ESTERILIZACION Y DESINFECCION El manipuleo efectivo de microorganismos en el laboratorio, en el hospital y en la industria depende del conocimiento de cmo controlar (matar, inhibir

o remover) a los microorganismos en un ambiente. Existen varios agentes fsicos y qumicos que pueden ser utilizados para mantener a los microorganismos en niveles aceptables. La seleccin del mejor agente depende en parte de si se desea eliminar completamente todos lor microbios presentes, matar slo ciertos tipos, o simplemente prevenir la multiplicacin de los microorganismos presentes. En el hospital, prcticamente todos los dispositivos utilizados para el cuidado, atencin o diagnstico de pacientes, pueden convertirse en vehculos de transmisin de agentes infecciosos. A este respecto, debe considerarse la clasificacin de los materiales y equipos de asistencia al paciente:

Esterilizacin: es el proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida incluyendo las esporas bacterianas. Se realiza por mtodos fsicos o qumicos. Desinfeccin: es el proceso por el cual los organismos patgenos, pero no necesariamente las esporas, son destruidos. Como la esterilizacin, debe realizarse por mtodos fsicos o qumicos. Antisepsia: procedimiento mediante el cual se emplea un agente qumico sobre superficies animadas (piel o tejidos vivos) a fin de inhibir o destruir a los microorganismos.

Mtodos de esterilizacin. Los mtodos fsicos de esterilizacin incluyen (Tabla 1): Incineracin, calor hmedo, calor seco, filtracin, radiacin ionizante (radiacin gamma) y (bajo ciertas condiciones) la radiacin no ionizante (UV). Incineracin: la destruccin de microorganismos por incineracin es una prctica de rutina en el laboratorio. Un ejemplo de este mtodo es el flameo de la parte inferior del ansa colocndola en la llama de un mechero de Bunsen. Este procedimiento se realiza como parte integral del aislamiento de colonias bacterianas en medio slido, previo a la inoculacin de tubos con medio de cultivo, para evitar la contaminacin de los cultivos subsecuentes. La incineracin es tambin utilizada para el descarte de materiales contaminados. La forma de eliminar todo material tipo gasas, bendas u otro elemento contaminado con sangre o secreciones de los pacientes en el hospital, es la incineracin. Tabla 1. Mtodo fsico de esterilizacin Incineracin Calor hmedo

Crticos: instrumentos y accesorios que se introducen directamente en el torrente sanguneo o reas estriles del organismo (catteres, agujas, instrumental quirrgico, etc.) y, por consiguiente, deben estar estriles para ser utilizados. Semicrticos: objetos que se ponen en contacto con mucosas intactas (laringoscopios, espculos vaginales, etc.). Deben estar libres de microorganismos pero no necesariamente de bacterias esporuladas. Requieren esterilidad o desinfeccin de alto nivel. No crticos: objetos que se ponen en contacto con piel intacta (recipientes para recoleccin de orina, ropa de cama, etc.). Deben estar limpios o desinfectados con agentes de bajo nivel. De esta manera, antes de utilizar cualquier dispositivo para pacientes se debe eliminar completamente o reducir (segn el caso) la concentracin de microorganismos que ste pudiera tener. Con este fin se utilizan diferentes tcnicas de esterilizacin y desinfeccin. Para el correcto control microbiolgico, deben tenerse en cuenta las diferencias existentes entre los siguientes procesos:

Principio El material se quema. Mtodo mas comn de tratamiento de deshechos infecciosos. Calor (121oC) hmedo a 1 atmsfera 30-60 minutos. Se usa autoclave (calor a alta presin). Para desechos de peligro biolgico y objetos resistentes al calor. 160-180oC durante 1-3 horas. Se usa estufa. Para material de vidrio, aceites, etc. Pasaje de soluciones a travs de membranas con vaco. Para soluciones de antibiticos, qumicos txicos, radioistopos, vacunas, carbohidratos, etc., sensibles al calor. Radiacin ionizante de corta longitud de onda y alta energa. Para material descartable como jeringas de plstico, catteres, guantes, etc., antes de su uso. Radiacin no ionizante de bajo poder de penetracin. Slo

Calor seco Limpieza: remocin de toda materia ajena al objeto. Se lleva a cabo con agua, detergentes y accin mecnica. Precede a todo proceso de esterilizacin y desinfeccin. Decontaminacin: procedimiento que hace segura la manipulacin y el uso de un dispositivo, aparato o instrumento, como as tambin superficies ambientales. Se puede realizar por esterilizacin, desinfeccin o limpieza.
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Filtracin

Radiacin gamma Radiacin UV

esteriliza las superficies sobre las que incide directamente o volmenes pequeos de lquidos.

