Enterococos Dentro de los microorganismos del tipo bacilar existen del tipo Gram negativos, dentro de los cuales

se encuentran los fermentadores (BGNF) y los no fermentadores (BGNNF). Tenemos los bacilos patognicos (escherichia, shigella, salmonella y yersinia) y los oportunistas. Tenemos la clasificacin por morfologa (bacilos), por pared (gram negativos) y por caractersticas bioqumicas, entre las que se encuentra la fermentacin. Las azcares comnmente fermentadas son lactosa y glucosa, pero puede haber otros como la galactosa. Para el aislamiento e identificacin de MOs, se utilizan diferentes medios (selectivos, diferenciales, etc.) en el caso de los BGNF, se encuentran las enterobacteriaceas, para las que se utiliza el medio Agar McConkey para separar Gram positivas de negativas (medio selectivo que inhibe crecimiento de Gram positivas como cocceas excepto Neisseria catarralis o gonorreae y Moraxella). Existen otros medios, como el que contiene Citrato de sodio (citrato power), donde las bacterias que crecen all forman productos derivados del citrato, lo que permite un cambio de la coloracin gracias al indicador presente. Si son fermentadoras, adems se pueden clasificar por la formacin de gas. En caso de coliformes se puede usar un medio Caldo Verde Brillante (contiene sales biliares) o Luria Agar (tambin con bilis). Por ejemplo se tiene un tubo de ensayo con una campana de Durham adentro (que es como un tubo invertido), luego se llena el tubo con caldo hasta la mitad, la campana debe quedar con lquido en su interior, se autoclava y luego se inocula con la muestra y se hace que crezcan a 45C (no como la mayora de los patgenos que crecen entre 35-37C) ya que a esta temperatura se seleccionan los Coliformes Fecales (de la caca!!! XD), una vez crecidos, dentro de la campana va a haber formacin de gas (en forma de burbujas), esto es positivo para la formacin de gas en la fermentacin. Entonces: si se realiza un cultivo en caldo verde a 45C con una campana de Durham y hay formacin de gas, entonces indica la presencia de Coliformes Fecales. Pero, cundo se necesita saber de la presencia de estos coliformes fecales? En muestras de alimentos principalmente y tambin en los manipuladores de alimentos para verificar contaminacin. En caso de ser positivo el resultado, indica la presencia de fecas en la muestra. El muestreo de alimentos depende del tipo de alimentos. En caso de los alimentos procesados, son licuados para tomar una muestra y mezclarla con un caldo peptonado y luego inocularla en un medio de cultivo. En caso de las verduras, stas se pican muy pequeito hasta hacer una pasta que se mezcla con un caldo peptonado y se inocula tambin. No se pueden tomar muestras de superficie, porque las bacterias son

adherentes, entonces no se podran detectar solamente de esta forma, ni tampoco tomar una hora para cultivar, porque se necesita una muestra representativa de los alimentos. En el caso de los manipuladores de alimentos, las muestras se toman con una trula estril y con caldo peptonado, sta se pasa por toda la superficie de la mano, por la palma, entremedio de los dedos y por las uas. Se hace un cultivo en caldo verde brillante a 35C para que crezcan coliformes y luego a 45C para verificar si son fecales. Las caractersticas enterobactericeas dijimos que eran bacilos Gram negativos, la mayora fermentadores de glucosa, tienen flagelos que generalmente los rodean, la mayora son mviles excepto Shigella y Klebsiella (la movilidad se ve por presencia de flagelos o cilios al microscopio, o en un medio semislido, en el cual se inocula la bacteria en un punto, pero ella crece en otro punto diferente del medio, dejando una estela de crecimiento debido a su capacidad de desplazamiento). Otro de los azcares que fermentan estas bacterias es la lactosa, pero no todas las bacterias la fermentan, por lo tanto se pueden diferenciar las BGNF en aquellas que pueden fermentar lactosa y aquellas que no pueden fermentar lactosa. Agar McConkey es rosado, y sobre l se pueden diferenciar Shigella de Salmonella, Escherichia coli de Shigella. Entre los medios para diferenciar enterobactericeas estn el McConkey, el Agar SS (especfico para diferenciar Shigella de Salmonella) y el medio TSI. Entonces se va a poder cultivar las bacterias y dependiendo de su forma y coloracin se podrn diferenciar. Si se fijan, el Agar McConkey es rosado con un indicador de pH rojo neutro, el cual al virar su coloracin lo que permite visualizar la fermentacin, como este medio tiene dentro de su preparacin, Lactosa, entonces si cambia el color determinamos que las bacterias son: Gram Negativas, Enterobacteriaceas y verificar si son Lactosa positiva o lactosa negativa. Si por ejemplo tengo una muestra para determinar que gnero o especie de bacteria es, lo que se hace es tomar una muestra y hacerla crecer para ver si es o no fermentadora de glucosa. Si es BGN Glucosa positivo, inmediatamente se determina que es una BGNF. Luego se determina si fermenta lactosa, se puede utilizar el Agar McConkey (o lo puedo utilizar para mirar si son BGNF de glucosa). Para determinar si fermenta glucosa, se puede usar el Agar TSI (porque ste posee glucosa). Si la bacteria es fermentadora de glucosa y de lactosa, se puede pensar que la bacteria pertenece a las enterobacterias. Si se le hacen pruebas bioqumicas y se determina que son oxidasa negativa, entonces s pertenece a las enterobactericeas.

