ESTABILIDAD

Estudiante: Ivon Aristizbal Garca Documento: 1128432070 Educador: Oscar A. Flrez Acosta LABORATORIO DE CONTROL FISICOQUIMICO Y MICROBIOLGICO II Facultad de Qumica Farmacutica Universidad de Antioquia Junio 20 de 2013 Objetivo Comprender la importancia que tiene el desarrollo de estudios de estabilidad para poder garantizar que los productos que sean introducidos al mercado cumplan parmetros en cuanto a su eficacia, seguridad y calidad dentro del periodo de comercializacin y uso. Introduccin Se consideran en el presente documento algunos parmetros de estudios de estabilidad para el anlisis de amoxicilina, que es un antibitico semisinttico derivado de la penicilina. Se trata de una amino penicilina, su nombre sistemtico es cido (2S, 5R, 6R)-6-[(R)-2-amino-2-(4hidroxifenil)acetamido]-3,3-dimetil-7o (Ver Figura 1) que acta contra un amplio espectro de microorganismos, tanto Gram positivos como Gram-negativos, por esto se emplea a menudo como primer remedio en infecciones de diferente gravedad, tanto en medicina humana como tambin en veterinaria. Se destaca por ser muy refractaria, y tambin tiene una alta persistencia en el ambiente. La amoxicilina se descompone mediante un proceso de hidrlisis; en medio alcalino se descompone a cido peniciloico por apertura del anillo B-lactmico Posteriormente sufre descarboxilacin para formar cido penilico. En medio cido, se hidroliza a cido amoxicilinpenicilnico. Otros productos de la hidrlisis cida son el cido penlico, cido penldico, penicilamina y peniloaldehido (1).

Figura 1. Estructura molecular de la amoxicilina. Tomado de (1)

Marco terico Los estudios de estabilidad son aquellas actividades experimentales que conducen a la obtencin de la informacin necesaria y suficiente, para sustentar la vida til del producto, mediante la que se puede establecer la fecha de expiracin de cada uno de los lotes de producto fabricado. Adicionalmente, los estudios de estabilidad son tambin el soporte fundamental para el desarrollo de un producto, como para la vigilancia de su calidad en la etapa de post-mercadeo. Desde este punto de vista, los estudios de estabilidad se pueden clasificar as: a. Estudios de estabilidad de Pre-formulacin y Desarrollo de Producto los que conducen a la seleccin de: 1. La forma farmacutica ms adecuada. 2. Los excipientes de formulacin ms compatibles. 3. El mtodo de produccin y las condiciones bajo las que se mantiene la estabilidad de un(os) principio(s) activo(s). b. Estudios de estabilidad para Registro Sanitario y autorizacin de comercializacin: Comprenden los estudios de estabilidad acelerados (envejecimiento acelerado) y los de largo plazo (envejecimiento natural). Los primeros sirven para soportar la vida til ms probable (tentativa) del producto en el mercado y los segundos para establecer la vida til definitiva del producto, bajo unas condiciones de almacenamiento definidas. Por esta razn, los primeros se consideran provisionales y no son obligatorios, sino optativos y los segundos, se consideran definitivos y son de carcter obligatorio. c. Estudios de estabilidad en la etapa de Post-mercadeo: Se realizan inicialmente a condiciones aceleradas y posteriormente se ratifican con estudios de largo plazo. Su finalidad, es evaluar el efecto que diversas modificaciones efectuadas sobre el medicamento (composicin de la formulacin y/o proceso productivo) o su envase primario, puedan tener sobre la calidad del producto. Dentro de las Buenas Prcticas de Manufactura, se puede considerar que estos estudios forman parte de las actividades de validacin de los cambios efectuados. Se recomienda realizar este tipo de estudio bajo las siguientes circunstancias: 1. Modificacin cualitativa o cuantitativa de una formulacin. 2. Cambio de proveedores de materias primas, fundamentalmente el principio activo. 3. Modificaciones en el proceso de manufactura. 4. Cambios de equipos. 5. Cambio de escala de produccin. 2

