UNIVERSIDAD DEL CAUCA FACULTAD DE EDUCACION PROGRAMA DE INGENIERIA FSICA LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA GENERAL I PERIODO DE 2013

Laboratorio 2: CROMATOGRAFIA DE CAPA DELGADA Zuiga Mera Pablo Wolfgang (pwzuniga@unicauca.edu.co), Nastar Crdova Valeria (valerian@unicauca.edu.co) Programa Ingeneria Fsica Fecha de Entrega: 2 de abril de 2013

Resumen Para separar los componentes de una mezcla de colorantes, fluorescena - azul de metileno y naranja de metilo azul de metileno, se us la cromatografa. Usando como disolvente etanol al 20% y etanol al 80%, las diferentes proporciones del etanol nos dio resultados muy variados, con comportamientos diferentes siendo el tiempo el nico factor claramente determinante. Decimos esto ya que en ambas placas se realizaron las mismas observaciones. Esto lo observamos a travs de la aplicacin de ondas cortas y ondas largas a las placas con el nico fin de encontrar con mayor facilidad las manchas de los componentes. Ademas de su simple observacin obtuvimos asi los Rf (factor de retardo) de cada componente siendo este una relacin obtenida de la distancia recorrida por el compuesto y lo recorrido por el solvente. Abstract: To separate the components of a mixture of dyes, fluorescein - methylene blue and methyl orange - methylene blue was used as chromatography. Using as solvent 20% ethanol and 80% ethanol, the various proportions of ethanol gave varying results with different behaviors time being the only factor determining clearly. We say this because in both plates were made the same observations. We see this through the application of short wave and long wave to the plates for the sole purpose of finding more easily stains components. Besides its simple observation thus obtained Rf (delay factor) of each component being obtained from this relationship the distance traveled by the compound and the route for the solvent.

Introduccin CROMATOGRAFIA DE CAPA DELGADA

El termino de cromatografa viene de las palabras griegas Kromato (color) y Graphos (escritura), fue usado primero en 1906 por Michael Tsewtt, botnico ruso, para describir la separacin de clorofila y otros pigmentos de la naturaleza. Luego fue reintroducido en el anlisis orgnico en 1931 por Khon y Ledever. Y el CCD se origin en 1938 por dos rusos Tzmalois y Shacraiber.

La cromatografa es un proceso fisicoqumico que permite separar los componentes o sustancias integrantes de una mezcla en movimiento a travs de procesos de absorcin, particin, exclusin por tamao, intercambio inico. Etc.

A principios del siglo XX un botnico ruso desarroll una tcnica de coloracin para separar los compuestos qumicos, que es lo que hoy da se denomina Cromatografa. Este es actualmente uno de los mtodos ms difundidos para separar e identificar los compuestos qumicos. Las sustancias de origen biolgico tales como los pigmentos, los aminocidos, los azcares, las sustancias qumicas aromticas, las grasas y otras sustancias relacionadas con los seres vivos (ejemplo son las Sustancias Contaminantes y los Insecticidas) pueden aislarse utilizando la Cromatografa. Aunque hoy da esta tcnica se utiliza para muchos fines, el principal intento de su descubridor, Michelle Tswett, era el de separar los pigmentos contenidos en las hojas de las plantas de la materia que los rodea.

Para ello prepar una mezcla de pigmentos de las hojas disueltas en un disolvente (disolvente es un lquido, ejemplo: agua o alcohol, en el que puede disolverse otras sustancias qumicas; despus de la evaporacin de ste las sustancias qumicas no varan respecto a como eran antes de ser disueltas). Verti, a continuacin esta solucin en la parte superior de un estrecho tubo de vidrio lleno de azcar en polvo. Cuando el disolvente se desplaza a travs del azcar, los pigmentos que transportaba tendan a adherirse con distintas velocidades sobre la superficie de los cristales del azcar (ste es un ejemplo del proceso conocido con el nombre de adsorcin) y en la columna aparecan unas bandas de colores, cada uno correspondiendo a uno de los pigmentos de la mezcla. Una vez sacada la columna, poda dividirse en secciones por medio de una esptula y lavando, se extraera cada pigmento de un sector, completando de esta manera el proceso de separacin. Distintos compuestos de pigmentos daban origen a distintas bandas de colores estratificadas en columna. El proceso se llam Cromatografa, de la palabra griega chroma, que significa color. Existen varios tipos de Cromatografa: Explicaremos algunos de ellos.

