Revista de Cincias Farmacuticas Bsica e Aplicada

Estabilidade fsico-qumica de fitocosmticos

Rev. Cinc. Farm. Bsica Apl., v. 29, n.1, p. 81-96, 2008 ISSN 1808-4532

Journal of Basic and Applied Pharmaceutical Sciences

Protocolo para ensaios fsico-qumicos de estabilidade de fitocosmticos

Isaac, V.L.B.1*; Cefali L.C.1; Chiari, B.G.1; Oliveira, C.C.L.G.2; Salgado H.R.N.2; Corra, M.A.1
1Laboratrio

de Cosmetologia, LaCos, Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista, UNESP, Araraquara, SP, Brasil. 2Laboratrio de Controle Biolgico de Qualidade, Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista, UNESP, Araraquara, SP, Brasil. Recebido 12/05/2008 - Aceito 24/07/2008

RESUMO A crescente demanda por produtos cosmticos estveis, seguros e eficazes tem exigido da comunidade cientfica estudos cada vez mais complexos e utilizao de tcnicas mais eficientes para determinao da estabilidade dos produtos. O uso de ativos da biodiversidade brasileira levou ao desenvolvimento de inmeros produtos, nas mais diferentes formas cosmticas, o que dificulta, ainda mais, a padronizao de protocolos experimentais para atestar a estabilidade das preparaes cosmticas. Embora no exista no Brasil um protocolo que padronize os ensaios a serem realizados para se determinar a estabilidade dos produtos, vrios estudos foram realizados nos meios acadmicos para determinao da estabilidade de matrias-primas especficas. As caractersticas reolgicas so propriedades importantes a serem consideradas na fabricao, estocagem e aplicao de produtos de uso tpico. Alm de ensaios comumente empregados, a determinao do comportamento reolgico da formulao auxilia na avaliao da natureza fsico-qumica do veculo, de tal forma que torna possvel detectar sinais precoces de instabilidade fsica, possibilitando o controle de qualidade dos constituintes, das formulaes teste e dos produtos finais. A anlise trmica tambm usada para auxiliar o estudo da estabilidade de produtos cosmticos e, de modo geral, a calorimetria exploratria diferencial para orientar o desenvolvimento de novos produtos. Outras ferramentas, como a fluorimetria e a granulometria a laser podem auxiliar o estudo e o desenvolvimento de sistemas, emulsionados ou no. O objetivo deste estudo o desenvolvimento de protocolo para o estudo da estabilidade fsico-qumica de fitocosmticos - sistemas contendo ativos da biodiversidade brasileira. Palavras-chave: biodiversidade brasileira; estabilidade fsico-qumica; fitocosmticos. INTRODUO Fitocosmtico pode ser definido como o cosmtico que contm ativo natural, de origem vegetal,
*Autor correspondente: Vera Lucia Borges Isaac - Departamento de Frmacos e Medicamentos - Faculdade de Cincias Farmacuticas Universidade Estadual Paulista, UNESP - Rodovia Araraquara-Ja, km 1 CEP: 14801-902 - Araraquara SP, Brasil. - Telefone: (16) 3301-6979 e-mail: isaacvlb@fcfar.unesp.br

seja um extrato, leo ou leo essencial, cuja ao define a atividade do produto. Um fitocosmtico deve passar por todas as etapas de pesquisa: proposio, criao e desenvolvimento, incluindo os testes de estabilidade, para assegurar a atividade durante toda sua vida til. A estabilidade um parmetro de validao muito pouco descrita em normas de validao de metodologia analtica (Vilegas & Cardoso, 2007), mas necessria para assegurar a qualidade do fitocosmtico, desde a fabricao at a expirao do prazo de validade. Variveis relacionadas formulao, ao processo de fabricao, ao material de acondicionamento e s condies ambientais e de transporte, assim como cada componente da formulao seja ativo ou no, podem influenciar na estabilidade do produto. As alteraes podem ser extrnsecas, ou seja, relacionadas a fatores externos aos quais o produto est exposto (tempo, temperatura, luz e oxignio, umidade, material de acondicionamento, microrganismos e vibrao) e intrnsecas, relacionadas natureza das formulaes e, sobretudo, interao de seus ingredientes entre si e ou com o material de acondicionamento: incompatibilidade fsica e incompatibilidade qumica, como, por exemplo, pH, reaes de xido-reduo, reaes de hidrlise, interao entre ingredientes da formulao e interao entre ingredientes da formulao e o material de acondicionamento. Tcnicas de anlise trmica diferencial, calorimetria exploratria diferencial e termogravimetria podem ser usadas na compreenso de mecanismos fsicoqumicos relativos a processos de decomposio trmica e no desenvolvimento de compostos. A espectrometria de fluorescncia ou tambm chamada espectrofluorimetria o mtodo espectroscpico ptico mais extensivamente usado em meios analticos e em investigaes cientficas, devido ao elevado nvel de sensibilidade e ao amplo intervalo dinmico que pode ser aplicado. Alm disso, o instrumento para a maioria dos propsitos pode ser adquirido por um custo no muito elevado (Silberman, 2006). A granulometria a laser permite determinar o tamanho da partcula por difrao de laser e pode ser usada

