DEPARTAMENTO DE PRODUCCIN VEGETAL Escuela Tcnica Superior de Ingeniera Agronmica UNIVERSIDAD POLITCNICA DE CARTAGENA

PROYECTO FINAL DE CARRERA

Ingeniera Tcnica Agrcola

Estudio de la interaccin salinidad x fitorregulador en Chrysanthemum coronarium L. cultivado en maceta

YolandaPastorFrez Cartagena,septiembre2009

Universidad Politcnica de Cartagena Departamento de Produccin Vegetal rea de Produccin Vegetal

Sebastin del Pilar Ban Arias y Encarna Conesa Gallego, profesores del DepartamentodeProduccinVegetaldelaUniversidadPolitcnicadeCartagena INFORMAN: Que el presente Proyecto Fin de Carrera, titulado Estudio de la interaccin salinidad x fitorregulador en Chrysanthemum coronarium L. cultivado en maceta, presentadoporYolandaPastorFrez,hasidorealizadobajonuestradireccin. Y para que conste, a los efectos oportunos, firmamos el presente escrito en Cartagena,asietedeseptiembrededosmilnueve Fdo:SebastindelPilarBanArias

EncarnaConesaGallego

NDICEGENERAL

INTRODUCCIN ..................................................................................................................................7 ANTECEDENTESYOBJETIVOS............................................................................................................................ 7 DESCRIPCINBOTNICADELAPLANTA.............................................................................................................. 9 LOSRETARDADORESDELCRECIMIENTOVEGETAL................................................................................................ 12 LASALINIDAD.............................................................................................................................................14 MATERIALESYMTODOS.................................................................................................................. 18 MATERIALVEGETAL.....................................................................................................................................18 CONDICIONESDECULTIVO............................................................................................................................ 18 TRATAMIENTOS..........................................................................................................................................20 ................................................................................................................ 20 MEDIDASEVOLUTIVASDELDRENAJE MEDIDADECOLORDELASINFLORESCENCIASYDELACLOROFILAFOLIAR.................................................................21 ............................................................................................. 21 DETERMINACINDELAPRDIDADEELECTROLITOS MEDIDASDELOSPARMETROSHDRICOSDELAPLANTA..................................................................................... 22 .......................................................................................................... 23 MEDIDADECRECIMIENTOENLAPLANTA DETERMINACINDESOLUTOSINORGNICOS.................................................................................................... 23 ..................................................................................................... 24 MEDIDADELAFLUOROMETRACLOROFLICA ANLISISESTADSTICO..................................................................................................................................25 RESULTADOS..................................................................................................................................... 31 CRECIMIENTOYDESARROLLO......................................................................................................................... 31 RELACIONESHDRICAS..................................................................................................................................33 ACUMULACINDEIONES.............................................................................................................................. 33 FLUORESCENCIACLOROFLICA........................................................................................................................ 34 PRDIDASDEELECTROLITOS.......................................................................................................................... 35 DISCUSIN........................................................................................................................................ 48 CONCLUSIN .................................................................................................................................... 55 REFERENCIAS.................................................................................................................................... 57

NDICEDETABLAS

TABLA1.SIGNIFICACINESTADSTICADELASALINIDAD(SL)YLOSFITORREGULADORES(FT)YSUINTERACCINSOBRELOS PARMETROSDECRECIMIENTO,DESARROLLOYCOLOR.PACLOBUTRAZOL(PAC),ETEFN(ETC),CLORURODEMEPIQUAT (CMC)YCLORURODECLORMEQUAT(CCL)1.................................................................................................. 36 TABLA2.SIGNIFICACINESTADSTICADELASALINIDAD(SL)YLOSFITORREGULADORES(FT)YSUINTERACCINSOBRELAS RELACIONESHDRICASDELASPLANTASYLASCARACTERSTICASDELDRENAJE.PACLOBUTRAZOL(PAC),ETEFN(ETE), CLORURODEMEPIQUAT(CME)YCLORURODECLORMEQUAT(CCL).H(POTENCIALHDRICOFOLIAR),P(POTENCIAL 1 37 DETURGOR),O(POTENCIALOSMTICO),OS(POTENCIALOSMTICOASATURACIN) ...................................... TABLA3.SIGNIFICACINESTADSTICADELASALINIDAD(SL)YLOSFITORREGULADORES(FT)YSUINTERACCINSOBRELA CONCENTRACINDEIONESENHOJASYRACES.PACLOBUTRAZOL(PAC),ETEFN(ETF),CLORURODEMEPIQUAT (CME)YCLORURODECLORMEQUAT(CCL).VALORESENMG/GPESOSECO1.....................................................38 TABLA4.SIGNIFICACINESTADSTICADELASALINIDAD(SL)YLOSFITORREGULADORES(FT)YSUINTERACCINSOBRELA FLUORESCENCIACLOROFLICAYLALIBERACINDEELECTROLITOS.PACLOBUTRAZOL(PAC),ETEFN(ETF),CLORURODE MEPIQUAT(CME)YCLORURODECLORMEQUAT(CCL).MNIMAFLUORESCENCIAENESTADODEADAPTACINALA OSCURIDAD(FO).EFICIENCIADELFOTOSISTEMAIIADAPTADAALAOSCURIDAD(FV/FM).PRDIDASDEELECTROLITOS (PE)1...................................................................................................................................................39

NDICEDEFIGURAS

FIGURA1.EFECTOSDELASALINIDADYLOSFITORREGULADORESSOBRELAALTURADEPLANTA(A),COMPACIDAD(B), 40 NMERODEBOTONES(C)YCLOROFILAFOLIAR(D)....................................................................................... FIGURA2.EFECTOSDELASALINIDADYLOSFITORREGULADORESSOBRELASUCULENCIAAREA......................................41 FIGURA3.EFECTOSDELASALINIDADYLOSFITORREGULADORESSOBREELCONTENIDODEPOTASIOENLASRACES, CALCIOENLASHOJASBASALES(B),CALCIOENHOJASINTERMEDIAS(C)............................................................42 FIGURA4.EFECTOSDELASALINIDADYLOSFITORREGULADORESSOBREFV/FM(A),LAPRDIDADEELECTROLITOS(B).......43

NDICEDEFOTOS

FOTO1.MORFOLOGADECHRYSANTHEMUMCORONARIUML. ............................................................................... 11 FOTO2.SEMILLASDECHRYSANTHEMUMCORONARIUML. ..................................................................................... 26 FOTO3.TRASPLANTEDECHRYSANTHEMUMCORONARIUML.AMACETA..................................................................26 FOTO4MACETASCOLOCADASENLAMESADELINVERNADERO............................................................................... 27 FOTO5.QUEMADURASENHOJASPORLASALINIDAD............................................................................................ 27 FOTO6.SISTEMADERECOGIDAYMEDIDADEDRENAJES........................................................................................ 28 FOTO7.CMARADESCHOLANDERPARALAMEDIDADELPOTENCIALHDRICO.ELESQUEMADELACMARAESTADAPTADO 28 DETAIZYZEIGER;PLANTPHYSIOLOGY,4THEDITIONONLINE.......................................................................... FOTO8.DETALLEDELAMEDIDADELPOTENCIALHDRICO ....................................................................................... 29 FOTO9.OSMMETRODEPRESINDEVAPORWESCOR5520................................................................................ 29 FOTO10.COMPARATIVADEALTURAYANCHURAENTRETRATAMIENTOSCONFITORREGULADORESYCONDICIONESSALINASY NOSALINAS........................................................................................................................................... 44 FOTO11.FLORACINPARALOSDISTINTOSFITORREGULADORESENCONDICIONESSALINASYNOSALINAS........................45 FOTO12.DETALLEDELAINFLORESCENCIAENETEFN ........................................................................................... 46 FOTO13.MORFOLOGADELAHOJAPARALOSDISTINTOSFITORREGULADORESENCONDICIONESSALINASYNOSALINAS.....46

 INTRODUCCIN

INTRODUCCIN
Antecedentesyobjetivos
En la produccin viverstica de la regiones afectadas por la salinidad es frecuente regar con aguas salinas, lo que puede ocasionar problemas de crecimiento y desarrollo en las especies cultivadas, que repercuten negativamente en la calidad de la planta. Los sntomas ms comunes de la salinidad en la produccin de plantas ornamentales son la reduccin del crecimiento, la manifestacin de clorosis y necrosis foliares, y la cada de las hojas. Algunos autores han estudiado si la reduccin del crecimiento por la salinidad puede ser aplicada para obtener plantas ms compactas y reducir las necesidades de la regulacin qumica, pero los resultadosobtenidosindicanunabajaeficacia(Vernierietal.2006). Los sntomas por salinidad son consecuencia de los efectos fisiolgicos y bioqumicos inducidos por factores osmticos e inicos de lassales (Hare and Cress 1997; Munns, 2002). El efecto osmtico provoca un estrs hdrico en la planta al disminuir el potencial osmtico del medio que restringe las disponibilidades de agua de la planta reduciendo el crecimiento areo (Neumann 1997) y radical (Wild, 1988). La deshidratacin celular inducida produce daos irreparables sobre las membranas y protenas (Crowe, 1998). Esta restriccin de la disponibilidad hdrica produce una adecuacin del potencial hdrico interno de la planta mediante la acumulacin de iones salinos y la sntesis de solutos orgnicos (Alarcn et al., 1993). La primera actuacin implica un riesgo de toxicidad, deshidratacin y desequilibrio nutritivo,ylasegundaundesgasteenergtico(Munns,2002). Elefectoinicodelasalinidadradicaenlaabsorcindeionessalinosespecficoshasta acumular de forma directa concentraciones txicas (toxicidad inica especfica), y de forma indirectapuededeterminardesequilibriosnutricionales(efectonutricional).Losionesquems problemas inducen son el cloruro (Cl) y el sodio (Na+), aunque hay otros que tambin pueden sertxicos.Algunasespeciestoleranelestrssalinoevitandoabsorberestosionesotolerando altas concentraciones en los tejidos mediante compartimentacin. La concentracin de iones salinos reduce la capacidad fotosinttica al daar cloroplastos (Soldatini y Gianini, 1985) y reducir la clorofila y la actividad enzimtica. Como consecuencia la planta es incapaz de producir los carbohidratos que los rganos en crecimiento demandan, lo que implica una mayor reduccin de su tasa de crecimiento (Munns y Tester, 2008). La toxicidad por cloro se manifiesta por la aparicin de color marrn sueva en el limbo y una amarilleamiento del pice en las hojas que continua con su muerte y una clorosis general del limbo, mientras que la del 7

sodio se inicia con una amarillez en el margen foliar que evoluciona necrosndose finalmente (Ferguson y Grattan, 2005). En el medio de cultivo, el Na y el K compiten con la entrada en el interior de las clulas radicales, y cuando las concentraciones de Na exceden a las del K se producen efectos negativos porque las planta no puede mantener la relacin K/Na en sus tejidos (Munnss and Tester, 2008). Cuando la compartimentacin de iones no es suficiente, la hoja los acumula en el citoplasma o en las paredes celulares, provocando inactivacin de enzimas (Amtmann y Sanders 1999) o deshidratacin (Flowers et al., 1991), respectivamente. El Na+ puede inhibir la actividad enzimtica por enlazar con los lugares de inhibicin o por desplazar al K+ de los lugares de activacin (Serrano, 1996). El Na+ puede desplazar al Ca2+ de las posiciones de intercambio en las membranas celulares (Cramer et al., 1985). El Ca2+ tiene unaimportantefuncindeestabilizacindelasmembranascelulares(Crameretal.,1985) Actualmente hay un creciente inters hacia la utilizacin de especies nativas en las actuaciones de jardinera y paisajismo, que abren un prometedor mercado en el sector ornamental, acorde con las actuales tendencias hacia lo naturalizado. Las especies silvestres estn bien adaptadas a sobrevivir bajo condiciones mediterrneas porque tienen una mayor adaptabilidad al entorno, lo que potencialmente confiere una mayor resistencia a los estreses medioambientales que imponen las condiciones climticas de las zonas ridas o semiridas, donde la salinidad y escasez de agua son un claro exponente de stas. La regin mediterrnea constituye una fuente importante de plantas con gran potencial para el uso ornamental y paisajstico, entre stas, Chrysanthemum coronarium L. es una planta anual de la familia Asterceas,muycomnenlosmrgenesdeloscaminosdelsurdeEspaa,entre0y500mde altitud. Dispone de tallos muy ramificados, que fcilmente alcanzan entre 50 y100 cm de altura, cubiertos con hojas alternas y muy divididas. Sus flores, agrupadas en captulos solitarios, son liguladas en la periferia (amarillas o blancas), y flsculos en el centro. La abundante y vistosa floracin de este crisantemo, y su floracin en invierno y primavera, lo hace muy atractivo para su uso ornamental. Sin embargo, su excesivo y desproporcionado crecimientocuestionasuutilizacinornamentalcomoplantaenmaceta. Una de las herramientas ms utilizadas para reducir estos problemas de excesivo crecimiento es la aplicacin de fitorreguladores, por su efectividad, facilidad de uso y bajo coste. Estos compuestos son tiles para controlar diversos aspectos del desarrollo vegetal con intersagronmicoyendistintostiposdecultivos,comofrutales,cereales,ornamentales,etc. En el caso de los cultivos ornamentales, la literatura cientfica indica que su utilizacin se ha centrado, principalmente, en mejorar la calidad de las plantas, haciendo plantas ms pequeas, ms compactas, con hojas con un color verde ms intenso y una floracin ms 8

