Professional Documents
Culture Documents
Centrifugas
Poucos experimentos so realizados sem pelo menos uma passagem pela centrfuga Usadas para separar partculas de uma soluo Em laboratrios de pesquisa biolgica: Sangue Clulas Separao de fases Organelas Isolamento de macromolculas (DNA, RNA, vrus, protenas)
Centrifugao
Qual velocidade? rpm x rfc (g) ? Qual o tipo de separao desejado? Qual centrfuga usar? Que temperatura? Qual o tubo apropriado? Qual o rotor? Como centrifugar
Fora centrfuga
A fora centrfuga relativa (Rcf) cuja unidade o g gerada quando uma partcula ou conjunto de partculas sujeito a um movimento circular de acelerao Rcf (g) = 1,12 x 10-5 x R x N2 R = raio em centmetros N = velocidade de centrifugao em rpm 1 g equivalente acelerao da gravidade na superfcie da Terra
Fora centrfuga
Tipos de centrifugao
Centrifugao diferencial (separao de fases)
Amostras centrifugadas a certa velocidade resultam em sobrenadante e plete (baseada no tamanho das partculas) Tamanho maior sedimenta mais rpido Ex: separao do sangue em elementos figurados e plasma / soro,
Tipos de centrifugao
Centrifugao por gradiente de densidade
Centrifugao de escala zonal Separao de partculas com diferentes densidades Ex: separao de mononucleares por Ficoll-Hypaque Hemcias:1095 densidade, mononucleares 1065 e Ficoll 1077 Utiliza gradiente de meio viscoso
Centrfugas
Centrfuga de bancada Centrfuga de bancada refrigerada Centrfuga de alta velocidade Ultracentrfuga Microcentrfuga Citocentrfuga
Centrfuga de bancada
Mltiplos fins: peletizar clulas e bactrias, sedimentao de soro, urina, clulas e sangue Suporte oscilante: at 3.800g ou 6.000 rpm Capacidade: normalmente 32 x 5mL ou 16 x 10mL Com ou sem tacometro Controle de tempo Sem freio
Ultracentrfuga
Sedimentao de macromolculas, ribossomos, vrus... ngulo fixo ou suporte oscilante At 100.000rpm - 800000rcf (g) Tubos tamanhos variveis , Cho ou bancada Programvel Sorvall WX Sempre refrigerada Cmara fechada vcuo (atrito com ar eleva temperatura e diminui velocidade) Programvel
Microcentrfuga
Volumes pequenos, precipitao de clulas (baixa velocidade), retirada de debris, extraes com etanol e minifenol ngulo fixo: mx 14000rpm Capacidade :tubos eppendorf 20 x 2mL Sensor tampa Sem refrigerao
Jouan A14
Citocentrfuga
Produo de monocamada de clulas em rea definida Ex: lminas para deteco de Anca Cytofunnel sada nica ou dupla Programvel Capacidade at 12 cmaras Suporte oscilante:200 a 2000rpm Sensor tampa fechada + tampa de segurana
Cytospin 2 Shandon
Rotor
Tubos
Seleo do tubo adequado: De acordo com o tipo de rotor Evitar vazamento ou perda da amostra (mecanismo de lacre) Assegura compatibilidade qumica (resistncia) Permite fcil recuperao da amostra (transparncia)
Como centrifugar
Conhea as limitaes de velocidade da centrfuga e dos rotores Equilibre todos os tubos com seus suportes, tampas, proteo e pinos Se usar um tubo para equilibrar, encha-o com material similar ao que vai centrifugar - gua = contrabalancear fora do meio Utilize tubos, tampas e suportes apropriados (filme plstico) Preencha os tubos at 1 ou 2 cm da borda Tubos ntegros ( sem rachaduras)
Como centrifugar
Suportes no utilizados podem desequilibrar a centrfuga Materiais infecciosos SOMENTE EM TUBO FECHADO Retire as amostras da centrfuga assim que terminar amostras paradas = plete disperso Centrfugas refrigeradas: feche a tampa no intervalo das centrifugaes (evitar queda de temperatura e condensao) e deixe aberta quando terminar (secar) Limpe com pano macio e hipoclorito/lcool 70% quando acabar de usar
Armazenamento de amostras
Tubos e caixas apropriados e identificados
Identificao
Canetas permanentes e durex sobre o escrito para tubos e caixas NUNCA identifique amostras de pacientes pelas iniciais Ex: MCO = Maria Cristina Oliveira quantas ? Todo material coletado pela disciplina, pertence disciplina , no ao ps-graduando Material devidamente identificado pode ser utilizado no futuro
Banco de dados
001 LESa SPK 20/07/2004
data coleta N ENSAIO 20/07/2004 1 27/09/2004 2 17/08/2004 3 14/09/2004 4 28/09/2004 5 19/10/2004 6 15/07/2004 7 16/08/2004 8 19/04/2005 9 RG HSP Nome 1058511 Bruna Suzuki Donoso 1485459 Helen Micaela A Aguiar 10068367 Fernando de Souza 10070001 Liliam Bruna O Magalhes 1061544 Juliane B de Oliveira 10099595 Paula Ferreira 10052027 Thiago L de Oliveira 1134111 Isabela C de Souza 10104632 Jaqueline R S Albuquerque SEXO Idade Sledai ETNIA ACR FAN DNAifi DNA EIA CH100/C2 F 14 6 NC 4 PF 1:320 NEG 101 182U/>100% F 6 6 C 9 PF>1:320 NEG 94 161U/67 NEG 50 150 M 16 8 C 5 NEG F 17a 11m 8 C 6 PF 1:80 NEG 81 263/88% F 18a 11m 12 C 7 PF 1:80 NEG 173 234/>100% F 16 13 C 6 PF1:640 NEG 74 <30/43% M 14 16 C 9 PF 1:320 NEG 81 203/100 F 18 14 NC 6 HO >1:640 1/40 505 239/>100% F 11 8 C 5 PG >1:640 NEG 173 277/>100%
Conservao de amostras
Conservao de amostras
Geladeira: material biolgico temporariamente, reagentes e solues pelo prazo de validade dos mesmos Sangue total: utilizao imediata para ensaios hemodinmicos e dosagens bioqumicas, geladeira por 1 semana* ou -20C somente para futura extrao de DNA Soro ou plasma: -20C por tempo indeterminado (selado) Clulas sempre em soluo de tamponamento para morte celular -70C por tempo limitado, nitrognio lquido (-196 C ) por tempo indeterminado Tecidos ou orgos: -70C
Conservao de amostras
Alquotas
Por que fazer?
Prevenir decomposio por congelamentos e descongelamentos repetidos Prevenir contaminao por mltiplos usos Por convenincia fsica Para economizar tempo no preparo de uma soluo ou tempo de descongelamento