HPLC LACTEA

RESUMEN El suero de queso es un post-producto de la industria lechera, contiene aproximadamente 20% de la protena total de la leche y tienen la ventaja de ser un una fuente de protena de bajo costo (McIntosh et al., 1998). Las protenas presentes en mayor cantidad en suero de queso se -lactoalbmina (-la) y lactoglobulina (-LG), con concentraciones de 1 a 1,5 g / litro y de 2 a 4 g / litro, respectivamente. El alto valor agregado de protenas de suero de queso y su amplia aplicabilidad en la industria alimentaria y farmacutica justifica el desarrollo de los procesos de separacin y purificacin de estas protenas. Este estudio describe y compara tres mtodos cromatogrficos para el anlisis y la cuantificacin de las protenas ms abundantes en el suero de queso, lactoglobulina y lactoalbmina. Los mtodos fueron los siguientes: cromatografa lquida de alta eficacia en fase reversa, cromatografa de intercambio aninico y cromatografa de exclusin molecular. La cromatografa lquida en fase reversa condujo a una mejor separacin de las protenas de suero de leche que la cromatografa de exclusin molecular y la cromatografa de intercambio aninico, este mtodo ofrece una excelente separacin de las protenas de suero de leche, y present un breve tiempo de anlisis (33 min). Palabras clave: RP-HPLC, cromatografa de intercambio aninico, cromatografa de exclusin molecular, lactoglobulina, lactoalbmina.

METODOLOGA Qumicos y reactivos -la y -lg fueron adquiridas de Sigma Chemicals (St. Louis, EE.UU.) y el suero de leche de la planta de lcteos FUNARBE (Viosa, Brasil). Todos los dems reactivos fueron de grado analtico. Agua ultrapura para todos los experimentos se obtuvo de un sistema Milli-Q (Millipore Inc., MA, EE.UU.).

Materiales de cromatografa Superdex 75 HR 10/30 (30 x 1 cm ID) intervalo de fraccionamiento (Sr. 3.00070.000) y Mono Q HR 5/5 (5X0.5 cm ID) las columnas se adquirieron de Pharmacia Biotech (Uppsala, Suecia). Shim-pack CLC-ODS (M) columna de fase inversa C18 (250 mm 4,6 mm, dimetro de partcula 5_m y dimetro de poro 100 , Shimadzu, Tokio, Japn) precedido por una precolumna del mismo material (10 mm 3,2 mm) . Se utilizaron dos cromatgrafos. SEC y AEC se realizaron con el sistema purificador KTA (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Suecia). El eluyente se control mediante absorcin de UV UV-900 a 280 nm. Cromatografa RP-HPLC se realiz utilizando un sistema de HPLC Shimadzu (LC-10VP, Japn) con una bomba LC-10ADvp, un muestreador automtico SIL10ADvp (Shimadzu, Japn) y un detector de arreglo de diodos SPD-M10AVP (Shimadzu, Japn) fijado en 210 nm. Los datos se analizaron utilizando los programas informticos como VP5.02 (Shimadzu, Japn).

Cromatografa en fase inversa (RP-HPLC) En la Figura 5, se muestra un cromatograma de las protenas de muestras puras utilizadas para construir la curva de calibracin, en el que se obtuvieron dos picos de alfalg. Esto se debe a que LG es un dmero formado por A lg y B lg (Cayot y Lorient, 1997). Se encontr que las condiciones de cromatografa usadas permiten una buena resolucin y en un corto perodo de tiempo de anlisis (33 min), para separar A lg y B-LG. La tcnica tambin es adecuada para la cuantificacin de suero de mozzarella fresco (Figura 6). RP-HPLC es una tcnica cromatogrfica sensible a las diferencias en hidrofobicidad y ha sido ampliamente aplicada para el anlisis de protenas y pptidos (Harrison, 1994). Las fuerzas inicas bajas se pueden utilizar a valores de pH bajos, lo que facilita la recuperacin ms fcil, mejor forma de pico, y la retencin ms reproducible (Janson y Ryden, 1998). Recientemente se desarroll un mtodo de RP-HPLC de