homognea y persistente. Resultados previos se han obtenido C. coronarium, demostrndose que paclobutrazol y prohexadiona clcica mejoraron el valor ornamental del crisantemo silvestre en maceta (Valds et al. 2008). Por otro lado, se ha sugerido la eficacia de los fitorreguladores para mejorar la resistencia o tolerancia a estreses abiticos y biticos (Rademacher, 1995). Entre estos, el paclobutrazol ha demostrado su papel positivo para reducir los efectos negativos de la salinidad en distintas especies (Saha and Gupta 1998; El Kheir et al. 2000). Ban et al. (2005) justificaron el efecto del paclobutrazol en adelfa porque disminuylaacumulacindeionestxicosenlostejidos. Considerando que la aplicacin de fitorreguladores y el riego con agua salina son dos aspectos que frecuentemente van a coincidir en el cultivo de C. coronarium en zonas semiridas, el objetivo de este estudio fue determinar los efectos de la aplicacin conjunta de estos dos factores sobre el crecimiento, desarrollo, estado hdrico y acumulacin de solutos inorgnicos en la planta, y su relacin con posibles daos en los centros de reaccin del fotosistemaIIylaintegridaddelamembranacelular.

Descripcinbotnicadelaplanta
El crisantemo silvestre (Chrysanthemum coronarium L.) es una planta herbcea de la familia Asteracea, comn en los mrgenes de caminos del sur de Espaa, entre los 0 y 500 m de altitud. Esta planta anual, es glabra o ligeramente pelosa. Los tallos son muy ramificados, y sualturapuedellegaralmetrodealtura. Las hojas son alternas, pecioladas, enteras y lobuladas o dentadas, pueden ser lisas o rugosas y su color vara del verde claro al oscuro, adems tienen una pelusa blanquecina que confierealahojauntonogrisceo. Las flores se renen en inflorescencias de tipo captulo, dnde la flor femenina es la lgula que se encuentra en la periferia, y en el centro encontramos la verdadera flor que es hermafroditaynoligulada.Lalgulaesblancaconlabaseamarilla.Elandroceoconstadecinco estambres epiptalos, con anteras normalmente connadas formando un tubo que rodea el estilo. El gineceo tiene un ovario nfero, unilocular, del que surge un estilo solitario con dos estigmas.

Los frutos son en aquenio, el de las flores liguladas con tres ngulos y el de las flores del disco es lateralmente comprimido con cuatro cantos. La raz es fibrosa y muy desarrollada (Foto1). Encuantoasuclasificacinbotnica,tenemos: Reino: Plantae

Subreino: Tracheobionta Divisin: Clase: Magnoliophyta Magnoliopsida

Subclase: Asteridae Orden: Familia: Asterales Asteraceae

Subfamilia: Asteroideae Tribu: Gnero: Especie: Anthemideae Chrysanthemum C.coronarium

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 Foto1.Morfologade d Chrysanth hemumcoronariumL.

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Losretardadoresdelcrecimientovegetal
Los fitorreguladores son una de las herramientas ms utilizadas para reducir los problemas de calidad de plantas ornamentales, an as, los fitorreguladores representan nicamenteun34%deltotaldeproductosfitosanitarioscomercializadosenelmundo(Agrow World Crop Protection 2001), siendo este porcentaje mayor en los pases que desarrollan una tecnologa de produccin ms avanzada, ya que suelen incorporarlos habitualmente en sus procesos productivos. Este bajo porcentaje, evidencia que el mercado de los productos fitosanitariosestcontroladoporherbicidas,fungicidaseinsecticidas. Los principales retardadores utilizados en la horticultura ornamental y cuya comercializacin est autorizada en Espaa son el cloruro de clomercuat, la daminocida, el paclobutrazol, la prohexadiona clcica y etefn. En este proyecto, los retardadores del crecimiento utilizados fueron paclobutrazol, etefn, cloruro de clormequat y cloruro de mepiquat.Acontinuacinsedetallarnsuscaractersticas. El paclobutrazol es un retardador del desarrollo perteneciente al grupo de los triazoles,queintegraalgrupomsimportantedecompuestossistmicosdesarrolladosparael control de hongos en plantas y animales (Siegel 1981). Comparado con otros retardadores del desarrollo, el paclobutrazol es muy efectivo a dosis bajas y no suele presentar problemas de fitotoxicidad (Davis et al. 1988; Jung et al. 1986). El mecanismo de accin principal por el que el paclobutrazol reduce el crecimiento es por la inhibicin de la segunda de las tres etapas de la biosntesis de las giberelinas, inhibiendo la oxidacin de entkaureno a cido kaurenoico (Rademacher 1989). Por otra parte, ha sido sugerido que el paclobutrazol afecta al metabolismo de otras fitohormonas endgenas. El paclobutrazol puede ser aplicado va foliar o al sustrato. La baja solubilidad en agua del paclobutrazol (30 ppm) facilita su entrada en la planta (Lever 1986). Una vez dentro de la planta, se desplaza principalmente por el xilema hacia las hojas y yemas, a travs del flujo de nutrientes y agua que activa la transpiracin (Davis et al. 1988; Intrieri et al. 1987; Quilan y Richardson 1986; Wang et al. 1986). Cuando se aplicaalsuelooalsustrato,lacomposicindelmediopuedealterarsumovimientoyportanto su eficacia (Barret 1982; Klock 1998; Lever 1986). En el suelo, su persistencia es superior a la de los retardadores del desarrollo tradicionales (Chapman y Shearing 1984). Esto ha sido uno de los principales problemas del uso del paclobutrazol durante los primeros aos de su desarrollo,yaquesecomprobquepodadurarvariosaos.

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El etefn es un fitorregulador con propiedades sistmicas que acta sobre la maduracin y coloracin de los frutos. El etefn se puede aplicar va foliar o en el suelo o sustrato. Diluido en agua y pulverizado sobre las plantas, penetra rpidamente en los tejidos por va foliar y es traslocado. Como el pH de los tejidos suele mantenerse prximo a 7, el etefn se transforma progresivamente en el interior de la planta en cloruro, fosfato y etileno. Este etileno modifica el metabolismo de las auxinas, interfiere los procesos de crecimiento y estimula la sntesis de fenoles y ligninas, es decir, acta sobre la coloracin y maduracin de los frutos y reduce el nmero de recolecciones. Tambin puede retrasar la floracin o promover la iniciacin florar, provocar amarilleo en hojas, cada de hojas, botones y flores. Como retardador del desarrollo vegetal acta reduciendo la longitud de entrenudos y, sobre todo, favoreciendo la brotacin lateral. En el suelo y en las plantas se degrada a cido fosfrico, gas etileno y HCl. La degradacin es rpida y su vida media es de 7.5 das en condicionesaerobiasyde5.3das,enanaerobias.Esadsorbidofuertementeporelsueloypor subajamovilidad,noselixivia.Enelsuelosedisipaconunavidamediademenosde20das. El cloruro de clormequat pertenece al grupo qumico del amonio cuaternario y fue el primer antecedente del uso de un producto qumico para controlar la altura de plantas. Este compuesto fue la chispa que provoc el inters de los retardadores del desarrollo vegetal en floricultura, dados los efectos restrictivos que ocasion sobre el desarrollo de la poinsetia. Posteriormente, se aplic a otros cultivos obteniendo resultados diversos. Es un regulador del crecimiento bien absorbido por va foliar y radical, aunque tiene una menor actividad cuando se aplica al suelo que foliarmente, y cuando se aplican dosis altas puede producir clorosis foliares e incluso necrosis. Se metaboliza rpidamente en la planta y puede transformarse en otros productos, lo que puede originar una falta de efectividad e incluso puede ocasionar el efectocontrario,esdecir,puedeserestimulantedeldesarrollo.Elclorurodeclormequatacta impidiendolaelongacindelasclulas,ejerciendounaaccinenanizante:acortandolostallos, y produciendo plantas ms robustas: fortaleciendo los tallos. Impide temporalmente la biosntesis de las giberelinas naturales con lo que se produce la detencin de la elongacin celular de los rganos vegetativos y una ms precisa utilizacin de las sustancias nutritivas por parte de los rganos productivos. Puede tambin incrementar la produccin de clorofila y el desarrollo de las races. Tambin influye en el desarrollo del ciclo biolgico, induciendo una floracinyunacosechamayores. Elclorurodemepiquatpertenecealmismogrupoqumicoqueelclorurodeclormequat, esdecir,aldelamoniocuaternario.Actainhibiendolaprimerafasedelarutadelabiosntesis de las giberelinas, esto lo lleva a cabo alterando la concentracin de cido giberlico en las 13

clulas debido a su parcial inhibicin de una de las enzimas involucradas en la biosntesis de cido giberlico. El cloruro de mepiquat fue descubierto en los aos 1970 y se comercializ primero en California en 1981. No suele usarse en plantas ornamentales, aunque s en algodn, hortalizas y vid. El cloruro de mepiquat es usado habitualmente en el cultivo de algodn buscando frenar el crecimiento vegetativo, aumentar el tamao de las cpsulas y favorecer la homogeneidad y precocidad de cosecha (York, 1983). En ajos y cebolla, se usa para homogeneizar el tamao e incrementar la produccin. En meln se utiliza para homogeneizareltamaoyaumentarlaprecocidaddelacosecha.Yenvidseusaparaevitarel crecimiento. Se aplica foliarmente actuando sistmicamente en toda la planta ya que despus de ser absorbido en la planta se mueve hacia arriba con la corriente transpiratoria a travs del xilema, y hacia abajo en el fluido del floema desde la hoja a los rganos sumideros (Jarma, et al.,2004).Enelsueloesmetabolizadoadixidodecarbono.

Lasalinidad
Lasalinidadestalvezelproblemamsimportantequeafectaalaagriculturaderegado de las zonas ridas y semiridas. Se considera que la proporcin de suelos afectados por salinidad es un 10% del total mundial, y se estima que entre 25 y 50% de las zonas de regado estn salinizadas (Rhoades et al., 1992). Y el problema tiende a crecer, por la extensin del regado incluso a suelos marginales hasta ahora no cultivados y por la extraccin intensiva de aguassubterrneas(decontenidoscadavezmselevadosensalessolubles)parasuutilizacin en el riego. Estas circunstancias se dan y de manera muy marcada, en el sureste espaol, donde el riego ha ido aumentando paulatinamente la concentracin de sales solubles en el sueloyreduciendoelpotencialproductivodemuchoscultivos. Un suelo se considera salino cuando la cantidad de sales solubles en agua que contiene es suficiente para afectar negativamente al crecimiento de la mayor parte de los cultivos. Esto depende lgicamente de la tolerancia de la planta a la salinidad, pero por convenio, se considera que un suelo es salino cuando su conductividad elctrica del extracto de saturacin esmayorde4dS/m. Lamayoradelasregionesridasysemiridasdelmundotienensuelossalinosyfuentes de agua con alto contenido de sales, que impiden el crecimiento y desarrollo de cultivos tradicionales. En la bsqueda de alternativas para mejorar la productividad en estas regiones 14

marginales,seenfatizalanecesidaddeidentificarycaracterizarnuevosrecursosfitogenticos tolerantes al estrs salino ya que la gama de tolerancia, no solo vara con las especies, sino tambinentrevariedadesycultivaresdeunamismaespecie. Los anlisis realizados sobre numerosas muestras de agua utilizadas en el riego en la mayor parte de las zonas agrcolas del mundo, indican que las sales ms abundantes con las formadas por los aniones cloruro, sulfato, bicarbonato y carbonato y los cationes sodio, calcio y magnesio. La presencia de nitrgeno amoniacal o ntrico, boro, flor, cobre, cinc, hierro, plomo, aluminio, etc., es menos frecuente y puede responder a una determinada procedencia al paso por ciertos horizontes de suelos agrcolas o a contaminacin por efluentes de zonas industrialesourbanas. El lmite de tolerancia a la salinidad en la planta viene indicado en primer lugar por un cese en el crecimiento, seguido por la muerte de los tejidos, que comienza a manifestarse como zonas dispersas de aspecto quemado en la hoja (zonas necrticas). A continuacin aparece una inhibicin de yemas, prdida de turgor, cada de hoja y finalmente, marchitez irreversibledelaplanta. Otro cambio tpicamente inducido por la salinidad es la aparicin de suculencia, mecanismo de dilucin interna de sales por absorcin de agua, lo que produce clulas con elevadarelacinvolumen/superficie. La salinidad tambin induce el adelgazamiento y la menor ramificacin en las races de lasplantassensibles,provocandounaumentoenelespesordelasparedescelulares. A nivel subcelular parece que los orgnulos ms afectados son los cloroplastos, observndose una cierta distorsin de su estructura, consistente en la desorganizacin del sistema lamelar, fenmeno que impide reconocer claramente los grana. Adems, puede observarse una inusual acumulacin de gotitas lipdicas. Las mitocondrias se hacen menos densas a loselectrones y sus crestas se hinchan. El ncleo celular sufre un hinchamiento de su doble membrana, mientras que en el aparato de Golgi y en el retculo endoplasmtico se detecta una acumulacin de vesculas con un material denso a los electrones, posiblemente lpidoscondestinoalareparacindeestructurasdaadasporlasalinidad. En general la presencia de sales solubles en el medio de cultivo afecta negativamente al desarrollodelasplantasdetresformas: 1. Disminuyendo el potencial hdrico del medio y restringiendo as la absorcin de agua porlasraces(efectoosmtico).

