LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA CUESTIONARIO 1) Enumere 10 diferentes medios de cultivo y la utilidad de los mismos Agua de Peptona.

La peptona tiene una elevada concentracin de Triptfano, el cual es degradado a Indol por un cierto nmero de micro-organismos entre ellos E. coli Baird-Parker, Base de Agar Por la presencia del Litio Cloruro y el Potasio Telurito se inhi-be el crecimiento de microorganismos no deseados. Por la presencia del Sodio Piruvato y la Glicina se favorece el crecimiento de los Estafilococos. A su vez el Potasio Telurito combinado con la accin de la yema de huevo permite diferenciar los Estafilococos. Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Glucosa (VRBG), Agar. Por la presencia simultnea de violeta cristal y sales biliares se asegura en gran parte la inhibicin de la flora acompaante. La degradacin de la glucosa a cido se pone de manifiesto por el cambio de color del indicador. La presencia de halo en estas colonias corresponde a un precipitado biliar. Bilis-Tetrationato-Verde Brillante, Caldo. La y Bilis el Verde Brillante inhiben el crecimiento de la flora Gram-positiva. Las bacterias reductoras del tetrationato como Proteus y Salmonella crecen de forma ptima, mientras que Coliformes y flora habitual del intestino queda inhibida. Puede aadirse Novobiocina a una concentracin de0,04 g/l de Caldo para inhibir el crecimiento de Proteus. El carbonato clcico neutraliza el cido formado en la reduccin del tetrationato. Bordet Gengou, Base de Agar El medio con glicerina y sangre est indicado para el crecimiento de Bordetella pertussis y Bordetella para pertussis. Se puede conseguir que el medio sea selectivo si se aaden 0,25 unidades de Penicilina por cada ml. En las muestras de secreciones nasofarngeas hay mucha flora acompaante de Bordetella resistente a la Penicilina, porlo que se recomienda la adicin de 40 mg de cefalexina por litro de medio. Chapman TTC (Tergitol 7), Agar. La fermentacin de la Lactosa se pone de manifiesto por el viraje del Azul de Bromotimol; las colonias lactosa positiva tienen un halo amarillo, mientras que la lactosa negativa presenta un halo azulado. El Sodio Heptadecil Sulfato(Tergitol 7) es inhibidor de la flora acompaante. Este medio puede ser utilizado sin la adicin de TTC y permitir la presuncin de Coliformes. La adicin del TTC per-mite una sospecha precoz de la presencia de E. coli . Este producto es reducido por todos los Coliformes, a excepcinde E. coli . Las colonias adquieren un color rojo ladrillo, mientras que la colonia deE. coli es amarilla con o sin centro anaranjado. Urea, Base de Agar. Este medio es menos tamponado que el Caldo Urea adems tiene componentes nutritivos y energticos, lo que permite un
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA crecimiento ms diversificado de microorganismos y una deteccin ms amplia de ureasa positivos. A su vez el Sodio Cloruro aporta la salinidad necesaria para el buen desarrollo de los microorganismos. En el proceso de degradacin de la urea se produce amonaco, ste hace variar el color del indicador Rojo de Fenol (de amarillo a rojo) ponindose as de manifiesto la actividad ureasa. WL, Agar Nutriente. Despus de amplios trabajos en la industria de la fermentacin se lleg a la conclusin que el sistema de control de calidad deba contemplar el empleo de dos medios, uno que permitiera el desarrollo de mohos y levaduras (WL Nutriente, Agar) y otro que realizara las mismas funciones que el anterior pero inhibiera el crecimiento de levaduras permitiendo la numeracin de todas las bacterias que hay que tener en cuenta en la fermentacin. Este ltimo efecto se consigue en el medio Diferencial al aadir cicloheximida como antibitico. Segn el tipo de proceso fermentativo se deber ajustar el pH del medio a determinados valores. El pH 5,5 es ptimo para la industria cervecera; si se realiza la numeracin de levaduras en panificacin ajustar el pH a 6,5. Marino, Caldo. Por su contenido salino permite el crecimiento de las bacterias marinas en un medio anlogo al natural. La peptona bacteriolgica y el extracto de levadura constituyen el aporte nutritivo para el buen desarrollo de estos grmenes 2) Describa que medios de cultivo utilizara para una siembra simple de bacterias de fcil crecimiento. Y por qu? Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo necesario para el crecimiento, lo cual vara segn el organismo que se quiere cultivar, pero que comprende: agua, compuestos nitrogenados, una fuente de energa y otros factores de crecimiento. Los requerimientos nutricionales de las bacterias varan desde los sencillos compuestos inorgnicos de las auttrofas hasta complicadas vitaminas y factores de crecimiento de algunas hetertrofas. Algunos medios, como por ejemplo el agar nutritivo son capaces de soportar el crecimiento de muchas bacterias, pero su problema radica a que no es diferencial.