perfusin a la soja simultneamente por separado, protenas de suero de leche bovina y caprina, los autores (Ferreira y Cacote, 2003; Elgar et al, 2000;.. Garca et al, 1998) obtenido las condiciones ptimas para la separacin utilizando un gradiente binario de agua-cido trifluoroactico-acetonitrilo y una columna de fase inversa que contiene un copolmero de embalaje basado en poliestirenodivinilbenceno. En este trabajo el pH empleado (2,5) bajo y la fuerza inica (NaCl 0,15 M) utilizada en el gradiente de la elucin de A-la y B-lg produciendo una resolucin ptima en la separacin de estas protenas. Para la cromatografa de tres tcnicas descritas en este trabajo, no haba precisin intermedia de los tiempos de retencin de los picos de la cromatografa, la tcnica de RP-HPLC mostr mejores resultados en relacin con la repetibilidad, con una variacin de aproximadamente 2%.

Conclusiones Las protenas -la y -lg, fueron bien separados y cuantificados mediante la aplicacin de tres mtodos cromatogrficos diferentes. La tcnica de RP-HPLC mostr mejores resultados con una precisin de 2%, presentando una alta eficiencia en la separacin de los picos, as como un tiempo relativamente corto de anlisis (33 min).

HPLC PANIFICACION

RESUMEN Los carbohidratos denominados tambin azcares, son las molculas orgnicas ms abundantes en la biosfera. Son uno de los tres macronutrientes (adems de las protenas y las grasas) que suministran energa al organismo. Para que el cuerpo humano pueda usar esta energa, captada y almacenada bsicamente en el proceso de fotosntesis, los carbohidratos se deben metabolizar. Los polisacridos complejos son elementos estructurales en las paredes de las clulas de plantas y bacterias, almacenados para alimento y funcin de soporte estructural. Entre las tcnicas mas utilizadas para determinacin de carbohidratos, encontramos mtodos espectromtricos que necesitan instrumentos costosos y personal altamente especializado, las tcnicas de cromatografa de gases que exigen derivatizaciones que requieren mucho tiempo. Debido a estos inconvenientes, el uso de la cromatografa de intercambio de aniones de alta eficacia es cada vez ms utilizada para la determinacin de carbohidratos. En fases mviles fuertemente alcalinas, los aniones de azcar se separan en una resina de intercambio aninico de carga positiva. Por ello en este estudio se describe un mtodo directo de cromatografa inica utilizando elucin isocrtica y deteccin amperomtrica pulsada (PAD = pulsed amperometric detection) para la determinacin altamente sensible de polioles hidrosolubles y alcoholes de azcar as como de monosacridos, disacridos y oligosacridos en alimentos esenciales y no esenciales. Mientras que la determinacin de carbohidratos en la mayora de los alimentos exige slo una preparacin mnima de las muestras como dilucin y filtracin, las muestras con matrices complicadas como las de productos lcteos que contienen protenas deben someterse a una dilisis antes de la inyeccin.

METODOLOGIA a) Instrumentos La columna de separacin empleada y los parmetros mas importantes estn indicados en los cromatogramas correspondientes. Se usaron los aparatos siguientes: 850 Professional IC con IC Amperometric Detector

 858 Professional Sample Processor El control de los instrumentos, la recopilacin y el procesamiento de los datos se realizaron con el software MagIC Net (Metrohm AG). b) Reactivos y eluyentes Los carbohidratos fueron de grado analitico, adquiridos de Fluka (Sigma Aldrich, Buchs, Suiza). Todas las soluciones patron y eluyentes se prepararon con agua desionizada con una resistencia especifica superior a 18 Mcm. Ejemplo 1 Determinacin de carbohidratos en extractos de malta Los extractos de malta viscosos o secos se obtienen de cebada germinada y contienen enzimas naturales, en particular amilasas, que convierten el almidon en azucares hidrosolubles. Los extractos de malta se destacan por sus altos valores nutricionales y fisiolgicos. La malta se agrega como suplemento nutricional a las dietas de nios y personas mayores. Adems, es un ingrediente intermedio muy empleado en alimentos para nios y mascotas, en variedades de pan, caf instantneo, bebidas, helados, productos farmacuticos, etc.

