UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE CURSO DE FARMCIA INSTITUTO DE BIOLOGIA DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR GCM RELATRIO

NOME: Letcia Castro e vellin Barbosa Bonifcio. TTULO DA PRTICA: Cintica Enzimtica

CDIGO: GCM00025

TURMA: B DATA: 26/06/13

1. INTRODUO As enzimas so protenas especializadas na catlise de reaes biolgicas, aceleram a velocidade das reaes qumicas, diminuindo a energia de ativao, no alterando a constante de equilbrio nem a variando a energia livre das reaes, sendo regeneradas, sob a forma original, ao final da catlise. As enzimas so especificas com relao ao substrato, formando complexos com estes durante a catlise E + S ES E + P Algumas teorias procuram explicar esta especificidade. Em 1894, Emil Fisher descobriu que as enzimas da via glicoltica podem distinguir enantimeros (formas D de L) e esse facto levou-o a propor uma analogia com a chave e a fechadura como modelo de interao entre as enzimas e os seus substratos. Este modelo admite a existncia de locais preformados na enzima onde os substratos se podem ligar e reagir. Koshland, em 1959, props um modelo diferente a que podemos chamar de encaixe induzido; quando os substratos interagem com a enzima provocam nestas modificaes conformacionais que ocorrem no s no stio cataltico mas tambm se podem repercutir em toda a estrutura da protena. Outra teoria prope o perfeito encaixe no estado de transio, estado onde a barreira energtica (energia de ativao) foi vencida. O estudo cintico de uma enzima visa primariamente descrever sua atividade. In vitro estuda-se a atividade da enzima procurando saber que tipo de reaes pode catalisar, com que substratos pode interatuar e como se modifica essa atividade (qualitativa e/ou quantitativamente) quando se fazem variar as condies em que ensaiada. O valor de pH, a temperatura, o tempo de incubao, as concentraes dos substratos, de cofactores ou de outras substncias (inibidores ou ativadores) so exemplos de condies de ensaio que podem ser modificadas com o objetivo de observar como varia a atividade da enzima, ou seja, como varia a velocidade da converso ou converses que esta catalisa. Nesse relatrio analizaremos a influncia do tempo na reao, da concentrao da enzima e a concentrao do substrato.

A velocidade de uma reao catalisada pode ser determinada, em instantes iniciais, atravs da determinao do produto formado por unidade de tempo (caso mais comum) ou atravs da mensurao do substrato consumido por unidade de tempo. O produto formado pode ser medido diretamente atravs de alguma propriedade fsico-qumica caracterstica, ou ento fazer uma reao qumica com este produto produzindo um outro que possua propriedades apropriadas para medida. Os ensaios de atividade enzimtica desenvolvidos na aula prtica sero realizados com a enzima fosfatase, presente no extrato aquoso da batata inglesa. A enzima catalisar a reao de desfosforilao do para-nitrofenil fosfato resultando na formao de o para-nitrofenol. Em meio alcalino, esta reao resulta em um composto de colorao amarela. Reao:

2. OBJETIVOS Avaliar o efeito de alguns fatores que interferem na atividade enzimtica, tais como, o tempo de reao, a concentrao de substrato e a concentrao de enzima. 3. REAGENTES Uma batata inglesa mdia (cerca de 110g). Substrato: para-nitrofenilfosfato de sdio 1mM (soluo fresca). NaOH 0,02N. Liquidificador.

4. PROCEDIMENTOS Preparo de frao com atividade de fosfatase alcalina A frao enzimtica foi previamente preparada pelos monitores.

Procedimentos Enumerou-se 6 tubos de ensaio Colocou-se os reagentes na mesma ordem em todos os tubos O homogeinizado foi sempre adicionado por ltimo Agitou--se a mistura suavemente; A incubao foi realizada temperatura ambiente.

4.1 INFLUNCIA DO TEMPO DE REAO

OBSERVAR E ESCREVER SOBRE A COR

4.2 INFLUNCIA DA CONCENTRAO DA ENZIMA

OBSERVAR E ESCREVER SOBRE A COR

4.3 INFLUNCIA DA CONCENTRAO DO SUBSTRATO.

OBSERVAR E ESCREVER SOBRE A COR