DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO METODO TRADICIONAL DBO 5-das CDIGO GENERAL 007 1. SUMARIO Y APLICACIONES 1.

La demanda bioqumica de oxgeno (DBO) es una prueba usada para la determinacin de los requerimientos de oxgeno para la degradacin bioqumica de la materia orgnica en las aguas municipales, industriales y en general residuales; su aplicacin permite calcular los efectos de las descargas de los efluentes domsticos e industriales sobre la calidad de las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la prueba de la DBO se utilizan en ingeniera para disear las plantas de tratamiento de aguas residuales. 2. La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el oxgeno requerido por los organismos en sus procesos metablicos al consumir la materia orgnica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones estndar del ensayo incluyen incubacin en la oscuridad a 20C por un tiempo determinado, generalmente cinco das. Las condiciones naturales de temperatura, poblacin biolgica, movimiento del agua, luz solar y la concentracin de oxgeno no pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar en cuenta los factores anteriores para lograr una adecuada interpretacin. 3. Las muestras de agua residual o una dilucin conveniente de las mismas, se incuban por cinco das a 20C en la oscuridad. La disminucin de la concentracin de oxgeno disuelto (OD), medida por el mtodo Winkler o una modificacin del mismo, durante el periodo de incubacin, produce una medida de la DBO. 2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS 1. Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de la materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos factores. 2. DBO carboncea contra nitrogencea. La oxidacin de las formas reducidas del nitrgeno como amoniaco y nitrgeno orgnico, mediada por los microorganismos, ejercen una demanda nitrogencea, que ha sido considerada como una interferencia en la prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada con la adicin de inhibidores qumicos. Cuando se inhiba la demanda nitrogencea de oxgeno, reportar los resultados como demanda bioqumica de oxgeno carboncea (DBOC5); cuando no se inhiba, reportar los resultados como DBO5. 1. Requerimientos de dilucin. Si el agua de dilucin es de baja calidad, su DBO aparecer como DBO de la muestra, efecto que ser amplificado por el factor de dilucin, y el resultado tendr una desviacin positiva. El mtodo de anlisis debe incluir agua de dilucin de verificacin y agua de dilucin como blanco para establecer su calidad, mediante la medicin del consumo de oxgeno con una Cdigo

mezcla orgnica conocida, generalmente glucosa y cido glutmico. La fuente del agua de dilucin puede ser: destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgnicas biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El agua destilada puede contener amoniaco o compuestos orgnicos voltiles; el agua desionizada tambin puede estar contaminada con compuestos orgnicos solubles lixiviados del lecho de la resina; el uso de destiladores con conductos o accesorios de cobre en las lneas de agua destilada pueden producir agua con cantidades excesivas de cobre, que acta como biocida. 3. TOMA Y PRESERVACIN DE MUESTRAS 1. Las muestras para determinacin de la DBO se deben analizar con prontitud; si no es posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelacin, ya que se pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos. Sin embargo, es necesario mantenerlas el mnimo tiempo posible en almacenamiento, incluso si se llevan a bajas temperaturas. Antes del anlisis calentarlas a 20C. 1. Muestras simples. Si el anlisis se emprende en el intervalo de 2 h despus de la reco-leccin no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4C o menos; reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de almacenamiento. Bajo ningn concepto iniciar el anlisis despus de 24 h de haber tomado la muestra; las muestras empleadas en la evaluacin de las tasas retributivas o en otros instrumentos normativos, deben ser analizadas antes de que transcurran 6 h a partir del momento de la toma. 2. Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4C o menos durante el proceso de composicin, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del perodo de composicin. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte de los resultados. 4. APARATOS 1. Botellas de incubacin para la DBO, de 250 a 300 mL de capacidad. Lavarlas con detergente, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su uso. Para evitar la entrada de aire en la botella de dilucin durante la incubacin, se debe utilizar un sello de agua, que se puede lograr satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un bao de agua o adicionando agua en el reborde cncavo de la boca de las botellas especiales para la DBO. Colocar una copa de papel o plstica o un capuchn metlico sobre la boca de la botella para reducir la evaporacin del sello de agua durante la incubacin. 2. Incubadora de aire o bao de agua, controlada termostticamente a 20 1C; excluir cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de produccin fotosinttica de OD. 5. REACTIVOS

1. Solucin tampn de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos. 2. Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y diluir a 1 L. 3. Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1L. 4. Solucin de cloruro frrico: Disolver 0,25g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L 5. Soluciones cida y alcalina, 1 N, para neutralizacin de muestras custicas o cidas. 1) Acido. A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y mientras se agita, 28 mL de cido sulfrico concentrado; diluir a 1 L. 2) Alcali. Disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L. 6. Solucin de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua destilada. Esta solucin no es estable y se debe preparar diariamente. 7. Inhibidor de nitrificacin: 2-cloro-6-(triclorometil)piridina. 8. Solucin de glucosa-cido glutmico: Secar a 103C por 1 h glucosa y cido glutmico grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de cido glutmico en agua destilada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su uso. 9. Solucin de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua destilada, ajustar el pH a 7,2 con solucin de NaOH, y diluir a 1 L. La solucin contiene 0,3 mg de N/mL. 6. PROCEDIMIENTO 1. Preparacin del agua de dilucin. Colocar la cantidad de agua necesaria en una botella y agregar por cada litro, 1 mL de cada una de las siguientes soluciones: tampn fosfato, MgSO4, CaCl2, y FeCl3. El agua de dilucin se puede inocular como se describe en 6.4; chequear y guardar como se describe en 6.2 y 6.3, de tal manera que siempre se tenga disponible. Llevar el agua de dilucin a una temperatura de 20C antes de su uso; saturarla con OD por agitacin en una botella parcialmente llena, por burbujeo de aire filtrado libre de materia orgnica, o guardarla en botellas lo suficientemente grandes con tapn de algodn, para permitir su saturacin. Emplear material de vidrio bien limpio para proteger la calidad del agua. Verificacin del agua de dilucin. Aplicar este procedimiento como una forma de verificacin bsica de la calidad del agua de dilucin. Si el agua consume ms de 0,2 mg de oxgeno/L se debe mejorar su purificacin o