Si se mezclan varias tintas de escribir y se absorbe una gota de la mezcla con un papel secante, se ve la formacin de franjas o crculos concntricos, cada uno de los cuales corresponde a uno de los colores disueltos. La Cromatografa se funda en el mismo principio: la mezcla que se ha de analizar es absorbida por un polvo fino (alumina, almidn, magnesia, slice en forma de gel, etc.) o por un papel sin escolar. En ciertos casos la observacin directa permite distinguir los constituyentes de la mezcla. Por lo general, es necesario embeber la materia porosa con un eluyente que acenta la separacin o la revela si era invisible. La Cromatografa tiene una importancia considerable, pues permite analizar cmodamente cantidades infinitesimales de cualquier sustancia compleja. En la Industria Qumica y en la Petrolfera, la Cromatografa en fase gaseosa sirve para el control continuo de la composicin de los productos o para cerciorarse de su pureza.

Cromatografa en capa fina o Papel: Durante este proceso la mezcla qumica a analizar se disuelve en un disolvente y despus se coloca una gota de la misma sobre una tira de papel filtro o una placa de silica gel. l en el interior de una cmara cerrada, que contiene disolvente en el fondo. El extremo inferior de la placa de silica gell se sumerge en el eluyente y cuando este se desplaza hacia arriba (por efecto de la accin capilar) las distintas sustancias qumicas, a causa de su composicin, se desplazan con velocidades distintas. A menudo las sustancias qumicas separadas sobre son incoloras, as que, una vez retirado y secado la placa, ver con lmpara U-V- se le trata (por aspersin) o por sustancias que se sublimen (gas) ej: yodo solid con sustancias especficas llamados reveladores que hacen visibles los compuestos qumicos. Este segundo proceso se llama revelado, porque es similar al revelado de una fotografa. Gracias a la Cromatografa en papel o capa fina es posible identificar varias sustancias qumicas, como por ejemplo los azcares, los aminocidos, las grasas e incluso las sustancias reactivas. Datos y Resultados Las placas cromatogrfica, se marcaron con las medidas y especificaciones correspondientes y se le aplicaron las sustancias correspondientes en el anlisis. Seguido de esto se pusieron cada una en su respectivo disolvente y se esper a que el disolvente subiera para poner en los
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reveladores de onda corta y de onda larga, para luego calcular los Rf. Separacion de fluorescena y azul de metileno.
1.

Calculo del Rf, de las manchas de fluorescena y azul de metileno. Desarrollada en etanol al 80%
Mancha Distancia recorrida por la muestra (cm) Distancia recorrida por el disolvente (cm) Rf

4,1

4,6

0,89

Calculo del Rf, de las manchas de fluorescena y azul de metileno. Desarrollada en etanol al 20%
Mancha Distancia recorrida por la muestra (cm) Distancia recorrida por el disolvente (cm) Rf

1 2
2.

4 4,1

4,5 4,5

0,89 0,91

Separacin de naranja de metilo y azul de metileno Calculo del Rf, de las manchas de naranja de metilo y azul de metileno. Desarrollada en etanol al 80%
Mancha Distancia recorrida por la muestra (cm) Distancia recorrida por el disolvente (cm) Rf

Ninguna Calculo del Rf, de las manchas de naranja de metilo y azul de metileno. Desarrollada en etanol al 20%
Mancha Distancia recorrida por Distancia recorrida por el Rf

la muestra (cm)

disolvente (cm)