Resumiendo, tenemos la posibilidad de que sea una BGNNF o BGNF. - Si la BGN es fermentadora de glucosa, puede ser una bacteria Vibrionacea o Pasteurella, pero si adems fermenta lactosa, puede ser enterobacteria - Si hay probabilidad de que sea enterobacteria, si es citrato positiva, ya no es enterobacteria. - Si hay probabilidad de que sea enterobacteria, citrato negativa, y es oxidasa positiva, puede ser Vibrionaceas y Eromonas - Si hay probabilidad de que sea enterobacteria, citrato negativa y oxidasa negativa, es enterobacteria (adems que son mviles y sin requerimientos complejos del medio) Medio TSI: La prueba se hace en tubo inclinado, es un medio que tiene glucosa, lactosa, sacarosa y sulfato (que luego puede formar cido sulfhdrico) y un indicador de pH rojo fenol. Para determinar las bacterias que pueden crecer en este medio, teniendo en cuenta que hay enterobacterias fermentadoras de lactosa, si la bacteria que crece es fermentadora, generar cido, por lo cual el medio se tornar amarillo. Fjese que el cambio no es siempre general, en el primer tubo la parte de abajo es amarilla y la de arriba es roja, pero en el segundo, ambas partes son amarillas, eso significa que cuando se siembran las bacterias hay algunas que crecen hacia el fondo y otras a la superficie del tubo (que depende de la preferencia por el oxgeno de las bacterias). Resulta que las bacterias que crecen al fondo del tubo liberan protones que cambian la coloracin a amarillo, lo que significa que fermenta glucosa, por tanto si fermentan glucosa son BGNF. Si el tubo se mantiene rojo en superficie, significa que no fermentan lactosa. En el caso que el tubo est completamente amarillo, significa que las bacterias son fermentadoras de glucosa y de lactosa, entonces pueden ser Enterobacteriaceas, Vibrioneaceas o Pasteurellas. Pero adems, el segundo tubo se ve como flotando, lo que indica una presencia de aire en el fondo del tubo, por ende la bacteria es fermentadora y productora de gas. El tercer tubo est de color negro, no fermenta ni glucosa ni lactosa, sin embargo generan gas y producen cido sulfhdrico (que da la coloracin). El cuarto tubo se ve algo ms rojo (es ms bsico), no fermentan lactosa ni glucosa, no produce cido sulfhdrico ni genera gas. Por tanto si es bacilo, es un BGNNF.

Algunas aproximaciones que se pueden obtener por este medio para acercarse a otros tipos bacterianos. La nomenclatura ATCC (visto en libros y paper) se utiliza para bacterias obtenidas de colecciones de empresas que las cultivan para venderlas, pero el envo requiere que se firme una carta de que no corre riesgos para la salud, por lo que se les quitan los genes de virulencia. En Chile igual existe una coleccin ms pequea, la tiene el ISP. Utilizando el Agar TSI y viendo los cambios de colores en el tubo (VER CUADRO) se pueden tipificar las bacterias. A = cido, B = bsico Bacteria Superficie/Fon do A/A B/A B/A B/B Produce Gas Produce SH2 Si Si

E. coli S. enteritidis Si S. typhimurium No Pseudomona Aureginosa A/A: Fermenta glucosa y lactosa B/A: Fermenta glucosa, pero no lactosa B/B: No fermenta

Dentro de las E. coli existen muchas subespecies, como las diarricas, las no diarricas, las hemorrgicas, etc. En la Salmonella tambin existen especies: S. Enteritidis, S. typhimurium y (la profe no se acuerda xD) que por ejemplo se encuentra en la cscara de los huevos de gallina, pero igual ingresan al interior. Pseudomonas: odiosas, estn en todas partes y son complicadas de tratar. Son fluorescentes, fciles de ver. No es fermentadora, en TSI es Bsico en superficie y en el fondo. El medio ayuda a diferenciar algunas especies bacterianas, como se puede ver en el cuadro, ambas Salmonellas, typhimurium y enteriditis son B/A, ambas producen SH2, pero la S. enteritidis si produce gas, en cambio la S. typhimurium no lo produce. Prueba de oxidasa: Termina de diferenciar las enterobacterias. Consiste en la aplicacin del reactivo de Kovacs, la cual se torna violeta (cuando se oxida, cambia el estado de oxidacin de los compuestos y cambia su color) indicando que las bacterias son oxidasa positiva. Si esto no ocurre, es oxidasa negativa, comprobando seguramente que es una enterobacteriacea. Por qu hay que estar tan seguro de que es una enterobactericea?: No basta saber que es bacteria, ya que las bacterias pueden volverse resistentes y por disponibilidad. El antibitico debe hacer efecto en el intestino, no en los otros rganos ni tejidos. Por tanto, no es trivial diagnosticar una enteritis, es ms fcil diagnosticarla con fiebre y dolor de guata (a los nios se les toca la guata y les duele, se retuercen en agona). Diarrea en caso de salmonella, vmitos, dolor en la zona intestinal, etc. Pero hay