emplear agua de otra fuente; si se usa el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin, el agua de dilucin inolculada, se debe guardar en un sitio oscuro a temperatura ambiente hasta que el consumo de oxgeno se reduzca lo suficiente para cumplir el criterio de verificacin. Confirmar la calidad del agua de dilucin almacenada que est en uso, pero no agregar semilla para mejorar su calidad. El almacenamiento no es recomendable cuando se va a determinar la DBO sin inhibicin de nitrificacin, ya que los organismos nitrificantes se pueden desarrollar en este perodo. Revisar el agua de dilucin para determinar la concentracin de amonio, y si es suficiente despus del almacenamiento; de lo contrario, agregar solucin de cloruro de amonio para asegurar un total de 0,45 mg de amonio como nitrgeno/L. Si el agua de dilucin no ha sido almacenada para mejorar su calidad, agregar la cantidad suficiente de semilla para producir un consumo de OD de 0,05 a 0,1 mg/L en cinco das a 20C. Llenar una botella de DBO con agua de dilucin, determinar el OD inicial, incubar a 20C por 5 das y determinar el OD final como se describe en 6.8 y 6.10. El OD consumido en este lapso no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferiblemente menor de 0,1 mg/L. Chequeo con glucosa-cido glutmico. Debido a que la prueba de la DBO es un bioensayo, sus resultados pueden estar muy influenciados por la presencia de sustancias txicas o por el uso de semillas de mala calidad. Muchas veces el agua destilada puede estar contaminada con cobre, o algunos inculos de aguas residuales pueden ser relativamente inactivos, y si se emplean tales aguas o inculos siempre se van a obtener bajos resultados. Controlar peridicamente la calidad del agua de dilucin, la efectividad de las semillas y la tcnica analtica, por mediciones de la DBO para compuestos orgnicos puros y muestras con adiciones conocidas. En general, para determinaciones de la DBO que no requieran una semilla adaptada, usar como solucin estndar de chequeo una mezcla de 150 mg de glucosa/L y 150 mg de cido glutmico/L. La glucosa tiene una velocidad de oxidacin excepcionalmente alta y variable, pero cuando es empleada con cido glutmico se estabiliza, y es similar a la obtenida con aguas residuales municipales. Si un agua residual contiene un constituyente mayoritario identificable, que contribuye a la DBO, usar este compuesto en remplazo de la mezcla de glucosacido glutmico. Determinar la DBO5 a 20C de una dilucin al 2% de la solucin estndar de chequeo glucosa-cido glutmico mediante las tcnicas descritas en los numerales 6.4 a 6.10. Evaluar los datos como se describe en la seccin de Precisin. Inoculacin. 1. Origen de las semillas o inculo. Es necesario que en la muestra est presente una poblacin de microorganismos capaces de oxidar la materia orgnica biodegradable. Las aguas residuales domsticas no cloradas, los efluentes no desinfectados de plantas de tratamiento biolgico, y las aguas superficiales que reciben descargas residuales contienen poblaciones satisfactorias de microorganismos. Algunas muestras no contienen una poblacin microbiana

suficiente (por ejemplo, efluentes industriales sin tratamiento, aguas desinfectadas, efluentes con elevada temperatura o con valores extremos de pH), por tanto deben inocularse por adicin de una poblacin adecuada de microorganismos. La semilla o inculo preferible es el efluente de un sistema de tratamiento biolgico, en su defecto, el sobrenadante de aguas residuales domsticas despus de dejarlas decantar a temperatura ambiente por lo menos 1 h pero no ms de 36 h. Cuando se emplee el efluente de un proceso de tratamiento biolgico, se recomienda aplicar el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin. Algunas muestras pueden contener materiales no degradables a las tasas normales de trabajo de los microorganismos; inocular tales muestras con una poblacin microbiana adaptada, obtenida a partir de efluentes sin desinfectar de un proceso de tratamiento biolgico de aguas residuales. Tambin se puede obtener la semilla en el cuerpo de agua receptor del vertimiento, preferiblemente de 3 a 8 Km despus del punto de descarga. Cuando no se disponga de ninguna de dichas fuentes del inculo, desarrollar en el laboratorio una semilla adaptada, por aireamiento continuo de una muestra clarificada de agua residual domstica y adicin de pequeos incrementos diarios de aguas residuales. Para obtener la poblacin microbiana inicial, usar una suspensin de suelo, un lodo activado, o una preparacin a partir de semilla comercial. Ensayar el rendimiento de la semilla haciendo pruebas de la DBO en las muestras hasta obtener una poblacin satisfactoria. Si los valores de la DBO aumentan con el tiempo hasta un valor constante, se consideran como un indicio de la adaptacin sucesiva de la semilla o inculo. 1. Control de inculos. Determinar la DBO del material inoculante como si se tratara de una muestra. De este valor y del conocimiento del dato del agua de dilucin determinar el OD consumido. Hacer las diluciones necesarias hasta obtener una disminucin de por lo menos el 50% del OD. La grfica de la disminucin de OD expresada en miligramos por litro contra los mililitros de inculo, origina una recta cuya pendiente debe interpretarse como la disminucin de OD por mililitro de inculo. La intercepcin de la recta con el eje de los valores de reduccin del OD representa la disminucin del oxgeno provocada por el agua de dilucin, valor que debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver 6.8). Con el objeto de corregir el valor de OD consumido por una muestra, se debe restar a ste el consumido por el inculo. El consumo de OD del agua de dilucin ms el inculo puede estar en el intervalo de 0,6 a 1,0 mg/L. En el numeral 6.6 se describen las tcnicas para adicin de material inoculante al agua de dilucin, para dos mtodos de dilucin de muestras. Blanco de agua de dilucin. Con el objeto de verificar la calidad del agua de dilucin sin inculo y la limpieza de los materiales, usar una porcin de la misma y llevarla junto con las muestras a travs de todo el procedimiento. El OD consumido por el agua de dilucin debe ser menor de 0,2 mg/L y preferiblemente no mayor de 0,1 mg/L.

Pretratamiento de la muestra. 1. Muestras con alcalinidad custica o acidez. Neutralizar las muestras a pH entre 6,5 y 7,5 con una solucin de cido sulfrico (H2SO4) o hidrxido de sodio (NaOH) de concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en ms de 0,5%. La menor dilucin de muestra no debe afectar el pH dado por el agua de dilucin inoculada. 2. Muestras con compuestos residuales de cloro. Evitar las muestras que contengan cloro residual; tomarlas antes del proceso de cloracin; si la muestra ha sido clorada pero no presenta cloro residual detectable, inocular el agua de dilucin; si hay cloro residual, declorar la muestra e inocular el agua de dilucin (ver 6.7). No ensayar las muestras que han sido decloradas, sin inocular el agua de dilucin. En algunas muestras, el cloro se elimina si se dejan 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder durante el transporte y manejo de la muestra. Para muestras en las cuales el cloro residual no se disipa en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual por adicin de solucin de Na2SO3. El volumen de Na2SO3 requerido se determina en una porcin de 100 a 1 000 mL de la muestra, previamente neutralizada, por la adicin de 10 mL de cido actico 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL de solucin de yoduro de potasio (10 g KI/100 mL), por cada 1000 mL de muestra; el volumen resultante se titula con solucin de Na2SO3 hasta su punto final, determinado por el indicador almidn-yodo. Se agrega a la muestra neutralizada, el volumen relativo de solucin de Na2SO3 determinado, se mezcla bien y se deja en reposo cerca de 10 a 20 minutos. Ensayar la muestra para determinar el cloro residual. (NOTA: Un exceso de Na2SO3 en la muestra, consume oxgeno y reacciona con ciertas cloraminas orgnicas que pueden estar presentes en muestras tratadas). 3. Muestras contaminadas con sustancias txicas. Las muestras de aguas residuales provenientes de industrias, por ejemplo electroqumicas, contienen metales txicos. Estas muestras requieren de estudios especiales y deben ser tratadas antes de medirles la DBO. 4. Muestras sobresaturadas con OD. En muestras procedentes de aguas muy fras o de aguas en que la produccin primaria es alta, los valores de OD a 20C suelen ser mayores de 9 mg de OD/L. Para prevenir prdidas de oxgeno durante la incubacin, llevar la temperatura de la muestra a 20C en una botella parcialmente llena, mientras se sacude fuertemente o se burbujea aire comprimido filtrado y limpio. 5. Ajuste de temperatura de la muestra. Llevar las muestras a 20 1C antes de hacer las diluciones. 6. Inhibicin de la nitrificacin. A las muestras contenidas en botellas de 300 mL se agregan 3 mg de 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina (TCMP) o se puede agregar directamente al agua de dilucin para lograr una concentracin final de aproximadamente 10 mg de TCMP/L. (NOTA: Es posible que la TCMP se disuelva lentamente y permanezca flotando en la superficie de la muestra; algunas formulaciones comerciales se disuelven ms fcilmente pero no son 100% puras, por lo que se debe ajustar la dosificacin). Las muestras que requieren el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin incluyen: efluentes tratados biolgicamente, muestras inoculadas con efluentes tratados biolgicamente, y aguas

