Universidade Federal de So Carlos Campus Sorocaba Engenharia Florestal Fisiologia Vegetal

Nodulao

Equipe 04

Sorocaba Novembro/2012

INTRODUO
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Um dos elementos essncias requeridos pela planta o nitrognio. Mesmo que disponveis ao metabolismo vegetal, compostos nitrogenados em formas aproveitveis pela planta no so abundantes em ambientes naturais. Devido a isto, plantas e organismos de modo geral usam os compostos nitrogenados de maneira econmica, renovando protenas e macromolculas nitrogenadas. Macro e microrganismos tm desenvolvido mecanismos para aproveitar, conservar e reciclar o nitrognio disponvel de forma eficiente. A aplicao do nitrognio fixado em alta dosagem aumenta sua absoro, podendo levar ao acmulo de nitrato no tecido. Isto no causa toxidez na planta, mas pode desencadear problemas fisiolgicos graves em humanos (Campbell, 1999).

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O nitrognio tem vrios papeis na planta, mas destaca-se sua participao na sntese de aminocidos, constituinte de protenas, e na formao de cidos nuclicos e outros compostos importantes no metabolismo celular. Todas essas macromolculas so fundamentais nos organismos vivos (Marenco e Lopes, 2009).

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O nitrognio ocorre na natureza de diversas formas, com contnua interconverso dessas formas por meio de processos fsicos, qumicos e biolgicos, que constituem o ciclo biogeoqumico do nitrognio. Mesmo que o N2 penetre na planta atravs dos estmatos, os vegetais superiores no podem us-lo diretamente, devido ausncia da enzima necessria para reduzi-lo forma aproveitvel pela planta. Sendo assim, o N2 que entra na folha difunde-se para a atmosfera sem sofrer nenhuma alterao em sua estrutura molecular. A maior parte do nitrognio fixado provm da fixao biolgica. J a fixao intermediada por processos industriais contribui com, aproximadamente, 30% do total de nitrognio fixado (Marenco e Lopes, 2009).

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O nitrognio um elemento em constante mobilidade na planta. Sendo assim, sua deficincia manifesta-se primeiramente nas folhas mais velhas, prximo base da planta. Os sintomas de deficincia de nitrognio apresentam-se como amarelecimento, chamado de clorose. Ao apresentar deficincia de nitrognio, a planta pode produzir caules mais finos e lenhosos, provavelmente devido ao acmulo de carboidratos,
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podendo tambm acumular antocianinas devido ao redirecionamento do excesso desse carboidrato para a sntese de tais pigmentos. Nessas condies, observa-se uma colorao prpura nas folhas, nos pecolos e caules de algumas plantas, como ocorre no tomateiro e no milho (Taiz e Zeiger, 2002).

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Aps ser reduzido a formas aproveitveis, o N2 pode ser incorporado na biomassa vegetal, sendo que as plantas absorvem principalmente NO3- e NH4+. Alm de nitrato e amnio, em circunstncias especiais, algumas formas de nitrognio orgnico do solo tambm podem ser absorvidas pela planta. Como parte do ciclo, o N2 contido na biomassa vegetal pode passar pela cadeia alimentar, para outros organismos que liberam continuamente parte do nitrognio absorvido para o meio. Aps a decomposio de restos de animais, vegetais e organismos em geral, formado nitrognio orgnico (Norg), que , posteriormente, convertido a amnio (amonificao) pelos organismos presentes no solo. A converso de N-amoniacal em N-ntrico (nitrificao) realizada por bactrias nitrificadoras. O nitrognio mineralizado pode ser absorvido pelas plantas ou lixiviado para o lenol fretico. Parte do NO3- lixiviado pode levar a contaminao de fontes de gua potvel. Pelo processo de desnitrificao, o nitrato ou nitrito pode ser convertido em N2 e retornar para a atmosfera. Parte do amnio (NH4) pode ser convertida em amnia (NH3) e volatilizar para a atmosfera (Kerbauy, 2004).