Calor hmedo. La esterilizacin con calor hmedo es mucho ms efectiva que el calor seco para matar microorganismos ya que el calor hmedo ocasiona la desnaturalizacin y coagulacin de protenas vitales, mientras que el calor seco causa oxidacin de constituyentes orgnicos de la clula. La desnaturalizacin de protenas celulares ocurre a temperaturas ms bajas y con exposicin ms reducida que las requeridas para la oxidacin. La Tabla 2 muestra ejemplos Tabla 2.

comparativos de esterilizacin por calor hmedo y seco. La esterilizacin por calor hmedo se realiza a sobrepresin en un sistema cerrado de volumen constante denominado autoclave. El incremento de presin permite el aumento de temperatura. Usualmente se utiliza 121oC que corresponde a una atmsfera de sobrepresin (por encima de la atmosfrica), durante aproximadamente 20 minutos, dependiendo del material a esterilizar. Se utiliza para esterilizar medios de cultivo, soluciones, material contaminado, etc. El agua hirviente a presin atmosfrica no esteriliza porque durante el cambio de estado lquido-gas la temperatura permanece a 100oC, lo cual permite la supervivencia de esporas bacterianas.

Especies bacterianas Bacillus anthracis

Calor hmedo Temperatura (oC) Tiempo de muerte (minutos) 100 2-15 105 5-10 100 110 115 100 105 115 120 100 105 300-530 32-90 10-40 5-45 5-27 4 1 5-90 5-25

Clostridium botulinum

Calor seco Temperatura (oC) Tiempo de muerte (minutos) 140 ms de 180 160 9-90 180 3 120 50 130 15-35 140 5 120 130 140 130 140 160 50 15-35 5 20-40 5-15 12

Clostridium perfringens

Clostridium tetani

Calor seco. El calor seco a temperaturas suficientemente altas podr dar muerte a los microorganismos (Tabla 3). Pero este mtodo no es tan eficiente como el calor hmedo, requirindose temperaturas ms altas y mayores tiempos de exposicin. Se utilizan estufas de calor seco y sirve para esterilizar material no lbil al calor, como material de vidrio, instrumental quirrgico, grasas, aceites, sales, etc. La Tabla 6 muestra las condiciones requeridas para esterilizacin por calor seco Filtracin. Este mtodo se utiliza en el laboratorio y en la industria para esterilizar materiales termolbiles, como vitaminas o protenas. En general, se utilizan filtros de membranas de celulosa con poros suficientemente pequeos como para evitar el pasaje de microorganismos a travs de ellos. Se utiliza para esterilizar plasma, soluciones termolbiles, etc. Tambin se utiliza en los flujos laminares para la decontaminacin del ambiente.

Tabla 3. ESTERILIZACION POR CALOR SECO Material Temperatura (oC) Material de vidrio 160 Instrumental con filo (se alteran a 140 ms de 160oC) 160 Instrumental sin filo Agujas para administracin 160 parenteral Agujas para sutura 160-170 Jeringas de vidrio envueltas 160

Tiempo (minutos) 120 120 60 60 60 60

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Radiaciones. Se utiliza la radiacin ionizante o radiacin gamma, de alta energa y poder de penetracin, y la radiacin con luz UV, que tiene bajo poder de penetracin. Adems de ser microbicida, la radiacin gamma tiene la ventaja de ser capaz de penetrar paquetes y productos y esterilizar su interior. Se utiliza para material descartable en general. La luz UV es absorbida por muchos compuestos intracelulares, pero el mayor dao lo sufre el ADN. La mayor accin bactericida ocurre a longitudes de onda cercanas a 260 nm. Como tiene muy poco poder de penetracin a travs de los materiales a esterilizar y adems pierde intensidad frente al polvo atmosfrico, la radiacin no ionizante UV se utiliza ms como desinfectante, por ejemplo para decontaminar el aire de ambientes crticos como quirfanos. Mtodos qumicos de esterilizacin. Los esterilizantes qumicos son particularmente tiles para la esterilizacin de dispositivos mdicos sensibles al calor, como elementos plsticos para transfusin sangunea, jeringas plsticas, equipos de cateterizacin, etc. Tambin son utilizados para esterilizar reas cerradas. Oxido de Etileno. Es utilizado en forma gaseosa para esterilizar objetos sensibles al calor. No atraviesa materiales cristalinos pero atraviesa papeles, celofn, cartn, fibras textiles y algunos plsticos (no el polietileno). Glutaraldehdo. Es un agente desinfectante de alto nivel y esterilizante. Se utiliza solucin acuosa al 2% como agente esterilizante. Tiene un amplio espectro de actividad antimicrobiana. Se usa para esterilizar instrumentos urolgicos, instrumental con lentes, equipos de terapia respiratoria (broncoscopios), etc. A las concentraciones indicadas no es corrosivo para metales y no daa instrumental ptico. Formaldehdo. Como gas es estable slo a altas concentraciones y elevadas temperaturas, pero puede utilizarse tanto en fase gaseosa como lquida. En solucin acuosa (formol o formalina) contiene 34-38% de principio activo. En fase gaseosa (formaldehdo) es bactericida, tuberculocida y esporicida pero de accin ms lenta que el glutaraldehdo. Su uso como esterilizante y desinfectante est limitado porque es potencialmente carcinognico. Mtodos de desinfeccin. Los mtodos fsicos de desinfeccin son: Calentamiento a 100oC 15 minutos. Pasteurizacin a 63oC por 30 minutos o a 72oC por 15 segundos Radiacin UV. La utilizacin de calor a 100oC durante 15 minutos puede ser usada para dar muerte a clulas vegetativas en contenedores e instrumentos. Sin embargo, las esporas no son eliminadas, por lo cual no es un mtodo de esterilizacin. La

