INTRODUCCIN

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE UREA EN SUERO SANGUINEO

PRACTICA # 5

La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) ms abundantes en el cuerpo. Los dems son la creatinina, el cido rico, el amonio y los aminocidos. En otros tiempos todos eran medidos juntos (prueba del NNP), pero debido a que el anlisis de cada componente por separado es

bastante sencillo y proporciona datos ms precisos, las pruebas individuales han sustituido al del metabolismo de las protenas y slo se sintetiza ene l hgado. Su concentracin es igual en todos los lquidos corporales, con excepcin de la sangre entera debido a la diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere el suero o plasma ala sangre

global casi por completo. La urea es el principal producto nitrogenado de desecho

entera para analizar el nitrgeno de urea. Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos de los estudios ms solicitados para detecta la capacidad del rin para excretar desechos necesidad de dilisis en pacientes con insuficiencia renal crnica. La interpretacin de los valores metablicos. La elevacin de estos valores s e emplea, junto con otros, como indicador de la del nitrgeno de urea exige el conocimiento de la ingestin de protena exgena y de lquidos, y las condiciones que pueden incrementar la produccin endgena (por ejemplo: la actividad muscular, un traumatismo, la infeccin de una dieta muy restringida, el ayuno o la inanicin). mismo no es un reflejo real de la depuracinrenal de urea. Pueden usarse dos pruebas, con las Cualquiera de estas variables pueden aumentar la concentracin sangunea o urinaria que en si debidas precauciones en la interpretacin, como indicadores aproximados de mejora o deterioro

de la funcin renal del individuo. Aunque las determinaciones de urea es mucho menos especfica rutina para la funcin renal y para conocer algo sobre el estado de hidratacin del individuo. depuracin.

que de la creatinina srica, es de uso comn, particularmente en pediatra, como una prueba de Grados menores de disfuncin renal requieren anlisis ms sostificados como las pruebas de UREA COMO PRODUCTO FINAL EN EL SER HUMANO

Un ser humano moderadamente activo que consume cerca de 300 g de carbohidratos, 100 g de grasa y 100 de protenas diariamente, debe excretar aproximadamente 16.5 g de nitrgeno al da, 95% en la orina y 5% en las heces. Para las personas que consumen dietas occidentales, la urea 90% del nitrgeno excretado. FORMACIN DE LA UREA

sintetizada ene l hgado, liberada hacia la sangre y depurada por los riones, constituye de 80-

La sntesis de un mol de urea requiere de tres moles de ATP, un mol de amoniaco y el nitrgeno de

alfa amino del aspartato. Enzimas que catalizan las reacciones:1. Carbamoil fostafo sintasa I2. los seis aminocidos participantes el N-acetilglutamato funciona nicamente

Orinitin transcabamoilasa3. Arginasa4. Argininosuccinasa5. Acido argininosuccnico sintasa.De un activadorenzimtico.Los dems sirven como portadores de tomos que en ltima instancia se como

convierten enurea. En los mamferos, la funcin principal de la ornitina, la citrulina y al

argininosucinato est en la sntesis de urea. La biosntesis de urea es un proceso cclico. La ornitina ornitina, citrulina, argininosuccinatoo arginina. Sin embargo el ionamonio, CO2 y ATP y aspartato s se consumen, algunas reacciones de lasntesis de urea tiene lugar e n lamatriz mitocondrial en tanto que otras se realizan en el citosol. FISIOLOGA

consumida en la reaccin es degenerada en la reaccin5 y no hay prdida ni ganancia total de

La urea se forma a travs de un proceso de degradacin protenica, la protena se transforma a partir deaminocidos en amoniaco (desaminacin oxidatixa), como un producto final y de ah en urea (ciclo de laornitina) dentro del hgado .Debido a que el organismo no utiliza urea, es trasportada en la sangre hasta que es excretada por va urinaria. Sus concentraciones varan

fisiolgicamente, dependiendo de una manera directa del consumo de protenas en

la dieta (exgeno) y del estado de hidratacin (proporcin de soluto a solvente ene l cuerpo), o de modoindirecto por al tasa del catabolismo tisular (rpida degradacin corporal, que incrementa el desperdicio denitrgeno), o por la tasa de anabolismo tisular (disminucin de las concentraciones

por un mayor ndice deconstruccin tisular, como sucede durante al gestacin o convalecencia. La urea se excreta en el filtradoglomerular y se reabsorbe (probablemente por difusin) en el tbulo filtrado glomerular, pero a causa de que la urea se reabsorbeen los tbulos de manera deficiente, se reabsorbe poca urea, esto es un efecto benfico. de la neurona. Slo se excreta una fraccin de todo el material de desperdicio contenido en el

PATOLOGIAS RELACIONADAS: Urea alta neuroptica y urolgica (uremia renal y posrenal).

