ENFERMEDADES AUTOINMUNES Deteccin de Autoanticuerpos en el diagnstico de Enfermedades Autoinmunes

Introduccin
El sistema inmunitario protege al organismo, contra infecciones por microorganismo, al detectarlos y eliminarlos, limita el crecimiento de ciertas neoplasias, y elimina las clulas y macromolculas senescentes. Para realizar esta tarea, debe distinguir de forma fiable entre molculas propias y ajenas. Cualquier trastorno en este proceso puede llevar a la aparicin de autoinmunidad patolgica. Las enfermedades autoinmunes (EAI) son un grupo frecuente de entidades con un posible origen comn y cuya patologa vara en funcin del rgano o sistema afectado. Su etiologa es desconocida. Las enfermedades autoinmunes se caracterizan por la accin de los efectores inmunolgicos hacia componentes de la propia biologa corporal. En este caso, el sistema se conviertes en el agresor y ataca partes del cuerpo en vez de protegerlo. Existe una respuesta inmune exagerada contra sustancias y tejidos que normalmente estn presentes en el cuerpo. Si se toma el conjunto de las EAI, su prevalencia alcanza el 5%. Las EAI se clasifican de acuerdo a su extensin en: 1) Enfermedades rgano especfico con auto-anticuerpos rgano especficos, ejemplo: La enfermedad de Hashimoto; 2) Enfermedades rgano especfico con autoanticuerpos no rgano especficos, ejemplo: La cirrosis biliar primaria y 3) Enfermedades no-rgano especfico o enfermedades autoinmunes sistmicas donde el proceso puede afectar varios rganos, ejemplo: Lupus Eritematoso Sistmico. Las enfermedades autoinmunes en los seres humanos suelen instalarse en forma insidiosa, por lo que es muy difcil identificar e implicar un evento desencadenante. Es claro que factores genticos y hormonales son definitivos en la fisiopatologa. IMMUNOCONCEPTS cuenta con nuevas tcnicas conocidas como COLORZYME ANA HEp2000, FLUORESCENT ANA HEp2000, basadas en la utilizacin de una lnea celular transformada por ingeniera gentica mediante el proceso de transfeccin. En esta tcnica se introducen mltiples copias del gen bajo el control de un gen promotor- regulador especfico que permite la sobre-expresin del gen de inters en un 10-15%, en este caso, el gen que codifica el antgeno SS-A/Ro. La presencia de anticuerpos anti-Ro muestra un patrn bien definido en el ncleo y/o citoplasma.

Figura 2. Patrones observados en ANA Hep2000 (ANA-Ro) positivos empleando FLUORESCENT y COLORZYME.

Deteccin de Autoanticuerpos
Existen anlisis muy especficos y sensibles para detectar muchos tipos de autoanticuerpos. Las tcnicas de uso universal son la inmunofluorescencia, los anlisis inmunoadsorbentes ligados a enzima (ELISA), la inmunodifusin doble, los anlisis de aglutinacin, la inmunotransferencia y la inmunoprecipitacin.

IMMUNOCONCEPTS cuenta con un grupo de pruebas de alta sensibilidad y especificidad para la determinacin de Anticuerpos antinucleares en tu laboratorio.

Figura 3. Patrones observados en ANA Hep2 positivo empleando FLUORESCENT y COLORZYME.

Deteccin de autoanticuerpos por Inmunofluorescencia (Fluorescent) y por Inmunoperoxidasa (Colorzyme)