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2. Por la absorcin de iones salinos especficos, que puede determinar su acumulacin en los tejidos en concentraciones que lleguen a ser txicas e induzcan desrdenes fisiolgicos (toxicidadinicaespecfica). 3.Lasconcentracioneselevadasdeionessalinostambinpuedenmodificarlaabsorcin delosnutrientesesencialesdeterminandodesequilibriosnutricionales(efectonutricional). Hay controversia entre los diferentes autores sobre la importancia relativa de estos efectos potencialmente perjudiciales, pues unos consideran que la mayor parte de los efectos negativos de la salinidad se deben a la disminucin del potencial osmtico del medio radical, mientras que otros, por el contrario consideran que son debidos bsicamente a la accin txicadeionesespecficos. Desde 1958, los efectos de la salinidad sobre la fisiologa de los vegetales han sido clasificados como osmticos, nutritivos y de toxicidad. Los dos primeros son efectos secundarios inducidos por el estrs salino, mientras que el de toxicidad constituye un efecto primariodebidoalassales.

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 MATERIALESYMTODOS

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MATERIALESYMTODOS
Materialvegetal
Se estudiaron plntulas de Chysanthemum coronarium L. procedente de semilla de poblaciones silvestres de la Regin de Murcia que estaban conservadas en el banco de germoplasmadelaEscuelaTcnicaSuperiordeIngenieraAgronmicadeCartagena.Ellotede semillas escogido fue 03328, que se corresponde con una variedad caracterizada por tener captulosconlgulasamarillasyblancasenlamitadperifrica.

Condicionesdecultivo
Lasiembraserealizel20denoviembredel2008enbandejasnegrasdepolietileno.El sustrato utilizado fue fibra de coco y vermiculita en la superficie cubriendo las semillas. Estas bandejas se colocaron en mesas protegidas con un plstico para favorecer la germinacin aumentandolatemperaturaylahumedadambiental.Elriegoenestafaseserealizmediante aspersoresinstaladossobrelamesa. Tras 20 das las semillas germinaron y el 12 de diciembre de 2008 se llev a cabo el trasplante a macetas negras de PVC con dimetro de 14 cm (1,4 L de vol.). El medio de cultivo utilizado fue una mezcla de sustratos realizada en hormigonera, empleando las siguientes proporciones:40%defibradecoco,40%deturbarubiayun20%deperlita.Ademsseaadi 2g/L de un fertilizante de lenta liberacin (Osmocote 101118+2+microelementos; velocidad deliberacin:5/6mesesa21C). Cuandolasplntulastenanunaalturaentre1y3cm(carecandehojasverdaderas)se trasplantaron cuatro por macetas. Tras el trasplante se efectu un riego superficial. Se produjeronuntotalde100macetas. Estas macetas se colocaron sobre dos mesas ubicadas en un invernadero con cubierta de plstico (PE trmico de 200 micras), laterales y frontales de malla blanca antipulgn, ubicado en la Finca Experimental de la Universidad Politcnica de Cartagena, en La Palma (Cartagena). Se dispusieron 50 macetas en cada mesa, distribuyndolas en cinco filas de 10 macetascadauna.

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Elda2deenerode2009,sellevacabolareposicindeplantasenlasmacetas,debido aquealgunasdeellassehabansecado. Elriegofueporgoteomedianteunequipoautomatizadoyprogramabledefertirrigacin XILEMA, que alimentaba un sistema localizado, y cada maceta dispuso de un emisor de 2 L/h con dos microtubos de salida. Todas las plantas fueron regadas por igual durante los primeros 12 das tras el trasplante. En este perodo los riegos se efectuaron cada dos das y la duracin delriegofuede10minutosaproximadamente. A partir del 26 de enero de 2009 se comenz a regar con agua salina una de las mesas (mesa o tratamiento de salinidad), finalizando el 1 de abril de 2009. La conductividad elctrica (CE) de la solucin de riego se mantuvo prxima a los 5 dS/m y el pH alrededor de 78. La aplicacin del agua salina se llev a cabo regando a mano con un vaso de precipitados. El contenedordelaguafueunbidnde80litrosdevolumenquedisponadeungrifoenlaparte inferior.Elaguaderiegosepreparaadiendoclorurosdicoalaguaderiego. La otra mesa (mesa o tratamiento control) se reg con agua con una CE prxima a 1 dS/myelpHalrededorde67.Laaplicacindelriegoenlamesacontrolserealizmedianteel equipoprogramable. A partir del 26 de enero y hasta el 13 de marzo, se aplicaron a ambas mesas un riego los lunes, mircoles y viernes de cada semana. El volumen de agua aplicado fue diferente para cada tratamiento, buscaba un drenaje prximo al 20% del agua aplicada. El da 8 de marzo se aplic a la mesa salina un riego abundante con agua no salina para lavar el sustrato, ya que la acumulacindesalesenesteeramuyelevada. A partir del 13 de marzo hasta finalizar el experimento el 1 de abril, el riego fue diario. Esto fue debido al aumento de la demanda de agua por la planta provocado por un aumento de las temperaturas. Los fines de semana ambas mesas se regaban con el equipo de riego programableconaguanosalinaparalavarelsustratodelasacumulacionesdesales.

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Tratamientos
Se estudiaron dos factores, la salinidad del agua de riego y la aplicacin de fitorreguladores. Para el primer factor se utiliz agua con una salinidad media (~5 dS/m) y un control (1 dS/m). Par el segundo se aplicaron cuatro fitorreguladores: paclobutrazol, etefn, cloruro de mepiquat y cloruro de clormequat. Estas combinaciones produjeron diez tratamientos. Estasmateriasactivasfueronaplicadamediantelaaplicacindelossiguientesproductos comerciales: CULTAR (paclobutrazol 25% p/v, Syngenta Agro S.A., CLOUD (etefn 48% p/v, Sapec Agro), PIX (cloruro de mepiquat (3,8% p/v, BASF) y CCC40 (cloruro de clormequat 40% p/v,AgrometodosS.A.) La aplicacin fue en todos los caso va foliar mediante mochila pulverizadora de capacidad5litros.Serealizarontresaplicaciones.Laprimeraaplicacinconfitorreguladoresse realizel23deenerode2009,aplicando25ppm(paclobutrazol),500ppm(etefn),1500ppm (cloruro de mepiquat) y 1500 ppm (cloruro de clormequat). La segunda aplicacin se realiz el 11 de febrero de 2009, con 25 ppm (paclobutrazol), 750 ppm (etefn), 750 ppm (cloruro de mepiquat) y 750 ppm (cloruro de clormequat). Se redujo la dosis de cloruro de mepiquat y clorurodeclormequatalamitad,yaqueseobservaronquemadurasenlashojas(Foto2).Yse aumentladosisdeetefnalnoobservarsntomasenelcrecimientodelaplanta.Laterceray ltima aplicacin con fitorreguladores se realiz el 2 de marzo de 2009, manteniendo las dosis anteriormenteindicadas.

Medidasevolutivasdeldrenaje
A partir del primer riego y durante todo el cultivo se recogieron semanalmente los

drenajes, de tres plantas escogidas aleatoriamente para cada tratamiento. El drenaje se recogi colocando un vaso de precipitados aforado debajo de la maceta. Se midi el volumen de agua drenada, la CE y el pH mediante un equipo porttil (HI 98150 and HI 9835, Hanna InstrumentsS.L.,respectivamente).

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Medidadecolordelasinflorescenciasydelaclorofilafoliar
El color se determin mediante un colormetro Minolta CR10 (Konica Minolta Sensing,

Inc) que calcul las coordenadas de color (CIELAB): luminosidad (L), ngulo hue (Hue) y croma (Cr). Las medidas del ngulo hue y croma son medidas de absorcin selectiva de luz visible. El croma describe en qu grado esta absorcin selectiva ocurre, lo que determina la mayor o menor viveza (saturacin/palidez) del color, y el ngulo hue describe en que longitud de onda el color es absorbido (el tono), que puede ser amarillo, verde amarillento, azul verdoso, azul, etc. La luminosidad mide la capacidad de reflectar la luz de una superficie, es decir la mayor o menor claridad. Para ello, se realizaron disparos en el centro de la lgula (parte blanca), midiendo20inflorescenciasportratamiento. El contenido relativo de clorofila (SPAD) de las hojas se realiz con un medidor de clorofila Minolta SPAD502 (Konica Minolta Sensing, Inc) y con 5 disparos por medicin. Se midientresplantasportratamiento.

Determinacindelaprdidadeelectrolitos
Los daos en la membrana celular fueron medidos determinando la perdida de electrolitoscomocambiosenlaconductividadelctrica(Bajjietal.,2001). Enhojassituadasenlaparteintermediadelaplantayquenomostrabansntomaspor salinidad se determin el porcentaje de prdida de electrolitos para conocer el posible grado dedaocelularporlasalinidad. Se tomaron para cada tratamiento 3 muestras de hojas para su determinacin. Las hojassecortaronenseccionesde3cmdelongituddesdelazonaintermediadelahojahaciael pice, lavndose con agua bidestilada para eliminar los electrolitos que se liberan de las clulasrotasenlazonadecorte. Se pesaron 5 g de material vegetal que se introdujeron en frascos con 50 ml de solucin 0,3 M de Manitol. Seguidamente se midi la CE con un conductmetro de sobremesa (CRISON GLP 32) y se incubaron los frascos a 45C en un bao (modelo J.P.Selecta SA., Barcelona)durante30minutos.PasadoestetiemposevolviamedirlaCE,yacontinuacinse autoclavaron las muestras durante 15 minutos a 121C. Una vez enfriados los frascos hasta 21

temperatura ambiente, se volvi a medir de CE, correspondiente sta a la destruccin total de las clulas del tejido. La prdida de electrolitos determin usando la formula: PE (%) = (CE a 45C/CEa121C)x100.

Medidasdelosparmetroshdricosdelaplanta
Al finalizar el experimento se midieron el potencial hdrico foliar (h), el potencial osmtico foliar (o), potencial de turgencia (p) y potencial osmtico a plena turgencia (os). Se utilizaron 5 repeticiones en cada tratamiento. Para las medidas del potencial hdrico se utiliz una cmara de presin tipo ScholanderHammel Soil Moisture, mod. 3000 (Soil Moisture Equipment Co, CA, USA) (Foto 3). Segn la tcnica descrita por Scholander et al. (1965), las hojas se envolvieron en una bolsa de plstico y se colocaron rpidamente en la cmara (Turner, 1988). La presin se increment a razn de 0,03 MPa s1 utilizando gas nitrgeno. ElpotencialosmticofuemedidoconunosmmetrodepresindevaporWescor5520 Wescor Inc., Logan, UT, U.S.A. (Foto 4) previamente calibrado con soluciones de osmolaridad conocida. Las hojas recin cortadas eran envueltas en papel de aluminio e introducidas en el nitrgeno lquido para congelar a 170 C y romper las membranas celulares, con lo que el componente de turgencia se anula y el potencial hdrico resulta anlogo al osmtico. Antes de realizar las medidas, las muestras se descongelaron a temperatura ambiente, se colocaron en unajeringa,yeneljugocelularexprimidosemidielpotencialosmticodeacuerdoconGucci et al. (1991). El potencial de turgencia fue calculado como la diferencia entre el potencial hdrico y el potencial osmtico. La suculencia area fue determinada como la relacin peso frescoareo/pesosecoareo.