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para anlises que no destroem a amostra, seja ela seca ou mida, com partculas de 0,02 a 2.000 micra (Kippax, 2007). A reologia, na ltima dcada, adquiriu posio permanente nos testes de estabilidade, uma vez que as caractersticas reolgicas so propriedades importantes a serem consideradas na fabricao, estocagem e aplicao de produtos de uso tpico, interferindo na forma de utilizao do produto, na adeso ao tratamento e, tambm, na aceitao do produto pelo consumidor. A caracterizao reolgica completa de um sistema pode, ento, ser til desde o desenvolvimento do produto cosmtico at a determinao do prazo de validade, incluindo influncia em testes sensoriais, que auxiliam verificar a aceitao do consumidor. Os extratos vegetais podem ser incorporados em diferentes preparaes cosmticas e, dependendo da classe qumica de seus ativos, podem ser responsveis pela atividade do produto. Podem ou no alterar a forma cosmtica e o comportamento reolgico da preparao conforme estudos realizados por Archondo (2003). Xampus manipulados com extrato de pitanga tiverem suas viscosidades alteradas, dependendo do veculo extrator, mas no da quantidade de extrato adicionado, como atestam resultados preliminares em estudos realizados pelo nosso grupo de pesquisa. Extratos so preparaes concentradas, de consistncia lquida, slida ou intermediria, obtidos a partir de material vegetal ou animal, (Farmacopia Brasileira, 2001), usando como solvente etanol, gua ou mistura entre eles ou, ainda, outro lquido extrator que seja apropriado ao uso (Schulz et al., 2002). Aps a extrao, o solvente pode ser evaporado em evaporador rotativo e o resduo liofilizado. Para obteno do extrato gliclico, o mais usualmente empregado em preparaes cosmticas, o material deve ser suspenso em propilenoglicol, veculo que apresenta grande compatibilidade com as formulaes farmacuticas usadas como veculos e excipientes cosmticos. Padronizar um extrato significa estabelecer a relao ideal entre droga vegetal x extrato e a relao extrato x marcador. Muitos extratos so comercializados com o objetivo de preparar fitocosmticos sem ao menos apresentar a concentrao dos princpios ativos. A utilizao de extratos padronizados pode assegurar a eficcia de um fitocosmtico, garantindo segurana e qualidade. Macerao o processo no qual o material a ser extrado reduzido em partculas de tamanho adequado e mantido em contacto com o lquido extrator por tempo a ser determinado experimentalmente, para que a extrao seja completada. Esse contacto realizado em recipiente fechado e, ao final do processo, o extrato separado do resduo, o qual deve ser prensado e o lquido juntado ao extrato (Farmacopia Brasileira, 2001). Percolao o processo no qual o material a ser extrado reduzido em partculas de tamanho adequado e mantido em contato com o lquido extrator por tempo no inferior a uma hora. Em percolador, o material deve ser coberto com o lquido extrator e aps o tempo necessrio

macerao, dever ser percolado lentamente, tendo cuidado para que sempre permanea coberto pelo solvente. A velocidade, o tempo e a temperatura de percolao devero ser determinados experimentalmente, para que a extrao seja completada (Farmacopia Brasileira, 2001). Turboextrao um processo no farmacopico que consiste em dois processos simultneos: rasura e esgotamento do material. Isto ocorre, pois o material, ainda na sua forma ntegra, colocado em um recipiente que possui trs facas em seu fundo, que realizam um movimento rotacional, semelhante a um liquidificador, o que leva rasura do material e permite o contato com o lquido extrator de forma cintica. A liofilizao consiste em retirar o solvente do material a ser estudado, o qual seco por sublimao de gua presso inferior do ponto triplo, em misturas solidificadas ou congeladas, sem sofrer desnaturao. As caractersticas essenciais da amostra so mantidas e, a simples adio de gua, suficiente para sua reconstituio (Pombeiro, 1980). O estudo da estabilidade fornece indicaes sobre o comportamento do produto, em determinado intervalo de tempo, frente a condies ambientais a que possa ser submetido, desde a fabricao at o trmino da validade (Brasil, 2004). Para os testes de estabilidade, as condies de armazenagem mais comuns so: temperatura (elevada, do ambiente e baixa), exposio luz e ciclos de congelamento e de descongelamento. A temperatura ambiente dever ser monitorada, sendo aceita variao de at 2 C e as temperaturas elevadas devem obedecer aos limites mais freqentemente praticados, em estufas a 37, 40, 45 e 50 C, sendo aceita variao de at 2 C. Os limites de temperaturas baixas mais utilizados so em geladeira a 5 C e em freezer de 5 a 10C. Segundo o Guideline on Stability Testing: Stability Testing of New Drug Substances And Products (2008), preconizado pela European Medicines Agency, os ensaios avaliam as amostras submetidas a diferentes temperaturas (25 C ou 30 C, 40 C, 5 C e 20 C) em um determinado perodo de tempo. Para temperaturas de 25 ou 30 C, durante o teste em longo prazo, as amostras devem ser estocadas a uma temperatura de 25 C 2 C a 60% de umidade relativa 5% ou a 30 C 2C a 65% de umidade relativa 5% durante 12 meses. J no teste acelerado, as amostras devero ser armazenadas temperatura de 40 C 2 C a 75% de umidade relativa 5% durante seis meses. Durante o teste em longo prazo no refrigerador, as amostras devem ser submetidas temperatura de 5 C 3 C durante 12 meses, e no teste acelerado, submetidas temperatura de 25 C 2 C a 60% de umidade relativa 5% durante seis meses. As amostras tambm devem ser estocadas no freezer a uma temperatura de 20 C 5 C, durante 12 meses, para avaliar sua estabilidade. A exposio do produto radiao luminosa pode alterar a cor, levando degradao de ingredientes da formulao. Por isso, os estudos de avaliao da estabilidade