Informacin experimental La preparacin de muestras de extractos de malta es directa y consiste solamente en una dilucin 1:100, tras la cual la muestra se puede inyectar directamente.

RESUMEN El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de tres bacterias lcticas bioprotectoras (BAL) y del cido lctico sobre la concentracin de aminas biognicas en carne empacada al vaco y almacenada bajo refrigeracin y condiciones de abuso de temperaturas. Las muestras de carne molida fueron inoculadas con BAL (Lactobacillus carnis, Lactobacillus pentosus y Staphylococcus carnosus) o mezcladas con cido lctico, y almacenadas a 4 y 20C durante 12 y 6 das, respectivamente. Las concentraciones de aminas biognicas (histamina, cadaverina, putrescina y tiramina) fueron analizadas mediante HPLC. El cido lctico y las tres BAL redujeron la concentracin de histamina en la carne almacenada a 20C a menos de 0.25 mg/kg; en comparacin con el grupo control que mostr una concentracin de aminas biognicas de 4.91 mg/kg. Sin embargo, las BAL no fueron eficaces en la reduccin de cadaverina, putrescina y tiramina, independientemente de la temperatura de almacenamiento. La carne tratada con cido lctico mostr las menores concentraciones de putrescina y tiramina, lo que permiti concluir que fue efectivo en el control de la produccin de aminas biognicas en carne empacada al vaco, mientras que las BAL no pudieron prevenir su formacin. La inoculacin con BAL no controla el crecimiento de algunos microorganismos alterantes y, en consecuencia, son incapaces de reducir los niveles de aminas biognicas. Lo anterior permite concluir que la calidad microbiolgica inicial de la carne es un

factor determinante en el control de la concentracin de aminas biognicas durante el almacenamiento. Palabras clave: aminas biognicas, cido lctico, bacterias lcticas, carne.

Materiales y mtodos Muestras de carne Estas fueron obtenidas a partir del msculo Psoas major de bovino despus de 6 a 7 horas post mortem. No se registraron datos sobre la raza, sexo y edad de los animales o condiciones previas. Con el objeto de minimizar la poblacin microbiana inicial, la superficie crnica fue flameada y tratada bajo estrictas condiciones de esterilidad. La carne fue molida en una moledora domstica (Moulinex, Mxico) previa sanitizacin de las superficies de contacto con la muestra por medio de alcohol etlico y flameado de la cuchilla. Finalmente se dividi la carne en porciones de 50 g e inoculadas con las cepas de BAL bajo estudio y la adicin de cido lctico.

Preparacin de los inculos Las BAL empleadas fueron: Lactobacillus carnis MXVK76 (Queens University of Belfast, Belfast, Northern Ireland, U.K.), Lactobacillus pentosus (Christian Hansen, LP1-31035) y Staphylococcus carnosus (Christian Hansen, MC1-02055). Las cuales fueron seleccionadas debido a su limitada actividad proteoltica, lipoltica y aminodescarboxilante (Signorini y col., 2003). Las cepas fueron reactivadas en caldo APT (Becton Dickinson) por 24 h a 30C. La suspensin celular fue centrifugada a 4000xg por 10 min a 4C y las muestras de carne inoculadas con 105 UFC/g. El cido lctico (200 mg/100 g de carne) fue aplicado como tratamiento qumico de acuerdo a lo reportado por Nassos y col. (1983). La carne tratada y el control fueron colocadas en bolsas Cryovac LB-50 (Cryovac, Mxico) y sometidas a vaco empleando City) a -700 mBar. Las muestras fueron almacenadas a 4oC y, simulando la temperatura ambiente promedio del centro de Mxico, a 20C por 12 y 6 das respectivamente. Para la realizacin de los anlisis, se tomaron muestras los das 0, 4, 8 y 12 (para la carne almacenada bajo refrigeracin) y los das 0, 2, 4 y 6 (para la carne almacenada a 20C). pH El pH de cada muestra se determin por triplicado, empleando un potencimetro Beckman (Beckman, Fullerton), previa homogeneizacin de 10 g de carne con 90 mL de agua destilada estril en una licuadora domstica a mxima velocidad durante 30 seg.