2,3

4,6

0.5

fluorecente, mientras que para el azul de metileno no se revelaron mediante la luz ultravioleta. Para la segunda muestra de naranja de metilo y azul de metileno desarrollada con etanol al 80 % no se observo ninguna mancha , por tanto podremos decir que no hubo una separacin ,ni arrastre de los compuestos. En la segunda de naranja de metilo y azul de metileno con etanol al 20% observamos el arrastre de la muestra a 2,3 cm, cuando se llevo a la cmara de revelado se observo una sola mancha, lo cual indica que se encontr un compuesto debido a que no hubo una fcil elucin de los componentes ya que no hubo una correcta interaccion del solvente con ellos. CONCLUSIONES Se observo en esta prctica que por medio de la cromatografa es posible identificar de que sustancias esta compuesta una mezcla, siendo la polaridad del disolvente utilizado para la cromatografa el que determina el resultado mostrndonos sus diferentes compuestos. Los sistemas de separacin por cromatografa se basan en la interaccin del soluto con la fase estacionaria.

Anlisis de Resultados Debemos tener presente que la tcnica de cromatografa se basa en las pequeas diferencias de absortividad de las molculas sobre un compuesto de polaridad similar, la capacidad del solvente para arrastrar consigo a los componentes de la muestra y la interaccion de estos con la fase estacionaria como resultado de estos tendremos que los componentes que se evaluaron asecenderan con una velocidad relativa diferente, dado la naturaleza de las muestras y del solvente; lo anterior se comprueba al someter dos placas cromatograficas con igual muestras a diferente porcentaje de etanol. En la primera muestra con flurosceina y azul de metileno desarrollada con etanol al 80% observamos el arrastre de la muestra a 4,1 cm, cuando se llevo a la cmara de revelado se observo una sola mancha lo cual indica que se encontr un compuesto y que no hubo una separacin, debido a que no hubo una fcil elucin de los componentes ya que no hubo una correcta interaccion del solvente con ellos. Mientras en la muestra con etanol al 20% se observo que la fluorescena fue el compnente que alcanzo una altura mayor y el azul de metileno presento el arrastre minimo, esto lo observamos mediante a travez de la aplicacin de luz ultravioleta de longitud de onda corta y larga a las placas con el nico fin de encontrar con mayor facilidad las manchas de los componentes con este mecanismo obtuvimos el mejor resultado con la fluorescenia dado a su naturaleza
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la polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza de los grupos funcionales presentes. Los solutos ms polares quedarn ms retenidos puesto que se adsorben ms firmemente a los centros activos de la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirn con mayor facilidad.

El valor de Rf depende del tipo de disolvente empleado, y otros factores mas; conocer este valor permite saber que tan rpido se mueve el soluto que se analiza respecto al sistema cromatogrfico.

La mayor parte de las placas de cromatografa llevan un indicador fluorescente que permite la visualizacin de los compuestos activos a la luz ultravioleta (254 nm). El indicador absorbe la luz UV y emite luz visible. La presencia de un compuesto activo en el UV evita que el indicador absorba la luz en la zona en la que se encuentra el producto, y el resultado es la visualizacin de una mancha en la placa que indica la presencia de un compuesto

C. de reparto: separa los solutos basndose en la solubilidad. C. de adsorcin: se basa en la afinidad de adsorcin. C. de exclusin: separa solutos segn el peso molecular. C. de intercambio inico: separa solutos segn la carga inica. Tambin se pueden clasificar segn el estado de la fase mvil en: C. de gases: la fase mvil es un gas y pueden ser dos sistemas:
o o

C. gas-liquido C. gas-slido

Preguntas de Manual de Laboratorio de Quimica Consultas preliminares

1. Consulte los principios en lo que se

C. lquida: la fase mvil es un liquido y puede ser:

o o o

C. liquido-liquido C. liquido-slido C. de exclusin C. de intercambio ionico

fundamenta la cromatografia. En la cromatografa se separan los componentes de las mezclas a medida queson transportadas por un fase fluida mvil a travs de una fase estacionaria slida olquida, la separacin de las molculas se logra porque la movilidad de cada solutodepende de un equilibrio en la distribucin entre la fase mvil y la estacionaria, y estaseparacin se puede realizar en funcin de sus cargas, masas, tamaos moleculares, la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redoxComo resultado hay una gran variedad de tcnicas para llevar a cabo laseparacin de una sustancia, que se clasifican en cuatro grandes grupos segn elmecanismo de separacin:
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Las nicas sustancias que no pueden ser examinadas por cromatografa son las insolubles y aquellas que se descomponen con el solvente o con la fase estacionaria.Dentro de las tcnicas cromatogrficas no se incluyen los mtodos que utilizan campos elctricos para separar molculas cargadas, mtodos que se denominan electroseparaciones, electromigraciones o electroforesis.El proceso cromatogrfico, aparentemente simple, es en realidad una compleja unin de fenmenos tales como hidrodinmica, cintica, termodinmica, qumica desuperficie y difusin. Hasta la fecha se han propuesto