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frente exposio luminosa, devem ocorrer frente luz solar, captada atravs de vitrines especiais ou em ambientes cujas lmpadas apresentem espectro de emisso semelhante ao do sol, como as lmpadas de xennio. Os ciclos de congelamento e descongelamento alternam 24 horas em temperaturas elevadas e 24 horas em temperaturas baixas, sendo recomendados os seguintes conjuntos: ambiente e 5 2 C; 40 2 C e 4 2 C; 45 2 C e 5 2 C; 50 2 C; 5 2 C (Brasil, 2004). Os parmetros a serem avaliados so definidos pelo pesquisador e dependero no s das caractersticas do produto, como tambm dos componentes da formulao e, principalmente, da forma cosmtica. Podem ser classificados em organolpticos, fsico-qumicos e microbiolgicos. Um cuidado a ser tomado que os ensaios realizados devem, de fato, representar o conjunto de parmetros que avaliem a estabilidade do produto. A fora da gravidade atua sobre os produtos fazendo com que as partculas se movam no seu interior. A centrifugao promove estresse na amostra, simulando aumento na fora da gravidade, aumentando a mobilidade das partculas e antecipando possveis sinais de instabilidade, como precipitao, separao de fases, formao de sedimento compacto e coalescncia (Brasil, 2007). A ANVISA recomenda que, antes do incio dos testes de estabilidade, o produto seja submetido centrifugao, durante 30 minutos, a uma velocidade de 3.000 rpm com trs leituras para cada amostra. A ocorrncia de instabilidade indicativa da necessidade de reformulao. As amostras consideradas, por este ensaio, inicialmente estveis, podem ser submetidas ao Teste de Estabilidade Preliminar. O objetivo desta pesquisa foi estabelecer protocolo para o estudo da estabilidade fsico-qumica de formas cosmticas contendo ativos da biodiversidade brasileira para uso cosmtico, os fitocosmticos. MATERIAL E MTODOS Os ensaios de estabilidade propostos esto descritos de maneira geral e devem ser empregados adequadamente ao estudo da estabilidade de cada forma cosmtica. Muitos foram realizados em nosso laboratrio e outros foram retirados da literatura, na tentativa de mostrar sua importncia na avaliao da estabilidade de fitocosmticos. O material empregado em ensaios de estabilidade foi produzido e/ou manipulado em um nico lote, usando as mesmas matrias-primas, para no haver possibilidade de interferncia na estabilidade do sistema se as matriasprimas forem de diversos fornecedores e apresentarem prazos de validade diferentes. Sendo assim, para os ensaios serem realizados em triplicata, foram preparados em trs lotes. Em estudos de estabilidade deve ser assegurada a quantidade de material necessria para produzir amostra suficiente para a realizao de todos os ensaios. Os fitocosmticos estudados foram identificados quantitativamente para verificao da concentrao de

ativo na forma cosmtica, utilizando espectrofotmetro UV/VIS, com leitura em comprimento de onda de mxima absoro ou em cromatgrafo lquido de alta eficincia. As amostras foram dissolvidas em sistema solvente adequado e submetidas leitura para determinao da massa inicial do ativo. A comparao da concentrao inicial com a concentrao residual, determinada nas leituras durante todo o experimento, possibilitam a verificao da estabilidade do ativo. As formas cosmticas foram acondicionadas nas embalagens adequadas para realizao do estudo da estabilidade. Metodologia Estabilidade Preliminar O teste de estabilidade preliminar consiste em submeter a amostra a condies extremas de temperatura e realizar os ensaios em relao aos vrios parmetros de acordo com a forma cosmtica estudada. O teste de estabilidade preliminar tem a durao de 15 dias, sendo a primeira avaliao realizada no tempo um (t1), que corresponde a 24 aps a manipulao e/ou produo, para que o produto possa adquirir viscosidade e consistncia final, aps sua maturao. As outras avaliaes devem ser realizadas diariamente, durante toda a durao do teste. Alguns dos parmetros a serem analisados para cada amostra, so: aspecto, cor, odor, pH, viscosidade, densidade, condutividade eltrica e devem ser apresentados como a mdia aritmtica dos valores obtidos dos testes realizados em triplicata. Estabilidade Acelerada Este teste tem como objetivo fornecer dados para prever a estabilidade do produto, tempo de vida til e compatibilidade da formulao com o material de acondicionamento (Brasil, 2004). Emprega condies no extremas e serve como auxiliar na determinao da estabilidade da formulao. um estudo preditivo e pode ser usado para estimar o prazo de validade mas pode ser empregado, ainda, quando houver mudanas na composio ou no processo de fabricao, na embalagem primria ou para validar equipamentos e, tambm, no caso de fabricao terceirizada As amostras devem ser acondicionadas em frascos de vidro neutro ou na embalagem a serem acondicionadas como produto final, o que pode antecipar a avaliao da compatibilidade entre a formulao e a embalagem. importante que a quantidade de produto seja suficiente para as avaliaes necessrias e que o volume total da embalagem no seja completado, sendo respeitado um tero da capacidade da embalagem para possveis trocas gasosas (Brasil, 2004). O teste de estabilidade acelerada tem durao de 90 dias, embora possa ser estendido para seis meses ou um ano, em funo das caractersticas do produto a ser analisado (Brasil, 2004). As amostras devem ser