Recuento de bacterias lcticas y Enterobacteriaceae spp. Se mezclaron 10 g de carne con 90 mL de agua destilada estril y se homogeneizaron (Oster, Bartelesville). A partir de esta pasta se realizaron diluciones seriadas empleando agua destilada como diluyente. La poblacin de bacterias lcticas fuedeterminada mediante la inoculacin en agar MRS (Merck, Darmstadt, Alemania). Para el recuento de Enterobacteriaceae spp., las diluciones fueron inoculadas en agar VRBG (Merck). Las cajas se incubaron a 30C durante 2 das.

Determinacin de aminas biognicas por HPLC La determinacin de aminas biognicas presentes en la carne se realiz de acuerdo al mtodo reportado por Hwang y col. (1997). Se homogeneizaron en una licuadora domstica (Oster) 5 g de carne con 20 mL de cido tricloroactico (Baker) al 6%, durante 1 min. El homogeneizado se centrifug a 8000xg durante 10 min a 4C y el sobrenadante se filtr a travs de un papel de filtro Whatman No 2. El filtrado se transfiri a un matraz y se afor a 25 mL con cido tricloroactico al 6%. Dos mililitros del filtrado se homogeneizaron con 10 l de cloruro de benzoilo y 1 mL de hidrxido de sodio 2 M, incubndose durante 40 min a 30C. La derivatizacin se detuvo con 2 mL de una solucin de NaCI 5 M y las amidas resultantes fueron extradas con 3 mL de ter etlico. La fase orgnica fue evaporada hasta sequedad en un rotavapor Bchi O11 (Bchi, Flawil, Suiza) y el residuo fue disuelto en 500 l de metanol grado HPLC. Se tomaron alcuotas de 50 l, previamente filtradas a travs de acrodiscos de 0.45 m, las cuales fueron inyectadas en un cromatgrafo de lquidos de alta resolucin (HPLC) Waters (Waters, Milford) equipado con una bomba 626 y un detector de arreglo de diodos UVVIS 994 integrados a un software Millenium versin 2.1 (Waters). Se emple una columna de fase inversa Symmetry C18 (Waters) de 150 mm de longitud, 3.9 mm de dimetro y un tamao de partcula de 5 m. El flujo de la fase mvil empleado fue de 0.5 mL / min, siguiendo un programa de elusin con metanol al 100% y 55%. El cromatograma se obtuvo a una longitud de onda de 254 nm. Cada muestra fue analizada por triplicado.

Diseo experimental y anlisis estadstico de los datos Las muestras de carne fueron asignadas al azar a los diferentes tratamientos (control, adicionada con cido lctico, inoculacin con L. carnis, L. pentosus y S. carnosus), realizando 12 repeticiones del experimento. El efecto de la inoculacin con BAL y la adicin de cido lctico fu analizada en un diseo factorial 5x4; los datos fueron sujetos a un anlisis de la varianza y comparacin mltiple de medias de Duncan. Adicionalmente, se realizaron anlisis de correlacin para determinar la posible asociacin existente entre las variables relacionadas con la produccin de aminas biognicas. Los anlisis fueron realizados usando el paquete estadstico SAS (SAS Institute, 1998).

