Trabajo Prctico N 5 COMPARTAMENTALIZACION CELULAR, MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA La existencia de la vida en el planeta est vinculada con la organizacin de lpidos y protenas

que generaron membranas y con la formacin de hebras de molculas heredables (cidos nucleicos). En esta sesin prctica Ud. revisar todas aquellas estructuras intracelulares que a travs de distintas tcnicas de tincin son posibles de identificar en el microscopio ptico y observar imgenes obtenidas a travs de microscopa electrnica. Esto le permitir a usted evaluar la importancia del aumento para efecto de identificar la ultraestructura celular y conocer su organizacin. La clula eucarionte est contenida por una membrana plasmtica y se le subdivide en dos compartimientos: el ncleo y el citoplasma que se separan a travs de la carioteca o envoltura nuclear. En el ncleo interfsico encontramos la cromatina que corresponde a material gentico del tipo ADN, asociado a protenas bsicas denominadas histonas, y a ARN en procesos de sntesis o formando parte del nuclolo. En el interior del ncleo no existen estructuras membranosas. La cromatina presenta diferente respuesta a la tincin dependiendo del grado de condensacin en que se encuentre, de acuerdo a este criterio se clasifica en heterocromatina la ms condensada, y por tanto, ms teida y en eucromatina la menos teida por presentar una escasa condensacin. Las caractersticas del ncleo de una clula dependen de su estado fisiolgico, por ejemplo los ncleos de las clulas metablicamente activas suelen ser grandes y relativamente poco teidos. En el citoplasma encontramos dos fases, el citosol y las estructuras membranosas. El citosol est formado por molculas orgnicas y electrolitos en solucin coloidal, dicha fase posee un citoesqueleto que corresponde a protenas organizadas formando estructuras tales como microfilamentos y microtbulos, con funciones tales como determinar y mantener la forma de la clula; adems, se encuentran a este nivel los ribosomas que se encargan de realizar la sntesis de protenas. Inmersas en el citosol encontramos las estructuras membranosas que poseen una o dos membranas que separan su contenido con el del citosol, entre las estructuras membranosas de una membrana se encuentran el sistema de endomembranas o vacuolar y las vacuolas, entre las de dos membranas los organelos semiautnomos. Adems, en el citoplasma encontramos estructuras generadas por microtbulos organizados en forma permanentes tales como: centriolos, cilios, flagelos y cuerpos basales, los ltimos determinando caractersticas especficas de algunos tipos celulares El sistema de endomembranas se presenta en todas las clulas eucariontes, dependiendo su desarrollo de la funcin celular; corresponde a una red de membranas la que se subdivide, por morfologa y funcin, en: Envoltura nuclear o carioteca, Retculo Endoplsmico Rugoso (RER), Retculo Endoplsmico Liso (REL) y Sistema o Aparato Golgi.

La carioteca presenta una membrana, la interna, que se une a la cromatina por su cara interna y la externa que queda en contacto con el citosol unindosele ribosomas, entre ambas existe un espacio virtual continuo, al igual que las membranas, con el retculo. Posee poros a travs de los cuales se realizan los procesos de intercambio entre ncleoplasma y citoplasma. El RER se caracteriza por poseer ribosomas unidos a las membranas por su cara citoplasmtica, la existencia de ribosomas le determina su capacidad de realizar sntesis de protenas de exportacin, o sea, protenas que no entran en contacto directo con el citosol. Adems, en este organelo las protena recin sintetizadas son plegadas adoptando su estructura secundaria, terciaria y/o cutaernarioa, y en algunas de ellas se inicia el proceso de glicosilacin. La morfologa del RER es sacular (como sacos) y su grado de desarrollo es mayor en aquellas clulas que poseen funcin de secrecin. Su desarrollo determina que el citoplasma se tia intensamente con colorantes bsicos (por el ARN existente) El REL es de forma ms bien tubular, posee membranas lisas y presenta diversas funciones, tales como, sntesis de fosfolpidos y esteroides y fenmenos de detoxificacin celular. Se puede demostrar con tcnicas rutinarias de tincin a travs de la vacuolizacin del citoplasma. El Golgi corresponde a un grupo de cisternas apiladas cuyas funciones son modificar el rbol de glicosilacin aadido en algunas protenas que son sintetizadas en el RER y proveer de membranas a los productos sintetizados por los otros compartimientos del sistema, o sea, generar las vacuolas de secrecin. Para su demostracin se utilizan tcnicas argnticas (plata), el Golgi se aprecia de color negro y el resto de la estructura celular de color amarillo a dorado - caf. En el citoplasma encontramos a las vacuolas que son sacos formados por una membrana cuyo contenido es variable; reciben diferentes nombre segn su contenido y funcin: los lisosomas son vacuolas con contenido enzimtico y poseen la funcin de digestin de partculas endocitadas o de estructuras celulares poco eficientes. Los peroxisomas o microcuerpos son vacuolas con contenido enzimtico y su funcin es realizar reacciones de oxidoreduccin. Adems, existen vacuolas que contienen producto de secrecin o de excrecin, dependiendo del tipo celular observado. La demostracin de las vacuolas existentes en los distintos tipos celulares se realiza, fundamentalmente, mediante tinciones histoqumicas, marcando alguna enzima u otra sustancia especfica del metabolismo de sta. Los centrolos son estructuras microtubulares que se describen slo en clula animal, se localizan por fuera de la carioteca y se presentan dos, ubicados perpendicularmente uno respecto del otro. Son demostrados a travs de tcnicas de ME. Los cuerpos basales se encuentran slo en aquellas clulas que poseen cilios o flagelos, posee una estructura microtubular igual a la del centriolo y se localizan en el ectoplasma. Los cilios y flagelos corresponden a expansiones protoplasmticas en cuyo interior encontramos microtbulos organizados que se prolongan a partir de su correspondiente cuerpo basal. Se aprecian como delgados filamentos.