6. Cambios o modificaciones en las instalaciones fsicas y en los sistemas de apoyo crtico del rea de fabricacin. 7. Cambios o modificaciones en los procedimientos de mantenimiento y limpieza de equipos y reas de manufactura comprometidas con el producto. 8. Modificacin del envase primario y cierre del producto, incluida la modificacin del material y su forma. 9. Cambio de envase. 10. Cambio de proveedor de los materiales de envase primario y cierre. 11. Reprocesamiento de productos. 12. De manera peridica programada, como una poltica de verificacin de que todas las etapas relacionadas con la manufactura de un producto, estn bajo control (on going stability o de verificacin de BPM o lo que se denomina Estudios de Aseguramiento de Estabilidad). En Colombia se aceptan dos tipos de estudios de estabilidad para presentar la solicitud de un registro sanitario de un medicamento, a saber segn la resolucin 2514 de julio del 95: a. Estudios de Estabilidad de largo plazo o de envejecimiento natural (obligatorios) (3) b. Estudios de Estabilidad acelerados o de envejecimiento acelerado (optativos). (3) Aunque tambin se considera estabilidad para: Productos cosmticos (2) Productos fitoteraputicos (4) Biotecnolgicos / biolgicos (5)

El propsito de un estudio de estabilidad es suministrar evidencia necesaria y suficiente, de cmo la seguridad, eficiencia y calidad de un producto, vara con el tiempo por la influencia de diferentes factores ambientales, tales como la temperatura, la humedad, la luz, entre otros (radiaciones electromagnticas, ataque microbiano etc.). Un programa de estudios de estabilidad incluye la evaluacin de los factores relacionados con el producto mismo que influyen en su calidad, como por ejemplo, la interaccin del principio activo con los excipientes, con el envase, sistema de cierre y los materiales de los mismos, as como la incompatibilidad entre principios activos dentro de una misma formulacin. Como resultado de estos estudios de estabilidad, se logra establecer el periodo de reanlisis de una materia prima, la vida til de un producto terminado y las condiciones de almacenamiento recomendadas segn la zona de comercializacin del medicamento, como se establece dentro de las Buenas Prcticas de Manufactura vigentes. (2)

Metodologa Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) Equipo: HPLC Agilent 1100 Condiciones cromatogrficas: - Columna RP-18 Licrospher 250*45 mm D.I., 5 m tamao de partcula. - Fase mvil: Buffer fosfato pH 5 0,1 ACN (93:7) - Flujo: 1 ml/min - Longitud de onda: 230 nm - Volumen de inyeccin: 20 l - Tiempo de retencin aprox. 2,9-3,3 min Se evalo la especificidad de la Cromatografa lquida de alta resolucin HPLC con vistas a su aplicacin en estudios de estabilidad de la suspensin oral de amoxicilina y se descart la posible interferencia de productos de degradacin con relacin a la respuesta cromatogrfica del ingrediente activo principal. Se valor el perfil cromatogrfico de cada condicin analizada (muestras sometidas a diferentes temperaturas que propiciaran la degradacin del ingrediente activo). Para ello se compararon las respuestas cromatogrficas de las muestras sometidas a estudios de estabilidad a largo plazo que se almacenaron en la nevera (temperatura 282,15 K), las muestras de estabilidad en uso (tiempo cero y temperatura 297,15 K), y las de estabilidad intermedia (temperatura 297,15 K tiempo 1 y 2) con la respuesta cromatogrfica del estndar de amoxicilina. La respuesta del estudio de estabilidad acelerada propuesto arbitrariamente a temperatura 303,15 K se halla por interpolacin de los datos luego de hacer la curva de la cintica de degradacin correspondiente (ver nota en la seccin de resultados). Yodometra

Reaccin de hidrolisis alcalina en la cual los hidroxilos del agua rompen el anillo -lactmico responsable de la actividad farmacolgica, el yodo se adiciona en el lugar de los grupos hidroxilo de la molcula y se retrovalora el exceso de yodo con tiosulfato de sodio. (6) Datos de la muestra Amoxicilina suspensin oral Polvo para suspensin de color amarillo Envase de vidrio mbar y tapa rosca metlica Concentracin de principio activo: 250 mg/5mL 4