de ro, pero no se limitan necesariamente a estas. En el reporte de los resultados registrar el uso del procedimiento de inhibicin de la nitrificacin. Tcnica de dilucin. Los resultados ms acertados se obtienen con diluciones de muestra en las que los valores de OD residual son por lo menos 1 mg/L y un consumo de OD de por lo menos 2 mg/L despus de los 5 das de incubacin. La experiencia con muestras de diferente origen permiten optimizar el nmero de diluciones requeridas; la correlacin de la DQO con la DBO puede constituir una gua efectiva para la seleccin de las diluciones ms convenientes. Si no se dispone de esta metodologa, se pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 % para efluentes lquidos industriales, 1 a 5 % para efluentes industriales no tratados y decantados, 5 a 25 % para efluentes con tratamiento secundario o biolgico, y 25 a 100 % para corrientes contaminadas. Las diluciones se efectan en probetas y luego se transfieren a las botellas de DBO, o se preparan directamente en las botellas. Cualquiera de los dos mtodos de dilucin puede combinarse con cualquier tcnica para medicin de OD. El nmero de botellas a ser preparadas para cada dilucin depende de la tcnica de anlisis del OD y del nmero de rplicas deseadas. Cuando sea necesaria la inoculacin, agregar la semilla directamente al agua de dilucin o a cada probeta o botella de DBO antes de la dilucin. La inoculacin en las probetas evita la disminucin de la relacin semilla:muestra cuando se hace un incremento en las diluciones. 1. Diluciones preparadas en probeta. Si se emplea el mtodo modificado de la azida para la medicin de OD, transvasar cuidadosamente el agua de dilucin -inoculada si es necesario-, hasta llenar la mitad de una probeta de 1 a 2 L de capacidad por medio de sifn para evitar la entrada de aire. Agregar la cantidad deseada de muestra cuidadosamente mezclada y diluir al nivel apropiado con agua de dilucin; mezclar bien con una varilla tipo mbolo y evitar la entrada de aire. Trasvasar la dilucin a dos botellas de DBO por medio de sifn. Determinar el OD inicial en una de estas botellas. Tapar hermticamente la segunda botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20C. Si se determina el OD por el mtodo de electrodo de membrana, transvasar la mezcla de dilucin a una botella DBO por medio de sifn. Determinar el OD inicial en esta botella, descartar el residuo y llenar nuevamente la botella con la muestra diluida. Tapar hermticamente la botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20C. 2. Diluciones preparadas directamente en botellas DBO. Con una pipeta de boca ancha agregar el volumen de muestra deseado a diferentes botellas para DBO de volumen conocido. Agregar, a cada botella o al agua de dilucin, las cantidades apropiadas de semilla; llenar las botellas con suficiente agua de dilucin, inoculada si es necesario, de tal manera que al insertar el tapn se desplace todo el aire, sin dejar burbujas. Para diluciones mayores de 1:100 hacer una dilucin preliminar en una probeta antes de hacer la dilucin final. Preparar dos botellas de cada dilucin cuando se empleen los mtodos yodomtricos de volumetra para la medicin del OD; determinar el OD inicial en una de las dos botellas, tapar hermticamente la segunda botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20C. Si se emplea el mtodo

de electrodo de membrana para la medicin de OD, preparar solamente una botella de DBO por cada dilucin; determinar el OD inicial en esta botella y remplazar cualquier contenido desplazado con agua de dilucin para llenar la botella. Tapar hermticamente, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20C. Enjuagar el electrodo de OD entre determinaciones para prevenir la contaminacin cruzada de las muestras. Determinacin del OD inicial. Si la muestra contiene sustancias que reaccionan fcilmente con el OD, es necesario determinar el OD antes de llenar la botella de DBO con la muestra diluida. Si el consumo de OD inicial es insignificante, el perodo entre la preparacin de la dilucin y la medida del OD inicial no es crtico. Emplear el mtodo modificado de la azida (mtodo yodomtrico) o el mtodo de electrodo de membrana, para determinar el OD inicial en todas las muestras diluidas, testigos y, si se considera necesario, en los controles de semilla. Incubacin. Incubar a 20 1C las botellas que contienen las diluciones, los controles de semilla, los blancos de agua de dilucin y los patrones de glucosacido glutmico. Hacer un sello de agua como se describe en 6.7. Determinacin del OD final. Determinar el OD en las muestras diluidas, los blancos y los patrones despus de 5 das de incubacin como se describe en 6.8. 7. CLCULOS 1. Cuando el agua de dilucin no ha sido inoculada: DBO5, mg/lt = (D1-D2)/P 2. Cuando el agua de dilucin ha sido inoculada: DB)5, mg/lt = {(D1-D2)-(B1-B2)*f }/P donde: D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente despus de la preparacin, mg/L, D2 = OD de la muestra diluida despus de 5 d de incubacin a 20C, mg/L, P = fraccin volumtrica decimal de la muestra empleada, B1 = OD del control de semilla antes de la incubacin, mg/L (seccin 6.1.4), B2 = OD del control de semilla despus de la incubacin, mg/L (seccin 6.1.4), y f= proporcin de semilla en la muestra diluida a la semilla en el control de semilla = (% de semilla en la muestra diluida)/(% de semilla en el control de