RESUMEN Las antocianinas son los principales pigmentos hidrosolubles responsables de los colores rojo, azul y prpura colores de las plantas terrestres. Las antocianinas se encuentran en toda nuestra dieta basada en vegetales, tienen poca o ninguna toxicidad conocida, que los hace particularmente atractivos como sustitutos naturales de pigmentos sintticos y antioxidantes. Adems, un nmero creciente de estudios han demostrado que las antocianinas tienen la capacidad de prevenir las enfermedades crnicas y degenerativas, incluyendo diabetes tipo 2, enfermedades cardiovasculares y el cncer. Adems Las antocianinas son de origen natural, polifenoles que imparten color brillante a las frutas, verduras y plantas en general. En este estudio se extrajo antocianinas de la piel de la fruta (Rhodomyrtus tomentosa (Ait.), se optimiz usando la metodologa de superficie de respuesta (RSM). Utilizando 60% de etanol que contiene 0,1% (v / v) de cido clorhdrico como extraccin del disolvente, las condiciones ptimas para rendimientos mximos de antocianina (4,358 0,045 mg / g) fueron 15.7:1 (v / w)

relacin de lquido a slido, 64,38 C con un tiempo de extraccin 116,88 min. Los resultados mostraron buenos ajustes con el modelo propuesto para la extraccin de antocianinas (R2 = 0,9944). Por otra parte, los resultados de cromatografa lquida-electropulverizacin - espectrometra de ionizacin de masas de alto (HPLC-ESI-MS) anlisis de las antocianinas extradas de la piel del fruto de la rosa, revelaron la presencia de cinco componentes de antocianina, que se identificaron tentativamente como delfinidina-3-glucsido, cianidina-3-glucsido, peonidina-3-glucsido, petunidina-3-glucsido y malvidina-3-glucsido.

Palabras clave: antocianinas; Rhodomyrtus tomentosa; metodologa de superficie de respuesta, HPLC-ESI-MS

METODOLOGIA Preparacin de la muestra y reactivos

Frutas maduras frescas de la variedad suave rosa mirta "Gangren" se obtuvieron en septiembre de 2010 en un mercado local en Shaoguan (Guangdong, China). Pieles de muestras de la fruta se separaron manualmente. Las pieles se secaron en un secador por congelacin (-40 C) (ZD-A3, Nanjing, China), pulverizadas por un desintegrador (FSD-100A, Taizhou, China) y desplazada a travs de un tamiz de malla 100. El polvo de la piel rosa-mirta (contenido de agua <12%) se sell en una botella ambar y se mantuvo a -18 C hasta su posterior anlisis. Los estndares de cianidina-3-glucsido, delfinidina-3-glucsido, petunidina-3glucsido, peonidina-3-glucsido y malvidina-3-glucsido fueron proporcionados por Polyphenol AS (Sandnes, Noruega). cido frmico y acetonitrilo de calidad HPLC, se adquirieron de Merck (Darmstadt, Alemania). Se obtuvieron Todos los otros productos de Guangzhou Industria Qumica (Guangzhou, China).

Extraccin de antocianinas Se aadieron muestras de polvo liofilizado (1,0 g) a un Erlenmeyer de 50 ml y luego se mezclaron con diferentes volmenes de etanol al 60% que contiene 0,1% (v / v) de cido clorhdrico (pH ~ 1,0) [17] para dar intervalos que van del 10 al 20 (v / w), y poner en bao de agua termosttico a temperaturas seleccionadas (5575 C) durante varios minutos (90-150 min), luego se centrifuga a 5400 g durante 10 min a 25 C. El sobrenadante se recogi y se diluy a 50 ml con el mismo

disolvente. Todas las muestras se filtraron a travs de un filtro de jeringa de 0,45 micras (Pall Life Sciences, Ann Arbor, MI, EE.UU.). Despues, se tomaron alcuotas de las muestras para evaluar contenido total de antocianinas y para identificar los componentes especficos de antocianina en el extracto.