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Medidadecrecimientoenlaplanta
Se midi la altura y anchura de la planta en 10 plantas para cada tratamiento. La

anchura de planta fue la media de la distancia (en un plano horizontal) entre las dos inflorescencias ms alejadas y la medida perpendicular a esta entre los bordes de la planta. Tambin se midi el nmero de botones, el nmero de captulos abiertos, el nmero de flores senescentes, el peso fresco areo y peso seco areo. Estas medidas se realizaron en cinco plantasdecadatratamiento. Para el clculo del peso seco, se introdujo la parte area de la planta en sobres perfectamente identificados con el nmero de repeticin y tratamiento. Posteriormente, se introdujeron los sobres de papel en una estufa bacteriolgica de conveccin natural (modelo 2002471, J.P. Selecta, S.A., Espaa) a 60C hasta peso constante. Por ltimo, se determin el pesoseco. Se midi el dimetro del captulo, el dimetro del flsculo y la longitud de la lgula tomandoen20inflorescenciasabiertasdecadatratamiento.

Determinacindesolutosinorgnicos
El contenido de solutos inorgnicos (Na+, Cl, K+, P, Ca2+ y Mg2+) se determin en hojas

basales, hojas intermedias y races, en 5 plantas por tratamiento. Para cada parte de la planta se realiz un muestreo cogiendo 100 g aproximadamente de peso fresco, determinndose el peso seco. Las muestras se molieron hasta conseguir un tamao de partcula capaz de atravesar un tamiz de 0,5 mm de dimetro de malla. A continuacin, se tomaron 0,2 g de muestra molida y se le aadi 50 ml de agua destilada. Seguidamente se agit la disolucin durante 30 minutos a 117 rpm y 27C en un agitador Orbital Shater, modelo 481. Finalmente, losextractosfueronfiltradosconayudadeembudosquetenanfiltrosDP145110.Setomaron 5 ml de este filtrado y fueron enviados para analizar en el laboratorio de la Universidad PolitcnicadeCartagena,SAIT,conunCromatgrafoInico,(MeltronHMcolumna838861).

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Medidadelafluorometracloroflica
La fluorimetra cloroflica se midi en 4 hojas por tratamiento seleccionadas segn los criterios para el color usando un Fluormetro de Pulso Modulado FMS2 (Gomensoro Instrumentacin Cientfica, S.A., Espaa) basado en el principio de Feng et al. (2001). Despus de mantener en oscuridad las hojas durante 30 minutos, la mnima fluorescencia en estadode adaptacin a la oscuridad se determin (Fo) y se emiti un pulso de luz saturante (5000 mol m2 s1) durante 0,7 s para determinar la mxima fluorescencia en estado de adaptacin a la oscuridad (Fm). Entonces, las hojasse sometieron a luz actnica (400 mol m2s1) durante 130 s para medir el estadolisto de fluorescencia en luz (Fs). Despus, se aplic otro pulso de luz saturante (5000 mol m2 s1) durante 0,7 s para calcular la cantidad de fluorescencia en el estado de adaptacin a la luz (Fm). A partir de aqu, se apag la luz actnica durante tres segundos y posteriormente se activ la luz infrarroja durante 5 segundos para reoxidar el fotosistema II y medir la mnima fluorescencia en oscuridad con un quenching no fotoqumico similar al encontrado en el estado listo bajo radiacin (Fo). Se calcul la cantidad de quantum en el estado de adaptacin a la oscuridad (Fv/Fm), el quantum adaptado a la luz (PSII), el quenching fotoqumico (qP), el quenching no fotoqumico (NPQ) y la tasa de transferencia de electrones(ETR)segnlassiguientesecuaciones: PSII=(FmFs)/Fm;Fv/Fm=(FmFo)/Fm;qP=(FmFs)/(FmFo) NPQ=(FmFm)/Fm;ETR=PSIIxPARx0,5x0,84(Schreiberetal.1994)

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Anlisisestadstico
Lasignificacindelosefectosdelosdosfactoresestudiados(salinidadyfitorregulador)y su interaccin fue estudiada mediante un anlisis de la varianza bifactorial, usando STATGRAPHICS PLUS para Windows. Las medias de los tratamientos fueron separadas con la PruebadeRangoMltipleLSD(P<0.05). Los resultados de las pruebas cuantificables de ANOVA determinan si las diferencias entre tratamientos y su interaccin son significativas. La interaccin es significativa cuando se observaquelosefectosdeunfactordependendelniveldelotrofactor.Enestecaso,nopuede examinarse el efecto principal de cada factor independientemente. Si el trmino de la interaccin es no significativo se examinan los principales efectos de los factores. De todos modos, aun cuando el trmino de la interaccin del ANOVA es significativo, la prueba no esclarecelanaturalezadelacombinacindelosefectosdelosfactores. El efecto combinado de dos factores puede ser aditivo, antagonista o sinergista. Un efecto aditivo indica que el resultado de los dos factores, aplicados juntos, es equivalente a la suma de los efectos de ambos factores cuando aplic separadamente. Un efecto antagnico indica que el resultado de los dos factores, cuando se aplicaron juntos, es menor que la suma de los efectos de ambos factores, y un efecto sinergista indica que el resultado de los dos factores, aplicados juntos, es mayor que la suma de los efectos de ambos factores cuando aplicanseparadamente.

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 Foto2.Semillasde eChrysanthe emumcorona ariumL. oto3.Trasp plantedeChr rysanthemum mcoronarium mL.amacet ta. Fo

26

 Foto4Macetas M colocadasenlamesa m delinvernadero. Foto o5.Quemad durasenhoja asporlasalin nidad

27

 Foto6. .Sistemade erecogidaymedidadedrenajes d Foto o7.CmaradeScholand derparalamedida m delpo otencialhdr rico.Elesque emadelacm mara est tadaptadodeTaizyZeiger;PlantPh hysiology,4t thEditiononline

28

 Foto8.Detalledelamedidadel d potencialhdrico O depresinde d vaporWescor5520 Foto9.Osmmetro

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 RESULTADOS

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RESULTADOS
Crecimientoydesarrollo
Al estudiar la altura planta observamos una interaccin altamente significativa entre salinidad y fitorreguladores (Tabla 1). La salinidad redujo significativamente la altura de la planta en todos los casos. Esto mismo ocurri con los fitorreguladores aplicados, aunque cloruro de clormequat no afect a altura en condiciones no salinas pero s la redujo bajo salinidad (Fig. 1A), lo que indica que este fitorregulador interaccion con la salinidad acentuando el efecto reductor de la altura por la salinidad (efecto sinrgico). Independientemente de las condiciones de salinidad, etefn y paclobutrazol redujeron la altura del control alrededor del 30% y 60%, respectivamente. La salinidad redujo un 35% la anchura de planta comparado con el control, independientemente de que las plantas fueran tratadas o no con los fitorreguladores. Los fitorreguladores tambin redujeron este parmetro en condiciones salinas y no salinas, excepto el cloruro de mepiquat que mantuvo valores similares a las plantas control (Tabla 1), (Foto 10). El peso seco areo del control fue reducido un 30% por la salinidad, y todos los fitorreguladores tambin lo hicieron, especialmente paclobutrazol y etefn que provocaron una reduccin alrededor del 55% (Tabla 1). La salinidad tendi a aumentar el ndice de compacidad en todos los casos (Fig. 1B), y el paclobutrazol fue el nico fitorregulador que increment este ndice, y lo hizo de forma drstica en condiciones salinas. Esto indica que se produjo un efecto sinrgico entre paclobutrazol y salinidad, que produjo un ndice de compacidad siete veces mayor que en las plantas control. La reduccin del nmero de captulos por la salinidad fue drstica y se produjo en las plantas tratadas y no tratadas con los fitorreguladores (Fig. 1C). Etefn y cloruro de clormequat aumentaron el nmero de captulos por planta en condiciones no salinas, pero ambos productos interaccionaron con la salinidad producindose un efecto antagnico para cloruro de clormequat y sinrgico para etefn. El estrs salino aument el porcentaje de inflorescencias abiertas en un 13%, pero los fitorreguladores tuvieron el efecto contrario (Tabla 1). Etefn y paclobutrazol redujeron este porcentaje, desde un 57% (control) hasta un 6,5% y 13%, respectivamente. (Foto 11).

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La aplicacin de sal no afect al dimetro del captulo, pero los fitorreguladores s (Tabla 1). Paclobutrazol aument el dimetro, mientras que etefn lo redujo a la mitad del tamao del control. Sin embargo, el dimetro del flsculo fue reducido por los dos factores estudiados, siendo etefn el fitorregulador con mayor efecto, reduciendo un 25% con respecto al control. La longitud de la lgula no fue afectada por la salinidad, pero cloruro de clormequat y etefn la redujeron un 20 y un 60%, respetivamente. Consecuencia de estos efectos, la salinidad aument el ndice dimetro captulo/flsculo, y etefn lo redujo fuertemente (Tabla 1), (Foto 12). Las coordenadas de color de las inflorescencias no fueron afectadas por la salinidad, pero s por los fitorreguladores (Tabla 1). El ngulo hue y la luminosidad fueron reducidas por etefn y cloruro de mepiquat, y estos mismos fitorreguladores aumentaron el croma. En las hojas se observ que, independientemente de la aplicacin o no de salinidad, paclobutrazol las haca ms carnosas y de un verde ms oscuro con respecto a la control, con la aplicacin de salinidad, el verde segua siendo ms oscuro que para el control pero era ms amarillento que para la tratada sin sal, el tamao de la hoja tambin se vi reducido con la aplicacin de sal. En etefn, el tamao de la hoja no se vio afectado, la hoja tratada con salinidad adquiri un color ms amarillento que el control pero no se observaron otras diferencias en su morfologa, en cambio la tratada sin salinidad aument la separacin entre los lbulos que forman la hoja y fue menos espigada. Para el cloruro de clormequat y cloruro de mepiquat, la morfologa de la hoja no fue afectada y esta fue muy similar al control (Foto 13). La salinidad disminuy los niveles de clorofila foliar, pero cuando paclobutrazol fue aplicado los contenidos presentados en condiciones salinas se mantuvieron (Fig. 1D), lo que evidencia un efecto antagnico de este fitorregulador en condiciones salinas. En condiciones no salinas, etefn redujo el contenido de clorofila y paclobutrazol lo aument

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Relacioneshdricas
En condiciones no salinas todos los fitorreguladores aumentaron la suculencia area, especialmente el paclobutrazol, que la aument desde 6,7 (control) a 12,3 (Fig. 2). La salinidad redujo la suculencia en todas las plantas tratadas con los fitorreguladores, pero en los no tratadas (control) la salinidad no afect a la suculencia area. Esta reduccin fue proporcionalmente mayor para cloruro de mepiquat y etefn, indicando un efecto sinrgico con la salinidad, que produjo que las plantas tratadas con estos dos fitorreguladores y salinizadas presentaran un ndice de suculencia similar a las plantas no tratadas. El h, o y el os en las plantas salinizadas fueron ms bajos (ms negativos) que en las no salinizadas, independientemente de la aplicacin del fitorregulador (Tabla 2), pero el p no fue alterado. Los fitorreguladores solo modificaron con significacin estadstica el h, aumentndolo cuando se aplic paclobutrazol, cloruro de mepiquat y cloruro de clormequat.