La hiperazotemia es el signo humoral ms simple de la insuficiencia renal orgnica y constituye la significa uremia ninefropata, muchas veces la elevacin de la urea obedece a causas extrarrenales. Uremia aguda

uremiagenuina en clnica. Pero hay que tener bien clara la idea de que no toda la urea alta

Va acompaada de anuria o oliguria con orina densa. Aunque rpidamente se alcanzan cifras muy altas o muy altas de urea, el cuadro es, a veces irreversible.

En la glomerulonefritis aguda en la que, a diferencia de la crnica, la reaccin xantroproteica es normal, pues salvo la anuria absoluta no existe retencin de sustancias aromticas.

En la nefropata anrica (nefrosis de neurona distal, anuria traumtica, etc), el en shock, necrosis muscular isqumica, shocks hemolticos o transfusionales.

En la nefrosis necrotizante por el sublimado y otros txicos. Uremia Crnica

Con una cantidad normal de orina o con poliuria compensadora. La orina tiene una densidad separar este grupodel anterior.

densa. Corresponde a lesiones renales avanzadas e irreversibles, de ah la razn pronostica para

En la glomrulonefritis crnica, aqu la reaccin xantoproteica de cifras altas. En la esclerosis renal primaria o secundaria. En las nefropatas quirrgicas (hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis, rin poliqustico, etc.) En la nefropata calcra de la ostetis fibrosis qustica avanzada, tambin en el mieloma mltiple se observa amenudo insuficiencia renal, en un caso neutro, la retencin ureica alcanz 360 mg. Urea alta extrarrenal o prerrenal

Es decir, sin nefropata demostrable, aunque puede existir, por lo menos en algunos casos, una insuficiencia renal funcional. Es un trastorno irreversibleen al eliminacin renal y no da lugar alauremia propiamente dicha. Se presenta siempre en forma aguda o subaguda, alcanzndose rpidamente a veces cifras muy altas,superiores a la azotemia neuroptica.

Suele acompaarse de oliguria, con orina de densidad normal o concentrada y de color oscuro.La urea en orina se encuentra en proporcin normal, mientras que decrece la concentracin de sodio(<15mEq/l). Estos hallazgos permiten diferenciar la uremia prerrenal de la debida insuficiencia renal. Existen dos grandes mecanismos, a menudo coincidentes en un mismo creatinina plasmtica es alta en lauremia prerrenal circulatoria y normal en al debido a hiperproduccin (sangre retenida en intestino,infartos o neumonas masivas, etc) enfermo, de uremia perenal, por dficit de oferta de sangre al rin y por hiperproduccin. La

DISMINUCIN DE UREA. La disminucin de urea tiene escaso significado clnico, ya que no es una sustancia necesaria para elfuncionamiento del organismo. Los valores bajos se encuentran con menos frecuencia que los elevados. Se hasugerido que una concentracin disminuida de nitrgeno de urea puede ser signo de unpronstico favorable,debido a que indica una funcin renal normal con excrecin adecuada.