Immunoconcepts, cuenta con un grupo de pruebas de alta sensibilidad y especificidad en la deteccin de ANA, nDNA (FLUORESCENT Y COLORZYME) y ANCA (FLUORESCENT). Ambos sistemas de se fundamenta en la reaccin de los Anticuerpos Antinucleares presentes en suero con un sustrato constituido por secciones de rganos criopreservados o por lneas celulares cultivadas, fijadas en una lamina portaobjeto. El complejo antgeno-anticuerpo que se forma se visualiza por la adicin de una inmunoglobulina polivalente marcada con fluorescena (FLUORESCENT) con peroxidasa de rbano (COLORZYME). Esta ltima posee gran ventaja ya que los resultados se pueden leer empleando un microscopio convencional. A diferencia de la tcnica por Fluorescencia las cuales han presentado inconvenientes en los laboratorios de rutinas, por el costo que representa el microscopio de luz ultravioleta. El sistema de anlisis de Immunoconcepts con clulas epiteliales humanas mitticas representa un avanzado sistema de inmunofluorescencia para la deteccin de Anticuerpos Antinucleares. Se ha demostrado que las clulas con figuras mitticas son ms sensibles y proporcionan un modelo de reconocimiento ms preciso que el clsico sustrato de rin de ratn. Las figuras mitticas mejoran el reconocimiento diferencial del modelo y ayudan a detectar antgenos nucleares no notificadas anteriormente que alcanzan concentraciones superiores en las clulas que se encuentran en mitosis.

Patrn Moteado

Patrn Nucleolar

Tabla 1. Porcentajes de Sensibilidad y Especificidad para las pruebas de Immunoconcepts SENSIBILIDAD ANA Colorzyme ANA Fluorescent ANA-Ro Colorzyme ANA-Ro Fluorescent nDNA Colorzyme nDNA Fluorescent ANCA con Ethanol Fluorescent 97.6% 95.2% 99.6% 99.6% 100% 100% 98.4% ESPECIFICIDAD 100% 100% 99.6% 99.6% 100% 100% 95.5%

Figura 1. Clula en Mitosis por Inmunofluorescencia.

Clula en Mitosis

Deteccin de autoanticuerpos por ELISA

AESKULISA cuenta con una amplia gama de productos por el mtodo de ELISA, para el diagnstico de enfermedades autoinmunes. En el cual las muestras de suero diluidas 1:101, se incuban en la microplaca revestida con el antgeno especfico. Si los anticuerpos estn presentes en las muestras de los pacientes, estos se unirn al antgeno. La fraccin no unida

es retirada en el paso siguiente a travs del lavado. Despus, las inmunoglobulinas anti-humanas conjugadas con peroxidasa (conjugado) se incuban y reaccionan con el complejo antgeno-anticuerpo de las muestras dentro de la microplaca. El conjugado no unido es retirado en el siguiente paso a travs del lavado. La adicin del sustrato-TMB genera una reaccin colorimtrica (azul) enzimtica que se detiene a travs de cido diluido (el color cambia a amarillo). La tasa de formacin de color por parte del cromgeno va en funcin de la cantidad de conjugado unido al complejo antgeno-anticuerpo y esto es proporcional a la concentracin inicial de los respectivos anticuerpos en la muestra del paciente.

Las ventajas de las pruebas de AESKULISA pueden resumirse en los siguientes puntos: Los antgenos humanos recombinantes sintetizados en los laboratorios de investigacin, proporcionan pruebas de alta sensibilidad y especificidad de gran ayuda para todos los usuarios; los reactivos estn listos para su uso; placas de microtitulacin en formato conveniente con pozos individuales separables; tiempos de incubacin estandarizados para resultados en menor tiempo y esfuerzo; todos los reactivos, buffers, contenedores e incluso los calibradores de diferentes niveles de concentracin estn codificados por color para proporcionar ms seguridad al momento de su uso.

Tabla 2. Grupo de productos que ofrece AESKULISA por el mtodo de ELISA. REUMATOLOGIA
AESKULISA ANA Hep-2 AESKULISA dsDNA-G AESKULISA ENA 6 PRO AESKULISA ENA -6S AESKULISA Jo-1 AESKULISA RA/CP CHECK AESKULISA Scl-70 AESKULISA Sm AESKULISA SS-A AESKULISA SS-B AESKULISA U1-70 AESKULISA Histona C AESKULISA Rf-Check AESKULISA Sclero-Pro

Tabla 3. Pruebas de AESKULISA para la deteccin de Autoanticuerpos en el diagnstico de Enfermedades Autoinmunes.