Acumulacindeiones
La salinidad aument fuertemente la concentracin de Na+ en las hojas y races, acumulando 2,5 veces ms en las hojas basales y races y 3 veces ms en las hojas intermedias que las plantas no salinizadas (Tabla 3). Los fitorreguladores slo afectaron al contenido de Na+ en las races, duplicando su concentracin en todos los casos, excepto en las plantas tratadas con cloruro de mepiquat que presentaron valores similares a las plantas no tratadas. Igualmente, el contenido en Cl- de las hojas basales, hojas intermedias y races aument por la salinidad, 15, 18 y 2 veces los valores del control, respectivamente. El contenido de Cl- en las hojas intermedias no fue afectado por los fitorreguladores, pero el de las hojas basales y races fue reducido por la aplicacin de paclobutrazol y etefn (Tabla 3). Significativas reducciones en la concentracin de K+ foliar y radical por la salinidad tambin fueron observadas (Tabla 3 y Fig. 3A). La reduccin del K+ fue mayor en las hojas basales que en las intermedias. Sin embargo, la pulverizacin de paclobutrazol sobre las plantas increment el K+ en las hojas intermedias, pero ninguno de los fitorreguladores afect al contenido de K+ en las hojas basales. Fue en las races

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en donde se produjo la mayor disminucin del K+, y todos los fitorreguladores excepto cloruro de clormequat acentuaron esta cada (Fig. 1A). En condiciones no salinas etefn, paclobutrazol y cloruro de mepiquat mantuvieron mayores niveles de K+ en las races comparado con el control, pero en condiciones salinas se produjo lo contrario, que justifica la interaccin significativa salinidad x fitorregulador con un efecto sinrgico. Los dos factores estudiados no afectaron al contenido de Ca2+ en las races, pero en las hojas tuvieron interacciones significativas (Tabla 3). En plantas no salinizadas, cloruro de clormequat aument fuertemente el Ca2+ de las hojas basales pero en condiciones salinas estas plantas presentaron los valores fueron ms bajos (Fig. 3B). En las hojas intermedias de las plantas no salinizadas, todos los fitorreguladores redujeron el Ca2+. La salinidad redujo el Ca2+ de estas hojas en el control y en las plantas pulverizadas con cloruro de clormequat; por el contrario, paclobutrazol aument el Ca2+ foliar (Fig. 3C). Ni los fitorreguladores ni la salinidad alteraron la concentracin de Mg2+ en las races (Tabla 3). La salinidad redujo ligeramente el contenido de Mg2+ en las hojas basales e intermedias, y el paclobutrazol fue el nico fitorreguladores que alter el Mg2+ foliar, aumentndolo tanto en las basales como en las intermedias.

Fluorescenciacloroflica
La mnima fluorescencia en estado de adaptacin a la oscuridad (Fo) no fue alterada por la salinidad ni por los fitorreguladores (Tabla 4), y la cantidad de quantum en el estado de adaptacin a la oscuridad (Fv/Fm) lo fue por ambos factores. La salinidad redujo la relacin Fv/Fm en las plantas control y en las plantas tratadas con los fitorreguladores, pero el paclobutrazol fren esta cada (Fig. 4A).

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Prdidasdeelectrolitos
La salinidad aument la prdida de electrolitos en las clulas en todos los tratamientos (Fig. 4B). El control y las plantas tratadas con cloruro de clormequat y cloruro de mepiquat lo aumentaron en la misma proporcin, pero etefn y paclobutrazol interaccionaron con la salinidad provocando un efecto sinrgico en el primer fitorregulador y un efecto antagnico en el segundo. Esto produjo que en las plantas estresadas la mayor prdida de electrolitos fuera en las plantas tratadas con etefn y la menor en las tratadas con paclobutrazol.

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Tabla 1.-Significacin estadstica de la salinidad (SL) y los fitorreguladores (FT) y su interaccin sobre los parmetros de crecimiento, desarrollo y color. Paclobutrazol (PAC), etefn (ETC), cloruro de mepiquat (CMC) y cloruro de clormequat (CCL)1 PARMETROS Altura de planta (cm) Anchura de planta (cm) Peso seco areo (g) ndice de compacidad (g/cm3) N de captulos por planta % de inflorescencias abiertas de captulo (cm) del flsculo (cm) Longitud de la lgula (cm) captulo/flsculo Color de lgulas (Hue) Color de lgulas (Croma) Color de lgulas (L) Clorofila foliar (SPAD)
1

Salinidad Control 53,10 b 42,11 b 38,80 b 0,65 a 96,08 b 25,56 a 5,59 a 1,93 b 1,83 a 0,96 a 95,29 a 47,84 a 72,85 a 33,21 b Salinidad 32,43 a 27,12 a 27,84 a 1,24 b 49,84 a 38,80 b 5,49 a 1,81 a 1,84 a 1,05 b 95,27 a 45,52 a 73,99 a 29,01 a PAC 15,63 a 25,42 a 17,87 a 2,56 b 82,90 b 13,15 b 6,54 d 2,06 c 2,24c 1,18 c 98,44 c 39,94 a 75,91b c 38,85 c ETF 36,25 b 31,62 b 24,14 a 0,75 a 88,50 b 6,50 a 3,21 a 1,50 a 0,86 a 0,64 a 86,18 a 68,46 c 63,88 a 22,99 a

Fitorregulador CME 48,60 c 40,46 c 37,29 b 0,42 a 60,70 a 48,27 c 6,39 cd 1,96 bc 2,21 c 1,15 c 98,26 c 39,06 a 77,01 c 30,86 b CCL 53,25 d 35,83 b 36,23 b 0,61 a 68,10 a 39,94 c 5,33 b 1,88 b 1,72 b 0,95 b 94,74 b 47,31 b 74,09 b 30,88 b Control SL

Estadstica FT *** *** *** *** *** ** *** *** *** *** *** ** *** *** SLxFT *** ns ns * * ns ns ns ns ns ns ns ns **

60,10 e *** 39,74 c *** 51,07 c *** 0,40 a **

64,60 a *** 56,66 d 6,22 c 1,96 bc 2,13 c 1,11 c 98,80 c 38,65 a 76,21 c ** ns * ns * ns ns ns

32,03 b ***

ns, *, **, *** indican ausencia de significacin estadstica y significacin con P 0,05, 0,01 y 0,001, respectivamente. Los valores dentro de cada fila que no tienen ninguna letra en comn son significativamente diferentes segn el test de LSD.

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 Tabla 2.-Significacin estadstica de la salinidad (SL) y los fitorreguladores (FT) y su interaccin sobre las relaciones hdricas de las plantas y las caractersticas del drenaje. Paclobutrazol (PAC), etefn (ETE), cloruro de mepiquat (CME) y cloruro de clormequat (CCL).h (potencial hdrico foliar),p (potencialdeturgor),o(potencialosmtico),os(potencialosmticoasaturacin)1 Salinidad PARMETROS Control Suculenciaarea(gPF/gPS) h(MPa) p(MPa) o(MPa) os(MPa)
1

Fitorregulador PAC 11,11a 0,47b 0,50a 0,97a 1,21a ETE 7,69b 0,50ab 0,48a 0,98a 1,24a CME 6,67cd 0,48b 0,71a 1,19a 1,36a CCL 7,69bc 0,43b 0,67a 1,10a 1,32a Control SL

Estadstica FT *** * ns ns ns SLxFT ** ns ns ns ns

Salinidad 6,67b 0,67a 0,57a 1,24a 1,53a

9,09a 0,45b 0,47a 0,91b 1,12b

6,25d *** 0,66a 0,51a ** ns

1,17a *** 1,39a **

ns,*,**,***indicanausenciadesignificacinestadsticaysignificacin con P0,05,0,01y0,001,respectivamente. Losvaloresdentrode cadafilaqueno tienenningunaletraencomnsonsignificativamentediferentessegneltestdeLSD.

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Tabla 3.- Significacin estadstica de la salinidad (SL) y los fitorreguladores (FT) y su interaccin sobre la concentracin de iones en hojas y races. Paclobutrazol (PAC), etefn (ETF), cloruro de mepiquat (CME) y cloruro de clormequat (CCL). Valores en mg/g peso seco1
Salinidad IONES Control Salinidad PAC ETF hojas basales Na+ ClK+ Ca2+ Mg2+ 13,58 a 33,57 a 31,15 b 10,36 a 7,23 b 33,63 b 52,78 b 12,34 a 9,38 a 6,09 a 17,42 a 34,24 a 22,60 a 9,69 a 7,80 c 23,17 ab 39,3 a 20,99 a 10,91 a 6,52 ab hojas intermedias Na+ ClK+ Ca2+ Mg2+ 7,59 a 21,51 a 16,53 b 8,57 a 6,48 b 22,56 b 37,66 b 10,09 a 8,55 a 5,63 a 17,6 a 32,47 a 19,17 b 10,89 b 7,0 b 14,15 a 26,86 a 11,45 a 8,2 a 5,9 ab races Na+ ClK+ Ca2+ Mg2+ 11,07 a 21,06 a 31,02 b 7,16 a 5,8 a 27,82 b 40,84 b 6,07 a 6,31 a 5,12 a 25,47 b 39,40 b 18,47 a 6,88 a 5,69 a 24,5 b 37,30 b 16,62 a 7,25 a 5,78 a 14,58 a 22,09 a 18,08 a 6,49 a 5,46 a 21,54 b 27,38 a 22,41 b 7,11 a 5,74 a 11,13 a 23,56 a 17,19 a 5,95 a 4,63 a *** *** *** ns ns *** *** ** ns ns ns ns *** ns ns 13,25 a 23,53 a 12,52 a 8,109 a 5,97 ab 13,10 a 31,5 a 11,03 a 7,25 a 5,65 a 17,27 a 33,61 a 12,39 a 7,88 a 5,75 a *** ** ** ns * ns ns * ** * ns ns ns ** ns 23,16 ab 43,42 ab 21,07 a 10,01 a 7,22 b 24,77 ab 42,59 a 22,20 a 9,06 a 6,21 a 29,5 b 56,36 b 21,66 a 9,7 a 6,55 ab *** ** *** ns ** ns * ns ns * ns ns ns * ns CME CCL Control SL FT SL x FT Fitorregulador Estadstica

1 ns, *, **, *** indican ausencia de significacin estadstica y significacin con P 0,05, 0,01 y 0,001, respectivamente. Los valores dentro de cada fila que no tienen ninguna letra en comn son significativamente diferentes segn el test de LSD.

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 Tabla 4. Significacin estadstica de la salinidad (SL) y los fitorreguladores (FT) y su interaccin sobre la fluorescencia cloroflica y la liberacin de electrolitos.Paclobutrazol(PAC),etefn(ETF),clorurodemepiquat(CME)yclorurodeclormequat(CCL).Mnimafluorescenciaenestadodeadaptacinala oscuridad(Fo).EficienciadelfotosistemaIIadaptadaalaoscuridad(Fv/Fm).Prdidasdeelectrolitos(PE)1 Salinidad PARMETROS Control Fo Fv/Fm PE(%)
1

Fitorregulador PAC 75,5a 0,86a 1,60a ETF 72,8a 0,81a 3,22d CME 73,1a 0,82a 2,41bc CCL 71,5a 0,82a 2,26b Control 76,4a SL ns

Estadstica FT ns ns *** SLxFT ns ** ***

Salinidad 73,3a 0,79a 3,37b

74,8a 0,87b 1,55a

0,82a *** 2,8cd ***

ns,*,**,***indicanausenciadesignificacinestadsticaysignificacinconP0,05,0,01y0,001,respectivamente.Losvaloresdentrodecadafilaqueno tienenningunaletraencomnsonsignificativamentediferentessegneltestdeLSD.

39

80 Altura de planta (cm)

60

3 40

20

C
125 Nmero de captulos

D
40 Clorofila foliar (SPAD)

100 30 75

50

20

Control

Salinidad

Control

Salinidad

Figura 1.- Efectos de la salinidad y los fitorreguladores sobre la altura de planta (A), compacidad (B), nmero de botones (C) y clorofila foliar (D). Las barras indican el error estndar.

40

Indice compacidad (g/cm3)

Paclobutrazol Etefn Cloruro de mepiquat Cloruro de clormequat Control

Suculencia area (gPF/g/PS)

14

12

PAC ETE CME CCL Control

10

6 Control Salinidad

Figura 2.- Efectos de la salinidad y los fitorreguladores sobre la suculencia area. Las barras indican el error estndar.

41

A
40

Paclobutrazol Etefn Cloruro de mepiquat Cloruro de clormequat Control

K+ (races)

30

20

10

0 14 Ca2+ (hojas basales)

12

10

14 Ca2+ (hojas intermedias)

12

10

6
Control Salinidad

Figura 3.- Efectos de la salinidad y los fitorreguladores sobre el contenido de potasio en las races, calcio en hojas basles (B), calcio en hojas intermedias (C). Las barras indican el error estndar.

42

A
0,90

Fv/Fm

0,85

0,80
Paclobutrazol Etefn Cloruro de mepiquat Cloruro de clormequat Control

0,75

B
Prdida de electrolitos (%) 5

Control

Salinidad

Figura 4.- Efectos de la salinidad y los fitorreguladores sobre Fv/Fm (A) la prdida de electroltos (B). Las barras indican el error estndar.

43

Foto10.Comparativadealturayanchuraentretratamientosconfitorreguladoresy condicionessalinasynosalinas.