Cantidad: suficiente para preparar 100 mL Lote: 1701210 Fecha de fabricacin: Diciembre de 2010 Fecha de vencimiento: Diciembre de 2014 Laboratorio Genfar Datos experimentales Cantidad pesada (g) 0,0322 0,0324 Potencia estndar [muestra] % t rea t0 (mg/ml) amoxicilina (das) 25302, 59,1880685 0,9262 7 3 115,2464 0 26881, 56,0582976 0,9262 3 4 25107, 9 57,6231830 8 28780, 8 26274 118,7122

HPLC Estndar t0 (1) Estndar t0 (2)

muestra t0 Promedio [muestra]

0,6365

Estndar t1 muestra t1 estndar t2

0,0351 0,6703 0,032

0,9262

7 59,3561

25161 14 23082, muestra t2 0,6027 9 54,3810 108,7620 Tabla 1. Datos recolectados de las muestras de amoxicilina suspensin oral (ambiente) analizadas por Cromatografa lquida de alta resolucin HPLC durante 0, 7 y 14 das. Ecuacin de Arrhenius

0,9262

Ln K=lnA -

Cinticas de reaccin Reaccin de orden 0: Reaccin de orden 1: 5

Reaccin de orden 2: Estndar usado: Estndar secundario de amoxicilina con potencia del 92,62%

Resultados Amoxicilina a temperatura ambiente:

% AMOXICILINA VS TIEMPO (DAS)

% AMOXICILINA 123.0000 118.0000 113.0000 108.0000 0 5 10 Y = -0.4632X + 117.48 TIEMPO (DAS) R = 0.4121 15

Grafica 1. Porcentaje de amoxicilina contra los tiempos de anlisis en das. Los datos fueron recolectados durante los anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin HPLC en los das 0, 7 y 14 a temperatura 297,16 K.

Modelo de clculo 1 50 mg/ml amoxicilina 100% 57,5758 mg/ml amoxicilina X X= 115,2464% amoxicilina. Tiempo al cual se alcanza el 90% de la concentracin del principio activo 1. El 90% de la concentracin inicial es equivalente a: 50 mg/ml amoxicilina.100% X................................90% X = 45 mg/ml amoxicilina es el 90 % de la concentracin inicial del mismo principio activo.

2. Para hallar el t90 requiero tener primero la ecuacin de la recta que me describa el comportamiento de la concentracin respecto al tiempo, es decir, grfica 2:

Concentracin de amoxicilina vs t
Concentracin (mg/ml) 60 58 56 54 0 5 10 y = -0.2316x + 58.741 tiempo (das) R = 0.4121 15

Grfica 2. Concentracin de amoxicilina (mg/ml) vs tiempo (das) de la muestra analizada a 297,16 K. Teniendo la ecuacin de la recta, se puede obtener el t90: Modelo de clculo 2 Y= -0, 2316X + 58,741 (ecuacin de la recta representada en la grfica 2) Y= 90% de la concentracin inicial (45 mg/ml) X= tiempo en das para alcanzar el 90% de la concentracin inicial X= 45 58,741 = 59.33 (das) - 0,2316 t90

El tiempo al cual se alcanza el 90% de la concentracin inicial es 59 das.

Cintica orden cero

57.7 57.6 57.5 57.4 57.3 57.2 57.1 57.0 0 5 t (das) Cf (mg/ml) y = -0,0363x + 57,576 R = 1

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Grafica 3. Concentracin de amoxicilina (mg/mL) vs tiempo (das) siguiendo una cintica de degradacin de orden cero. 7

Cintica orden uno

57.7 57.6 57.5 57.4 57.3 57.2 57.1 57.0 0 y = -0,0363x + 57,576 R = 99994 5 10 tiempo (das) 15 C f (mg/ml)

Grafico 4. Cintica de orden uno. Logaritmo natural de la concentracin (mg/mL) de amoxicilina en la muestra de ambiente vs tiempo en das.

Cintica de orden 2
1000.0 800.0 600.0 400.0 200.0 0.0 0 y = 57,575x R = 0,99999 5 tiempo (das) 10 15 1/ Cf (ml/mg)

Grafico 5. Inverso de la concentracin de amoxicilina en la muestra vs el tiempo en das.