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submetidas a aquecimento em estufas, resfriamento em refrigeradores, exposio radiao luminosa e ao ambiente, com controle da temperatura e analisadas em relao aos vrios parmetros de acordo com a forma cosmtica estudada. Teste de Prateleira A amostra, acondicionada em embalagem apropriada e mantida temperatura ambiente deve ser analisada periodicamente, at o trmino do prazo de validade, em relao aos vrios parmetros de acordo com a forma cosmtica estudada. Centrifugao Em tubo de ensaio para centrfuga, cnico, graduado, de 10 g de capacidade, devem ser pesados, em balana semi-analtica, cerca de 5 g da amostra a ser analisada, os quais devem ser submetidos a rotaes crescentes de 980, 1800 e 3000 rpm, em centrfuga, durante quinze minutos em cada rotao, temperatura ambiente (Idson, 1988; 1993a; 1993b; Rieger, 1996). A no ocorrncia de separao de fases no assegura sua estabilidade, somente indica que o produto pode ser submetido, sem necessidade de reformulao, aos testes de estabilidade. Estresse Trmico Em embalagem adequada, semelhante quela a ser usada para a comercializao do produto cosmtico, 10 g da amostra devem ser submetidos a condies extremas de temperatura, como 5 C e 45 C, para deteco de sinais de instabilidade a mudanas de temperaturas e sob manuteno de temperaturas baixas e elevadas por um determinado intervalo de tempo. A no ocorrncia de separao de fases deve ser indicativa de estabilidade do produto ensaiado. Ciclos de Congelamento e Descongelamento Em embalagem adequada, semelhante quela a ser usada para a comercializao do produto cosmtico, cerca de 10g da amostra devem ser submetidos a condies extremas de temperaturas, nos chamados ciclos, sendo considerados para efeito de estudo de estabilidade preliminar, a realizao de pelo menos seis ciclos. Os ciclos de congelamento e descongelamento alternam 24 horas em temperaturas elevadas e 24 horas em temperaturas baixas, sendo recomendados os seguintes conjuntos: ambiente e 5 2 C; 40 2 C e 4 2 C; 45 2 C e 5 2 C e 50 2 C; 5 2 C. Exposio Radiao Luminosa Em embalagem adequada, semelhante quela a ser usada para a comercializao do produto cosmtico, cerca de 10 g da amostra devem ser submetidos a condies

extremas de incidncia luminosa direta, para deteco de sinais de instabilidade exposio luz (Brasil, 2004). A no ocorrncia de separao de fases e a no alterao da colorao devem ser indicativas de estabilidade do produto ensaiado. Aspecto A amostra deve ser analisada, em relao ao padro, a fim de avaliar as caractersticas macroscpicas para verificao de sinais de instabilidade. A no ocorrncia de separao de fases, de precipitao, de turvao, deve ser indicativa de estabilidade da amostra ensaiada. O aspecto pode ser descrito como granulado, p seco, p mido, cristalino, pasta, gel, fluido, viscoso, voltil, homogneo, heterogneo, transparente, opaco e leitoso. A amostra pode ser descrita como normal, sem alterao; levemente separada, precipitada, turva; separada, precipitada, turva. Cor A colorimetria deve ser realizada pela comparao visual, sob condies de luz branca e espectrofotomtrica, pela anlise na regio espectral do visvel, da cor da amostra com a cor do padro, armazenado nas mesmas condies e embalagem que a amostra. A comparao visual da cor da amostra ensaiada com a cor do padro deve ser realizada em cerca de 5 g da amostra acondicionados em frascos iguais. A fonte de luz empregada deve ser a luz branca, natural. Cerca de 1,5 g da amostra ensaiada diludos em gua destilada, na proporo de 1:1 (p/p) devem ser submetidos colorimetria espectrofotomtrica pela anlise da varredura, na regio do visvel, e comparao com a varredura do padro. Efeitos hipercrmico e hipocrmico, referentes intensidade da banda e efeitos batocrmico ou hipsocrmico, referentes variao no comprimento de onda relativo mxima absoro, so indicativos de alterao na intensidade da cor ou mesmo modificao da colorao e, portanto, podem ser indicativos de instabilidade. A amostra pode ser classificada, em relao cor em: normal, sem alterao; levemente modificada; modificada; intensamente modificada. Odor O odor da amostra ensaiada deve ser comparado ao odor do padro, diretamente atravs do olfato. A amostra pode ser classificada, em relao ao odor em: normal, sem alterao; levemente modificado; modificado; intensamente modificado. pH A determinao do pH deve ser realizada em uma disperso aquosa a 10% (p/p) da amostra ensaiada