Medicin contenido total de antocianinas El contenido total de antocianinas se determin segn el mtodo espectrofotomtrico de pH diferencial [18]. Tomamos, una alcuota (1 ml) del extracto se mezcl con tampn de cloruro de potasio 0,025 M (pH 1,0, 4 ml) y tampn de acetato de sodio 0,4 M (pH 4,5, 4 ml), respectivamente. La absorbancia de la mezcla se midi a 510 y 700 nm usando un espectrofotmetro modelo UVVis interfaz de usuario-trospec 2000 (Amersham Pharmacia Biotech, Dbendorf, Suiza). La absorbancia se calcula como A = [(A510 - A700) a pH 1,0] - [(A510 A700) a pH 4,5] con un coeficiente de extincin molar de 26.900 para la antocianina.

Identificacin de antocianinas en el extracto de piel de la fruta por HPLC-ESIMS Se utiliz; cromatografa lquida de alto rendimiento Una serie Agilent 1200 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, EE.UU.) acoplado a un Agilent 6410 Triple espectrmetro de masas cuadrupolo y una columna Zorbax SB-C18 de Agilent (2,1 mm 50 mm 1,8-micras) para identificar las antocianinas en el extracto de la corteza del fruto. La separacin cromatogrfica se realiz usando una mezcla de dos eluyentes: disolvente A, 5% de cido frmico en agua (V / V), y el disolvente B, acetonitrilo. El programa de elucin en gradiente se utiliz de la siguiente manera: 0 a 2 min, 6% de B y de 2 a 8 min, 6% a 12% de B; 8 a 20 min, 12% a 20% de B; 20 a 28 min, 20% B . temperatura de la columna fue de 25 C, velocidad de flujo fue de 0,5 ml / min, y el volumen de inyeccin fue de 2 l. Para la identificacin de las antocianinas, ionizacin por electrospray (ESI) fue operado en el modo de iones positivos en el rango de masas 200 a 800 (m / z) y bajo las siguientes condiciones: voltaje capilar, 4500 V; nebulizador presin, 40 psi; gas de secado temperatura a 350 C se utiliz a una velocidad de flujo de 8,0 L / min.

Anlisis estadstico Todos los experimentos se llevaron a cabo por triplicado, y los resultados se expresan como medias SD (desviacin estndar). Los anlisis estadsticos se realizaron con el paquete SPSS 14.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU., 2005). Un valor de p <0,05 fue considerado estadsticamente significativo.

RESUMEN El uso de insecticidas organofosforados ha ido en aumento desde la retirada de insecticidas organoclorados debido a su toxicidad, persistencia y bioacumulacin en el medio ambiente. Por el contrario, la mayora compuestos organofosforados no son tan persistente y slo mantenerse activo durante unos horas a varios meses. Sin embargo, estos insecticidas se descomponen bastante rpidamente, la generacin de subproductos que son txicos para los microorganismos acuticos, peces, aves, humanos y otros mamferos. Debido a su no persistente actividad, los agricultores tienen que aplicar insecticidas a

intervalos regulares para garantizar su control de insectos eficaz. Esto da como resultado continua acumulacin de sustancias qumicas en el medio ambiente. Se realizo un estudio de Plaguicidas organofosforados en agua de cuatro granjas de hortalizas en Provincia Patumtane, se analizaron mediante extraccin en fase slida (SPE) y cromatografa lquida de alta resolucin reversa (HPLC). Experimentos SPE eran realizado en condiciones de una fase de SAO, una masa de sorbente de 100 mg, solucin volumen de 100 ml, de disolvente de 60/40 acetonitrilo / agua de elucin, el volumen de elucin de 5 ml y una presin de 17 mm Hg. Mtodo de extraccin de recuperacin fue confirmada por pesticidas estndar a 1 ppm. Cuantificacin por un estndar externo mtodo implic un 90% de recuperacin promedio de profenofos estndar. Profenofos fue detectado en 27 muestras de agua de tres granjas de hortalizas. El detectada intervalo de concentracin fue de 0,11 a 1,11 ppm con una media de 0,44 0,07 ppm. La estructuras qumicas de plaguicidas fueron identificados por los espectros de masas.