Estimacin del porcentaje de degradacin Modelo de clculo 3

Tiempo (das) % degradacin 0 O 7 -3,45 14 6,49 Tabla 1.1. Estimacin del porcentaje de degradacin de la amoxicilina contra el tiempo de anlisis. Amoxicilina a temperatura 282,16 K Nota: esta prueba no fue desarrollada en su totalidad y slo se cuenta con el dato de la concentracin de la muestra al tiempo 14 (das). La concentracin inicial de la muestra de amoxicilina a temperatura 282,16 K es igual a la concentracin de la muestra del mismo principio activo analizado a temperatura ambiente. Esto se hace ya que ambas muestras son del mismo lote y durante el anlisis inicial se encontraban ambas a igual temperatura. Potenci Cantidad a t pesada estnda [muestra] % (das (g) r rea t0 (mg/ml) amoxicilina ) 0,0322 0,9262 25302,7 115,1517 0 0,0324 0,0323 0,6365 0,9262 26881,3 26092 25107,9 57,6231

HPLC Estndar t0 (1) Estndar t0 (2) promedio estndar muestra t0

Estndar t1 muestra t1

0,0351

0,9262

23148,4 ---------------

------ -------

estndar t2

0,032

0,9262

25161

0,6342 24702,6 60,3768 120,7537 14 muestra t2 Tabla 2. Datos recolectados de las muestras de amoxicilina suspensin oral (nevera) analizadas por Cromatografa lquida de alta resolucin HPLC durante 0, 7 y 14 das. 9

No es posible determinar cinticas de degradacin para la muestra a 282,16 K debido a la falta de datos mnimos para realizar las grficas y de igual manera, tampoco se pueden calcular las k de cada una de las grficas de cinticas de degradacin, necesarias para hallar la energa de activacin debido a que la concentracin inicial de ambos lotes es supuesta equivalente, entonces el ln1 es igual a cero lo que dara como resultado la inutilidad de energa para la degradacin (lo cual evidentemente es falso).

El modelo de clculo 2, y la ecuacin de la recta descrita en la grfica 2 son tiles para hallar el tiempo de vida media (0,5C) de la suspensin oral de amoxicilina as: Y= -0, 2316X + 58, 741 0,5* 50 = 0,2316X + 58,741 25-58,741 = 0,2316X X 145,7 das aproximadamente T50= 145,7 das Anlisis de resultados Para la determinacin de amoxicilina a travs del tiempo analizado, se emplea una longitud de onda igual a 230 nm, la cual corresponde a la forma no hidrolizada de la amoxicilina; de esta manera se garantiza la especificidad del mtodo para cuantificar el analito de inters sin interferencias. (7) Segn la USP 32, la cantidad de amoxicilina no debe ser menor al 90% ni superior al 120% en amoxicilina como suspensin oral (8), por lo tanto, se puede decir que el porcentaje de amoxicilina inicial correspondiente al 115,1517% sigue especificaciones puesto que se ajusta al rango propuesto en la farmacopea oficial para Colombia en cuanto la cantidad de principio activo en una suspensin oral de amoxicilina. El porcentaje de degradacin de amoxicilina se ve altamente influenciado por la concentracin inicial del frmaco, encontrando que a valores bajos de concentracin el proceso de degradacin se ve notablemente favorecido. Los iones hidrxido (OH-) entran a competir con la amoxicilina, lo que reducira la generacin de radicales hidroxilos (OH) que son los principales responsables de la degradacin. Una vez generados los radicales hidroxilos, stos atacan los anillos lactmicos, donde entran a competir las molculas de amoxicilina con los subproductos de la degradacin. (1) El incremento en la concentracin de analito entre los das 0 al 7 se explica gracias a que en este punto el frmaco ms otra molcula interactan en esta etapa (la molcula de amoxicilina y los iones hidroxilo generndose en concentracin necesaria para cuantificar una degradacin apreciable de principio activo).