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em gua recm destilada, usando peagmetro digital, avaliando a diferena de potencial entre dois eletrodos imersos na amostra em estudo (Brasil, 2004). O eletrodo deve ser inserido diretamente na disperso aquosa (Davis & Burbage, 1997; Isaac, 1998a; Farmacopia Brasileira, 2001) e valores mantidos entre 5,5 e 6,5, compatveis com o pH cutneo, devem ser usados como critrio de estabilidade. Densidade A densidade relativa a relao entre a densidade absoluta da amostra e a densidade absoluta de uma substncia usada como padro. Quando a gua utilizada como substncia padro, a densidade determinada a densidade especfica (Brasil, 2007). A determinao da densidade especfica deve ser realizada em picnmetro, acoplado com termmetro, previamente pesado vazio, para determinao da mPv. A amostra deve ser inserida no picnmetro e a temperatura deve ser ajustada para 20 C, quando, ento, o picnmetro deve ser pesado, para determinao da mPa. A diferena entre a massa do picnmetro com a amostra e do picnmetro vazio a massa da amostra. A relao entre a massa da amostra e a massa da gua, ambas a 20 C, representa a densidade especfica da amostra ensaiada (Farmacopia Brasileira, 2001). Viscosidade A viscosidade depende das caractersticas fsicoqumicas e das condies de temperatura do material (Brasil, 2007). Pode ser determinada em viscosmetro rotativo coaxial, acoplado a banho termostatizado e a computador para uso de software especfico para o equipamento, que tem como princpio a velocidade de rotao de eixos metlicos imersos no material ensaiado, e consiste na medio do torque requerido para rodar o sensor imerso na amostra. O controle da temperatura e a escolha do sensor so fundamentais para a adequao da leitura. O sensor deve ser mergulhado diagonalmente na amostra, para evitar formao de bolhas. Cerca de 8 a 15g de amostra devem ser analisados no dispositivo de amostras e o sensor imerso possibilita, sob velocidades crescentes, a leitura das viscosidades. Podem ser traadas curvas ascendente e descendente, correspondentes a velocidades crescentes e decrescentes, a fim de serem classificados os sistemas em Newtonianos ou no-Newtonianos, isto , que apresentam e no viscosidades constantes sob qualquer condio. Espalhabilidade A determinao da espalhabilidade da amostra deve ser realizada a partir da leitura dos dimetros abrangidos pela amostra em um sistema formado por uma

placa molde circular de vidro com orifcio central, sobre uma placa suporte de vidro posicionada sobre uma escala milimetrada (Isaac, 1998a; Knorst & Borghetti, 2006). A determinao da consistncia por extensibilidade pode ser realizada como proposto por Isaac, (1998a), adaptado de Bueno et al. (1984), e oferece subsdios para discusso de espalhabilidade relacionada caracterizao reolgica da amostra. A amostra, cerca de 0,3g de produto deve ser colocada entre duas placas de vidro, com 10 X 18cm e 0,5cm de espessura, sendo uma delas disposta sobre um papel milimetrado, colado em uma placa de madeira. A adio de pesos de 250, 500, 750 e 1000g, a cada trs minutos, na placa superior, promove o espalhamento do produto, que pode ser medido como extensibilidade, em centmetros. A espalhabilidade pode ser determinada, ainda, quando cerca de 4mg de cada amostra de fotoprotetores, por exemplo, forem aplicados, no lado interno do antebrao e espalhados por um perodo de 10 minutos sobre a pele. Devem ser mantidas condies ambientais propcias, tais como temperatura de 23 C e umidade relativa do ar de 60%. Os resultados, expressos em centmetros de extenso da regio aplicada, devem ser analisados estatisticamente, para obteno do perfil de espalhabilidade dos emolientes presentes na formulao e/ou da prpria formulao. Este ensaio pode ser executado com 15 voluntrios, sendo efetuadas quatro medies por pessoa (Isaac, 1998a; Francisco et al., 2001; Pereira et al., 2001). Anlise Trmica A anlise trmica deve ser realizada submetendo a amostra anlise por Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) e Termogravimetria (TG/DTG). A massa da amostra deve ser colocada em cadinho de platina para as anlises de TG e DTG, e cadinho de alumnio com tampa perfurada para a anlise de DSC. A razo de aquecimento deve ser determinada experimentalmente, em atmosfera de N2, utilizando uma ampla faixa de temperatura. Espectrofluorimetria A espectrofluorescncia pode ser empregada para detectar a presena de perxido por meio de uma sonda que se torna fluorescente na presena de perxidos, aps incubao em meio tamponado (Pytel et al., 2005). Granulometria a Laser No equipamento de granulometria por difrao a laser, a distribuio de tamanho da partcula calculada comparando o ensaio de uma amostra com um modelo tico apropriado.