La clula animal presenta como nico organelo semiautnomo a las mitocondrias, estos se caracterizan por poseer dos membranas, la interna se aprecia formando pliegues o tbulos en su interior. Las mitocondrias en general no se ven con microscopa ptica, sin embargo, son responsables de la eosinofilia del citoplasma, al teir con H-E, por ser acidfilas. Para su demostracin se utilizan mtodos histoqumicos enzimticos en el cual se marcan enzimas especficas del ciclo de Krebs. La clula vegetal, adems de las mitocondrias, presenta a los plastidios que cumplen funcin de reserva o como sintetizadores de carbohidratos, segn el tipo de tejido. Los cloroplastos posee una envoltura formadas por dos membranas y membranas interiores llamadas tilacoides, son plastidios propios de las partes verdes del vegetal y los encargados de realizar la fotosntesis. Adems, de las estructuras descritas, para la clula vegetal se describen estructuras tales como: una vacuola llamada vacuola de la clula vegetal que participa en la mantencin de la presin de turgencia de la clula y por sobre la membrana plasmtica existe la pared de la clula vegetal, que es la encargada de determinar y mantener la forma celular. Si bien la clula vegetal posee microtbulos se caracteriza por carecer de estructuras microtubulares permanentes como los centriolos. A travs de mtodos de tinciones es posible de verificar la existencia de algunas de las estructuras celulares descritas anteriormente, estas tinciones se aplican sobre tejidos y sern observadas a travs de MO. Al realizar este tipo de tinciones se debe tener en cuenta si el tejido utilizado posee la estructura que estamos buscando, y en qu zona del tejido y clulas est presente, adems, en que parte de la clula encontramos la estructura celular que nos interesa. Existen mtodos de tincin ms especfico que otros, por ejemplo, el mtodo de Cain destaca la existencia de mitocondrias, no observndose con claridad otras estructuras celulares, mientras que la hematoxilina de Weigert se utiliza para destacar la existencia del RER. Hay mtodos de tincin que usan ms de un colorante por lo que pueden teir varias estructuras celulares cada una con un color especfico, es el caso de la Hematoxilinaeosina que nos permite discriminar, por ejemplo, el nuclolo entre la cromatina del ncleo y los diferentes tipos de cromatina. Por tanto, no debe olvidar cual es el objetivo especfico de la tincin que est usando. El uso del ME ha permitido realizar las descripciones morfolgicas de los distintos componentes celulares con ms detalle, por lo que durante esta sesin revisaremos diapositivas de microfografa obtenidas con este medio de ampliacin.

PREGUNTAS 1.- Estas observando una muestra teida con Hematoxilina eosina, donde te llama la atencin que el citoplasma es muy basfilo. A qu se puede deber? Enumera todas las alternativas explicando las bases para cada una de ellas. Relacinalo con la posible funcin de la clula. 2. Qu actividades fisiolgicas celulares son comandadas por los centriolos? Las clulas vegetales realizan dichas funciones? 3. Averigua que son los microsomas. Para qu se usan? 4. A que corresponden los corpsculos de Nissl. Para qu tipo celular se describen?

5.

Problema: Tienes clulas provenientes de un cultivo de tejido al que le fue aplicada una droga llamada citocalasina y posteriormente se realiz un frote en el que se observa un nmero importante de clulas con dos ncleos, lo que no corresponde al tipo celular. Qu explicacin le daras al fenmeno?

ACTIVIDADES OBJETIVOS - Reconocer estructuras intracelulares con el microscopio compuesto fotnico y electrnico. - Familiarizar al estudiante con las dimensiones submicroscpicas de las estructuras con las cuales va a trabajar durante el transcurso de la asignatura. DESARROLLO DEL PRACTICO 1.- Retculo Endoplsmico: Observe un corte histolgico transversal de ganglio espinal humano teido con Hematoxilina de Weigert. Identifique neuronas de gran tamao y observe con atencin el citoplasma con el aumento mayor. Discuta con su profesor la funcionalidad y el dinamismo de dicha estructura subcelular. Esquematice y rotule. 2.- Observe diapositivas que muestran micrografas electrnicas del retculo endoplsmico y analice y discuta los procesos de sntesis y translocacin de protenas en el RE. 3.- El Complejo de Golgi: Observe un corte histolgico transversal de ganglio humano teido con la tcnica argntica Da Fano. Describa la localizacin del Complejo de Golgi y ascielo con su rol biolgico en este tipo celular. Haga un esquema de lo observado. 4.- Analice una micrografa electrnica de cortes que muestran el sistema de Golgi. Observe su ultraestructura. Rotule. 5.- Mitocondrias Observe un corte histolgico de Rin teido con hematoxilina frrica . En la parte ms externa del tejido (la parte ms ancha del corte), corteza, observe las clulas de los tbulos contorneados proximales y reconozca la existencia de mitocondrias. Indique forma, tamao y ubicacin. Dibuje y rotule. 6.- Analice una micrografa electrnica de una mitocondria. Observe su ultraestructura. Rotule.