44

Fo oto11.Floracinparalo osdistintosfitorregulado f oresencondicionessalin nasynosalin nas

45

Foto12.Detalledelainflore escenciaenetefn e

Foto o13.Morfologadelahojaparalosdistintosfito orreguladore esencondicionessalinasyno salinas

46

 DISCUSIN

47

DISCUSIN
En este experimento, reducciones de la biomasa area y del tamao de planta fueron observados en plantas estresadas con sal. El grado de reduccin de la biomasa por la salinidad est considerado como un criterio para conocer el grado de tolerancia a este estrs (Ho y Adams,1994).Variosinvestigadoreshandemostradoqueelcrecimientoareoesmssensible queelradicalalasalinidad(Shalhevetatal.,1995;Bernstainetal.,2001;Silvaetal.,2008). En este experimento no se midi el efecto de la salinidad sobre el crecimiento radical por su dificultad en la extraccin de las races,ya que C. coronarium desarrolla una extenssima y fina cabelleraradical.LareduccindelpesosecodelaparteareadelC.coronariumseaproximoal 30%, porcentaje que est por debajo del 50% observado en geranios y coleos cuando se regaronconaguasconunniveldesalinidadparecida(Zurayketal.,1993;Ibrahimetal.,1991). En especies autctonas semileosas de la Cuenca mediterrnea estas reducciones fueron del 54% (Cistus albidus) y del 32% (Cistus monspeliensis) (Torrecillas et al., 2003). Y en Asteriscus maritimus, especie herbcea y tambin autctona, la aplicacin de 70 mM de NaCl redujo el crecimiento areo un 55% (Rodrguez et al., 2005). A la vista de estas cifras y considerando slo este parmetro, podemos sugerir que C. coronarium es moderadamente tolerante a la salinidad.Losfitorreguladorafectaronenelmismosentidoquelasalinidadalpesosecoareo, pero con mayor efectividad cuando se aplicaron paclobutrazol y etefn. La ausencia de interaccin salinidad x fitorregulador indica que los fitorreguladores no mejoran ni empeoran elefectodelasalinidad. El tamao desarrollado por las plantas control (no salinizadas ni tratadas con fitorreguladores) en la maceta fue grande, alcanzando mucha altura, lo que redujo su compacidad. Desde el punto de vista ornamental esto imposibilita su comercializacin. En otras especies herbceas y florferas comercializadas en maceta del 14, la altura suele estar entre 20 y 25 cm (Ban et al., 2002). Una fuerte reduccin de la altura es necesaria para resolver este problema, y la salinidad, aunque redujo el tamao de planta y aument la compacidad, no fue lo suficientemente efectiva. En este sentido, slo el paclobutrazol fue efectivo para situar la altura en el intervalo 2025 cm, pero como su efecto fue aditivo al de la salinidad, la aplicacin conjunta de ambos tratamientos nos llev a una altura quizs demasiado baja (16 cm). La adecuacin de la dosis o nmero de aplicaciones podra optimizar estos resultados. La aplicacin de paclobutrazol fue ms efectiva todava sobre la mejora de la compacidad,conunefectosinrgicoencondicionessalinas. La incidencia de la salinidad sobre las caractersticas florferas se centr especialmente en la reduccin de los captulos de la planta (se redujo a la mitad), y tambin retras la 48

apertura de los mismos. Etefn y paclobutrazol favorecieron la presencia de captulos en condiciones no salinas, pero con salinidad este efecto fue dbil. Esto evidencia una prdida importante del fuerte carcter florfero de esta especie cuando es regada con agua salina. Etefn fue el fitorregulador con mayor incidencia sobre el desarrollo de las inflorescencias, afendolas fuertemente al hacerlas ms pequeas e inducir una prdida de calidad de color (de menor viveza, ms claro y con una amarillo ms rojizo). Paclobutrazol actu en sentido contrario, aumentando el tamao de los captulos independientemente de las condiciones salinas. La salinidad inhibe el crecimiento y afecta al desarrollo de las plantas por estrs hdrico (efecto osmtico). En este experimento las plantas salinizadas y no salinizadas presentaron la mismaturgencia,apesardequeelhdelasprimerasfuemsnegativo,loquepudodebersea que estas plantas realizaron ajuste osmtico como indican los valores deos. Sin embargo, la salinidad no desarroll la suculencia (Fig. 2), otra estrategia osmtica para resistir la salinidad (Zekri, 1991) y que puede ser promovida por el NaCl (Batanoumy, 1996). Los fitorreguladores fomentaron la suculencia, pero en condiciones salinas slo las plantas tratadas con el paclobutrazol la mantuvo alta. La influencia de los fitorreguladores sobre los parmetros hdricos fue baja, y slo el paclobutrazol aument el h. Esta mejora del h por el paclobutrazol no fue correspondida con un mayor turgor de estas plantas, ni acompaado por unajusteosmtico,apesardequeenotrostrabajossfueobservadaestarelacin(Davisetal. 1988; Fletcher y Hofstra 1988; Watson 2001; Ban et al., 2005). El aumento del h por el paclobutrazol puede estar relacionado con su capacidad para regulara la apertura estomtica. AsareBoamah et al. (1986) observaron que paclobutrazol increment la resistencia al intercambio estomtico para evitar prdidas de agua va transpiracin. De hecho, el paclobutrazol ha sido comercializado en Canad como antitranspirante en conferas (Fletcher etal.2000). La afeccin de la salinidad sobre el crecimiento y desarrollo est determinada por la acumulacin de iones, produciendo efectos txicos y desequilibrios nutricionales. La salinidad produjo una significativa acumulacin de Na+ y Cl en las hojas y races, especialmente en las hojas basales. Esto puede justificar que estas hojas presentaran claros sntomas por daos salinos (quemaduras y necrosis foliares), mientras que las intermedias estos sntomas no se apreciaron, lo que sugiere que los niveles txicos foliares en C. coronarium estaran alrededor de 34 y 53 mg/g PS de Na+ y Cl, respectivamente. Tanto en las hojas como en las races se acumul ms Cl que Na+, lo que sugiere que el Cl es un in que entr y se transport mejor por la planta que el Na+. Se ha sugerido que el Na+ es un ion que tiende a ser secuestrado en las races y tejidos maduros (Ferguson and Grattan, 2005), mientras que el Cl est 49

continuamente transportndose a las hojas (Munns and Tester, 2008). Sin embargo, la acumulacindeNa+enlasracesyhojasenlasplantassalinizadasnofuemuydiferente,loque indica que no se desarrollaron mecanismos de tolerancia basados en la habilidad para limitar el transporte de Na+ desde las races a la parte area, como se ha sugerido en otras especies (Greenway and Munns, 1980). Quizs, las hojas de la parte baja del tallo desarrollaron este mecanismo de tolerancia a la salinidad (Maathuis and Amtmann, 1999). La aplicacin de paclobutrazol aument la retencin de Na+ y Cl en las races, y consecuencia de ello el contenido de ambos iones disminuy en las hojas basales (Tabla 3). Esto sugiere que paclobutrazol activ este mecanismo de tolerancia a la salinidad al dificultar el ascenso y transporte de Na+ y Cl, lo que mejora la capacidad de la planta para reducir el estrs salino. EstudiossimilaresenotrasespeciescomprobaronlareduccindeNa+yClporelpaclobutrazol (Abou ElKhashab et al., 1997; Saeed, 2005). Por otro lado, aunque se produjo una cierta acumulacindeNa+yClenlashojasintermedias(22,56y37,66mg/g,respectivamente),nose observaron sntomas aparentes de salinidad, lo que podra sugerir un mecanismo de inclusin de iones txicos en esta especie para reducir la concentracin de sal en el citoplasma de las clulas (Waisel, 1972; Leigh and Storey, 1993; Munns, 2002). Cultivos tolerantes a la salinidad como cebada y espinacas no mostraron efectos txicos con concentraciones de Cl entre 20 y 30mg/g(Wuetal.,1995).Losresultadosobtenidosindicanqueningnfitorreguladorfoment estemecanismodeinclusindeiones. El aumento de los iones salinos en la solucin nutritiva puede producir desequilibrios nutricionales al interaccionar con los nutrientes (Grattan and Grieve, 1999). Se suelen establecercompetenciasentreelNa+yelrestodecationes,destacandosucompetenciaconla entradadeK+(Schroederetal.,1994),queseproduceporquetienensimilarestamaoinicoy propiedades qumicas (Harry and Benton, 1996). En este estudio, el estrs salino redujo fuertemente el contenido de K+ en las hojas y races. En las races la reduccin fue del 80% del control (Tabla 3), lo que sugiere que con altos contenidos de Na+ en la solucin del medio se mejoralaabsorcindeesteinendetrimentodelK+.LadisminucindelcocienteK+/Na+enlas races desde 2,86 (control) a 0,23 (salinidad) en este experimento lo confirma. En las hojas basales de las plantas salinizadas este ratio fue de 0,36 y en las intermedias de 0,45, lo que indicaqueeltransportedeK+eneltallonoestuvomuyafectadoporlacompeticinconelNa+, como han comentado otros autores (Salim, 1989; Navarro et al., 2007). La interaccin entre el contenido de Na+ y K+ se ha considerado un factor clave para determinar la tolerancia a la salinidad de las plantas (Willadino and Camara, 2005). Cuanto ms competencia tiene el Na+ y el Cl con el resto de iones, mayor sensibilidad a la salinidad (Nieman and Clark, 1976; Slama, 1986). Segn Greenway and Munns (1980) ratios K+/Na+ 1,7 son necesarios para una 50

optimizarlaeficienciametablicadelasplantasnohalfitas,loqueindicaquelareduccindel K+afectalcrecimientoydesarrollodeC.coronariumbajosalinidad.Porotrolado,elK+esuno de los principales solutos compatibles para hacer el ajuste osmtico (Wyn Jones y Gorham, 1983). Su reduccin por la salinidad favorece que el ajuste osmtico se alcance mediante la acumulacin deNa+yK+(Alarcnetal.,1994),aumentandolaprobabilidaddeproducirdaos celulares. Con los resultados obtenidos, no est claro el papel de los fitorreguladores para mantener los niveles de K+. Se ha sugerido que paclobutrazol mantiene altos niveles de K+ en hojas y races en mango bajo estrs salino (Kishor et al., 2009). En este experimento, esto solo se observ en las hojas intermedias, y es posible que influyera sobre la ausencia de sntomas salinos en dichas hojas, lo que sera un efecto aadido del paclobutrazol para mejorar la toleranciaalasalinidadC.coronarium. El contenido de Ca2+ en los tejidos de C. coronarium no fue afectado por la salinidad, sin embargo, se ha sugerido que altas concentraciones de Na+ en la solucin nutritiva reduce la disponibilidad del Ca2+ en la planta (Ho et al., 1993; Luchi and Epstein 1984). Quizs, el estrs aplicado no fue lo suficientemente fuerte para producir este comportamiento, ya que De Pascale et al. (2003) encontraron en pimiento la mejora de la habilidad para coger Ca2+cuando el estrs salino era moderado, pero un fuerte estrs salino redujo el transporte del Ca2+. Y Niu and Rodriguez (2008) encontraron un comportamiento errtico del contenido de Ca2+ en portainjertosderosabajosalinidad. SehasugeridoqueelMg2+puedeinteraccionarconelNa+yCa2+,yquetieneungranefecto depresivosobre el K+ (Harryand Benton, 1996).Sin embargo,a lavista de las concentraciones de Mg2+ enlos tejidos (Tabla 3), no parece queeste in haya incidido fuertemente sobrelos efectos producidos en este experimento. La salinidad redujo ligeramente el Mg2+ en las hojas, y el paclobutrazol tuvo el efecto contrario. El Mg2+ es un importante constituyente de la clorofila, y la reduccindeloscontenidosfoliaresporlasalinidad(Arshietal.2002;ElIkliletal.2002;ElKheir etal.2000)podrajustificarladisminucindeclorofilafoliarporlasalinidad.Ylocontrariopodra decirse para el PAC. El aumento de la clorofila por el paclobutrazol est considerado como un efecto tpico de este compuesto, que se debe a la estimulacin de la sntesis de citoquininas (Fletcher y Arnold, 1986) o a la prevencin de su degradacin (Grossman, 1992), ya que esta hormona induce la sntesis de clorofila (Visser et al. 1992) y la diferenciacin de cloroplastos (Fletcheretal.1982;Harveyetal.1974). El estrs salino afecta a todos los procesos metablicos y fisiolgicos de las plantas, especialmente a la fotosntesis. La reduccin de la fotosntesis puede estar relacionada con aspectos estomticos (Hsiao et al., 1976; Osmond et al., 1982) o puede ser consecuencia de daos en los cloroplastos (Soldatini y Gianini, 1985). La salinidad fomenta la formacin de 51

