Urea y creatinina sricos.

I. INTRODUCCIN. La urea es el principal producto final del metabolismo proteico. Es formado en el hgado por hidrlisis de la arginina por efecto de la arginasa. Es libremente filtrada por el glomrulo y reabsorbida (60%) por el tbulo, principalmente a nivel colector. El 90% de la urea excretada por el organismo corresponde a los riones, y el 10% restante, al tubo digestivo. Su determinacin se hace por el mtodo de la diacetilmonoxima dando como resultado la concentracin de nitrgeno urico en miligramos por dl.; para convertir este valor a urea debe ser multiplicado por 2,14 ya que el nitrgeno urico comprende aproximamente 47% del peso molecular de la urea. Los valores normales en el recin nacido varan entre tres y diez miligramos por dl en los lactantes cinco a diez miligramos por dl en nios pre escolares y escolares 5 a 15 miligramos por dl y en la etapa post puberal 10 a 15 miligramos por dl. Estos valores pueden ser modificados por muchos factores: ingesta protica, funcin heptica y deshidratacin entre otros. Los valores de urea se elevan en insuficiencia renal slo despus de una reduccin sustancial de la velocidad de filtracin glomerular. Por esta razn no es tan til para detectar modificaciones precoces de la funcin renal. La creatinina es derivada del metabolismo de la creatina del msculo, por degradacin enzimtica, slo 2% de ella es convertida cada da a creatinina y excretada por la orina. La excrecin de creatinina es proporcional a la masa muscular y es relativamente constante en cada individuo. El ejercicio y la ingesta alta de carne pueden aumentar la creatinina su excrecin urinaria. Las enfermedades degenerativas de los msculos, tales como la distrofia muscular, puede aumentar la produccin de creatinina. La creatinina filtrada por el glomrulo y, con excepcin de una pequea proporcin secretada por el tbulo proximal, no atraviesa el epitelio tubular. La medida de creatinina sricos es uno de los mtodos ms valiosos para estimar la tasa de filtracin glomerular y sus valores normales estn relacionados estrechamente a la edad.

II. OBJETIVOS: 1. Determinar la concentracin de urea y creatinina srica basal. III. MATERIALES: 3.1 Materiales y equipos 3.1.1. Materiales: A. Biolgico: Sangre total Suero sanguneo

B. De vidrio: 6 Tubos de ensayo 13 x 100

C. Reactivos: Reactivos para urea Reactivo 1

o Fenol.532mMol/L o Nitroferricianuro de sodio.0.85mMol/L o Etilen bis - ditiocarbanato.0.3mMol/L Reactivo 2 o Hipoclorito de sodio o P- toluensulfoncloramida o Hidrxido de sodio Ureasa Standard de urea 60 mg/dL Reactivos para urea Ac. Pcrico Hidrxido de sodio Standard de creatinina

3.1.2. Equipos e instrumentos: 1 Bao mara 1 Espectrofotmetro 1 Centrfuga Micropipetas 2 Gradillas

3.1.3. Otros: Tips de micropipetas 6 Cubetas para espectrofotmetro 1 mL Cronometro

IV. PROCEDIMIENTO:

4.1. Determinacin de Urea en sangre

FUNDAMENTO DEL MTODO La ureasa descompone especficamente a la urea produciendo dixido de carbono y amonaco; ste reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de indofenol que se determina colorimtricamente.

Obtener una muestra de sangre de una persona en ayuno. Extraer suero de manera usual y realizar la prueba de determinacin de urea de acuerdo al siguiente cuadro:

En tres tubos 15 x 100 marcados: B, S, M, colocar una gota de agua y agregar: Tubo Blanco Standard Muestra Standard (L) -20 -Muestra (suero) (L) --20 Ureasa (gota) 1 1 1 Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C. Luego agregar: Reactivo 1 (L) 1 000 1 000 1 000 Reactivo 2 (L) 1 000 1 000 1 000 Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C. Luego agregar: Agua destilada (mL) 10 10 10 Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus de 10 minutos leer en espectrofotmetro a 540 nm, llevando el equipo a cero con el blanco.

Clculos:

Valores de referencia en suero : 0,20 0,45 g/L

4.2. Determinacin de creatinina en sangre

FUNDAMENTO TERICO: CREATININA

La creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el cido pcrico en medio alcalino dando un complejo color rojo que se cuantifica mediante lectura fotomtrica. La determinacin de creatinina puede llevarse a cabo por medio de una tcnica de punto final, o por una tcnica cintica eliminndose en ambas el color que se debe a los cromgenos no creatinina. En el primer caso, la adicin de cido al medio, destruye el picrato de creatinina pero no el color formado por los dems compuestos. Por lo tanto la diferencia entre la lectura fotomtrica antes y despus del agregado de cido, permite cuantificar la creatinina en forma especfica. En la tcnica cintica, los cromgenos no creatinina, reaccionan dentro de los primeros 30 segundos de iniciada la reaccin, que se comporta como cintica de primer orden para la creatinina. De manera que entre los 30 segundos y los 5

minutos posteriores al inicio de la reaccin, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina. Creatinina + acido pcrico---- complejo de creatinina - picrato Obtener una muestra de sangre de una persona en ayuno. Extraer suero de manera usual y realizar la prueba de determinacin de

creatinina de acuerdo al siguiente cuadro: Tubo Standard Muestra (D) (S)

Standard (mL) 0.1 -Muestra (suero) (mL) 0.1 Reactivo de trabajo (mL) 1 .0 1.0 Mezclar e inicie el cronometro. Servir en la cubeta de lectura y leer a los 30 segundos la absorbancia A1. Lea la absorbancia A2 a los 2 minutos. A1 A2=_ a. muestra/A. standard. Hacer todas las lecturas en espectifotometro a 505 nm, llevando al aparato a cero con el reactivo de trabajo Clculos: A2 A1

Creatinina en suero (mg/L)=2.0 x

Creatinina uMol/L) =176.8 x

Valores de Referencia: hombre 0.6 1.1 mg/dL Mujeres 0.5 0.9

V. RESULTADOS:

1. UREA Absorbancia de blanco: 0,48 Absorbancia de estndar: 0,174 Absorbancia de muestra: 0.

UREA (mg/dL) = Factor (D - B) Ur=23,21

2. CREATININA st: A1: 0,015 D: A1: 0,082 Clculos: A2: 0,07 A2: 0,1 A2 A1

Creatinina en suero (mg/L)=2.0 x

Creatinina uMol/L) =176.8 x

Creatinina (mg/dL) = 2.0 x 0,018/0,055

Creatinina (mg/dL) = 0.6

VI. CONCLUSIN: El resultado obtenidos en urea estn dentro de los rangos normales. El resultado de creatinina esta dentro de los rangos normales.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. Diccionario medico MOSBY Govantes J, Lorenzo P, Govantes C. Manual Normon. 8 ed.

Madrid Espaa: Laboratorios Normon S.A.; 2006. Wiener lab. Group. Vademecum de Reactivos [en lnea] 2010 [acceso: 2012 DICIEMBRE 03] Disponible en: http://www.wiener-

lab.com.ar/wienerw/corp/vademecum.vsp