson, T.H. (1963). Spores of mycorrhizal Endogone species extracted from soil by wet sieving and decanting. Transactions of the British Mycological Society, 46, 235-244. Daniels, B.A., y Skipper, H.D. (1982). Methods for the recovery and quantitative estimation of propagules from soil. En N.C. Shenck (Ed.). Methods and principles of mycorrhizal research (pp. 29-35). St. Paul (USA): American Phytopathological Society.

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ANEXO 7 Tcnica para la esterilizacin de esporas de hongos formadores de micorriza arbuscular (Mtodo de Bago et al., 2000 b) 1. Esterilizar el material ha utilizar en autoclave, o bien en olla de presin (18 libras x 18 min): Cajas de Petri, pinzas de diseccin, pinzas para atrapar esporas, etc. 2. En la campana de flujo laminar: a) Colocar las cajas de Petri estriles, y b) Con las sustancias indicadas y en los tiempos sealados realizar el lavado de las esporas que previamente se han vertido en un pequeo tamiz con membrana millipore type HA de 0.40 0.44 m, y desinfectado con hipoclorito de sodio (50% x 30 min) de la manera siguiente:
Tamiz con las esporas elegidas para la esterilizacin de su superficie

Agua estril + 1 gota Tween 80 1 min

Cloro 2.5% 2 a 5 min

1 min

1 min

1 min
Solucin con antibiticos Estreptomicina 200g mL-1 Gentamicina 100 g mL-1 20 min Listas para la inoculacin

Lavado con agua estril

1 min

1 min

Bago, B., Azcn, C., Varela F., L., Amora L., E., y Alarcn, A. (2000 b, septiembre). Integrando morfologa y funcin de hongos micorrzicos arbusculares. Curso tericoprctico impartido en la Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional, Mxico, D.F. 34 p. Adaptado en el rea de Microbiologa del Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrcolas, Montecillo, Estado de Mxico, Mxico, 2001. En este caso las cajas de Petri y su contenido se fueron cambiando y preparando de nuevo para el respectivo tratamiento de cada una de las procedencias que se pretendan evaluar.

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ANEXO 8 Tcnica para el establecimiento de cultivos-trampa a partir de esporas de hongos formadores de micorriza arbuscular (Mtodo de Brundrett et al., 1994, 1996) [1] Pinzas o tenacillas metlicas [2] Clavija de madera [3] Pincel para pintar [1 [3 [2

(1)

Morfotipos definidos

(2)

Despus de haber separado a las esporas del suelo (1), se les selecciona y aparta en grupos discretos (2) de acuerdo con su morfotipo (tamao, color, etctera) bajo un microscopio de diseccin (o estereoscpico)

(4)

(3)

Las esporas son depositadas en macetas que contienen sustrato esterilizado con vapor (3), donde se ponen a crecer las plantas hospederas (4) (Dibujos tomados de Brundrett et al., 1996) Brundrett, M., Melville, L., y Peterson, L. (Eds.). (1994). Practical methods in mycorrhiza research. Mycologue Publications, Canad. 161 p.; Brundrett, M., Bougher, N., Dell, B., Grove, T., y Malajczuk, N. (1996). Working with mycorrhizas in forestry and agriculture (Monograph Series 32). Canberra: CIAR. 374 p.

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ANEXO 9 Solucin nutritiva de Hoagland Solucin nutritiva de Hoagland, menos fsforo, modificada en su frmula original por Fernndez y Johnson (1986) al contener Fe en forma de quelato. Compuesto Concentracin Cantidad de soluciones madre, en mL, para 1 L de solucin nutritiva Ca(NO3)2 4H2O 1 M (236 g/1) 5 KNO3 1 M (101 g/1) 5 MgSO4 7H2O 1 M (246.50 g/1) 2 Quelato de Fe 5 000 ppm de Fe 1 --1 Micronutrimentos KCl 1 M (74.55 g/1) 1

Solucin que contiene 25 g de FeSO4; 7H2O, 26 g de etilenodiaminetracetato de sodio (Na2 EDTA); 14 g NaOH, en 1 L de agua destilada. Solucin de microelementos (Mn, B, Zn, Cu, Mo) con la composicin siguiente: MnCl2: 1.81 g; H3BO3: 2.86 g; ZnSO4 7H2O: 0.22 g; CuSO4 5H2O: 0.88 g; H2MoO4: 0.09 g; 1 L de agua destilada.

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ANEXO 10 Especies de plantas asociadas con Glomus constrictum en Polonia. Familia botnica Especie Aceraceae Acer palmatum Buxaceae Buxus sempervirens Asteraceae (Compositae) Petasites officinalis Cupressaceae Juniperus communis Cupressaceae Thuja occidentalis Poaceae (Gramineae) Avena sativa Poaceae (Gramineae) Corynephorus canescens Poaceae (Gramineae) Festuca ovina Poaceae (Gramineae) Festuca rubra Poaceae (Gramineae) Glyceria aquatica Poaceae (Gramineae) Helictotrichon pubescens Poaceae (Gramineae) Hordeum vulgare Poaceae (Gramineae) Sorghum sudanense Poaceae (Gramineae) Triticum aestivum Poaceae (Gramineae) Triticum secalum Poaceae (Gramineae) Triticum vulgare Fabaceae (Leguminosae) Medicago sativa Allium schoenoprasum Alliaceae (Liliaceae) Rosaceae Cratagus momogyna Rosaceae Malus domestica Rosaceae Rosa canina Rosaceae Rubus idaeus Salicaceae Salx caprea Apiaceae (Umbelliferae) Apium graveolens Apiaceae (Umbelliferae) Heracleum sphondylium

Fuente: Blaszkowski, J. (1990). Polish Endogonaceae (V). Glomus constrictum. Cryptogamic Botany, 1, 360-364.La organizacin de las familias botnicas se ha redefinido en base a la clasificacin de Takhtajan (1997).

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