muchas teoras, que incluyen complejos matemticos para poder explicar el comportamiento de los solutos en lascolumnas cromatogrficas, por citar alguna de estas teorias las ms estudiadas son:

Teora de los Platos Tericos (Martin & Synge). Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg, Klinkenberg & Sjenitzer). Teora Desarrollada para Columnas Capilares (Golay).

cmara y se desarrolla elcromatograma rociando agente reveladores.En el caso de sustancias coloreadas tales como los colorantes de alimentos, laseparacin resulta evidente aun sin la ayuda de tales agentes. Las sustancias no polarestambin pueden separarse recubriendo el papel con un compuesto no polar y usandosolventes polares como fase mvil. Es una tcnica barata pero relativamente lenta, conlimitaciones en el uso de agentes reveladores, algunos de los cuales pueden atacar ydestruir el papel. Las manchas tienden a ser difusas. CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (TLC) Es un procedimiento rpido y sencillo para separar mezclas de sustancias y paraidentificar/caracterizar o para determinar semicuantitativamente componentesindividuales.La separacin se basa en que las sustancias investigadas se reparten de mododiferencial entre una fase estacionaria y otra mvil: en la TLC el eluyente (fase mvil)se desplaza por una fina capa del sorbente (fase estacionaria), transportando as loscomponentes individuales de la mezcla de sustancias ms o menos lejos dependiendo desu solubilidad y/o de su comportamiento frente a la adsorcin. Al contrario, que en lacromatografa en columna, el proceso separativo transcurre en un sistema abierto, la placa separativa plana. El recorrido particular de cada sustancia se emplea as para suidentificacin.Las separaciones se realizan generalmente por el procedimiento ascendiente, introduciendo el borde inferior de la placa cromatogrfica en el solvente, que sersuccionado por accin de las fuerzas capilares del recubrimiento de la superficie de la placa.
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2. Cules son los tipos de cromatografa

mas importantes? Describa cada uno.

CROMATOGRAFIA EN PAPEL Es una forma combinada de cromatografas de particin y adsorcin en la que lafase estacionaria es el agua absorbida presente en el papel, y el soporte es el papelmismo. La fase mvil es una solucin que consiste de un solvente o de una mezcla devarios lquidos, incluyendo el agua. Se deja secar sobre el papel unas gotas del extractode la muestra y se forma una mancha.Para impedir la evaporacin, el papel se cuelga dentro de una cmara de talforma que la mancha pueda ser irrigada con la fase mvil ya sea hacia abajo por efectode la gravedad, hacia arriba u horizontalmente por efecto de la capilaridad. Cuando lafase mvil ha saturado el papel hasta una distancia predeterminada en la que se logre laseparacin cromatogrfica, se saca el papel de la