semilla). 3. Si el material inoculante se agrega directamente a la muestra o a las botellas de control: f=(volumen de semilla en la muestra diluida)/(volumen de semilla en el control de semilla) 4. Si se ha inhibido la nitrificacin, reportar los resultados como DBO5. 1. Los resultados obtenidos para las diferentes diluciones pueden ser promediados si se cumple con los requisitos de valores de OD residual de mnimo 1 mg/L y un consumo de OD de por lo menos 2 mg/L. Este promedio se puede hacer si no hay evidencia de toxicidad en las muestras menos diluidas o de alguna alteracin detectable. 2. En estos clculos no se hace correccin por el OD consumido por el blanco de agua de dilucin durante la incubacin. Esta correccin no es necesaria si el agua de dilucin cumple el criterio de blanco estipulado en el procedimiento. Si el agua de dilucin no cumple este criterio, la correccin es difcil y los resultados sern cuestionables. 8. PRECISIN 1. No existe un procedimiento aceptable para establecer la precisin y exactitud de la prueba de la DBO. El control de glucosa-cido glutmico prescrito est proyectado como un punto de referencia para la evaluacin de la calidad del agua de dilucin, la efectividad de la semilla, y la tcnica analtica. 2. Ochenta y seis analistas, pertenecientes a 58 laboratorios analizaron muestras de aguas naturales dosificadas con incrementos exactos de compuestos orgnicos, con valores promedios de DBO de 2,1 y 175 mg/L; su desviacin estndar fu de 0,7 y 26 mg/L, respectivamente. 3. Las pruebas realizadas en un laboratorio con una solucin de glucosa-cido glutmico de 300 mg/L, produjeron los siguientes resultados: Nmero de meses: 14 Nmero de triplicados: 421 Promedio recuperado mensualmente: 204 mg/L Desviacin estndar promedio mensual: 10,4 mg/L 4. Los estudios estadsticos de precisin y exactitud de las determinaciones de la DBO, realizados en ejercicios de intercalibracin que involucraron de 2 a 112 laboratorios, con diferentes analistas y semillas, en muestras sintticas que contenan glucosa y cido glutmico en proporcin 1:1 en el intervalo de

concentraciones de 3,3 a 231 mg/L, proporcionaron el promedio, X, y la desviacin estndar, S, a travs de las ecuaciones de regresin correspondientes: X = 0,658 (nivel agregado, mg/l) + 0,280 mg/L S = 0,100 (nivel agregado, mg/l) + 0,547 mg/L

Para el estndar primario de 300 mg/L, el promedio de DBO 5-d fue de 198 mg/L con una desviacin estndar de 30,5 mg/L.

5. Valores lmites de control: Debido a la gran variedad de factores que afectan las pruebas de la DBO en los estudios multilaboratorios y la consecuente disparidad en los resultados, se recomienda como valor lmite de control para laboratorios individuales una desviacin estndar ( 1S), la determinada en las pruebas interlaboratorios. Para cada laboratorio, establecer los valores lmites de control efectuando un mnimo de 25 anlisis de glucosa-cido glutmico (ver 6.3) en un perodo de algunas semanas o meses y calcular la media y la desviacin estndar. Emplear como valor lmite de control para futuros chequeos de glucosa-cido glutmico la media 3 desviaciones estndar; comparar los valores calculados para los ensayos de un solo laboratorio, presentados anteriormente, con los resultados interlaboratorios. Reevaluar los valores lmites de control si estos se ubican fuera del intervalo de 198 30,5 e investigar el origen del problema. Si la DBO medida para un patrn de glucosa-cido glutmico est fuera del intervalo aceptado, rechazar las pruebas hechas con tales semilla y agua de dilucin. 4. Iintervalo de trabajo: es igual a la diferencia entre el mximo OD inicial (7 a 9 mg/L) y el mnimo OD residual de 1 mg/L multiplicado por el factor de dilucin. Un lmite de deteccin ms bajo de 2 mg/L se establece para una disminucin del OD mnima de 2 mg/L.

DETERMINACION DE LA DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 METODO RESPIROMETRICO Por: Felipe Caldern Senz y Margarita Pavlova. Bogot, Enero 15 de 2001; Rev. Enero31/2001; Rev. Septiembre 22 de 2004; Oct 21 de 2005; Mayo 9 de 2007 Dr. Caldern Laboratorios. www.drcalderonlabs.com INTRODUCCION

Los siguientes mtodos aunque son vlidos en cualquier tiempo y lugar se hacen en la ciudad de Bogot Colombia, ubicada a 2540 metros sobre el nivel del Mar y una Presin baromtrica de 560 mm Hg. Estas condiciones afectan la disponibilidad de oxgeno disuelto disuelto en el agua y por consiguiente las condiciones en las cuales se realiza la prueba de la Demanda Bioqumica de Oxgeno en 5 das DBO5. ANTECEDENTES Desde principios de los aos de 1900s se han utilizado varios metodos para determinar el ndice de respiracin de bacterias para evaluar la capacidad de una poblacin bacteriana de quitar sustancias de las aguas residuales (tratabilidad, o biodegradabilidad) y para determinar el efecto de las sustancias en las bacterias (inhibicin o toxicidad). La tentativa ms antigua para utilizar la absorcin directa para medir la demanda del oxgeno de las aguas residuales fue hecha por Adney en 1890. El desarroll un tipo de aparato manomtrico de presin constante en el cual l observaba el ndice de la absorcin del oxgeno por el agua contaminada. A una presin constante, la disminucin del volumen, debido a la absorcin del oxgeno fue observada por la distancia que una columna del agua sube un un tubo vertical, graduado, en forma de "u" que conectaba dos recipientes, uno llenado parcialmente de la muestra, y el otro que contena un volumen igual de agua. El aparato entero fue colocado a una temperatura constante en un bao de agua, y agitado peridicamente para mantener un exceso del oxgeno disuelto en la muestra. Aunque Adney encontr que este mtodo era exacto, l concluy que no era conveniente para el trabajo rutinario. Rideal y Burgess (1909) utilizaron el aparato, pero lo encontraron insatisfactorio debido a los escapes que se producan en el curso de la agitacin. Sugirieron que el mtodo de la dilucin, con la incubacin de las botellas cerradas con la medida del oxgeno disuelto tanto antes como despus de la incubacin por un mtodo modificado de Winkler era ms exacto. Este mtodo fue el precursor de la prueba estndar BOD5. Sierp (1928) y otros revivieron y modificaron el aparato de aireacin directa de Adney "para reducir el dispendioso trabajo del mtodo de la dilucin y para producir lecturas rpidas, directas y frecuentes". El respirometro de Warburg (1926) usado extensivamente por Don Bloodgood en la universidad de Purdue y por H. Huekelekian en la universidad de Rutgers fu una modificacin del " manmetro de sangre-gas" desarrollado por Haldane y Barcroft (1902). El trabajo pionero de Sawyer, de Nichols y de Rohlich (1939) en el estudio y el desarrollo de las curvas de la utilizacin del oxgeno en lodos

activados, fue hecho usando los dispositivos manomtricos que ellos desarrollaron para satisfacer su necesidad de utilizar muestras ms grandes y de sistemas mas hermticos - Estos sistemas, sin embargo, requeran la adicin manual de aire atmosfrico para suplir el oxgeno. Analistas expertos eran necesarios para funcionar y vigilar visualmente las lecturas del manmetro. La interpretacin era aburrida y dispendiosa ya que no existian aparatos automatizados para la manipulacin de los datos. John W. Clark en la universidad de estado de nuevo Mjico a fines de los aos 50 desarroll y report un dispositivo en el cual el oxgeno fue generado por una pila electroltica, que tambin funcion como un manmetro, asociado a un reactor cerrado. Cuando el dispositivo es accionado por la reduccin de la presin en el recipiente de la prueba causado por el retiro qumico del CO2 generado por la respiracin bacteriana, el oxgeno fue producido por una corriente controlada de corriente continua. El valor integrado de la corriente proporcion una indicacin del oxgeno consumido. Una de las primeras aplicaciones de aparato Voith-Sapromat (desarrollado por Popel en 1964) fue un procedimiento manual para evaluar el efecto de varios deshechos en degradacin de la peptona. Liebmann y Offhaus tambin colaboraron en procedimientos para determinar la DBO5 y la toxicidad de algunos elementos en el agua.