pasteurizacin tambin inactiva clulas vegetativas de patgenos en leche, jugos de fruta y otras bebidas, pero no esteriliza. Mtodos qumicos de desinfeccin . Los desinfectantes qumicos se dividen en varios grupos principales que incluyen: alcoholes, aldehdos, halgenos, metales pesados, compuestos de amonio cuaternarios y fenoles. De acuerdo al tipo de microorganismo que son capaces de eliminar, los desinfectantes se pueden clasificar como agentes de ALTO, MEDIO y BAJO nivel (Tablas 4, 5 y 6). Tabla 4. TIPO DE DESINFECTANTE NIVEL ALTO Esporas M. tuberculosis Otras bacterias vegetativas

+ + + NIVEL MEDIO + + NIVEL BAJO + +: generalmente germicida; -: generalmente sin efecto germicida
Tabla 5. Nivel del desinfectante ALTO Compuesto glutaraldehido forlmaldehdo peroxgenos clorgenos alcoholes iodforos fenoles compuestos de amonio cuaternario compuestos anfteros compuestos mercuriales sales de plata

MEDIO

BAJO

Desinfectantes qumicos de alto nivel. Los desinfectantes de alto nivel glutaraldehdo y formaldehdo han sido descriptos ms arriba. Peroxgenos. Entre los peroxgenos ms importantes utilizados como desinfectantes de alto nivel se encuentran el perxido de hidrgeno o agua oxigenada y el cido peractico. El perxido de hidrgeno al 6%

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Tabla 6. es esporicida y al 3% bactericida. Adems de la concentracion, su baja estabilidad influye en su actividad, ya que se descompone en presencia de metales, calor y agitacin. El agua oxigenada comercial (perxido de hidrgeno al 3%) es un desinfectante estable y efectivo. El cido peractico comercial se vende al 40% y es ms potente que el perxido de hidrgeno. Desinfectantes qumicos de nivel intermedio. Fenoles: se utilizan como solucin acuosa al 5% para matar formas vegetativas. Las esporas son resistentes al fenol. Este compuesto qumico es txico, por lo cual su uso se ha limitado en la actualidad. Ha sido reemplazado por varios compuestos qumicos relacionados que son menos txicos para los tejidos y ms activos contra los microorganismos. Estos compuestos se utilizan para decontaminacin del entorno hospitalario. Tabla 6 DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS DE USO COMUN Desinfectante o Antisptico Compuestos fenlicos Concentracin 0.5-3% Ejemplos de uso Desinfeccin de objetos inanimados como instrumentos, pisos, superficies de mesas, etc. Desinfeccin de piel, instrumental de ciruga delicado, termometro Desinfeccin de piel, cortes menores. Desinfeccin de agua, superficies no metalicas, etc. para sanidad ambiental de equipos y superficies Desinfeccin de piel, instrumentos. Nivel de Actividad Intermedio a bajo

El alcohol metlico (metanol) no es un agente antimicrobiano til, ya que es menos bactericida que el etanol y altamente venenoso. El etanol 70% se utiliza como antisptico sobre la piel, para termmetros y algunos instrumentos de ciruga. El etanol en concentraciones entre 60 y 90% es efectivo contra virus. Sin embargo, la presencia de protenas extraas disminuye su efectividad contra los virus ya que el alcohol se combina con ellas, impidiendo que acte sobre las protenas virales. La desventaja de los alcoholes como desinfectantes de equipos es que su uso prolongado daa los materiales de montje de las lentes, disuelve las gomas y ciertas tubuladuras plsticas. Adems son inflamables.

Halgenos: son fuertes agentes oxidantes y por esto son altamente reactivos y destructivos para compuestos vitales dentro de la clula microbiana.

Compuestos de iodo: El iodo es uno de los ms antiguos y ms efectivos agentes microbicidas. Es tradicionalmente utilizado como agente antisptico. Tambin se usan los complejos de iodo con compuestos que actan como transportadores y agentes solubilizantes del iodo, como la povidona. Los iodforos son microbicidas, como el yodo, pero con la ventaja de no se irritantes para la piel. Estos compuestos son germicidas efectivos contra todas las clases de bacterias. Son tambin esporicidas (segn la concentracin), fungicidas, y efectivos contra virus. Las preparaciones con iodo se utilizan para desinfeccin de la piel.