Carga de las disoluciones Las disoluciones de la muestra y de los patrones se cargan con pipetas demicrolitro (o similares) sobre la placa de TLC, de manera que el punto medio de lamancha est a 1.5 cm aproximadamente del borde inferior y de los bordes de loslaterales y que haya una separacin entre 1-2 cm de una mancha a otra. Los volmenes recomendables dependen de la concentracin de las disoluciones. Por lo general, se cargan 1-10 microgramos de sustancia por mancha. Si laconcentracin de la sustancia a analizar fuera de un orden de magnitud desconocido, lamuestra debera cargarse varias veces en volmenes crecientes y claramente diferentes.Los volmenes mayores se cargan en varias veces, secando entre una y otra (con airefro o caliente, aire a presin o con nitrgeno), para evitar que las manchas seextiendan.Para realizar determinaciones cuantitativas con placas convencionales, se carganvolmenes aproximados de 0.5-1.0 microlitros por mancha. Los volmenes mayores de5.0 microlitros deben evitarse salvo en casos excepcionales, donde se cargaran en varias veces. Desarrollo El eluyente, cuya composicin depende de cada problema concreto, se pone enla cubeta cromatogrfica por lo menos 30 minutos antes del principio de la separacinhasta una altura de 0.5 cm. La cubeta se cerrar con su tapa para que se sature con losvapores del disolvente y se coloca en un lugar adecuado. Para que la saturacin seamejor, se recubre la cubeta con papel secante (se indicar en el protocolo en el caso quesea necesario).Para desarrollar la placa, su extremo inferior se introduce en el diluyente y sevuelve a cerrar
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la cubeta inmediatamente. Para evitar eluciones, las manchas cargadasdebern estar completamente por encima del nivel de eluyente.El eluyente se ve impelido hacia arriba por capilaridad a travs delrecubrimiento. El recorrido ser, dependiendo de la separacin, de 5 a 15 cm mximo, yel tiempo necesario depender del sorbente, del espesor del mismo y de la composicindel eluyente. El recorrido ptimo es por lo general de 10 cm. Clculos Tras el desarrollo del cromatograma, se saca la placa de la cubeta y (despus demarcar el frente) se seca cuidadosamente al aire o con un secador. La posicin de lasmanchas se determina:-por su color propio-por su fluorescencia-por la disminucin o amortiguacin de la fluorescencia-por reaccin qumica: la placa una vez seca se roca parcial o totalmente con undeterminado reactivo, de manera que aparecern coloraciones caractersticas o unafluorescencia particular.La identificacin de cada una de las manchas se realiza de acuerdo con su color y del denominado valor rf. (factor de retencin , llamado tambin factor Rf) es decir, el cociente entre el recorrido de la sustancia (ls) y el del eluyente (lL). Para conseguir la identificacin, los colores propios o consecuencia del reveladoy los rf se comparan con los de sustancias de referencia, obtenidos en las mismascondiciones de desarrollo y tincin (si es posible en el mismo cromatograma). Comocontrol se realizan adicionalmente los denominados cromatrogramas mixtos (ladisolucin problema y la de la sustancia de referencia se cargan en una misma mancha).

Cromatografa bidimensional en capa fina Para mejorar una separacin incompleta, se combinan dos pasos decromatografa monodimensional de la manera siguiente: 1 paso: cargar la muestra en una esquina de la placa y desarrollarla en sentidoascendente como se describa ms arriba. 2 paso: girar 90 la placa desarrollada y seca, de manera que la mezcla yaseparada parcialmente se encuentre en el borde inferior, a continuacin se desarrolla ensentido ascendente con un segundo eluyente. La investigacin y la determinacin se realizan como ya han sido descritasanteriormente. Aplicaciones En la mayora de los casos la TLC se realiza cuando se quieren hacer evaluaciones cualitativas rpidas (screening). Las determinaciones cuantitativas son posibles por acoplamiento del equipamiento necesario (unidades de carga, scanner); enestos casos, es mejor recurrir a las placas de HPTLC, porque son ms efectivas. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA Fue la forma original de cromatografa lquida realizada por primera vez en 1906 por Tswett. La fase estacionaria normalmente se encuentra dentro de una columna devidrio de 5 a 30 mm de dimetro. Se utilizan muchas clases de materiales de empaqueque van desde la almina, gel de slice, tierra de diatomeas, hasta resinas sintticas yderivados polisacridos.Se usan todos los
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tipos de cromatografa lquida. Lo habitual es que la fase mvilse deje percolar a travs de la columna por gravedad. No se usa mucho en el anlisis dealimentos ya que es una tcnica para la separacin cromatogrfica de mezclas desustancias. Sin embargo, hoy en da existe un sistema cromatogrfico completo y automtico diseado para el anlisis bioqumico que se conoce como cromatografalquida rpida para protenas. Estos instrumentos emplean un rango de fases encolumnas de plstico de 5 o 10 cm que operan bajo presin moderada.Se revolucion el uso de la cromatografa en columna para la purificacin desoluciones de prueba o para extraer las sustancias deseadas de las soluciones, debido ala introduccin de cartuchos cortos de plstico y desechables de minicolumnas, preempacados con una variedad de fases de separacin con partculas de tamaorelativamente grandes, por ejemplo, cartuchos de Bond-Elut y Sep-Pak.Las soluciones de prueba, de lavado o extraccin pasan rpidamente a travs delos cartuchos con un poco de vaco generado a travs de una bomba de agua. Lamayora de los mtodos de purificacin tales como la extraccin lquido-lquido, la TLCy la cromatografa en columna de vidrio que se usan antes de la espectofotometra, laGLC, la HPLC etc, pueden ahora realizarse en forma ms eficiente usando estos cartuchos.
3. CONSULTAR