BOTELLA RESPIROMETRICA DE DR. CALDERON LABORATORIOS LTDA.

FUNDAMENTOS

El Mtodo Respiromtrico, para la determinacin de la DBO5 se basa en medir el consumo de oxgeno, o la produccin de CO2, en una Botella Respiromtrica. Este objetivo se logra entre otras formas (Mtodo Manomtrico) midiendo la variacin de la presin en la botella, mediante un manmetro lo suficientemente sensible. Otros mtodos respiromtricos propiamente dichos miden la produccin de CO2 u otros gases como Metano, Anhdrido Sulfhdrico, etc. dentro de la botella. En el Mtodo Clsico, para la determinacin de la DBO5, se calcula la diferencia entre el Oxgeno Disuelto en la muestra o en una dilucin de la misma, entre el da 0 y el da 5. Este mtodo tiene muchas limitaciones, siendo una de las principales la pequea cantidad de oxgeno disponible en la muestra. Usualmente unos 10 mg/lt a nivel del mar, y menos de 7 mg/Lt a nivel de Bogot (2540 m.s.n.m.). Si tenemos en cuenta que la muestra deber terminar la prueba con al menos 1 mg/Lt, (algunas normas especifican terminar con al menos 2 mg/Lt) se observa que el oxgeno total disponible para la prueba ser alrededor de 5 mg/Lt. En el supuesto caso de que se trabajase con Botellas de 0.5 Lt de capacidad, la cantidad absoluta de oxgeno disponible sera de tan solo 2.5 mg. En la mayora de los Laboratorios usualmente se trabaja con Botellas de 300 ml., lo cual disminuye aun mas la cantidad de oxgeno disponible para la prueba. Esta pequea cantidad a determinar hace que pequeos errores en la manipulacin de la prueba produzcan grandes diferencias (errores) en el resultado. En el mtodo Respiromtrico, trabajando con botellas de 1 lt de capacidad, llenas con medio litro de muestra o dilucin de muestra, se cuenta hasta con 125 mg de Oxgeno, contenidos en el aire presente en la cmara superior de la botella. Y se puede contar aun con mayor cantidad de oxgeno en caso de trabajar con volmenes inferiores de muestra. En este caso, el oxgeno disuelto, fuere cual fuere su contenido inicial en la muestra (exceptuando muestras altamente sobresaturadas) no tiene casi incidencia en el resultado. Por lo general esta por debajo de 2.5 mg frente a los 125 mg presentes en la cmara superior. Esto es un error mximo del 2 %. ABSORCION DEL CO2 En el mtodo llamado mtodo manomtrico, se mide el vaco creado por el consumo de oxgeno causado por la muestra. Para que el mtodo basado en la medicin manomtrica del vaco causado en la botella funcione adecuadamente es necesario absorber el CO2 formado de alguna manera. De lo contrario no habra cambio de presin en las botellas ya que el

volmen de CO2 producido podra ser igual o casi igual al volmen de Oxgeno consumido. La absorcin del CO2 puede hacerse de varias maneras. 1. Adecuando el poder buffer de la solucin en ensayo para absorber la totalidad del CO2, en forma de Bicarbonato disuelto en el lquido y 2. Absorbiendo el CO2 mediante algn hidrxido alcalino en un recipiente apropiado en contacto con la fase gaseosa de la botella. En el presente artculo analizaremos ambas opciones aunque en principio consideramos que adecuar el poder buffer de la solucin de ensayo es especialmente adecuado para la determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno en 5 das en aguas y el mtodo de absorber el CO2 en un recipiente con reactivos especiales insertos en la botella respiromtrica es mas adecuado para la determinacin de la respiracin en muestras slidas como suelos, deshechos orgnicos, lodos secos etc. CAPACIDAD DE ABSORCION DE CO2 DEL SISTEMA DIFOSFATOMONOFOSFATO La cantidad de CO2 producida en el mtodo respiromtrico, al igual que la cantidad de oxgeno consumida, es relativamente mas grande que la producida en el mtodo clsico. Esto requiere entonces de una adecuacin del poder buffer de la solucin de ensayo. Para adecuar el poder buffer de la solucin de ensayo a las nuevas condiciones es necesario conocer la capacidad de absorcin del CO2 del sistema Difosfato-Monofosfato dentro del rango de pH permisible o compatible con un crecimiento adecuado de los microorganismos presentes en la muestra en ensayo. Como base terica para la absorcin del CO2 dentro del sistema tenemos la siguiente ecuacin: Na2HPO4 + CO2 + H2O -------------> NaHCO3 + NaH2PO4 (1) De acuerdo con la anterior reaccin 142 mg de Fosfato Disdico anhidro absorberan 44 mg de CO2 La anterior reaccin es reversible y a medida que procede hacia la derecha se va reduciendo el pH del medio de tal manera que esta misma condicin paraliza el desarrollo de la reaccin en un punto intermedio de la transformacin del Fosfato Disdico en Fosfato Monosdico. Creemos que no todo el Fosfato Disdico logra

transformase en Fosfato Monosdico. Para saber que tanto CO2 logra capturar una solucin de Fosfato Disdico se llev a cabo el siguiente experimento: Se prepar una solucin de Fosfato Monosdico (NaH2PO4.H2O) de 2 gr/Lt. Se titul con NaOH 0.1 N hasta viraje incipiente de la Fenolftaleina (Aproximadamente pH = 8.5-9.0). En este punto la solucin se satur con CO2 permitiendo as que se desarrolle la reaccin (1) en la mayor extensin posible. Acto seguido se expuls el CO2 libre mediante agitacin y barrido con aire. Despus se titul en reversa con NaOH 0.1 N nuevamente hasta viraje incipiente de la fenolftaleina. Se considera que la cantidad de CO2 fijado por el sistema es directamente proporcional a la cantidad de NaOH consumida en la segunda titulacin. Los datos del ensayo fueron los siguientes: Titulacin del Fosfato Monosdico Alcuota de solucin de Fosfato Monosdico = 25 ml Cantidad de NaOH 0.1 N usado en la titulacin inicial = 3.65 ml Esta cantidad coincide casi exactamente con la cantidad terica necesaria para la transformacin de todo el Fosfato Monosdico en Fosfato Disdico segn la ecuacin siguiente: NaH2PO4 + NaOH -------------------> Na2HPO4 + H2O Fijacin de CO2 Alcuota de solucin de Fosfato Monosdico = 50 ml Cantidad de NaOH 0.1 N usado en la titulacin inicial = 7.2 ml Saturacin con CO2 y eliminacin del Sobrante con Aire. Titulacin en reversa con NaOH 0.1 N = 4.5 ml De acuerdo con la ecuacin: NaOH + CO2 --------> NaHCO3 40 gr de NaOH neutralizan 44 gr de CO2 Entonces 4.5 ml de NaOH 0.1 N neutralizarn 4.5 x 4 x 44/40 = 19.8 mg de CO2 Lo cual quiere decir que los 100 mg de Fosfato Monosdico (50 ml de solucin de NaH2PO4.H2O de 2 gr/lt) utilizados, equivalentes a 87 mg de Fosfato Monosdico Anhidro y transformados en 102.9 mg de Fosfato Disdico anhidro

