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COLETA E TRANSFERNCIA DE EMBRIES A transferncia de embries uma das biotecnologias aplicada com o objetivo principal de aumentar o nmero de produtos

os nascidos com uma gentica superior. Denomina-se transferncia de embries a tcnica pela qual, os embries so colhidos de um animal e transferidos para outro onde ocorrer a gestao por completo. Na espcie eqina houve um grande avano desta biotcnica e hoje as associaes de raas permitem o registro de produtos nascidos de transferncia de embries, cada uma com suas particularidades, o que permitiu uma grande expanso da tcnica no pas. VANTAGENS DA TE Produzir mais que um potro por estao, guas competidoras possam produzir embries sem interromper a campanha esportiva, pois os potros sero gestados por receptoras, obteno de descendentes de animais que se tornaram subfrteis por problemas adquiridos, melhor aproveitamento de guas que possuam alto valor zootcnico e sejam idosas, maior controle de doenas quando da transferncia de material gentico entre estados ou pases, bem como a obteno de divisas para o pas atravs de exportaes de embries. AS GUAS Na seleo da gua doadora, deve-se saber: histrico reprodutivo, idade, potencial gentico, conformao vulvar e condio uterina . guas idosas e com histrico reprodutivo ruim so as principais candidatas escolhidas para o

programa de transferncia de embries.


J na escolha da gua receptora de extrema importncia para o sucesso de um programa de TE. Deve-se verificar fatores como: porte, produo de leite, habilidade materna, idade (3-10 anos), condio uterina e vulvar, bem como as exigncias das associaes de raas. A melhor gua receptora aquela que j produziu potros. Ciclicidade normal tambm so importantes, pois permitir maior sucesso no momento da sincronizao da ovulao doadora/receptora, a menos que se pretenda utilizar guas aciclcas tratadas com hormnios como receptoras. Previamente ao nicio de um programa de TE deve ser realizado um completo exame ginecolgico nas guas doadoras e receptoras, incluindo exame do trato genital por meio da palpao e US trans-retal, exame citolgico e se histolgico (bipsia) do tero, a fim de detectar possveis anormalidades ovarianas e/ou uterinas. Estes procedimentos permitiro ao tcnico a tomada de deciso quanto ao uso ou descarte da receptora e trar subsdios com respeito condio uterina e ovariana da gua doadora, permitindo, a opo por um determinado tratamento desde que a anormalidade diagnosticada seja por causas adquiridas. Uma vez tratada gua doadora poder ser utilizada para colheita de embries. A US trans-retal recomendada no momento da seleo das receptoras, e no ato da transferncia, cujo objetivo avaliar as caractersticas uterinas e ovarianas, especialmente o corpo lteo (C.L). As anormalidades podem ser observadas pelo US, permitindo o descarte da receptora. A qualidade da receptora a chave para o sucesso da tcnica de TE, que objetiva em atingir altos ndices de prenhez ps inovulao. No cio, tanto a gua doadora quanto a receptora devem ser submetidas

avaliao trans-retal diria por meio da palpao retal e/ou ultra-som, cujo objetivo avaliar o desenvolvimento folicular e realizar o processo de inseminao artificial (I.A) da doadora previamente ovulao. Ocorrida a ovulao, recomenda-se que a colheita de embrio seja realizada nos dias 6, 7,8 ou 9 ps-ovulao. Quando o objetivo da colheita a congelamento do embrio, o controle de desenvolvimento folicular deve ser realizado com intervalos menores que 24 horas e o lavado uterino realizado no dia 6 ps-ovulao. A maioria dos embries so coletados atravs de lavagem uterina da doadora nos dias 7, 8 ou 9 depois da ovulao (dia 0). O procedimento realizado com um meio de cultura apropriado que contm protenas e antibiticos para garantir uma taxa de sobrevivncia elevada e eliminar possveis contaminaes bacterianas. Antes da transferncia os embries so avaliados quanto a sua morfologia e viabilidade e, o sucesso da tcnica depende muito da escolha correta e manejo de receptoras. Alguns fatores podem afetar o sucesso da tcnica: ligados a coleta e transferncia, habilidade do tcnico, idade da doadora, dia da coleta e tamanho do embrio, idade do corpo lteo da receptora, condies sanitrias do tero da receptora. COLETA DO EMBRIO O embrio do eqino geralmente colhido entre o sexto e o oitavo dia aps a ovulao, podendo ser colhido at o nono dia. Dois mtodos para coleta de embries so descritos para guas: o cirrgico e o no cirrgico. O mtodo cirrgico somente deve ser utilizado quando o objetivo for a obteno de embries em estgios iniciais de desenvolvimento. A coleta no cirrgica de embries pode ser realizada utilizando catteres de duas ou trs vias, com sistemas aberto ou fechado. Para a realizao das tcnicas de colheita de embries se faz necessrio a existncia de um laboratrio equipado com todos os materiais para TE como cateteres esterilizados, copos coletores, um aparelho de visualizao de embrio (lupa / estereomicroscpio), meios especficos para embrio, solues para coleta do embrio, placas de petri e tambm de uma pessoa treinada para auxiliar durante os processos de coleta. indispensvel que em todos os estgios do processo da coleta de embrio haja um controle de qualidade que assegure um nvel adequado de limpeza e esterilizao de materiais e equipamentos utilizados. TRANSFERNCIA DO EMBRIO Pipeta de inseminao artificial para eqinos e o inovulador modelo francs, utilizando palhetas de 0,5 ml, ambos protegidos com uma bainha sanitria com o objetivo de evitar uma contaminao intra-uterina da gua receptora. PROCEDIMENTO DA COLETA Nas guas doadoras de embries pode ser administrados frmacos sintticos para a sincronizao de cio (Pgf 2) e para induo da ovulao (Hcg). A coleta de embries pode ser realizada a partir do sexto dia ps-ovulao, sendo realizada preferencialmente nos stimo e oitavo dias e em alguns casos pela ausncia do veterinrio, se coleta o embrio no nono dia ps-ovulao.