especiedeoxigenoactivasquepueden daarloscentrosdereaccindelfotosistemaII(PSII) y a la integridad de la membrana celular (Bowler y Fluhr, 2000). El anlisis de la fluorescencia cloroflica es una tcnica eficaz y precisa para estudiar los daos en el aparato fotosinttico. Entre los parmetros ms utilizados para valorar la actividad fotoqumica de las clorofilas est laeficienciadelPSIIadaptadaalaoscuridad(Fv/Fm)(MaxwellandJohnson2000,Havauxetal. 1991). Fv/Fm es una medida porcentual de la capacidad fotoqumica potencial del PSII, y est basado en el clculo de la mnima fluorescencia en estado de adaptacin a la oscuridad (Fo) y la mxima fluorescencia en estado de adaptacin a la oscuridad (Fm). La sensibilidad de este ratio a estreses ambientales lo ha convertido en un fiable indicador del estrs que sufre la planta (Krause and Weis 1991; Figueroa et al. 1997). Los valores estables de Fo en todos los tratamientos de este estudio indican que no hay daos importantes en el funcionamiento del centro de reaccin del PSII a nivel basal(Araus et al 1998; BolharNordenKampf et al. 1989). El mantenimiento de la Fo y la reduccin de Fv/Fm indican una reduccin de Fm, lo que significa una menor cantidad de PSII disponible. Esto sugiere que la salinidad redujo la capacidad fotosinttica potencial de la planta. paclobutrazol fren la cada de Fv/Fm en plantas estresadas con sal, mostrando una capacidad protectiva del PSII frente a daos por estrs salino. Laprdidadeelectrolitosdeterminalapermeabilidaddelamembranacelularysesuele usar como ndice de medida del dao celular por un estrs (Earnshaw, 1993). A mayor liberacin de electrolitos mayor permeabilidad de la membrana, y por tanto mayor daos a nivel celular. En este experimento la salinidad da las membranas celulares, y el efecto combinado de la salinidad y el paclobutrazol sugieren un papel protectivo del fitorregulador frente a este dao. Sakhabutdinova et al. (2004) encontraron daos similares por la salinidad en trigo. Los daos sobre la membrana celular estn fuertemente relacionados con la disminucin de la actividad fotosinttica de la planta (Deshmukh et al., 2006), y en nuestro caso podran haber participado en la produccin de daos al PSII. Parece lgico pensar que el desequilibrio de iones ocasionado por la salinidad produjo daos en las membranas celulares. Se ha sugerido que altas concentraciones de Na+ en la solucin de riego reduce la disponibilidad del Ca2+ (Ho et al., 1993) o puede desplazar al Ca2+ de las posiciones de intercambio en las membranas celulares (Cramer et al., 1985). En este experimento pudo ocurrirlosegundo,yaqueelcontenidodecalcioenlostejidosnofuealteradoporlasalinidad. Por otro lado, se ha sugerido que el K+ tiene una funcin protectora tanto de la membrana celular como de los enzimas relacionados con su estabilidad (Hasegawa et al., 2000). La fuerte reduccin de K+ observado en este experimento redujo, por tanto, la capacidad protectiva de lasmembranas. 52

En este experimento, las implicaciones del paclobutrazol sobre los mecanismos de proteccin frente a daos por salinidad en las membranas y el PSII pueden estar relacionados la reduccin del contenido de Na+ y Cl en hojas y races, el aument el K+ en las hojas intermedias y el mantenimiento de la cada de la clorofila foliar (Fletcher and Hofstra, 1988) y de la suculencia area. No obstante, hay otras sugerencias que relacionan la capacidad protectiva del paclobutrazol con la mejora de la actividad de los sistemas antioxidantes (Senaratnaetal.,1988;Fletcheretal.2000)yladetoxificacindeespeciesdeoxgenoactivado (Upadhyaetal.,1989;KrausandFletcher,1994).

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 CONCLUSIN

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CONCLUSIN
A la vista de nuestros resultados podemos considerar que C. coronarium es moderadamente tolerante a la salinidad, aunque su capacidad florfera se vio fuertemente disminuida por la salinidad. Parece que esta planta desarrolla mecanismos de tolerancia a la salinidad frenando el transporte de Na+ y Cl y al incluir iones txicos. Los sntomas por salinidad ms evidentes fueron en las hojas basales, donde se acumularon las mayores concentraciones de iones salinos. El dao en las membranas celulares de estas hojas puede estar relacionado con la fuerte reduccin de K+. El fitorregulador ms eficaz para control el crecimiento y desarrollo y mejorar la resistencia a la salinidad fue el PAC, que mejor la compacidad, aument el tamao de los captulos, fren la cada de Fv/Fm y redujo el dao en las membranas celulares. Esto sugiere que paclobutrazol activ este mecanismo de tolerancia alasalinidadaldificultarelascensoytransportedeNa+yClyfrenarlacadadeclorofilafoliar por la salinidad. Sugiere que la salinidad redujo la capacidad fotosinttica potencial de la planta. Etefn da fuertemente la floracin y el resto de fitorreguladores no fueron lo suficientemente efectivos, quizs porque las concentraciones aplicadas o el nmero de aplicaciones no fue el adecuado, o porque las exigencias de estas materias activas son demasiadas altas para producir una mejora ornamental sin generar problemas de fitotoxicidad.

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 REFERENCIAS

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REFERENCIAS
ABOU ELKHASHAB, A. M., ELSAMMAK, A. F., ELAIDY, A. A. and SALAMA, M. I. 1997. Paclobutrazolreducessomenegativeeffectofsaltstressinpeach.JournalofAmerican SocietyforHorticultureSciences,122:4346. Alarcon, J.J., M.J. SanchezBlanco, M.C. Bolarin, and A. Torrecillas. 1994. Growth and osmotic adjustmentoftwotomatocultivarsduringandaftersalinestress.PlantSoil166:7582. Alarcon, J.J., SnchezBlanco, M.J., Bolarn, M.C. and Torrecillas, A. 1993. Water relations and osmotic adjustment in Licopersicon esculentum and L. pennellii during sortterm salt exposureandrecovery.Physiol.Plant.89:441447. Amtmann, A. and Sanders, D. 1999. Mechanisms of Na+ uptake by plant cells. Adv. Bot. Res. 29:75112. Araus JL, Amaro T, Casadesus J, Asbati A, Nachit MM. 1998. Relationships between ash content,carbonisotopediscriminationandyieldindurumwheat.AustralianJournalof PlantPhysiology.25,835842. Arshi, A., Abdin, M.Z. and Iqbal, M. 2002. Growth and metabolism of senna as affected by salt stress.Biol.Plant.45(2):295298. AsareBoamah NK, Hofstra G, Fletcher RA, Dumbroff EB. 1986. Triadimefon protects bean plantsfromwaterstressthroughitseffectsonABA.PlantCellPhysiology.27:383390. Bajji, M., Kinet, J.M., Lutts, S. 2001. The use of the electrolyte leakage method for assessing cell membrane stability as a water stress tolerance test in durum wheat. Plant Growth Regul.36:6170 Ban, S., Fernndez, J. A., Ochoa, J., SnchezBlanco, M. J. 2005. Paclobutrazol as an aid to reduce some effects of salt stress in oleander seedlings. European Journal of HorticulturalScience.70:4349. Ban, S.; Gonzlez, A.; Cano, E.A.; Franco, J.A. Fernndez, J.A. 2002. Growth, development and colour response of potted Dianthus caryophyllus cv. Mondriaan to paclobutrazol treatment.ScientiaHorticulturae.94:371377. Barret, J.E. 1982. Chrysanthemum height control by ancymidol, PP333 and EL500 dependent onmediumcomposition.HortScience17(6):896897. Batanoumy,K.H.1996.EcophysiologyofhalophytesandtheirtraditionaluseintheArabworld. En: Halophytes and Biosaline Agriculture (R. ChoukrAllah, C.V. Malcolm, A. Hamdy, eds.),pp:3153.MarcelDekker,Inc.NewYork.

57

Bernstain, N., Ioffe, M., Zilberstaine, M. 2001. Saltstress effects on avocado rootstock growth I. Establishing critera for determination of shoot growth sensitivity on the stress. Plant Soil.233,111. BolharNordenkampf, H. R. , S. P. Long , N. R. Baker , G. Oqquist , U. Schreibers , and E. G. Lechner .1989.Chlorophyll fluorescence as a probe of photosynthetic competence of leavesinthefieldareviewofcurrentinstrumentation.Funct.Ecol.3:497514 Bowler, C., and Fluhr, R. 2000. The role of calcium and activated oxygen as signals for controllingcrosstolerance.TrendsPlantSci.5:241246. Chapman,J.F.;Shearing,S.J.1984.ICIpotornamentaltrials.ICIInternalReport. Cramer, G.R., Luchli, A., Polito, V.S. 1985. Displacement of Ca+ by Na+ from the plasmalemma ofrootcells.Aprimaryresponsetosaltstress?PlantPhysiol.79:207211. Crowe, L. M. 1998. Lessons from nature: the role of sugars in anhydrobiosis. Comp. Biochem. Physiol.AMol.Integr.Physiol.131:50513 Davis, T.D.; Steffens, G.L.; Sankhla, N. 1988. Triazole plant growth regulators. Horticultural Reviews.10:63105. De Pascale SRuggiero CBarbieri GMaggio A. 2003. Physiological responses of pepper to salinity anddrought.JournaloftheAmericanSocietyforHorticulturalScience.128(1):4854. Deshmukh S, Hckelhoven R, Schfer P, Imani J, Sharma M, l Weiss M, Waller F, Kogel KH. 2006. The root endophytic fungus Piriformospora indica requires host cell death for proliferation during mutualistic symbiosis with barley. Proc. Natl. Acad. Sci. 103: 1845018457. Earnshaw, M.J. 1993. Stress indicators: electrolyte leakage. In: G.A.F. HENDRY y J.P. GRIME (Eds.) Methods in comparative plant ecology. A laboratory manual: 152154 Chapman &Hall.London. ElIklil, Y, Karrou, M., Rachid, M. and Benichou, M. 2002. Salt stress effect on metabolite concentrations of Lycopersicon esculentum and Lycopersicon sheesmanii. Can. J. Plant Sci.82(1):177183. ElKheir, M.S.A.A., S.A. Kandil and H.A. ElZeiny. 2000. Growth, yield and some physiological processesofsunflowerplantsasaffectedbypaclobutrazoltreatmentsundersaltstress conditions.EgyptJ.Agron.22:10724. Feng, Z.P., Hamid, J., Doering, C., Bosey, G.M., Snutch, T.P., and Zamponi, G.W. 2001. Residue G1326 of the Ntype calcium channel alpha 1 subunit controls reversibility of w conotoxinGVIAandMVIIAblock.J.Biol.Chem.276:1572815735.