tienen capacidad para absorber 19.8 mg de CO2 transformndolo en Bicarbonato de Sodio. Al comparar el resultado terico segn la ecuacin (1) con la cantidad resultante de este ltimo ensayo se hace evidente que no todo el Fosfato disdico utilizado inicialmente logra transformarse en Fosfato Monosdico. En consecuencia, la cantidad de Fosfato Disdico que se debe utilizar como Buffer en la prueba respiromtrica deber ser de como mnimo de 102.9 mg por cada 19.8 mg de CO2 Si en una botella de 1 Lt de capacidad con medio litro de muestra y con disponibilidad de 125 mg de Oxgeno se espera una produccin de 171.8 mg de CO2 se aconseja agregar 892.8 mg de Fosfato Disdico anhidro en calidad de buffer. (En la prctica agregar 1.000 gr) Nota: Esta cantidad de Fosfato en la prctica es cerca de 40 veces mas grande a la que se utiliza con el mtodo tradicional. ABSORCION DEL CO2 EN RECIPIENTE APARTE INSERTO EN LA BOTELLA CON HIDROXIDO DE SODIO Esta forma de absorber los gases tambien funciona adecuadamente y consiste en colocar en la cmara de aire encima del lquido, un recipiente perforado, en el cual se coloca hidroxido de sodio como material absorbente para el CO2. Este material absorbe rpidamente el CO2 producido. Se ha observado que la botella requiere algo de agitacin para la adecuada y rpida absorcin del CO2. De lo contrario la difusin del CO2 desde la parte inferior de la botella hacia el recipiente de absorcin puede resultar demasiado lenta. Para la Absorcin se debe tener en cuenta la siguiente ecuacin: 2 NaOH + CO2 -----------> Na2CO3 + H2O as quie 80 gr de NaOH absorbern 44 gr de CO2 Para una botella respiromtrica de 1105 ml de capacidad, llena de CO2 puro a 20 C, se requieren 1.105x0.8878x80/44 = 1.784 gr de NaOH y para una Botella normal con medio litro de muestra, suponiendo que se agotara completamente el oxgeno de la cmara y que se generan 125 x 44/32 = 171.8 mg de CO2 se requieren 171.8 x 80/44 = 312 mg de NaOH. En la prctica se recomienda colocar 1 gr de NaOH. RESUMEN DEL METODO

Para Botellas de 1 lt en las cuales Alcuota mas Agua de Dilucin = 500 ml, el Oxgeno disponible en la Botella a la altura de Bogot se calcula como sigue: Densidad del aire a 20 C = 0.8878 gr/lt. = 1.2931 x 273/293X560/760 Contenido de Oxgeno en el aire = 21 % volumtrico. Peso del Aire disponible en la Botella = 0.44388 gr. Contenido de Oxgeno disponible en la botella = aproximadamente igual a 103 mg de O2 puro. Para Botellas de 500 ml llenas hasta 250 ml, la disponibilidad de Oxgeno ser aproximadamente de 51.5 mg. De acuerdo con lo anterior, se podr entonces tomar la siguiente alcuota dependiendo de la DBO5 esperada: 1. Tomar una alcuota de muestra segn la DBO5 esperada as:
DBO5 esperada Bot 1000 Bot 500

mg/lt Alcuota/Aforamiento Alcuota/Aforamiento mximo ml/ml ml/ml 32000 16000 8000 4000 2000 1000 500 250 100 50 3/500 6/500 12/500 25/500 50/500 100/500 200/500 400/500 400/800 800/800 1.5/250 3/250 6/250 12/250 25/250 50/250 100/250 200/250 200/400 400/400

2. Colocarla en la probeta de aforamiento y agregarle agua destilada saturada de Oxgeno hasta un volmen cercano a los 400 ml. El Oxgeno presente en el agua de dilucin deber ser tenido en cuenta en los clculos finales ya que a grandes diluciones su valor alcanaza a ser muy significativo. 3. Agregarle 10 ml de Solucin A (Solucin Tampn de Fosfato Modificada 2X). 4. Agregarle 0.5 ml (10 gotas) de la Solucin B (Sulfato de Magnesio). 5. Agregarle 0.5 ml (10 gotas) de la Solucin C (Cloruro de Calcio). 6. Agregarle 0.05 ml (1 gota) de la Solucin D (Cloruro Frrico 10X). 7. Agregarle 0.5 ml (10 gotas) de Solucin Semilla Inculo de Agua Residual

Urbana Fresca. 8. Completar a 500 ml con agua destilada y transferir a la botella respiromtrica. 9. Cerrar la Botella y conectar el Transductor. 10. Colocar la botella en la cmara de Incubacin, encima del agitador Magntico o de Vaivn. 11. Iniciar la agitacin, esperar que se homogenize la temperatura y tomar la primera lectura (L0). 12. Tomar una lectura cada 24 horas durante los siguientes 5 das. Anotar simultneamente el valor de la temperatura de la cmara de incubacin.

Simultneamente con lo anterior, se debe realizar un blanco y ese valor deber ser restado de los resultados de las muestras. PREPARACION DE REACTIVOS A. Solucin Tampn de Fosfato Modificada (2X). Pesar 43.5 gr de K2HPO4, 66.8 gr de Na2HPO4.7H2O y 3.4 gr de NH4Cl, disolver y aforar a 1 Lt. B. Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y diluir a 1 L. C. Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 anhidro o 36.5 gr de CaCl2.2H2O en agua destilada y diluir a 1Lt. D. Solucin de cloruro frrico (10X) : Disolver 2.5 g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L. E. Solucin Patrn de Glucosa Acido Glutmico 50X: Disolver 7.5 gr de Glucosa y 7.5 gr de Acido Glutmico en 800 ml de agua destilada con ayuda de calor suave. Dejar enfriar y agforar a 1 lt con agua destilada. Guardar en nevera en frasco de color ambar. CALCULOS Para los clculos Utilizar el Software anexo. Clculo de la DBO5 OTROS DATOS Peso molecular Ponderado del Aire = 0.21 x 16 + 0.79 x 14 = 14.42 Densidad del Anhdrido Carbnico; D(aire=1) = 1.5291 DIAGRAMA

DEMANDA QUMICA DE OXIGENO Mtodo de reflujo abierto CDIGO GENERAL 008 1. SUMARIO Y APLICACIONES 1. La demanda qumica de oxgeno (DQO) determina la cantidad de oxgeno requerido para oxidar la materia orgnica en una muestra de agua residual, bajo condiciones especficas de agente oxidante, temperatura y tiempo. 2. Las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan mediante reflujo en solucin fuertemente cida (H2SO4) con un exceso conocido de dicromato de potasio (K2Cr2O7) en presencia de sulfato de plata (AgSO4) que acta como agente catalizador, y de sulfato mercrico (HgSO4) adicionado para remover la interferencia de los cloruros. Despus de la digestin, el remanente de K2Cr2O7 sin reducir se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto final el complejo ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgnica oxidable se calcula en trminos de oxgeno equivalente. 3. Para muestras de un origen especfico, la DQO se puede relacionar empricamente con la DBO, el carbono orgnico o la materia orgnica; la prueba se usa para controlar y monitorear despus que se ha establecido la correlacin. Cdigo