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Estudo do Comportamento Reolgico A determinao do comportamento reolgico realizada em remetro acoplado em banho termostatizado, por meio de ensaios rotativos e oscilatrios, para caracterizao reolgica dos produtos estudados. Os ensaios rotativos permitem anlise do fluxo da amostra, da tixotropia, da rea de histerese e determinao do limite de escoamento, utilizando uma tenso de cisalhamento por um determinado perodo de tempo para a curva ascendente e mesmo tempo para a curva descendente, obtendo dados relativos a um ponto por segundo, sob temperatura controlada. Os ensaios oscilatrios permitem analisar a deformao e a recuperao da amostra, a susceptibilidade mecnica, depois de aplicadas tenses de cisalhamento por um determinado perodo de tempo, em temperatura controlada, com o sensor adequado consistncia de cada produto analisado. A amostra deve ser exposta fora oscilatria, isto , deve ser submetida a uma tenso de cisalhamento utilizando freqncias variveis, sendo possvel analisar a viscosidade dinmica (), os mdulos de estocagem ou armazenamento (G) e de perda ou deformao (G) os quais possibilitam inferir sobre a deformao e a recuperao de amostras aps o cisalhamento, avaliando a viscoelasticidade da amostra. Em remetro de oscilao, deve ser utilizado o sensor adequado amostra (placa-placa, cone-placa ou copos com cilindros coaxiais) e tenso de cisalhamento de 0,01-0,5 Pa, por 180 segundos, sendo obtidos dados a cada dois segundos, a 25 C. A deformao deve ser avaliada com durao de 300 segundos e tenso de 0 a 0,5 Pa e a recuperao tambm com 300 segundos, voltando tenso de 0 Pa, em temperatura de 25 C. RESULTADOS Estudos realizados em nosso laboratrio, por integrantes cadastrados em nosso grupo de pesquisa, possibilitaram a obteno de muitos dos resultados, em vrios ensaios realizados, mostrados neste estudo. Centrifugao Dois sistemas emulsionados, um gua em leo (A/O) e outro leo em gua (O/A), contendo novas matrias-primas para sistemas A/O, propostos para realizao de avaliao sensorial, usando nitreto de boro como modificador sensorial, por retirar a sensao graxa residual das emulses gua em leo, foram submetidos ao ensaio preliminar de centrifugao, usando trs diferentes rotaes (980, 1800 e 3000 rpm), durante 15 minutos em cada rotao. Os dois sistemas permaneceram estveis.

Estresse Trmico Um sistema emulsionado gua em leo (A/O) contendo Polyglyceryl-2 e Dipolyhydroxystearate como agente emulsificante, elevadas concentraes de emolientes e de espessante hidroflico, apresentou estabilidade no ensaio inicial de centrifugao. Ao ser submetido a estresse trmico em condio extrema de temperatura em freezer, a 5 C, apresentou separao de fases e teve sua formulao modificada para ser submetido aos ensaios de estabilidade subsequntes para o desenvolvimento do trabalho. Ciclos de Congelamento e Descongelamento Um sistema emulsionado contendo lcool cetoestearlico etoxilado com 20 moles de xido de etileno, como agente emulsificante, foi submetido a oito ciclos de congelamento e descongelamento, durante 16 dias, nas temperaturas 5 C 2 C e 45 C 2 C, mantendo-se estvel em todo o ensaio. Exposio Radiao Luminosa Um xampu manipulado com extrato de polpa se Acrocomia aculeata (lacq) Lood. ex Mart, quando submetido radiao luminosa, por exposio luz natural, apresentou mudana de colorao, caracterizada por escurecimento. Aspecto Uma pasta dentifrcia manipulada com espessante hidroflico, elevada concentrao do agente abrasivo carbonato de clcio e leo essencial de folhas frescas de fruto ctrico, apresentou modificao de aspecto aps ser submetida temperatura de 45 C; entretanto, a concentrao do ativo, determinada em espectrofotometria na regio ultravioleta, no foi alterada aps o estresse trmico. Cor Uma soluo hidroalcolica contendo polpa de Acrocomia aculeata (lacq) Lood. ex Mart apresentou alterao de cor, caracterizada pelo escurecimento, quando mantida na bancada do laboratrio, protegida da luz em frasco de vidro mbar e envolto em papel alumnio. A adio de conservante antioxidante promoveu manuteno da colorao. Odor Amostras de fitocosmticos para maquiagem (loo tnica hidratante e base de maquiagem) que so usados pelos estudantes em testes para verificao e escolha das cores dos produtos a serem por eles preparados em aula prtica, apresentaram modificao do odor, entretanto, nenhuma alterao visual foi notada nos produtos.

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pH Os valores de pH obtidos por potenciometria direta em disperso aquosa das amostras estudadas, esto apresentados na Figura 1.

Figura 3. Valores da densidade das amostras (1-6) mantidas a 45 C durante 15 dias.

Figura 1. Valores de pH das amostras (1-6) armazenadas em temperatura de 28 2 C, durante 14 dias.

Amostra 1 creme padro sem conservante Amostra 2 creme padro com conservante Amostra 3 creme sem conservante + Staphylococcus aureus Amostra 4 creme com conservante + Staphylococcus aureus Amostra 5 creme sem conservante + Pseudomonas aeruginosa Amostra 6 creme com conservante + Pseudomonas aeruginosa

Densidade A densidade de sistemas emulsionados estudados, em duas condies de armazenamento, podem ser avaliadas nas Figuras 2 e 3. Figura 4. Reograma do gel de CMC 3% para Rampa de Tenso com limite de escoamento.