Alcoholes Etanol Iodo Clorgenos

70-90%

Intermedio Clorgenos: el cloro es uno de los desinfectantes ms ampliamente utilizados. El hipoclorito de sodio al 6% se conoce comnmente como lavandina, y es ms bactericida que esporicida, por lo cual se lo considera un desinfectante de nivel intermedio. El Centro Americano para el Control y Prevencin de Enfermedades (CDC) recomienda el uso de lavandina diluda 1:10 para salpicaduras de sangre sobre mesadas. La actividad de los hipocloritos se reduce en presencia de materia orgnica. Los clorgenos son utilizados para desinfectar el agua. Para esto se utiliza una concentracin de cloro equivalente a dos gotas de lavandina/litro de agua.

1% 0.5-5 g/l

Intermedio Bajo

Compuestos de Amonio cuaternario Mercuriales: Merthiolate

0.1-0.2%

Bajo

Bajo Desinfectantes qumicos de bajo nivel. Metales pesados y derivados: Los denominados metales pesados, como el mercurio y la plata, actan por inactivacin de ciertas enzimas al combinarse con ellas. Ciertos compuestos que contienen mercurio poseen una alta actividad antimicrobiana y baja toxicidad. Un ejemplo de estos compuestos es el Merthiolate, utilizado para cortes menores, heridas e infecciones de piel, pero su uso no es recomendable por su reducido espectro de accin.

1%

Alcoholes: en concentraciones entre 70 y 90%, las soluciones de alcohol etlico (etanol) son efectivas contra las formas vegetativas de microorganismos. Sin embargo, no pueden utilizarse como agentes esterilizantes ya que no matan las esporas bacterianas.

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La soluciones de nitrato de plata al 1% se utilizaban para la desinfeccin de la conjuntiva del beb al nacer. Actualmente puede reemplazarse por antibiticos. Compuestos de amonio cuaternarios: son efectivos tanto contra bacterias Grampositivas como negativas, aunque actan mejor sobre las Gram-positivas. Tienen accin germicida, detergente, baja toxicidad, alta solubilidad en agua, alta estabilidad en solucin y no son corrosivos, pero no tienen actividad contra Mycobacterium tuberculosis ni son esporicidas. Son utilizados para desinfeccin de utensilios de comida, pisos, paredes y otras superficies hospitalarias o lugares pblicos. Actan desnaturalizando protenas celulares, interfiriendo con procesos metablicos celulares y daando la membrana celular. Compuestos anfteros. Son compuestos tensioactivos (accin detergente). Poseen actividad microbicida contra bacterias, hongos y virus. Grupo2

Grupo 3

Grupo 4

Escherichia coli cepaK12 Lactobacillus acidophilus Virus Distemper canino Clostridium spp. Listeria monocytogenes Virus del sarampin Virus hepatitis Salmonella thyphi Mycobacterium tuberculosis Brucella spp. Rickettsia spp. Virus rbico Virus Junn Virus Lasa Virus de la fiebre aftosa Virus Machupo

BIOSEGURIDAD
La bioseguridad se ocupa de las medidas de proteccin que limitan los riesgos reales o potenciales que implica el manejo de microorganismos, de material biolgico o el trabajo relacionado con la manipulacin gentica. Debido a la amplitud de sus alcances y con fines operativos es conveniente diferenciarla en los siguientes grados tendientes a: a) Evitar la entrada al pas de material que implica un riesgo biolgico. La Organizacin Mundial de la Salud, (OMS) recomienda disponer de medidas de prevencin eficaces para controlar el desplazamiento de personas, la importacin de animales o sus subproductos, y de legislacin que pueda prohibir la manipulacin y/o la importacin de agentes patgenos. b) Protegere las reas libres de una determinada infeccin dentro del pas, con el apoyo de legislacin regional. c) Controlar las zonas de concentrain de microorganismos como industrias o laboratorios de investigacin d) Alertar a los laboratorios que reciben muestras para diagnstico de origen humano, animal o vegetal.El procesamiento de las muestras, la eliminacin de los deshechos y su interaccin con el medio ambiente es altamente riesgoso. La OMS en 1983 estableci cuatro gurpos de microorganismos ( Tabla 7) teniendo en cuenta los riesgos que pueden provocar al hombre y/o a los animales cuando se los manipula. Tabla 7. Algunos microorganismos de distinto riesgo. Microorganismos Bacillus cereus Grupo 1

Grupo 1: los de fcil control, que representan un riesgo mnmo tanto para quien los maneja como para el entorno. Grupo 2: Riesgo moderado para el individuo y limitado para la comunidad Grupo 3: Riesgo individual elevado, pero escaso para el entorno. Grupo 4: Microorganismos en extremo peligrosos para quien los manipula y para el entorno.