3) Mencione cuales son las condiciones de temperatura, pH, cantidad de oxgeno y de solutos bajo las cuales se desarrollan las levaduras. TEMPERATURA La temperatura en la cual la mayora de las levaduras crecen est en el rango de 5-37 C, pero el valor ptimo se encuentra en los 28 C. El valor ptimo mencionado no es totalmente ptimo exactamente en ambientes naturales.

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LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA Las levaduras que habitan en la superficie de las hojas se encuentran expuestas a las temperaturas mximas de 40-50c bajo condiciones de luz intensa ya temperaturas mnimas de 5c -10c durante la noche. PH Rango ptimo de PH: 4.5-6.5 Cabe resaltar que muchas especies toleran grandes variaciones de PH 2.8-3 a 2-8.5 Los cidos orgnicos tienen efector inhibir en su forma disociada, el ion H+ no penetra en la clula pero el cido no disociado RCOOH si lo puede hacer. La sensibilidad de una levadura a un cido orgnico depende as del pH y de la capacidad de a levadura de metabolizar o eliminar el cido si este penetra ala clula. es por ello que los cidos sorbido y propionico son ms inhibidores que los cidos acticos, ctricos y lctico.

OXIGENO Todas las levaduras son aerbicas, cuando el oxgeno est presente , estas crecen eficientemente a partir de carbohidratos del medio para producir la biomasa y co2. Sin embargo cuando no hay oxigeno o disminuye, las levaduras cambian a metabolismo anaerbico o fermentativo, que se traduce en al menor cantidad de biomasa y produccin de alcohol.

El oxgeno tambin interviene en la sntesis de esteroles y del cido nicotnico. si estos compuestos estn presentes en el medio , las levaduras pueden desarrollarse en anaerobiosis total. En el caso contrario para la supervivencia de las levaduras son necesarios 0.0015 mg de oxigeno por gramo de biomasa para llevar a cabo la sntesis de los esteroles. PRESIN OSMTICA Y ACTIVIDAD DEL AGUA Mayormente las levaduras crecen en medios que disponen de gran cantidad de agua. Algunas levaduras son osmotolerantes y soportan una actividad de agua (Aw) del orden de 0.65 (zygosacharomyces rouxii), valor aunque ningn otro microorganismo puede desarrollarse. El efecto de la presin osmtica vara de una cepa a otra. El mecanismo de resistencia de las levaduras en medios con actividad de agua baja se
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA explica por la acumulacin en al clula de polioles para minimizar la diferencia de presin osmtica entre al clula y el medio. A dems del papel de la minimizacin de la diferencia de presin osmtica sobre la membrana citoplasmtica, los polioles tienen una funcin sobre el desempeo de las enzimas. Los valores de Aw pueden variar cuando cambian las propiedades nutritivas del sustrato, PH, temperatura, disponibilidad de oxgeno y presencia de sustancias inhibidoras. SOLUTOS Muchas levaduras crecen en presencia de concentraciones de solutos como el azcar o la sal superiores a aquellas en que crecen la mayora de las bacterias.

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