4. El mtodo es aplicable a muestras de aguas residuales domsticas e industriales que tengan DBO superiores a 50 mg O2/L. Para concentraciones ms bajas, tales como muestras de aguas superficiales, se puede usar el mtodo modificado para bajo nivel en un intervalo entre 5 y 50 mg O2/L. Cuando la concentracin de cloruro en la muestra es mayor de 2 000 mg/L, se requiere el mtodo modificado para las aguas salinas. 2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS 1. Los compuestos alifticos voltiles de cadena lineal no se oxidan en cantidad apreciable, en parte debido a que estn presentes en la fase de vapor y no entran en contacto con el lquido oxidante; tales compuestos se oxidan ms efectivamente cuando se agrega Ag2SO4como catalizador. Sin embargo, ste reacciona con los iones cloruro, bromuro y yoduro produciendo precipitados que son oxidados parcialmente. 2. Las dificultades causadas por la presencia de los haluros pueden superarse en buena parte, aunque no completamente, por acomplejamiento antes del proceso de reflujo con sulfato de mercurio (HgSO4), que forma el haluro mercrico correspondiente, muy poco soluble en medio acuoso. Si bien se especifica 1 g de HgSO4 para 50 mL de muestra, se puede usar una menor cantidad cuando la concentracin de cloruro sea menor de 2 000 mg/L, mientras se mantenga una relacin HgSO4:Cl de 10:1. La tcnica no se debe usar para muestras que contengan ms de 2 000 mg de Cl/L; existen otros procedimientos diseados para determinar la DQO en aguas salinas. 3. El nitrito (NO2) tiene una DQO de 1,1 mg de O2/mg de NO2-N, y como las concentraciones de NO2 en aguas rara vez son mayores de 1 o 2 mg NO2-N/L, esta interferencia es considerada insignificante y usualmente se ignora. Para evitar una interferencia significante debida al NO2, agregar 10 mg de cido sulfmico por cada mg de NO2-N presente en el volumen de muestra usado; agregar la misma cantidad de cido sulfmico al blanco de agua destilada. 4. Las especies inorgnicas reducidas, tales como iones ferroso, sulfuro, manganoso, etc., se oxidan cuantitativamente bajo las condiciones de la prueba; para concentraciones altas de estas especies, se pueden hacer las correcciones al valor de DQO obtenido, segn los clculos estequiomtricos en caso de conocer su concentracin inicial. 3. TOMA Y PRESERVACION DE MUESTRAS 1. Colectar las muestras en botellas de vidrio preferiblemente; el uso de envases plsticos es permisible si se asegura la ausencia de contaminantes orgnicos. 2. Si la muestra tiene materia orgnica biolgicamente activa, el anlisis debe realizarse inmediatamente, aunque preservada a pH 2 por adicin de H2SO4 conc. (generalmente 2 mL de H2SO4 conc./L de muestra) puede analizarse hasta siete das despus. 3. Las muestras que contengan slidos sedimentables deben mezclarse con un homogeneizador para obtener una muestra representativa. 4. En el anlisis de aguas residuales con alta DQO deben hacerse diluciones preliminares, para reducir el error inherente en la medida de pequeos volmenes

de muestra. 4. APARATOS 4.1. Equipo de reflujo, constituido por balones o tubos de digestin de 500 o 250 mL de capacidad con boca 24/40 de vidrio esmerilado y condensador Liebig, West, Friedrichs, Allihn o equivalente, de 300 mm, con unin 24/40 de vidrio esmerilado, y una plancha de calentamiento con regulador de temperatura y potencia suficiente para producir al menos 1,4 W/cm2 de superficie de calentamiento, o su equivalente. 5. REACTIVOS 1. Solucin estndar de dicromato de potasio, 0,0417M. Disolver 12,259 g de K2Cr2O7, grado estndar primario previamente secado durante 2 h a 103C, en agua destilada y diluir a 1 000 mL en un baln volumtrico clase A. 2. Reactivo de cido sulfrico. Agregar con cuidado Ag2SO4 grado reactivo o tcnico, en cristales o en polvo, sobre H2SO4 concentrado en proporcin de 5,5g de Ag2SO4/Kg de H2SO4. Dejar en reposo 1 o 2 das para la disolucin del Ag2SO4. 3. Solucin indicadora de ferroina. Disolver 1,485 g de 1,10-fenantrolina monohidratada y 695 mg de FeSO47H2O en agua destilada y diluir a 100 mL. Esta solucin tambin se puede adquirir comercialmente. 4. Sulfato ferroso de amonio (FAS), 0,25 M. Disolver 98 g de Fe(NH4)2(SO4)26H2O en agua destilada; agregar 20 mL de H2SO4 concentrado, enfriar y diluir a 1000 mL. Estandarizar esta solucin diariamente con una solucin estndar de K2Cr2O7 as: Diluir 10,0 mL de la solucin estndar de K2Cr2O7 a aproximadamente 100 mL; agregar 30 mL de H2SO4 concentrado y enfriar. Titular con FAS en presencia de 0,10 a 0,15 mL (2 o 3 gotas) de indicador de ferroina. Molaridad del FAS = Volumen de K2Cr2O7 0.0417 M titulado, mL /Volumen del FAS empleado, mL* 0.25 5. Sulfato mercrico, HgSO4, en cristales o en polvo. 6. Acido sulfmico. Requerido solamente para eliminar la interferencia de nitritos. 7. Ftalato de potasio e hidrgeno estndar (biftalato de potasio, KHP). Triturar ligeramente y secar el biftalato de potasio (HOOCC6H4COOK) hasta peso constante a 120C; disolver 425 mg en agua destilada y diluir a 1 000 mL. La solucin es estable por ms de tres meses si se conserva refrigerada; se debe verificar la presencia o ausencia de crecimiento biolgico, y en caso afirmativo descartarla. El biftalato tiene una DQO terica de 1,176 mg O2/mg y la solucin tiene una DQO terica de 500 g O2/mL. 6. PROCEDIMIENTO 1. Tratamiento de muestras con DQO > 50 mg O2/L: Colocar 50,0 mL de muestra en un baln de reflujo de 500-mL (para muestras con DQO > 900 mg O2/L, usar una