Cuestionario 1: COMPLETAR LA SIGUIENTE TABLA antibiograma de difusin en disco. Bacteria probada: Eschericha coli con los resultados del

PARTE PRACTICA
ESTERILIZACION Y DESINFECCION El manipuleo efectivo de microorganismos en el laboratorio, en el hospital y en la industria depende del conocimiento de cmo controlar (matar, inhibir o remover) a los microorganismos en un ambiente. Existen varios agentes fsicos y qumicos que pueden ser utilizados para mantener a los microorganismos en niveles aceptables. La seleccin del mejor agente depende en parte de si se desea eliminar completamente todos lor microbios presentes, matar slo ciertos tipos, o simplemente prevenir la multiplicacin de los microorganismos presentes.

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En el hospital, prcticamente todos los dispositivos utilizados para el cuidado, atencin o diagnstico de pacientes, pueden convertirse en vehculos de transmisin de agentes infecciosos. A este respecto, debe considerarse la clasificacin de los materiales y equipos de asistencia al paciente:

Mtodos de esterilizacin. Los mtodos fsicos de esterilizacin incluyen (Tabla 1): Incineracin, calor hmedo, calor seco, filtracin, radiacin ionizante (radiacin gamma) y (bajo ciertas condiciones) la radiacin no ionizante (UV). Incineracin: la destruccin de microorganismos por incineracin es una prctica de rutina en el laboratorio. Un ejemplo de este mtodo es el flameo de la parte inferior del ansa colocndola en la llama de un mechero de Bunsen. Este procedimiento se realiza como parte integral del aislamiento de colonias bacterianas en medio slido, previo a la inoculacin de tubos con medio de cultivo, para evitar la contaminacin de los cultivos subsecuentes. La incineracin es tambin utilizada para el descarte de materiales contaminados. La forma de eliminar todo material tipo gasas, bendas u otro elemento contaminado con sangre o secreciones de los pacientes en el hospital, es la incineracin. Tabla 1. Mtodo fsico de esterilizacin Incineracin Calor hmedo

Crticos: instrumentos y accesorios que se introducen directamente en el torrente sanguneo o reas estriles del organismo (catteres, agujas, instrumental quirrgico, etc.) y, por consiguiente, deben estar estriles para ser utilizados. Semicrticos: objetos que se ponen en contacto con mucosas intactas (laringoscopios, espculos vaginales, etc.). Deben estar libres de microorganismos pero no necesariamente de bacterias esporuladas. Requieren esterilidad o desinfeccin de alto nivel. No crticos: objetos que se ponen en contacto con piel intacta (recipientes para recoleccin de orina, ropa de cama, etc.). Deben estar limpios o desinfectados con agentes de bajo nivel. De esta manera, antes de utilizar cualquier dispositivo para pacientes se debe eliminar completamente o reducir (segn el caso) la concentracin de microorganismos que ste pudiera tener. Con este fin se utilizan diferentes tcnicas de esterilizacin y desinfeccin. Para el correcto control microbiolgico, deben tenerse en cuenta las diferencias existentes entre los siguientes procesos:

Principio El material se quema. Mtodo mas comn de tratamiento de deshechos infecciosos. o Calor (121 C) hmedo a 1 atmsfera 30-60 minutos. Se usa autoclave (calor a alta presin). Para desechos de peligro biolgico y objetos resistentes al calor. 160-180oC durante 1-3 horas. Se usa estufa. Para material de vidrio, aceites, etc. Pasaje de soluciones a travs de membranas con vaco. Para soluciones de antibiticos, qumicos txicos, radioistopos, vacunas, carbohidratos, etc., sensibles al calor. Radiacin ionizante de corta longitud de onda y alta energa. Para material descartable como jeringas de plstico, catteres, guantes, etc., antes de su uso. Radiacin no ionizante de bajo poder de penetracin. Slo esteriliza las superficies sobre las que incide directamente o volmenes pequeos de lquidos.

Calor seco Limpieza: remocin de toda materia ajena al objeto. Se lleva a cabo con agua, detergentes y accin mecnica. Precede a todo proceso de esterilizacin y desinfeccin. Decontaminacin: procedimiento que hace segura la manipulacin y el uso de un dispositivo, aparato o instrumento, como as tambin superficies ambientales. Se puede realizar por esterilizacin, desinfeccin o limpieza. Esterilizacin: es el proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida incluyendo las esporas bacterianas. Se realiza por mtodos fsicos o qumicos. Desinfeccin: es el proceso por el cual los organismos patgenos, pero no necesariamente las esporas, son destruidos. Como la esterilizacin, debe realizarse por mtodos fsicos o qumicos. Antisepsia: procedimiento mediante el cual se emplea un agente qumico sobre superficies animadas (piel o tejidos vivos) a fin de inhibir o destruir a los microorganismos. Filtracin