1. Cualquier trastorno con aumento de la secrecin de hormonas andrgenas o del crecimiento, talvez debido alefecto anablico de estas hormonas.2. Embarazo normal, relacionado con: Aumento de la circulacin renal plasmtica y del IFG, secundario a la expansin del volumen plasmtico. El estado anablico del cuerpo.3. Insuficiencia heptica grave, en particular la que acompaa ala obstruccin de la circulacin en la

vena porta,debido a la incompetencia del hgado para convertir el amoniaco en urea. Cabe esperar unincremento concomitante en la concentracin sangunea de amoniaco.4. Cambios rpidos en la hidratacin como: Rehidratacin rpida cuando se han agregado compuestos nonitrogenados ala solucin intravenosa.El paciente que ha estado sobrehidratado y despus sometido a unadiuresis rpida. La disminucin del nitrgeno d e lo comn slo tiene inters acadmico.5. Es un hallazgo raro que puede ocurrir en: Ingesta elevada de bebidas o administracin endovenosa abundante de lquidos. Durante El embarazo, por aumento de filtrado glomerular. En hepatopatias graves, fulminantes, anablicos. Enfermedad celaca. coninsuficiencia de sntesis de urea.6. Tambin en: Acromegalia. Uso de esteroides 2. EN ANLISIS CLNICOS. La urea Es el principal metabolito de las protenas. Los valores oscilan entre 16 y 45 mg/dl . Se suele expresar como BUN o nitrgeno ureico sanguneo (urea = BUN x 2,146). Se cuantifica mediante una prueba espectrofotomtrica cintica. Su catabolismoproteico, a disminucin de la perfusin renal (shock, deshidratacin,

urea que se relaciona con cambios rpidos en al hidratacin,es en si misma temporaly por

aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a aumento del insuficiencia cardiaca, sndromehepatorrenal), a insuficiencia renal parenquimatosa aguda o crnica o a insuficiencia renal postrenal por obstruccin. Aunque la urea sangunea es un parmetro muy utilizado en la valoracin de la funcin renal, es poco sensible,ya que slo se eleva cuando se ha perdido ms de la mitad de la funcin renal, y no insuficiencia heptica, ya que se sintetiza en el hgado.La uremia es mejor evaluada en conjunto con la creatinina. Tanto en la azotemia prerenal y postrenal el BUN est ms elevado que la creatinina. Sin embargo en el 88% de los nios deshidratados por demasiado especfica. Laurea sangunea disminuye en situaciones de hemodilucin y en la

gastroenteritisquienes presentan una acidsis metablica presentan concentraciones de BUN < de 18 mg/dl. En la enfermedad renal progresiva crnica, cerca del 75% del parmquima renal es destruido antes de que se desarrolle la azotemia. El nitrgeno ureico refleja el radio entre la produccin de urea y su depuracin. El BUN aumentado puede

ser debido al aumento o disminucin de la produccin de excrecin. A pesar de que utilizan la mayora de las veces juntos. 3. Valores normales: 16-45 mg /dl 4. Preparacin del paciente: ayuno de 8 hrs 5. Muestra: Suero o plasma.

la creatinina es considerada la prueba ms especfica para evaluar la funcin renal, se

6. Metodologa: Espectrofotometra

INTERFERENCIAS: Se puede reducir el nivel del BUN si se combina con una dieta con pocas protenas y abundantes carbohidratos.

El BUN normalmente es bajo en nios y mujeres debido a que en su masa muscular es menor que la del varn adulto.

Al final del embarazo y durante al lactancia el BUN se eleva ya que aumentan el uso de protenas. Los ancianos pueden padecer BUN elevado cuando su rin no concentra al orina de manera adecuada.

Al principio del embarazo el BUN puede disminuir tambin por hidremia fisiolgica.

Medicamentos: Aumentado: Allopurinol, aminocidos, anfotericina B, captotril, carbamacepina, cimetidina, aspirina,cisplatino, tetraciclina, hidroclorotiazida, interleukina 2,pentamidina, tertratolol, ketoprofeno. ciclosporina, furosemida, gentamicina, neomicina,

Disminuido: Hormona de crecimiento, prednisona, cido ascrbico, heparina, amikacina, iodoacetato,parametasona, fenotiazinas FUNDAMENTO:

La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftalaldehido en medio cido originando un complejo coloreado que puede cuantificarse espectrofotomtricamente:

SIGNIFICADO CLNICO. La urea es el resultado final del metabolismo de las protenas; se forma en el hgado a partir de su destruccin. Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de protenas, enfermedades renales, insuficiencia cardaca, hemorragias gstricas, todos los datos clnicos y de laboratorio

hipovolemia y obstrucciones renales. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta

MATERIAL

4 sistemas vacutainer (aguja y jeringa) 4 ligaduras 1 gradilla Palillos 4 tubos vacutainer con heparina 4 tubos de ensaye (13x100ml) 2 pipetas Pasteur con bulbo 1 pipeta de 100 u 3 pipetas de 1 ml.