Enfermedades Autoinmunes
LES

HEPATOLOGIA
AESKULISA AMA-M2-G AESKULISA LKM1

Autoanticuerpos
ANA, U1-70, Sn-RNP-C, Sm, SS-A, SS-B, dsDNA ANA,U1-70,Sn-RNP-C

Enfermedades Autoinmunes
Anemia perniciosa Hepatitis Autoinmune Cirrosis Biliar Primaria Sndrome antifosfolipdico Trombosis

Autoanticuerpos
Factor Intrnseco, Parietal cell LKM-1

DIABETES
AESKULISA Insulina

VASCULITIS
AESKULISA ANCA-Pro AESKULISA MPO AESKULISA PR3 Sensitive AESKULISA Elastase AESKULISA Lactoferrin

Enfermedad Mixta del Conjuntivo Esclerodermia Sndrome de Sjngren

ANA, Sn-RNP-C ANA, SS-A

AMA-M2-G - Glicoproteina

Polimiositis Esclerosis Sistmica Miositis

ANA, U1-70, Sn-RNP-C, Jo-1 SCl-70

Cardiolipina, serina, inositol, protombina, trombina ANCA-Pro, PR3 Sensitive, MPO Glia-A, Glia-G, CeliCheck ASCA, Crohns Check

TIROIDEAS
AESKULISA a-TG AESKULISA a-TPO AESKULISA Tg

Vasculitis Sistmica autoinmune Enfermedad Celiaca Enfermedad de Cronh

Jo-1 Rf-Check, RA-CP, CCP

Artritis Reumatoidea

GASTROENTEROLOGIA
AESKULISA tTG-G AESKULISA tTG-A AESKULISA Glia-A AESKULISA Glia-G AESKULISA CELICHECK AESKULISA Crohns Check AESKULISA ASCA -A AESKULISA ASCA -G AESKULISA Intrinsic Factor

TROMBOSIS Referencias
AESKULISA Cardiolipina G-M AESKULISA Phospholipid-8ProGM AESKULISA PhospholipidScreen-GM AESKULISA 2-Glyco-GM AESKULISA Protein C AESKULISA Protein S AESKULISA Antitrombina III 1. Robert, Lahita G., Nicholas C. y Westley, Reeves H. 2000. Tratados de Enfermedades Autoinmunes. Madrid: Mc. Graw Hill Interamerica, 781-796. 2. Peter, Delves J., Seamus, Martin J., Dennis, Burton R., and Ivan, Roit M. 2006. Esential Immunology Roitts. 11 ed. U.S.A: Blackwel Publishing, 410412. 3. Robert, Rich R., Thomas, Fleisher A., William, Sheares T., Harry, Schroeder Jr W., Anthony, Frew J. and Cornelia, Weyand M. 2008. Clinical Immunology Principles and Practice. 3 ed. U.S.A: Mosby elservier, 739746. 4. Productos de Immunoconcepts para el diagnostico de Enfermedades Autoinmunes: (Resumen en lnea) Disponible: http://www.orgal.net/files/Tcnica- Immunoconcepts). 4. Productos de AESKU para el diagnostico de Enfermedades Autoinmunes: (Resumen en lnea) Disponible: http://www.orgal.net/files/Tcnica-AESKU). Cortesa de: Representaciones Orgal, C.A Lcda. Grecia J. Mijares. P., asesoriaorgal.net

AESKUSLIDES
ANA/AMA/ASMA/APCA

L o m ejor y m s eficaz al alcan ce d e su labor ator io

T O D O S N U E S T R O S P R O DU C T O S E S T AN R E G IS T RA D O S E N E L M .P .P .S .

R IF J -3 0 0 6 7 3 0 8 -1 N U E VO A F T 2 0 0 0 S is te m a A u to m a tiza d o p a ra : E L IS A e IFA

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C a lle 3 -A , C e n tro P ro fe s io n a l L a U rb in a , p is o 9 OO fic . .99 -A -A fic L a U rb in a , C a ra c a s ; Ve n e zu e la . TT ee lfs : .: (0(0 21 14 .4 21 62 14 .7 90 59 14 .5 05 60 6 lfs 22 1)2 2 )42 11 .4 62 42 42 10 .7 52 15 .5 9 3 5 .4 1 4 1 C e l: 0 4 1 2 -3 22 44 .6 00 33 44 FF aa xx :: (0 22 11 22 )2 49 -3 .6 (0 )4 22 4.6 2 .6 43 93

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