Figura 2. Valores da densidade das amostras (1-6) mantidas a -5 C durante 15 dias. Viscosidade A variao da viscosidade de diferentes xampus espessados com diferentes concentraes de cloreto de sdio pode ser visualizada na Tabela 1.

Figura 5. Reograma do gel de CMC 3% para Deformao e Recuperao.

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Tabela 1 - Avaliao da viscosidade (em mPa.s), de xampus contendo diferentes concentraes de tensoativo e espessados com cloreto de sdio em dois valores diferentes de pH Concentrao % do tensoativo detergente Concentrao % do espessante cloreto de sdio Viscosidade, em mPa.s, em pH = 6 Viscosidade, em mPa.s, em pH = 7 Xampu A 15 2,8 901,18 954,42 Xampu B 25 4,0 5047,79 5116,01 Xampu C 30 3,2 11968,17 12512,18

Tabela 2 - Perfil de espalhabilidade em mdia das medidas, em cm, da regio do antebrao espalhada com creme fotoprotetor com diferentes emolientes.

emolincia do fotoprotetor

mdia das medidas, em cm 2,0133 1,6933 1,6533 1,6267 1,4933 1,4333 1,4133

leo mineral lactato de miristila miristato de isopropila leo de amndoas manteiga de karit dimeticone 200 isononanoato de cetila

Tabela 3 - Temperatura de estabilidade e temperatura final da decomposio obtida das curvas TG/ DTG dos leos vegetais em atmosfera de nitrognio (Faria et al., 2002) leo temperatura de estabilidade C temperatura final de decomposio C 478 440 483 433 477

araticum babau buriti guariroba murici

320 180 321 283 271

Tabela 4 - Caractersticas do tamanho das partculas observadas nas emulses aps diluio com gua destilada e com soluo de dodecilsulfato de sdio. emulso sem a - tocoferol com a - tocoferol D50 (hm) H2O 255 1 416 14 DSS 249 1 391 3 %D < 200 hm H2O 27 13 DSS 26 14 %D < 1 mm H2O 100 71 DSS 100 78

Determinao da Espalhabilidade O perfil de espalhabilidade dos emolientes presentes em sete diferentes formulaes de creme fotoprotetor est apresentado na Tabela 2.

Anlise Trmica A anlise trmica de leos e gorduras vegetais, determinada por Faria et al. (2002), avaliou a temperatura de estabilidade e a temperatura final de decomposio, apresentadas na Tabela 3.

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Tabela 5 - Ensaios fsico-qumicos a serem realizados e periodicidade de realizao nos testes de estabilidade preliminar, acelerada e de longa durao.

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Espectrofluorimetria A pele irradiada e tratada com creme contendo o complexo antioxidante testado apresentou concentrao 116% menor de perxidos cutneos, enquanto a pele tratada com creme sem o complexo antioxidante apresentou concentrao 49% menor (Pytel et al., 2005). Granulometria a Laser A mdia do tamanho das partculas e as porcentagens de partculas com tamanhos menores que 200 m e menores que 1 m esto apresentadas na Tabela 4. D50 a mdia dos dimetros mdios %D < 200 m a porcentagem de partculas com dimetros menores que 200 m %D < 1 m a porcentagem de partculas com dimetros menores que 1 m Estudo do Comportamento Reolgico Os reogramas dos ensaios rotativo e oscilatrio com gel de sodium carboxymethyl cellulose esto mostrados nas Figuras 4 e 5. A Tabela 5 mostra o protocolo proposto para avaliar a estabilidade fsico-qumica de fitocosmticos, com base no conjunto de ensaios utilizados. DISCUSSO O uso de ingredientes de origem natural em cosmticos ganhou popularidade e, entre eles, podem ser citados os extratos vegetais, leos vegetais, leos essenciais e seus derivados que, incorporados nas formulaes, agregam bioatividade, funcionalidade e apelo de marketing (Priest, 2006). Nas ltimas duas dcadas, a indstria cosmtica tem lanado produtos contendo ingredientes naturais, mas as definies, ainda, so ambguas ou incertas. Uma corrente define natural como a substncia que vem de uma fonte vegetal renovvel e que no seja derivado nem de outra forma quimicamente modificada ou alterada. Outra definio, mais ampla, considera natural a substncia ou seus derivados sintticos de origem natural, o que poderia englobar todas as matrias-primas, uma vez que podem ser reduzidas a uma origem ou outra, entre os reinos animal, mineral ou vegetal (Oliveira & Bloise, 1995). A partir do lanamento de uma linha muito variada de produtos cosmticos por uma grande empresa brasileira do setor, que usou ativos da Biodiversidade Brasileira, a Amaznia passou a ser o centro das atenes das empresas fornecedoras de matrias-primas para a produo de cosmticos, no Brasil e no mundo. O manejo sustentvel tem sido explorado pelas empresas fornecedoras de matrias-primas, mas o caboclo um suporte indispensvel