EQUIPO

Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 340 nm. Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. MUESTRAS BIOLGICAS

Suero o plasma heparinizado: No usar sales de amonio o fluoruro como anticoagulantes. Orina: Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50(factor de dilucin); Evitar el crecimiento bacteriano, manteniendo el pH < 4.*La urea es estable 5 das a 2-8C o-Ftalaldehido solucin borato patrn primario acuoso de Urea

REACTIVOS R1 R2

4,8mmol/L 87 mmol/L 50mg/dL

UREA CAL PRECAUCIONES

R2: Corrosivo (C).

R35: Provoca quemaduras graves .S26: En caso de contacto con los ojos, lvense inmediatamente y abundantemente con agua y acuda a su medico.S30: No echar jams agua a este producto.S45: En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele la etiqueta).

CONSERVACIN Y ESTABILIDAD: Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de

caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. se evita su contaminacin. UREA CAL: Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos dela luz y

Indicadores de deterioro de los reactivos: PROCEDIMIENTO

Presencia de partculas y turbidez.-Absorbancia (A) del Blanco a 510 nm > 0,20. 1. Condiciones del ensayo:

2. Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . 510 nm (500-550) 3. Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... .1 cm paso de luz 4. Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C2. A) Cintica

5. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

1. Pipetear en tubos de ensayo: Blanco R1 (ml) Patrn (ul) Muestra (ul) 1.0 --Patrn 1.0 50 -Muestra 1.0 -50

2. Mezclar e incubar 1 minuto y aadir: R 2 (mL) 1.0 1.0 1.0

3. Mezclar, incubar a 37C y leer las absorbancias a 1 minuto (A1) y a los 2 minutos (A2). 4. Calcular el incremento de la absorbancia A= A2 A1. ( ( Muestra

calibrador

50 ( conc. Calibrador ) 0 mg l dl de Urea en la muestra.

B) Punto final

1 .Pipetear en una cubeta: Blanco R1 (ml) Patrn (ul) Muestra (ul) 1.0 --Patrn 1.0 25 -Muestra 1.0 -25

2. Mezclar y aadir R 2 (mL) 1.0 1.0 1.0

3. Mezclar e incubar 15 minutos a 37C. 4. Leer la (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo. (A)Muestra 50 ( conc. Calibrador ) 0 mg l dl de Urea en la muestra.

(A) calibrador

10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea. Factor de conversin: mg/dL x 0,1665 = mmol/L. VALORES DE REFERENCIA

Suero: de 15 a 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L) Orina: de 20 a 35 gr/24 horas

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. RESULTADOS:

CONCLUSION: En esta prctica se pudo realizar de manera exacta, hubo una comprensin del mtodo y la realizacin correcta de esta misma, tambin se pudo realizar la prueba con las recomendaciones adecuadas para que el resultado no sea incorrecto, la realizacin de esta prctica fue de una manera sencilla no fue tan laboriosa y se tuvo el cuidado necesario para poder realizarla correctamente, tambin en esta prctica se pudo ver la importancia de una rotulacin correcta debido a que sin en los tubos la rotulacin no es la adecuada nuestros resultados sern incorrectos y perjudicaremos a nuestro paciente de manera grave, tambin se pudo aprender a interpretar unos resultados correctos comparando con otras mesas resultados y viendo dependiendo a distintos factores porque algunos estudios tienen como resultados algunas alteracin no graves pero que pueden llegar a confundir al laboratorista y si no se sabe correctamente se dar un resultado incorrecto, asi mismo tener en cuenta los valores de referencia y ver que no sobre salgan de un valor normal y si lo hace saber por qu y si esto podra afectar de manera grave y marcada los resultados e interpretacin de los estudios.

BIBLIOGRAFIA: http://es.scribd.com/doc/22632638/3-Determinacion-Cuantitativa-de-Urea-en-Suero http://issuu.com/macagamo/docs/manual_de_practicas_de_bioqu_mica_cl_nica_i