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Las reacciones de hidrlisis deberan ser de orden 2, porque se tiene frmaco y agua, pero dado que lo ltimo se encuentra en gran cantidad, la variacin de su concentracin es imperceptible por lo tanto estas reacciones son de pseudo primer orden (9). La determinacin de la cintica de degradacin de la amoxicilina se realiza a partir de las representaciones grficas de concentracin-tiempo en escala normal y semilogartmica, que segn lo mencionado anteriormente, sigue un pseudo primer orden ya que la velocidad de degradacin se ve directamente afectada por la concentracin remanente de analito. Cuando se logra alcanzar una concentracin adecuada de radicales hidroxilo, encargados de atacar el anillo -lactmico para que este se rompa y genere productos diferentes a la amoxicilina, comienza el declive de la concentracin de la misma y el aumento del porcentaje de degradacin de la amoxicilina que es la tpica reaccin que sufren todas las penicilinas en medio alcalino: se descompone primeramente por apertura del anillo -lactmico, y se convierte en cido peniciloico. Este ltimo compuesto pierde CO2 y forma cido peniloico. Conclusin El desarrollo de estudios de estabilidad es necesario para determinar la eficacia, seguridad y calidad de los productos no solo medicamentosos sino tambin alimenticios y hasta cosmticos. Sus parmetros se miden a travs del tiempo de vida til y el tiempo de vida media. La amoxicilina se degrada cuando es atacada en su anillo -lactmico. En el presente estudio se provoc su degradacin por hidrlisis alcalina y variaciones en la temperatura. Tambin se puede efectuar usando luz, pero este no es el caso debido a que el envase de vidrio color mbar ofrece proteccin. La degradacin de amoxicilina como suspensin oral para reconstituir sigue una cintica de orden uno ya que la velocidad de degradacin es proporcional a la concentracin de analito en la muestra. Bibliografa y Cibergrafa (1) Degradacin de amoxicilina mediante fotocatlisis solar heterognea con Tio2 soportado, documento formato PDF pg. 23 24, 46 disponible en http://190.27.248.91:8082/jspui/bitstream/123456789/81/1/Degradaci%C3%B3n%20 de%20Amoxicilina%20mediante%20fotocat%C3%A1lisis%20solar%20heterog%C3%A9 nea%20con%20TiO2%20soportado.pdf visitado el 10/06/13 (2) Documento Tcnico Gua De Estabilidad De Medicamentos, Ministerio de la proteccin social, Repblica de Colombia, documento formato PDF pg. 9-11 Disponible en http://www.minsalud.gov.co/documentos%20y%20publicaciones/gu%c3%8da%20para %20el%20desarrollo%20y%20presentaci%c3%93n%20de%20los%20estudios%20de% 20estabilidad%20de%20medicamentos%20convencionales.pdf visitado el 06/06/2013 (3) Estudios de estabilidad en Colombia, Resolucin 002514 Del 11 De Julio De 1995, Ministerio De Salud, Republica De Colombia, documento formato PDF pg. 2-7 disponible enhttp://www.invima.gov.co/images/pdf/medicamentos/Resoluciones/resolucion_2514_ 1995.pdf visitado el 06/06/2013 11

(4) Estabilidad para productos fitoteraputicos, Res. 03131 del 6 de agosto de 1998 numeral 12.8 (5) Estabilidad de productos biotecnolgicos, USP 32, capitulo <1049> disponible en http://www.uspbpep.com/usp32/pub/data/v32270/usp32nf27s0_c1049.html visitado el 08/06/13 (6) Yodometra, USP 32 <425> disponible en http://www.uspbpep.com/usp32/pub/data/v32270/usp32nf27s0_c425.html visitado el 08/06/13 (7) Ensayo de identificacin de amoxicilina, mtodo cromatogrfico <621> USP32, disponible en http://www.uspbpep.com/usp32/pub/data/v32270/usp32nf27s0_m4100.html visitado el 19/06/13 (8) Amoxicillin Oral Suspension, USP 32, disponible en http://www.uspbpep.com/usp32/pub/data/v32270/usp32nf27s0_m4130.html (9) Evaluacin de la calidad de los productos farmacuticos, A. Bedoya, O. Flrez, G. Holgun, Primera edicin, Editorial Universidad de Antioqua, pg. 60.

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