Preguntas complementarias Cul es la diferencia entre fluorescencia y fosforecencia.

1.

4. Consulte las estructuras de cada una

de las sustancias utilizadas en la practica

AZUL DE METILENO
Cuyo nombre cientfico es Cloruro de Metiltionina

La Fluorescencia es un fenmeno fsico mediante el cual ciertas substancias absorben energa (a partir de luz ultravioleta) emitindola nuevamente en forma de luz, esta vez del espectro del visible y de un color caracterstico (una longitud de onda determinada). A diferencia de la fosforescencia, la fluorescencia tiene lugar nicamente mientras dura el estmulo que la provoca. Es decir, al desaparecer la irradiacin, desaparece la emisin, puesto que el proceso es extremadamente rpido. La fosforescencia, en cambio es un proceso mas lento. Las substancias absorven la energia, almacenndola para emitirla posteriormente en forma de luz o de otro tipo de radiacin electromagntica. ste fenmeno se aprovecha en las manecillas de los relojes o de determinados juguetes que brillan en la oscuridad. Consulte otras formas de revelar durante un proceso de cormatografia.
2.

NARANJA DE METILO

FLUORESCEINA

Mtodos qumicos: Consisten en realizar una reaccin qumica entre un reactivo revelador y los componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los reactivos reveladores. Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos coloreados con los componentes orgnicos (con tonos amarillo-marrn), pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente sealar las manchas aparecidas. Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que reacciona con los
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componentes orgnicos produciendo manchas negras. Tambin es utilizado el permanganato potsico, que deja unas manchas de color amarillo. El tamao de las manchas no est relacionado con la cantidad de componente separado. Adems de estos reveladores generales, existen otros especficos: 2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas). Verde de bromocresol (para cidos carboxlicos). Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas). Ninhidrina (para aminocidos). Mtodos fsicos: El ms comn consiste en aadir al adsorbente un indicador fluorescente. De tal forma que al colocar la placa bajo una lmpara ultravioleta, y dependiendo del indicador y de la longitud de onda, aparecen manchas fluorescentes en las zonas en las que hay componentes, o en otros casos aparece toda la placa fluorescente excepto donde hay componentes. Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo que pueden ser detectados directamente en una lmpara de ultravioleta. En que consisten las tecnicas de GCMS y HPLC? Para que tipos de separaciones se utilizan? Qu relacin tienen con la cromatografa?
3.

de masas para la identificacin de sustancias diferentes dentro de una muestra de prueba. La tecnologa GC-MS es muy aceptada como "estandar de oro" para la identificacin de compuestos orgnicos voltiles y semivoltiles en mixturas, deteccin de narcticos, anlisis medioambiental, investigacin de explosivos e identificacin de muestras desconocidas. Adems, es capaz de identificar trazas en materiales que se crean que pasaban desapercibidos por otras tecnologas.

Cromatografa de gases espectrometra de masas (GC/MS)

GC-MS se compone de dos componentes bsicos: el cromatgrafo de gases y el espectrmetro de masas. El cromatgrafo de gases utiliza una columna capilar que depende de las dimensiones de la columna (longitud, diametro, grosor de capa) as como las propiedades de fase (p.ej. 5% fenilpolisiloxano). La diferencia de las propiedades qumicas de las diferentes molculas en una mixtura causa que las molculas sern separadas cuando la muestra cruza la longitud de la columna. Las molculas necesitan diferentes tiempos (tiempo de retencin) para salir (eluir) del cromatgrafo de gases. Eso permite al espectrmetro de masas siguiente de capturar, ionizar, accelerar, desviar y detectar las molculas ionizadas de forma separada. Para relizar esto, el espectrmetro de masas divide cada molcula en fragmentos ionizados y detecta estos fragmentos mediante su relacin masa- carga.