porcin ms pequea de muestra y diluirla a 50,0 mL); agregar 1 g de HgSO4, en presencia de perlas de vidrio para controlar la ebullicin, y muy lentamente agregar 5,0 mL del reactivo de cido sulfrico, mientras se agita para disolver el HgSO4. Enfriar y agitar para evitar la posible prdida de materiales voltiles; agregar 25 mL de solucin de K2Cr2O7 0,0417 M y mezclar. Acoplar el baln al condensador y abrir el flujo de agua refrigerante; agregar el remanente del reactivo de cido sulfrico (70 mL) a travs del extremo superior del condensador. Continuar la agitacin mientras se agrega el reactivo de cido sulfrico. PRECAUCIN: Agitar muy bien la mezcla de reflujo antes de suministrar calor para prevenir el sobrecalentamiento en el fondo del baln y la formacin de espuma. 2. Cubrir el extremo superior del condensador con un vaso pequeo para prevenir la entrada de materiales extraos a la mezcla y dejar en reflujo durante 2 h. Enfriar y enjuagar el condensador desde la parte superior con agua destilada; desconectar el condensador y diluir la muestra al doble de su volumen con agua destilada. Enfriar hasta temperatura ambiente y valorar el exceso de K2Cr2O7 con FAS en presencia de 0,10 a 0,15 mL (2 o 3 gotas) de indicador de ferroina; aunque la cantidad de ferroina no es crtica, usar el mismo volumen para todas las titulaciones. Tomar como punto final de la titulacin el primer cambio ntido de color azul-verdoso a caf-rojizo; el color azul-verdoso puede reaparecer. El cambio de color no es tan marcado como en la titulacin del blanco de reactivos debido a la mayor concentracin de cido en la muestra. De la misma manera, someter a reflujo y titular un blanco que contenga los reactivos y un volumen de agua destilada igual al volumen de muestra. 3. Procedimiento alternativo para muestras con DQO-bajo: Seguir el procedimiento anterior, con dos excepciones: (i) usar K2Cr2O7 estndar 0,00417 M, y (ii) titular con FAS 0,025 M. Tener cuidado extremo, ya que cualquier traza de materia orgnica en la vidriera o deposiciones desde la atmsfera pueden causar errores. Si se requiere un mayor aumento de la sensibilidad, concentrar un mayor volumen de muestra antes de la digestin por reflujo, de la siguiente manera: Agregar todos los reactivos a la muestra y reducir el volumen total a 150 mL mediante ebullicin en el baln de reflujo abierto a la atmsfera (sin acoplar el condensador). Calcular la cantidad de HgSO4 a ser adicionada (antes de la concentracin por ebullicin), basada en una relacin de peso HgSO4:Cl de 10:1, segn la cantidad de Cl presente en el volumen de muestra original. Hacer un blanco de reactivos mediante el mismo procedimiento. Esta tcnica tiene la ventaja de concentrar la muestra sin prdidas significativas de materiales voltiles fcilmente digestibles; los materiales voltiles difciles de digerir, tales como cidos voltiles, se pierden pero se consigue una mejora frente a mtodos de concentracin por evaporacin ordinarios. 4. Determinacin de la solucin estndar. Evaluar la tcnica y la calidad de reactivos realizando la prueba con una solucin estndar de ftalato cido de potasio. 7. CLCULOS DQO como mg de O2/lt = (A-B) x M x 8000/mL de Muestra

donde: A = mL FAS usados para el blanco B = mL FAS usados para la muestra, y M = molaridad del FAS 8. PRECISIN 8.1. Un grupo de muestras sintticas preparadas con ftalato cido de potasio y NaCl se analizaron en 74 laboratorios. Para los valores de la DQO de 200 mg O2/L en ausencia de Cl, la desviacin estndar obtenida fue 13 mg/L (coef. de variacin 6,5 %); para los valores de la DQO de 160 mg O2/L y 100 mg Cl/L, la desviacin estndar obtenida fue de 14 mg/L (coef. variacin, 10,8%).

El presente mtodo es derivado del mtodo standard, el cual se ha modificado de la siguiente manera: Se han dividido las cantidades por 5 y se utiliza un tubo de digestin de 25 x 300 mm, calentado en su parte inferior, en una placa de calefaccin apropiada, la cual produce condensacin en las paredes del tubo, no siendo necesario el uso del refrigerante de reflujo. Esto simplifica enormemente el procedimiento y permite correr simultneamente en una placa normal hasta 56 muestras. Se toman 10 ml de muestra que puede ser pura o diluida segn el valor esperado para la DQO. Se colocan en un tubo de digestin, se agregan 5 ml de solucin de K2Cr2O7 0.25 N (equivalentes a 1.25 ml de solucin 1 N + 3.75 ml de H2O) y acto seguido con mucho cuidado 15 ml de H2SO4. Se pone a digerir a una temperatura cercana al punto de ebullicin pero sin dejar hervir (aprox 150 C) 1 hora y 30 min. Se deja enfriar. Puede ser de un da para otro. Precaucin: La ebullicin prolongada puede hacer perder oxgeno al dicromato aunque no haya DQO en las muestras, falseando los resultados de la muestra e incluso del blanco. La reaccin que ocurre en presencia de materia orgnica es la siguiente: 2K2Cr2O7 + 8H2SO4 + 3C -----> 2K2SO4 + 2Cr2(SO4)3 + 8H2O + 3CO2

En ausencia de Materia Orgnica y por prolongada ebullicin puede ocurrir las siguiente reaccin: 2K2Cr2O7 + 8H2SO4 ----> 2K2SO4 + 2Cr2(SO4)3 + 8H2O + 3O2 La anterior reaccin da lugar a un falso consumo de Dicromato aun en ausencia de materia orgnica. De ah la importancia del control de temperatura durante la digestin. Al otro da se diluye a 100 ml con agua, se agregan 2 a 3 gotas de Indicador de Difenilamina, 5 ml de H3PO4 conc. 85 % y se titula con Sulfato FerrosoAmnico (FAS) 0.5 N CALCULOS De acuerdo con el standar para la determinacin del Carbn Orgnico, 1 ml de solucin de Dicromato 1N contiene 49.03 mg de K2Cr2O7 y oxida 3 mg de Carbn equivalentes a una DQO de 8 mg de Oxgeno. DQO; mg/lt = (1.25 - FAS 0.5N/2) x 8 x 1000/Alcuota mas genricamente: DQO; mg/lt = (ml Dicromato x Normalidad - ml de FAS x Normalidad ) x 8 x 1000/Alcuota A lo anterior se le debe restar el resultado de un Blanco, con lo cual la frmula queda transformada en la siguiente: DQO; mg/lt = (ml de FAS x Normalidad en el Blanco - ml de FAS x Normalidad en la muestra) x 8 x 1000/Alcuota PATRONAMIENTO El anterior mtodo se calibra con un patrn de Ftalato Acido de Potasio preparado como sigue: Ftalato de Potasio e hidrgeno estndar (biftalato de potasio, KHP). Triturar ligeramente y secar el biftalato de potasio (HOOCC6H4COOK) hasta peso constante a 120C; disolver 425 mg en agua destilada y diluir a 1000 mL. La solucin es estable por ms de tres meses si se conserva refrigerada; se debe verificar la presencia o ausencia de crecimiento biolgico, y en caso afirmativo

descartarla. El biftalato tiene una DQO terica de 1,176 mg O2/mg y la solucin tiene una DQO terica de 500 m g O2/L. 10 ml de este Standard analizados deben dar un resultado DQO = 500 mg/lt 10 % de desviacin.