Radiacin gamma Radiacin UV

Calor hmedo. La esterilizacin con calor hmedo es mucho ms efectiva que el calor seco para matar microorganismos ya que el calor hmedo ocasiona la desnaturalizacin y coagulacin de protenas vitales, mientras que el calor seco causa oxidacin de constituyentes orgnicos de la clula. La desnaturalizacin de protenas celulares ocurre a temperaturas ms bajas y con exposicin ms reducida que las requeridas para la oxidacin. La Tabla 2 muestra ejemplos comparativos de esterilizacin por calor hmedo y seco. La esterilizacin por calor hmedo se realiza a sobrepresin en un sistema cerrado de volumen

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constante denominado autoclave. El incremento de presin permite el aumento de temperatura. Usualmente se utiliza 121oC que corresponde a una atmsfera de sobrepresin (por encima de la atmosfrica), durante aproximadamente 20 minutos, dependiendo del material a esterilizar. Se utiliza para esterilizar medios de cultivo, soluciones, material contaminado, etc. Tabla 2.

El agua hirviente a presin atmosfrica no esteriliza porque durante el cambio de estado lquido-gas la temperatura permanece a 100oC, lo cual permite la supervivencia de esporas bacterianas.

Especies bacterianas Bacillus anthracis

Calor hmedo Temperatura (oC) Tiempo de muerte (minutos) 100 2-15 105 5-10 100 110 115 100 105 115 120 100 105 300-530 32-90 10-40 5-45 5-27 4 1 5-90 5-25

Clostridium botulinum

Calor seco Temperatura (oC) Tiempo de muerte (minutos) 140 ms de 180 160 9-90 180 3 120 50 130 15-35 140 5 120 130 140 130 140 160 50 15-35 5 20-40 5-15 12

Clostridium perfringens

Clostridium tetani

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Calor seco. El calor seco a temperaturas suficientemente altas podr dar muerte a los microorganismos (Tabla 3). Pero este mtodo no es tan eficiente como el calor hmedo, requirindose temperaturas ms altas y mayores tiempos de exposicin. Se utilizan estufas de calor seco y sirve para esterilizar material no lbil al calor, como material de vidrio, instrumental quirrgico, grasas, aceites, sales, etc. La Tabla 6 muestra las condiciones requeridas para esterilizacin por calor seco Filtracin. Este mtodo se utiliza en el laboratorio y en la industria para esterilizar materiales termolbiles, como vitaminas o protenas. En general, se utilizan filtros de membranas de celulosa con poros suficientemente pequeos como para evitar el pasaje de microorganismos a travs de ellos. Se utiliza para esterilizar plasma, soluciones termolbiles, etc. Tambin se utiliza en los flujos laminares para la decontaminacin del ambiente. Tabla 3. ESTERILIZACION POR CALOR SECO Material Temperatura (oC) Material de vidrio 160 Instrumental con filo (se alteran a 140 ms de 160oC) 160 Instrumental sin filo Agujas para administracin 160 parenteral Agujas para sutura 160-170 Jeringas de vidrio envueltas 160 Tiempo (minutos) 120 120 60 60 60 60

Radiaciones. Se utiliza la radiacin ionizante o radiacin gamma, de alta energa y poder de penetracin, y la radiacin con luz UV, que tiene bajo poder de penetracin. Adems de ser microbicida, la radiacin gamma tiene la ventaja de ser capaz de penetrar paquetes y productos y esterilizar su interior. Se utiliza para material descartable en general. La luz UV es absorbida por muchos compuestos intracelulares, pero el mayor dao lo sufre el ADN. La mayor accin bactericida ocurre a longitudes de onda cercanas a 260 nm. Como tiene muy poco poder de penetracin a travs de los materiales a esterilizar y adems pierde intensidad frente al polvo atmosfrico, la radiacin no ionizante UV se utiliza ms como desinfectante, por ejemplo para decontaminar el aire de ambientes crticos como quirfanos. Mtodos qumicos de esterilizacin. Los esterilizantes qumicos son particularmente tiles para la esterilizacin de dispositivos mdicos sensibles al calor, como elementos plsticos para transfusin sangunea, jeringas plsticas, equipos de cateterizacin, etc. Tambin son utilizados para esterilizar reas cerradas. Oxido de Etileno. Es utilizado en forma gaseosa para esterilizar objetos sensibles al calor. No atraviesa materiales cristalinos pero atraviesa papeles, celofn, cartn, fibras textiles y algunos plsticos (no el polietileno). Glutaraldehdo. Es un agente desinfectante de alto nivel y esterilizante. Se utiliza solucin acuosa al 2% como agente esterilizante. Tiene un amplio espectro de actividad antimicrobiana. Se usa para esterilizar instrumentos urolgicos, instrumental con lentes, equipos de terapia respiratoria (broncoscopios), etc. A las concentraciones indicadas no es corrosivo para metales y no daa instrumental ptico.