La cromatografa de gasesespectrometra de masas (GC/MS, por sus siglas en ingls) es un mtodo que combina las caractersticas de cromatografa de gases y espectrometra
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Estos dos componentes aplicados juntos permiten un grado ms fino de identificacin de sustancias que cada instrumento utilizado por separado. La combinacin de los dos

procesos reduce la posibilidad de error como es muy poco probable que dos molculas diferentes se comporten de la misma manera tanto en un cromatgrafo de gases como en un espectrmetro de masas. Por consiguiente, cuando un espectro de masa aparece a un tiempo de retencin caracterstico durante un anlisis GC-MS, tpicamente lleva a un mayor grado de seguridad que el analito de inters se encuentra en la muestra.

la columna mejorando la resolucin de la cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo. El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el cido trifluoroactico, que ayudan a la separacin de los compuestos. Una mejora introducida a la tcnica de HPLC descrita es la variacin en la composicin de la fase mvil durante el anlisis, conocida como elucin en gradiente. Un gradiente normal en una cromatografa de fase reversa puede empezar a un 5% de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25 minutos. El gradiente utilizado vara en funcin de la hidrofobicidad del compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil utilizada respecto a la afinidad por la fase estacionaria. En el ejemplo, utilizando un gradiente agua/acetonitrilo los compuestos ms hidroflicos eluirn a mayor concentracin de agua, mientras que los compuestos ms hidrofbicos eluirn a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo, hace falta realizar una serie de pruebas previas con tal de optimizar el gradiente de forma que permita una buena separacin de los compuestos.

HPLC Cromatografa resolucin

lquida

de

alta

En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna cromatogrfica a travs de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas partculas redondeadas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. El grado de retencin de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido de la columna se denomina tiempo de retencin y se considera una propiedad identificativa caracterstica de un compuesto en una determinada fase mvil y estacionaria. La utilizacin de presin en este tipo de cromatografas incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro de la columna y reduce as su difusin dentro de
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Consulte que significa el trmino TLC bidimensional, en que casos se puede utilizar?
4.

Para separar los lpidos de una muestra se utilizan habitualmente tcnicas cromatogrcas, como la TLC o cromatografa en capa delgada. La misma puede realizarse en forma monodimensional o bidimensional, dependiendo de la

naturaleza del compuesto a separar. Para separar fosfolpidos individuales se utiliza la cromatografa bidimensional en placas de slica gel 60 en soporte de vidrio, utilizando como solvente de corrida una mezcla de solventes orgnicos alcalinos en la primer dimensin y una mezcla a pH cido en la segunda, distinguindose bandas correspondientes a fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, fosfatidilserina, cido fosfatdico, etc. La cromatografa monodimensional en palca de slica gel 60 se utiliza en cambio para la separacin de acilgliceroles, pudindose identicar bandas correspondientes a monoacilglicerol, 1,2 diacilglicerol, 1,3 diacilglicerol y triacilglicerol. Para la identicacion de los compuestos en ambas tcnicas se utilizan patrones conocidos y se revelan mediante la exposicin de las placas

a vapores de iodo (I2), los cuales colorean las distintas bandas permitiendo su visualizacin. BIBLIOGRAFA Compendio de anlisis qumico cuantitativo Autores: Fischer, Rebert B.- Peters, Dennis G. Editorial interamericana S.A de C.V. Mxico D.F. 1987 GROSCH, Tatiana. Enciclopedia Lmina Siglo XXI. Edicin 2001. Editorial Norma. Pg. 150 151 http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf %C3%ADa_en_capa_fina http://www.monografias.com/trabajos911/sep aracion-lipidos-individuales/separacionlipidos-individuales.pdf

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