Palabras clave: Pesticidas organofosforados, extraccin en fase slida.

METODOLOGIA

Materiales Los solventes de grado de cromatografa lquida y los cartuchos C18 SPE fueron de, U.S.A. el agua fue doblemente destilada y filtrada a travs de membranas de Millipore de tamao del poro 0.45 m. Los organofosfatos estndar, de pureza 99 el %, el malatin, el metilo de paratin y chlorpyrefos, fueron comprados en Soekawa Chemical Co., Ltd., Japn.los Profenofos, con pureza del 99%. fueron donados por Ciba-Geigy (Tailandia). Las soluciones normales estndar estaban preparadas en acetonitrilo y se guardaban en - 200C. El Visiprep. SPE Vacuum que 5-7030 mltiplepara la fase de extraccin Las soluciones normales y la calibracin Los profenofos estndar estndar (1000 g ml) estaban preparados en acetonitrilo y se guardaban en 200C. Las soluciones normales en fueron 5.0, 10.0, 20.0, 30.0 y 40.0 g ml, respectivamente. Una prueba en blanco que la solucin fue 100 ml de agua destilada. La calibracin estndar externa fue obtenida dibujando la concentracin en contra del rea de los cromatogramas.

Prueba de recuperacin porcentual Para experimentos de extraccin en fase slida se utilizaron cartuchos de silice Sep-Pak C18 cartuchos. Los parmetros de extraccin, la cantidad de solvente, el tipo y volumen de disolvente, y la presin de vaco, se determinaron. Las condiciones de extraccin, dando un alto% de recuperacin fueron probados con una concentracin de plaguicida estndar de 1 ppm y cuantificado a partir de una curva de calibracin estndar. El protocolo de variados parmetros y los resultados de porcentaje de recuperacin de profenofos son resumidos en la Tabla 1. De este porcentaje de recuperacin, encontramos las condiciones obtenidas para el extracto de muestra de agua. Todos los parmetros de prueba hemos elegido el porcentaje de recuperacin ms alto, excepto el volumen de elucin. Se utiliz 5 ml de 60% de acetonitrilo / agua, produciendo la recuperacin de 88,8%, en lugar de 7 ml, con un rendimiento de recuperacin de 89,3%.

Muestreo de Agua Muestras de agua de drenaje agrcola se obtuvieron de cuatro granjas de hortalizas en Distrito Bangbuatong, provincia Patumtanee (un suburbio al norte de Bangkok). Todos los sitios quedaban a unos 500 metros de la carretera principal. La principal hortaliza cultivada en las fincas era el brcoli chino. Treinta y seis muestras de agua fueron recolectadas de los canales a 30-50 cm de profundidad en Intervalos de 30 das durante los perodos de cultivo durante tres meses. Cada dos litros de agua se recogieron y se mantuvieron en botellas de vidrio oscuro separadas y se enfriaron en las cajas de hielo durante el transporte. Las muestras de preconcentracin se prepararon dentro de un da despus del muestreo.

Determinacin organofosforados Una muestra de agua de 100 ml, se aspir a travs de un 100 mg preactivado seppak 18 cartucho a presin de 17 mm Hg. Atrapado pesticidas se eluyeron con 5 ml de acetonitrilo al 60% en agua y despus se secaron bajo una corriente de gas nitrgeno .Se disolvieron Estas muestras concentradas en 100 l de acetonitrilo al 60%. Extradas las muestras de 20 l se inyectaron a HPLC LDC4100 equipado con detector de UV funcionando a 220 nm, tasa de flujo de 1 ml / min; sensibilidad del detector, 0,05 AUFS; columna ODS (slice vnculo Octadecil), 12,5 cm x 4 mm ID; intervalo de inyeccin, 15 min. Las estructuras qumicas de las muestras separadas se identificaron mediante un GC / MS espectrmetro de JMS-DX 300 (JEOL). El espectro de masas de ionizacin de electrones (EI) fueron medido a 70 eV, 1500 C.