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Formaldehdo. Como gas es estable slo a altas concentraciones y elevadas temperaturas, pero puede utilizarse tanto en fase gaseosa como lquida. En solucin acuosa (formol o formalina) contiene 34-38% de principio activo. En fase gaseosa (formaldehdo) es bactericida, tuberculocida y esporicida pero de accin ms lenta que el glutaraldehdo. Su uso como esterilizante y desinfectante est limitado porque es potencialmente carcinognico. Mtodos de desinfeccin. Los mtodos fsicos de desinfeccin son: Calentamiento a 100oC 15 minutos. Pasteurizacin a 63oC por 30 minutos o a 72oC por 15 segundos Radiacin UV. La utilizacin de calor a 100oC durante 15 minutos puede ser usada para dar muerte a clulas vegetativas en contenedores e instrumentos. Sin embargo, las esporas no son eliminadas, por lo cual no es un mtodo de esterilizacin. La pasteurizacin tambin inactiva clulas vegetativas de patgenos en leche, jugos de fruta y otras bebidas, pero no esteriliza. Mtodos qumicos de desinfeccin . Los desinfectantes qumicos se dividen en varios grupos principales que incluyen: alcoholes, aldehdos, halgenos, metales pesados, compuestos de amonio cuaternarios y fenoles. De acuerdo al tipo de microorganismo que son capaces de eliminar, los desinfectantes se pueden clasificar como agentes de ALTO, MEDIO y BAJO nivel (Tablas 4, 5 y 6). Tabla 4. TIPO DE DESINFECTANTE NIVEL ALTO NIVEL MEDIO Esporas M. tuberculosis Otras bacterias vegetativas

+ + + + + NIVEL BAJO + +: generalmente germicida; -: generalmente sin efecto germicida

Tabla 5. Nivel del desinfectante ALTO Compuesto glutaraldehido forlmaldehdo peroxgenos

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MEDIO

BAJO

clorgenos alcoholes iodforos fenoles compuestos de amonio cuaternario compuestos anfteros compuestos mercuriales sales de plata

Desinfectantes qumicos de alto nivel. Los desinfectantes de alto nivel glutaraldehdo y formaldehdo han sido descriptos ms arriba. Peroxgenos. Entre los peroxgenos ms importantes utilizados como desinfectantes de alto nivel se encuentran el perxido de hidrgeno o agua oxigenada y el cido peractico. El perxido de hidrgeno al 6% Tabla 6. es esporicida y al 3% bactericida. Adems de la concentracion, su baja estabilidad influye en su actividad, ya que se descompone en presencia de metales, calor y agitacin. El agua oxigenada comercial (perxido de hidrgeno al 3%) es un desinfectante estable y efectivo. El cido peractico comercial se vende al 40% y es ms potente que el perxido de hidrgeno. Desinfectantes qumicos de nivel intermedio. Fenoles: se utilizan como solucin acuosa al 5% para matar formas vegetativas. Las esporas son resistentes al fenol. Este compuesto qumico es txico, por lo cual su uso se ha limitado en la actualidad. Ha sido reemplazado por varios compuestos qumicos relacionados que son menos txicos para los tejidos y ms activos contra los microorganismos. Estos compuestos se utilizan para decontaminacin del entorno hospitalario. Tabla 6 DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS DE USO COMUN Desinfectante o Antisptico Compuestos fenlicos Concentracin 0.5-3% Ejemplos de uso Desinfeccin de objetos inanimados como instrumentos, pisos, superficies de mesas, etc. Desinfeccin de piel, Nivel de Actividad Intermedio a bajo

Alcoholes

70-90%

Intermedio

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Etanol Iodo Clorgenos 1% 0.5-5 g/l

Compuestos de Amonio cuaternario Mercuriales: Merthiolate

0.1-0.2%

instrumental de ciruga delicado, termometro Desinfeccin de piel, cortes menores. Desinfeccin de agua, superficies no metalicas, etc. para sanidad ambiental de equipos y superficies Desinfeccin de piel, instrumentos.

Intermedio Bajo

Bajo

Bajo

1%

Alcoholes: en concentraciones entre 70 y 90%, las soluciones de alcohol etlico (etanol) son efectivas contra las formas vegetativas de microorganismos. Sin embargo, no pueden utilizarse como agentes esterilizantes ya que no matan las esporas bacterianas. El alcohol metlico (metanol) no es un agente antimicrobiano til, ya que es menos bactericida que el etanol y altamente venenoso. El etanol 70% se utiliza como antisptico sobre la piel, para termmetros y algunos instrumentos de ciruga. El etanol en concentraciones entre 60 y 90% es efectivo contra virus. Sin embargo, la presencia de protenas extraas disminuye su efectividad contra los virus ya que el alcohol se combina con ellas, impidiendo que acte sobre las protenas virales. La desventaja de los alcoholes como desinfectantes de equipos es que su uso prolongado daa los materiales de montje de las lentes, disuelve las gomas y ciertas tubuladuras plsticas. Adems son inflamables.

Halgenos: son fuertes agentes oxidantes y por esto son altamente reactivos y destructivos para compuestos vitales dentro de la clula microbiana.