58

Feng, Z.P., Hamid, J., Doering, C., Jarvis, S.E., Bosey, G.M., Bourinet, E., Snutch, T.P., and Zamponi, G.W. 2001. Amino acid residues outside of the pore region contribute to N typecalciumchannelpermeation.J.Biol.Chem.276:57265730. Ferguson, L. and S.R. Grattam. 2005. How salinity damages citrus: Osmotic effects and specific iontoxicities.HortTech15:9599. Figueroa F.L., S. Salles, J. Aguilera, C. Jimnez, J Mercado, B Viegla, A FloresMoya & M. Altamirano.1997.Effectsofsolarradiationonphotoinhibitionandpigmentationinthe redalgaPorphyraleucosticta.MarineEcologyProgressSeries.151:8190. Fletcher, R. A., Kallidumbil, V. and Bhardwaj, S. N. 1986. Effects of fusicoccin on fresh weight and chlorophyll levels in cucumber cotyledons. Plant and Cell Physiology. 23(4): 717 719. Fletcher, R.A. and Arnold, V. 1986. Stimulation of cytokinin and chlorophyll synthesis in cumcumbercotyledonsbytriadimefon.Physiol.Plant.66:197201. Fletcher, R.A., Gilley, A., Sankhla, N., Davis, T.D. 2000. Triazoles as plant growth regulator and stressprotectants.HorticulturalReviews.23:55138. Fletcher, R.A., Hofstra, G. 1988. Triazoles as potential plant protectants. En: Sterol synthesis inhibitors in plant protections. (Berg, D., Plempel, M., eds.) Ellis Horwood Ltd., Cambridge,MA.pp.321331. Fletcher, R.A.,A. Gilley, N. Sankhlam,T.D.Davis. 2000. Triazoles as plant growth regulators and stressprotectants.Hortic.2:55138. Flowers,T.J.,Flowers,S.A.,Hajibagheri,M.A.andYeo,A.R.1991.Ionaccumulationinthecell walls of rice plants growing under saline condition: evidence for the Oertli hypothesis. PlantCellEnviron.14:319325. Grattan, S.R., Grieve, C.M. 1999. Salinitymineral nutrient relations in horticultural crops. ScientiaHorticulturae.78:127157. Greenway, H., Munns, R., 1980. Mechanisms of salt tolerance in nonhalophytes. Ann. Rev. PlantPhysiol.31:149190. Grossmann, K.J. 1992. Plant growth retardants: their mode of action and benefit for physiological research. Proceedings of the 14th International Conference on Plant GrowthSubstances,Amsterdam:788797. Gucci, R., Xiloyannis, C. and Flore, J.A. 1991. Gas exchange parameters water relations and carbohydrate partitioning in leaves of fieldgrown Prunus domestica following fruit removal.PhysiolgiaPlantarum.83:497505. Hare P.D., W.A. Cress 1997. Metabolic implications of stressinduced proline accumulation in plants.PlantGrowthRegulation.21:79102 59

Harry A. y Jones Benton J.Jr. 1996. Plant Analysis Handbook Il. Micro Macro Publishing lnc. Georgia,USA. HARVEY, B.M.; LU, BC.; FLETCHER, R.A. 1974. Benzyladenine accelerates chloroplast differentiation and stimulates photosynthetic enzyme activity in cucumber cotyledons. CanadianJournalofBotany.52:25812586. Hasgawa, P.M., Bressan, S.A., Zhu, J.K., Bohnert, H.J. 2000. Plant cellular and molecular responses to high salinity. Annual review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology.51:463499. Havaux, M., Grepping H. and Strasser RJ. 1991. Functioning of Photosystems I and II in pea leavesexposedtoheatstressinthepresenceofabsenceoflight.Planta.186:8898. Ho, K., Nichols, C.G., Lederer, W.J., Lytton, J., Vassilev, P.M., Kanazirska, M.V., Hebert, S.C., 1993. Cloning and expression of an inwardly rectifying ATPregulated potassium channel.Nature.362:3138. Ho,L.C.,Adams,P.1994.Regulationofthepartitioningofdrymatterand calciumincucumber inrelationtofruitgrowthandsalinity.AnnalsofBotany.73:539545. Hsiao T. C., Acevedo, E., Fereres, E., Henderson, D. W. 1976. Stress metabolism, water stress growth and osmotic adjustment. Philosophical Transactions Royal Society of London, SeriesB273:479500. Ibrahim, K.M., Collins, J.C., Collin, H.A. 1991. Effects of salinity on growth and ionic compositionofColeusblumeiandSalviasplendens.J.Hort.Sci.66:215222. Intrieri, C.; Silvestroni, O.; Turri, S. 1987. Uptake and transport of C paclobutrazol on vine grapeseedlings.AdvancesinHorticulturalSciences.1:1519. Jarma,A. J., Morales, W. R., Mosquera, H. 2004. Efectos del cloruro de mepiquat en la fotosntesis y parmetros del rendimiento en algodn (Gossipium hirsutum L.) var. Gossica.Temasagrarios.9(2):512. Jung, J.; Rentzea, C.; Rademacher, W. 1986. Plant growth regulations with triazoles of the dioxanyltype.JournalofPlantGrowthRegulation.4:181188. Kishor, A., Srivastav M., Dubey, A. K., Singh, A. K., Sairam, R. K., Pandey, R. N. and Dahuja, A. 2009. Paclobutrazol minimises the effects of salt stress in mango (Mangifera indica L.) TheJournalofHorticulturalScience&Biotechnology.84(4):459465. Klock, K. A. 1998. Influence of urban waste compost media and paclobutrazol drenches on impatiensgrowth.HortScience.33(2):277278. Kraus, T.E. and Fletcher, R.A. 1994. Paclobutrazol protects wheat seedlings from heat and paraquat injury. Is detoxification of active oxygen involved? Plant and Cell Physiol. 35(1):4552 60

Krause, G.H., WEIS E., 1991. Chlorophyll fluorescence and photosynthesis: the basics. Annu. Rev.PlantPhysiol.42:313349. Luchli, A., Epstein, E. 1984. Mechanisms of salt tolerance in plants. California Agriculture 38:181 Leigh,R.A.,Storey,R.,1993.Intercellularcompartimentationofionsinbarleyleavesinrelation topotassiumnutritionandsalinity.J.Exp.Bot.261:755762. Lever,B.G.1986.Cultar,atechnicaloverview.ActaHorticulturae.179:459466 Maathuis, F.J.M., Amtmann, A., 1999. K+ nutrition and Na+ toxicity: the basis of cellular K+/Na+ ratios.Ann.Bot.84:123133. Maxwell K, Johnson GN. 2000. Chlorophyll fluorescence A practical guide. Journal of ExperimentalBotany.51:659668. Munns R. 2002. Comparative physiology of salt and water stress. Plant Cell Environ. 28: 239 250. Munns,R.andTester,M.2008.Mechanismsofsalinitytolerance.Ann.Rev.PlantBiol.59:651 681. Navarro, A., Ban, S., Olmos, E., SnchezBlanco, M.J. 2007. Effects of sodium chloride on water potential components, hydraulic conductivity, gas exchange and leaf ultraestructureofArbutusunedoplants.PlantScience.172:473480. Neumann, P.M. 1997. Salinity resistance and plant growth revisited. Plant Cell Environ. 20: 11931198 Nieman R.H., Clark, R.A. 1976. Interactive effects of salinity and phosphorus nutrition on the concentrations of phosphate and phosphate esters in mature photosynthesizing corn leaves.PlantPhysiol.57:157161. Niu, G., D. Rodriguez, and L. Aguiniga. 2008. Response of growth and ion uptake of three rose rootstockstosalinewaterirrigation.HortScience.43:14791484. Osmond, C.B., Winter, K., and Ziegler, H. 1982. Functional significance of difference pathways of CO2 fixation in photosynthesis. En: Encyclopedia of Plant Physiology. New Series. Eds. Lange, O.P., Nobel, P.S, Osmond C.B. and Ziegler, H. pp. 479547. SpringerVerlag. Berlin. Quilan, J.D.; Richardson, P.J. 1986. Uptake and translocation of paclobutrazol and implications fororcharduse.ActaHorticulturae179:443451. Rademacher, W. 1989. Gibberellins: metabolic pathways and inhibitor of biosynthesis. En: Target sites of herbicide actions (Bger, P.; Sandmann, G.; Eds.). CRC Press, Boca Raton,Florida,USA.

61

Rademacher, W. 1995. Growth retardants: biochemical features and applications in horticulture.ActaHorticulturae394:5773. Rhoades, J. D., Kandiah, A., Mashali, A. M. 1992. The use of saline waters for crop production. FAOIrrigationandDrainagepaper48. Rodrguez, P., Torrecillas, A., Morales, M.A., Ortuo, M.F., SnchezBlanco, M.J., 2005. Effects ofNaClsalinityandwaterstressongrowthandwaterrelationsofAsteriscusmaritimus plants.Environ.Exp.Bot.53:113123. Saeed,W.T.(2005).Pomegranatecultivarsasaffectedbypaclobutrazol,saltstressandchange infingerprints.BulletinofFacultyAgriculture,56(3):581616. Saha, K.; Gupta, K. 1998. Effect of triazoles and CCC on growth, yield and metabolism of mung beanplantsundersalinitystress.IndianJournalofPlantPhysiology3(2):107111. Sakhabutdinova, A.R., Fatkhutdinova, D.R., Shakirova, F.M. 2004. Effect of salicylic acid on the activity of antioxidant enzymes in wheat under conditions of salination. Appl. Blochem.Microbiol.40:501505. Salim,M.1989.Effectofsalinityonionuptakeandgrowthofmungbeanplants(Vignaradiata L.)NewPhytologist113:1320. Scholander, P.F., Hammel, H.T., Bradstreet, E.D., Hemmingsen, E.A., 1965. Sap pressure in vascularplants.Science.148:339346. Schroeder, J. I., Ward, J.M., Grassman, W. 1994. Perspectives on the physiology and structure ofinwardrectifyingK+channelsinhigherplants:biophysicalimplicationsforK+uptake. Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.23:441471. Senaratna, T., Mackay, C., Mckersie, B. and Fletcher, R. 1988. Uniconazole induced chilling tolerance in tomato and its relationship to antioxidant content. Journal of Plant Physiology,133:5661. Serrano, R. 1996. Salt tolerance in plants and microorganisms: toxicity targets and defense responses.Int.Rev.Cytol.165:152. Shalhevet,J., Huck,M.G.,Schroeder,B.P.1995. Root andshootgrowthresponsestosalinity in maizeandsoybean.Agron.J.87:512516. Siegel, M.R. 1981. Sterolinhibiting fungicides: effects on sterol biosynthesis and sites and action.PlantDisease.65:986989. Silva, E. C., Nogueira, R.J.M.C., Arajo, F.P., Melo, N. F., Andr, D. A. N. 2008. Physiological responsestosaltstressinyoungumbuplants.ScienceDirect.63:147157 Slama, F. 1986. Intervention des racine dans la sensibilit ou la tolerance NaCl de plantes cultives.Agronomie.6:651658.

62

Soldatini, G. F. and Giannini, A. 1985. Influenza dello stress idrico e salino sulla fissazione della CO2esulmetabolismaminoaciditoinplantulediZeamaysL.Agrochimica.29:7488. Torrecillas, A., Rodrguez, P., SnchezBlanco, M.J. 2003 Comparison of growth, leaf water relations and gas exchange of Cistus albidus and C. monspeliensis plants irrigated with waterofdifferentNaClsalinitylevels.ScientiaHorticulturae.97:353368. Turner, N.C., 1988. Measurement of plant water status by the pressure chamber technique. Irrig.Sci.9:289308. Upadhyaya, A., Davis, T., Walser, R., Galbraith, A. and Sankhla, N. 1989. Uniconazoleinduced alleviation of low temperature damage in relation to antioxidant activity. Hort Science, 24:955957. Valds, R., Puerto, P., Martins, J., Ochoa, J., Ban, S. 2008. Adecuacin del Chrysanthemum coronariumalcultivoenmacetaporprohexadionaclcicaypaclobutrazol. VernieriP.,MugnaiS.,BorghesiE.,PetrognaniL.,SerraG.2006.Nonchemicalgrowthcontrol ofpottedCallistemonlaevis.AgricolturaMediterranea. Vissers, C.; Fletcher, R.A.; Saxena, P.K. 1992. Thidiazuron stimulates expansion and greening in cucumbercotyledons.PhysiologicalandMolecularBiologyofPlants1:2126. Waisel,Y.1972.Biologyofhalophytes(T.T.Kozloaski,ed.).AcademicPress,NewYork. Wang, S.Y., Sun, T.; Faust, M. 1986. Translocation of paclobutrazol, a gibberellins biosynthesis inhibitor,inappleseedlings.PlantPhysiology82:1114. Watson, G.W. 2001. Soil applied paclobutrazol affects root growth, shoot growth, and water potential of American elm seedlings. Journal of Environmental Horticulture 19(3): 119 122. Wild, A. 1988. Russells soil conditions and plant growth. Eleventh Edition, Longman Scientific andTechnical.991pp. Willadino, L.G.,Cmara, T.R. 2005. Aspectos fisiolgicos do estresse salino em plantas. In: Nogueira, R.J.M.C., Arajo, E.L., Willadino, L.G., Cavalcante, U.M.T. (Eds.), Estresses ambientais: danos e benefcios em plantas. UFRPE, Imprensa Universitria, Recife, pp. 118126. Wu, L., J. Chen, H. Lin, P. Van Mantgem, M. Ali Harivandi, and J.A. Harding. 1995. Effects of regenerant wastewater irrigation on growth and ion uptake of landscape plants. J. Environ.Hort.13:9296. Wyn Jones, R.G., Gorham, J. 1983. Osmoregulation. En: Encyclopedia of Plant Physiology, vol. 12C.PhysiologicalPlantEcologyIII(Lange,O.L.,Nobel,P.S.) York,A.C.,1983.CottoncultivarresponsetoMepiquatChloride.Agron.J.75:663667.

63

Zekri, M. 1991. Effects of NaCl on growth and physiology of sour orange and Cleopatra mandarinseedlings.ScienceHortic.47:305315. Zurayk, R., Tabbarah, D., Banbukian, L., 1993. Preliminary studies on the salt tolerance and sodiumrelationsofcommonornamentalplants.J.PlantNutr.16:13091316.

64