Para a coleta de embries consiste em conter a doadora em um brete, enfaixar a cauda, amarrar a cauda no corpo do animal, lavar a vulva da gua com detergente neutro por 3 vezes, aplicar degermante a base de iodo, enxaguar e secar com papel toalha. A soluo utilizada na infuso uterina para o procedimento de coleta de embrio a soluo Ringer com lactato de sdio , no entanto, o mais indicado a soluo salina fosfatada tamponada de Dulbecco (PBS) . O tcnico, utilizando luva plstica estril, com lubrificante, introduz um cateter de silicone estril de 80 cm x 8 mm de dimetro com um balo na extremidade. Aps entrar na vagina, o cateter passado pela crvix at chegar ao corpo do tero e o balo inflado. O balonete ento posicionado na parte posterior da crvix, para evitar a perda de lquido. Uma vez que este balo esteja posicionado corretamente, o tero enxaguado de 3 a 4 vezes com soro fisiolgico, tampo, fosfato modificado de Dulbeco (DBPS) aquecido (37,5C), contendo soro fetal ou de recm-nascido bovino, a 1%, penicilina (100 unidades/ml) e estreptomicina (100 g/ml). O tero preenchido com 1 a 2 litros de DBPS, durante cada lavagem. Depois de preenchido, o lquido volta pelo cateter e passa por um copo coletor e um filtro de embrio de permanecendo uma pequena quantidade dentro do copo coletor, o qual posteriormente ser transferido para uma placa de Petri, para anlise atravs de lupa/estereomicroscpio Localizado o embrio, este lavado em soluo de manuteno do embrio (holding) por cinco vezes ou tambm pode ser manipulado com o auxlio de uma palheta acoplada a uma seringa de 1ml promovendo banhos em gotas soluo de Ham F10 mod para remoo das sujidades aderidas ao embrio e ir ser mantido na soluo at o momento da transferncia ou colocado em um tubo de ensaio com holding para ser transportado refrigerado em uma caixa de transporte. A transferncia realizada com uma pipeta de inseminao. Para cada colheita realizado trs lavados, utilizando um volume de 500 ml a 1000 ml por lavado. AVALIAO E CLASSIFICAO DE EMBRIES A qualidade do embrio eqino considerada um dos fatores mais importantes e a que mais afeta as taxas de prenhez nos programas de transferncia de embrio. A avaliao morfolgica e a classificao dos embries baseiam-se no tamanho, cor, uniformidade, extruses e degeneraes de blastmeros. A escala de classificao de embrio varia de 1 a 5, dependendo de sua caracterstica morfolgica. Embries grau 1 (Excelentes) - Esfricos, com clulas de tamanho e cor uniforme; Embries grau 2 (Bons) - Forma irregular e poucas extruses de blastmeros; Embries grau 3 (Regular) - Extruses de vrios blastmeros, clulas degeneradas a nvel de boto germinativo e ou blastocele colapsada; Embries grau 4 (Pobres) - Numerosos blastmeros em extruso, blastocele severamente colapsada, boto germinativo escuro indicando maior grau de degenerao celular; Embries grau 5 - Ovcitos ou embries totalmente degenerados, apresentando destruio das clulas do trofoblasto com total colapso do embrio.

TRANSFERNCIA DO EMBRIO Diversos equipamentos podem ser utilizados para deposit-lo no corpo uterino da gua receptora. utilizado o aplicador modelo Hannover de transferncia de embrio com palhetas 0,5 ml, com bainhas descartveis para transferncia ou, pipeta de inseminao artificial de eqinos com ponteira Makro Tubo acoplada a uma seringa de insulina. Em ambas as tcnicas utilizada a bainha sanitria, visando uma diminuio da contaminao uterina da gua receptora. A gua receptora que ir receber este embrio ser previamente selecionada atravs dos vrios exames realizados e em seguida ser feita uma limpeza da regio perianal e vulvar da gua com uma soluo degermante e gua sendo feito a secagem da regio com papel toalha. A inovulao do embrio feita com muita habilidade do tcnico no corpo do tero na regio da bifurcao cornoal.

CONCLUSO O agronegcio nacional referente equinos tem colocado o Brasil entre um dos principais pases criadores e, com o terceiro maior rebanho mundial. Junto com o desenvolvimento do agronegcio, tambm crescem o nmero de pesquisas nas mais diversas reas que abrangem a medicina equina. Os maiores desafios ainda so encontrados na rea reprodutiva. Nas ltimas dcadas vem sendo utilizadas em larga escala a tcnica de transferncia de embrio. No programa de transferncia de embries, conclui que a experincia do tcnico e a condio uterina da receptora so fatores de suma importncia para o sucesso do programa de TE. Para se construir um centro de TE, deve-se respeitar todas as leis que o Ministrio da Agricultura estipula, que so muitas, alm de ter uma lista extensa de todos os equipamentos necessrios para a utilizao da tcnica.

REFERNCIAS LENZI, Cassiano. TRANSFERNCIA DE EMBRIES EM EQUINOS. Disponvel em: <http://tcconline.utp.br/wp-content/uploads/2012/08/TRANSFERENCIA-DEEMBRIOES-EM-EQUINOS.pdf>. Acesso em: 01 jun. 2013.

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