Compuestos de iodo: El iodo es uno de los ms antiguos y ms efectivos agentes microbicidas. Es tradicionalmente utilizado como agente antisptico. Tambin se usan los complejos de iodo con compuestos que actan como transportadores y agentes solubilizantes del iodo, como la povidona. Los iodforos son microbicidas, como el yodo, pero con la ventaja de no se irritantes para la piel. Estos compuestos son germicidas efectivos contra todas las clases de bacterias. Son tambin esporicidas (segn la concentracin), fungicidas, y efectivos contra virus. Las preparaciones con iodo se utilizan para desinfeccin de la piel.

Clorgenos: el cloro es uno de los desinfectantes ms ampliamente utilizados. El hipoclorito de sodio al 6% se conoce comnmente como lavandina, y es ms bactericida que esporicida, por lo cual se lo considera un desinfectante de nivel intermedio. El Centro Americano para el Control y Prevencin de Enfermedades (CDC)

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recomienda el uso de lavandina diluda 1:10 para salpicaduras de sangre sobre mesadas. La actividad de los hipocloritos se reduce en presencia de materia orgnica. Los clorgenos son utilizados para desinfectar el agua. Para esto se utiliza una concentracin de cloro equivalente a dos gotas de lavandina/litro de agua.

Desinfectantes qumicos de bajo nivel. Metales pesados y derivados: Los denominados metales pesados, como el mercurio y la plata, actan por inactivacin de ciertas enzimas al combinarse con ellas. Ciertos compuestos que contienen mercurio poseen una alta actividad antimicrobiana y baja toxicidad. Un ejemplo de estos compuestos es el Merthiolate, utilizado para cortes menores, heridas e infecciones de piel, pero su uso no es recomendable por su reducido espectro de accin. La soluciones de nitrato de plata al 1% se utilizaban para la desinfeccin de la conjuntiva del beb al nacer. Actualmente puede reemplazarse por antibiticos. Compuestos de amonio cuaternarios: son efectivos tanto contra bacterias Gram-positivas como negativas, aunque actan mejor sobre las Gram-positivas. Tienen accin germicida, detergente, baja toxicidad, alta solubilidad en agua, alta estabilidad en solucin y no son corrosivos, pero no tienen actividad contra Mycobacterium tuberculosis ni son esporicidas. Son utilizados para desinfeccin de utensilios de comida, pisos, paredes y otras superficies hospitalarias o lugares pblicos. Actan desnaturalizando protenas celulares, interfiriendo con procesos metablicos celulares y daando la membrana celular. Compuestos anfteros. Son compuestos tensioactivos (accin detergente). Poseen actividad microbicida contra bacterias, hongos y virus.

BIOSEGURIDAD
La bioseguridad se ocupa de las medidas de proteccin que limitan los riesgos reales o potenciales que implica el manejo de microorganismos, de material biolgico o el trabajo relacionado con la manipulacin gentica. Debido a la amplitud de sus alcances y con fines operativos es conveniente diferenciarla en los siguientes grados tendientes a: e) Evitar la entrada al pas de material que implica un riesgo biolgico. La Organizacin Mundial de la Salud, (OMS) recomienda disponer de medidas de prevencin eficaces para controlar el desplazamiento de personas, la importacin de animales o sus subproductos, y de legislacin que pueda prohibir la manipulacin y/o la importacin de agentes patgenos. f) Protegere las reas libres de una determinada infeccin dentro del pas, con el apoyo de legislacin regional. g) Controlar las zonas de concentrain de microorganismos como industrias o laboratorios de investigacin h) Alertar a los laboratorios que reciben muestras para diagnstico de origen humano, animal o vegetal.El procesamiento de las muestras, la eliminacin de los deshechos y su interaccin con el medio ambiente es altamente riesgoso. La OMS en 1983 estableci cuatro gurpos de microorganismos ( Tabla 7) teniendo en cuenta los riesgos que pueden provocar al hombre y/o a los animales cuando se los manipula.

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Tabla 7. Algunos microorganismos de distinto riesgo. Microorganismos Bacillus cereus Grupo 1 Escherichia coli cepaK12 Lactobacillus acidophilus Virus Distemper canino Clostridium spp. Grupo2 Listeria monocytogenes Virus del sarampin Virus hepatitis Salmonella thyphi Mycobacterium tuberculosis Grupo 3 Brucella spp. Rickettsia spp. Virus rbico Virus Junn Grupo 4 Virus Lasa Virus de la fiebre aftosa Virus Machupo Grupo 1: los de fcil control, que representan un riesgo mnmo tanto para quien los maneja como para el entorno. Grupo 2: Riesgo moderado para el individuo y limitado para la comunidad Grupo 3: Riesgo individual elevado, pero escaso para el entorno. Grupo 4: Microorganismos en extremo peligrosos para quien los manipula y para el entorno.

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