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No processo de amonificao, intermediado por bactrias amonificadoras, os compostos nitrogenados contidos em restos de animais vegetais so convertidos em compostos mais simples, principalmente em N-NH4. As reaes de nitrificao desempenham funo metablica importante nas bactrias autotrficas. A nitrificao tem grande importncia ecolgica e agronmica, pois fertilizantes amoniacais (N-NH4) so velozmente convertidos em ntricos (N-NO3-). A desnitrificao conduzida por bactrias anaerbias ou anaerbias facultativas. Substratos e produtos especficos no esto bem definidos entre as bactrias desnitrificadoras: algumas usam somente nitrato ou nitrito, enquanto outras podem utilizar ambos (Tortora et al., 2005).

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O processo pelo qual o N2 reduzido a NH3, conduzido por organismos procariotos, chamado de fixao biolgica. Os microrganismos fixadores incluem bactrias livres que vivem ao solo, cianobactrias (algas verde-azuladas) que vivem na
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superfcie da gua ou solo, algas verde-azuladas em associaes simbiticas com fungos nos liquens ou pequenas pteridfitas, um actinomiceto e as bactrias que vivem em associao ou simbiose com razes especialmente de leguminosas.

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Nas leguminosas e em uma espcie do gnero Parasponia, o endossimbionte uma bactria do tipo rizbio. Aproximadamente 220 espcies vegetais, distribudas em 25 generos e oito famlias, podem formar ndulos com a bactria filamentosa Frankia. Em conjunto, esse grupo de plantas chamado de plantas actinorrzicas, sendo a maioria eudicotiledneas, arbustos lenhosos ou rvores. A maioria das plantas actinorrzicas reconhecida como pioneira, tm crescimento rpido e adaptam-se bem a stios de alta luminosidade e solos pobres (Sprent e Parsons, 2000).

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Embora cerca de 90% das leguminosas possam formar ndulos (Salisbury e Ross, 1992) que atuam na fixao de N2, algumas espcies madeireiras desta famlia, como Caesalpinia echinata, Parkia biglobosa e Dipteryx odorata, formam parte de um pequeno numero de leguminosas em que ndulos no tm sido encontrados (Sprent e Parsons, 2000).

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A fixao biolgica de N2 realizada por organismos procariotos, que possuem em comum a enzima nitrogenase. um processo importante para a manuteno de um adequado balano nutricional em muitas espcies (Marenco et al., 1993).

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O grupo das bactrias anaerbias representado pelo gnero Clostridium, que tem distribuio universal no solo e apresenta alta resistncia a condies desfavorveis. C. pasteurianum multiplica-se rapidamente quando as condies de umidade e nutrientes so favorveis, fixando uma substancial quantidade de N2 no campo (Burns e Hardy, 1975), mas a presena de NH4 ou NO3- no solo reduz drasticamente a capacidade dessa bactria fixar N2. As bactrias anaerbias facultativas multiplicam-se independentemente da concentrao de oxignio no meio, mas a fixao de N2 realizase somente em condies anaerbias (Burris, 1976). As bactrias aerbias fixadoras de N2 caracterizam-se por sua ampla distribuio no solo e em ambientes aquticos.

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No levando em conta o micrbio envolvido, a fixao de N2 intermediada pela nitrogenase, uma enzima do procarioto que catalisa duas reaes simultaneamente: a converso de N2 em NH3 e a converso de dois prtons em gs H2 (Layzell, 1990; Christiansen et al., 2001). Essa enzima pode tambm catalisar outras reaes, incluindo a reduo de acetileno para etileno, reao que serve de base para avaliar a atividade da enzima e estimar a taxa de fixao de N2. Concentraes de O2 relativamente baixas provocam a perda da atividade da nitrogenase, tornando necessria a manuteno de um controle rigoroso dos nveis de O2 no ambiente enzimtico. Nas razes, o ATP e o agente redutor NADPH, necessrios para a fixao de N2 em associaes simbiticas, so provenientes dos fotoassimilados produzidos pela planta. Dessa maneira, a quantidade de fotoassimilados disponveis para o ndulo pode-se tornar um fator limitante da fixao de N2 quando outros rgos da planta passam a serem drenos prioritrios (Quebedaux et al., 1975). Portanto, fatores que aumentam a disponibilidade de fotoassimilados para os ndulos, como alta luminosidade, abundncia de rea foliar e alta concentrao de CO2 no meio, aumentam a taxa de fixao de N2. Os requerimentos energticos diretos para a converso de uma molcula de N2 em duas de NH3 so de 16 ATP, mas, levando em conta os indiretos, como a respirao de manuteno de ndulo, so gastos de 35 a 40 ATP para cada molcula de N2 fixada.