que saber si es Salmonella o Escherichia, porque no responden igual a los diagnsticos, esta prueba se hace con fecas, pero en caso de tener diarrea el paciente, la muestra se toma mediante una sonda anal para tomar una muestra por aspirado. En el caso de la Salmonella, sta produce como enfermedad la fiebre tifoidea, ms conocida como tifus. Adems de las caractersticas de dolor de estomago, fiebre, vmitos, etc. Para diagnosticar esta fiebre se debe tomar muestra de sangre, con esta muestra se termina de diagnosticar, porque cambian los parmetros de los leucocitos. Entonces, dijimos que los BGNF, todos fermentan glucosa, algunos fermentan lactosa, en algunos casos tienen mayores requerimientos nutritivos (como las Pasteurellas), pero las que no tienen requerimientos nutritivos son las enterobactericeas. Dentro de stas, si las bacterias no fermentan Lactosa, estamos hablando de las familias de la Salmonella o de la Shigella, pero si fermentan Lactosa, estamos hablando de las familias de la Escherichia. Dentro de las bacterias no fermentadoras de lactosa, estas bacterias utilizan cido ctrico como fuente de carbono y no lactosa, se puede separar a Salmonella de Shigella slo por la formacin de H2S. Fjense que las Salmonellas no fermentan lactosa y forman H 2S (mirando cuadro de hace rato). En el caso de Shigella, stas producen Lisina descarboxilasa, no H2S. Dentro de las que fermentan lactosa, y que utilizan cido ctrico como fuente de carbono, estn las E. coli, las Citrobacter y Enterobacter. Para diferenciarlas, se hace una prueba con un reactivo llamado acetona, aquella bacteria que produce acetona es Enterobacter, la que no, es Citrobacter. El 50% de las E. coli son hemolticas, beta hemolticas, esto quiere decir que tienen la enzima hemolisina, y por lo tanto utilizan los glbulos rojos en su metabolismo, por lo tanto pueden destruir tejidos, invadirlos. Hay varios tipos de bacterias que como la E. coli son Enterohemorrgicas, igual hay Enterodiarricas. Pruebas bioqumicas utilizadas para la determinacin e identificacin de enterobacterias: Citrato Lactosa Oxidasa Rojo de metilo con medio Veges Proskauer (similar al citrato) Para las especies dentro de las entrobactericeas Fermentadora de manitol Fenilalanina como fuente de carbono Etc (salan en la diapositiva, pero no las nombr)

Dentro de la familia enterobactericea, GN fermentadores de glucosa y no de lactosa estn las salmonellas y shigellas (La profe busca un archivo en el compu y no lo encuentra dice que la va a tratar de subir a la plataforma donde sale la diferencia de colonias de salmonella y shigella en medio SS)

Dentro de los GNNF existen bacterias que son patognicas y bacterias que son oportunistas, la mayora de las bacterias que se buscan generalmente, se relaciona con las bacterias patgenas, en algunos casos aparecen oportunistas en la muestra. Las ms comunes de las oportunistas son las Enterobacter, la Klebsiella, etc. Existen diversos medios de cultivo para diferenciar estas bacterias. En cultivo, la E. coli al ser beta hemoltica, crece en Agar sangre (no es medio selectivo), entonces las E. coli crecern gracias a su capacidad de descomponer sangre, as se identifica la E. coli patgena enterohemorrgica, se ven halos de hemlisis como en los estrepto. Igual puede crecer en Agar Luria y luego en Agar sangre para determinar su capacidad hemoltica. Otra bacteria que puede crecer en agar sangre es la Serratia marcescens a diferencia de las coliformes, Serratia es rosada de bordes definidos, difuso (no se ven colonias aisladas, se ve como una sola masa de colonias), pero las coliformes se ven blancas, con bordes definidos, colonias aisladas. Los estfilo y estrepto son blancas, as que se diferencian fcilmente de las serratias, pero para diferenciarlas de las coliformes se pueden observar en microscopio identificando su forma. Resumen: Se tiene un bacilo, gram negativo, qu se hace: 1. Ver si es fermentadora de glucosa, lactosa, produce gas o H 2S (Medio TSI) 2. Realizar prueba bioqumica y ver si es oxidasa negativa (la de catalasa, lindol o Citrato Voges-Proskauer igual se pueden hacer, pero pueden dar ms resultados, no definen bien el perfil de la enterobacteria) Agar Luria Escherichia coli Shigella flexneri

Cncavas, brillantes, blanquecinas. Klebsiella pneumoniae en Agar Luria

Formas variadas, parece viscosa, como con secrecin, aspecto dado por la cpsula de carbohidratos.