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Os rizobios, bactrias que fixam N2 em associao simbitica com leguminosas, persistem no solo saprofitamenete at infestarem as razes do hospedeiro, com qual passam a firmar uma simbiose perfeita. No hospedeiro provocam a formao de pequenos ndulos, onde as bactrias se multiplicam e recebem fotoassimilados da planta e proteo contra adversidades do meio, enquanto que a bactria fornece NH4+ planta, elemento este proveniente da fixao de N2 (Marenco e Lopes, 2009).

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Os ndulos envolvidos na fixao de N2 tm formas e tamanhos variados. Nas leguminosas podem ser arredondados e relativamente pequenos (4 a 7 mm de dimetro), como os da soja, ou de crescimento indeterminado, como em Acacia. Em algumas rvores, como Andira inermis, os ndulos podem atingir vrios centmetros de comprimento e largura, com camadas externas escuras e lignificadas (Sprent e Parsons, 2000). Nas plantas actinorrzicas, a fixao de N2 no ocorre em ndulos verdadeiros, mas em razes laterais modificadas para esse fim. Nessas plantas, cada lbulo nodular
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tem um cilindro vascular central, estando o endfito confinado aos tecidos corticais (Tjepkema et al., 1986).

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A formao do ndulo tem inicio quando flavonides e outros compostos produzidos pela planta estimulam a bactria a produzir sinais hormonais, conhecidos como fatores de nodulao, que desencadeiam uma variedade de respostas na planta, que levam invaso bacteriana e nodulao (Tirichine et al., 2000).

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Normalmente a infeco ocorre atravs do pelo radicular, que se curva no sitio da infeco, mas, em espcies como Arachis e Stylosanthes, a penetrao pode ocorrer atravs de pequenas rachaduras na epiderme da raiz. A migrao do rizbio para o pelo consequncia de uma resposta quimiottica intermediada por sinalizadores qumicos, produzidos pelas razes na forma de exsudatos, tais como flavonoides e isoflavonides (Bais et al., 2006). A adeso do rizbio superfcie da raiz provavelmente intermediada por lectinas produzidas pelo hospedeiro (Gibson, 1990). Em resposta infeco, o pelo radicular curva-se e o rizbio aderido superfcie do pelo, na rea da curvatura, visualmente digere a parede celular e causa a invaginao do plasmalema, o que d origem ao filamento de infeco, uma estrutura tubular cheia de rizbios. Esse filamento cresce para a base do pelo, adentrando nas clulas do crtex, podendo atingir as clulas prximas do periciclo. Nas clulas do crtex, as bactrias liberam substancias que estimulam a diviso celular, levando a formao do ndulo.

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Durante o processo de formao do ndulo, as bactrias mudam seu formato, aumentam de volume e perdem a motilidade, passando a ser chamadas de bacteroides. Nas clulas do crtex, os bacteroides no esto dispersos isoladamente no citoplasma, mas envolvidos numa membrana celular, conhecida como peribacteroide. A intensa diviso celular nas clulas do crtex, com a presena do endfito, da origem ao ndulo maduro. Nesse estado, aproximadamente 90% das clulas do ndulo esto infectadas com o endfito. Dessa maneira, os ndulos so formados de clulas tetraploides, que contm bacteroides e clulas diploides no infectadas, mas participam de reaes envolvidas no metabolismo do nitrognio fixado. Os bacteroides, agrupados de quatro a seis e no mximo 12, formam pequenas vesculas no citoplasma da clula hospedeira. Nas camadas internas do ndulo, h uma barreira que restringe a difuso de oxignio,
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favorecendo a atividade da nitrogenase, mas comprometendo a atividade respiratria do simbionte (Layzell, 1990). Dessa maneira, no citoplasma da clula hospedeira, se encontra a leg-hemoglobina, protena que atua no controle do fluxo de oxignio para o bacteroide. Em leguminosas, a presena dessa protena no ndulo determina a colorao avermelhada, caracterstica de ndulos ativos. O controle do nvel de oxignio no bacteroide essencial, pois nveis altos levam a inativao da nitrogenase e nveis baixos inibem o ciclo de Krebs e, consequentemente, a sntese de ATP no bacteroide (Appleby, 1984; Schubert, 1986; Santana et al., 1998).

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A formao de ndulo de extrema complicao e delicadeza, pois deve ocorrer uma interao balanceada entre a bactria e o hospedeiro. Em algumas leguminosas, a especificidade chega s estirpes de rizbio, sendo relacionada com o tipo de polissacardeo produzido pela bactria e a lectina ou fito-hemaglutinina produzida pela planta.

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Vrios fatores podem regular a fixao de N2 nas associaes simbiticas, como a translocao de carboidratos para o ndulo, a disponibilidade de oxignio e o efeito da retroalimentao do nitrognio fixado na atividade da nitrogenase (Schulze, 2004). A disponibilidade de nutrientes, o pH do solo, a temperatura e o estado hdrico da planta tambm podem influenciar a nodulao e a fixao de N2. Alta disponibilidade de nitrognio combinado (nitrato, amnio) reduz a atividade da enzima nitrogenase. Entretanto, a disponibilidade de pequenas quantidades de nitrognio combinado no solo, nas primeiras semanas do ciclo da planta, favorece a fixao de N2 pelo efeito positivo do nitrognio na fotossntese e nos processos metablicos que levam a formao da massa nodular. No entanto, em solos de fertilidade moderada, as pequenas quantidades de nitrognio combinado requeridas no incio do ciclo da cultura podem ser supridas pela mineralizao da matria orgnica do solo (Marschner, 1995).

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A relao entre o simbionte, Frankia e rizbio, e a planta hospedeira pode ser resumida em uma troca de carbono por nitrognio entre a planta e o endfito localizado nos ndulos. A dependncia dos ndulos do carbono e nitrognio da planta hospedeira permanente, pois continua em ndulos que fixam N2 ativamente. Porem, em ndulos ativos, a quantidade de nitrognio exportada pelo xilema muito maior do que a
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recebida pelo floema. Os ndulos constituem um dos drenos importantes para a planta pois recebem de 15 a 30% dos fotoassimilados produzidos durante a fotossntese. Esses compostos so usados como substratos na produo de energia e como esqueletos de carbonato requeridos para: crescimento e manuteno do ndulo; reaes que consomem energia associada com a reduo de N2 no endfito e a assimilao do amnio no citosol da clula hospedeira; na sntese de compostos orgnicos que contm nitrognio e participam da exportao de nitrognio de ndulo para a parte area. Os compostos solveis nitrogenados transportados via xilema, do ndulo para as partes areas da planta contribuem com o deposito ou reserva de nitrognio solvel. Devido demanda de N, esses compostos so retirados deste deposito de nitrognio e catabolizados, liberando NH4+ e outros subprodutos. Aps, os produtos do catabolismo so reassimilados, dando origem aos diversos aminocidos necessrios para a sntese de outros metablitos e macromolculas. Portanto, esta reciclagem engloba catabolismo, reassimilaao e ressntese de metablitos nitrogenados (Schubert, 1986).

MATERIAIS E MTODOS
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RESULTADOS E DISCUSSO

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