nessa cadeia, pois alm de se beneficiar com a explorao, ajuda a manter a floresta em p, uma vez que se preocupa com a derrubada das rvores, pois, do contrrio, na prxima colheita no teria as sementes desejadas pelos fornecedores. Silva (2002) apresentou estudos de bioengenharia cutnea comprovando a eficcia de bioativos tropicais e, assim como esse autor, vrios pesquisadores tm estudado ativos brasileiros aplicados em cosmticos. Sua concluso mostra a importncia da associao da tecnologia com a cultura popular, para estudo e conseqente uso de ingredientes naturais em cosmticos. Isso tem aumentado a pesquisa referente ao isolamento, identificao e quantificao de compostos ativos das plantas e suas atividades biolgicas (Teodor et al., 1998; Galhardo et al., 2007a). No Brasil, esto localizadas cerca de 20 por cento das duzentas e cinqenta espcies medicinais catalogadas pela UNESCO, facilitando o aproveitamento do potencial curativo dos vegetais para o tratamento de doenas (Drumond et al., 2004; Galhardo et al., 2007b). leos e extratos de plantas h muito tempo tm servido de base para diversas aplicaes na medicina popular, entre elas, a produo de anti-spticos. Tal realidade serviu para muitas investigaes cientficas, com vistas na confirmao da atividade antimicrobiana dos leos essenciais (Nascimento et al., 2007). Pesquisas demonstraram que o leo essencial (constitudo por um conjunto de componentes) apresenta uma melhor atividade teraputica do que as substncias isoladas que representam sua composio principal, por exemplo: o leo essencial de Eucaliptus globulus tem atividade antisptica maior do que o seu principal constituinte ativo isolado, o cineol ou eucaliptol (representando 80% da composio). Um leo essencial possui uma composio complexa sendo, algumas vezes, de centenas de diferentes compostos qumicos, os quais apresentam ao sinrgica ou complementar entre si, aumentando sua atividade (Simes et al., 2000). Estudos laboratoriais preliminares (Galhardo et al., 2007a, Galhardo et al., 2007b), demonstraram atividade inibidora de crescimento bacteriano frente a diferentes substncias qumicas, de leo essencial de pitanga coletado em diferentes pocas. A tendncia mundial a padronizao de extratos atravs de tcnicas rpidas e eficientes, sejam elas espectrofotomtricas e cromatogrficas, como cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), com a finalidade de se determinar as substncias normalmente presentes, responsveis pela atividade cosmtica, mesmo que em pequenas concentraes (Jcome et al., 1999). Dois fatores bsicos determinam a composio de um extrato: a qualidade do material vegetal e o processo de produo (Schulz et al., 2002). A padronizao de extratos vegetais dever ser realizada a fim de ser conhecido o teor de um ou mais constituintes (Farmacopia Brasileira, 2001).

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A padronizao pode ocorrer pela diluio com o solvente usado na extrao ou com extratos menos concentrados, obtidos nas mesmas condies ou, ainda, pela adio de materiais inertes ou concentrao por processo sob presso reduzida, em temperatura onde a degradao dos constituintes do extrato no seja significativa. Alguns estudos j foram realizados por integrantes do nosso grupo de pesquisa, utilizando extratos vegetais para o desenvolvimento de fitocosmticos e suas tcnicas de controle de qualidade (Silva et al., 2004, Salvagnini et al., 2006, Baby et al., 2007, Iha et al., 2008). Um dos processos mais usados para obteno de extratos a turboextrao, no qual muitas estruturas celulares so rompidas, permitindo contato direto do lquido com os metablitos secundrios, entre outras substncias, possibilitando esgotamento mais rpido, necessitando apenas de 15 minutos. Um inconveniente deste processo o calor devido ao movimento de rotao das facas, podendo levar degradao de substncias de interesse. Franco & Bueno (1999), compararam os processo de turboextrao (15 minutos) e macerao (42 dias) na extrao de prpolis, e concluram que, para as finalidades propostas, o primeiro foi mais eficiente, alm de ser um processo mais gil que os demais. Segundo monografia da International Federation of Societies of Cosmetic Chemists, o teste de estabilidade considerado um procedimento preditivo, baseado em dados obtidos de produtos armazenados em condies que visam acelerar alteraes passveis de ocorrer nas condies de mercado. A estabilidade relativa, pois varia com o tempo e em funo de fatores que aceleram ou retardam alteraes nos parmetros do produto. O estudo da estabilidade contribui para orientar o desenvolvimento da formulao e do material de acondicionamento; fornecer subsdios para aperfeioamento das formulaes; estimar o prazo de validade e fornecer informaes para sua confirmao; auxiliar no monitoramento da estabilidade organolptica, fsicoqumica e microbiolgica, produzindo informaes sobre a confiabilidade e segurana dos produtos. O teste de estabilidade preliminar, realizado em um curto intervalo de tempo, pode ser considerado um teste orientativo no desenvolvimento de produtos. Consiste em submeter a amostra a condies extremas de temperatura, objetivando acelerar processos de instabilidade, para auxiliar na triagem de formulaes e no ser estimativo de vida til do produto. A centrifugao, o estresse trmico e os ciclos de congelamento e descongelamento so ensaios realizados em condies extremas de armazenamento que podem fornecer indicaes de instabilidade da formulao, mostrando a necessidade de alterao na sua composio. Provavelmente, o escurecimento de xampus manipulados com extrato de polpa se Acrocomia aculeata (lacq) Lood. ex Mart, submetido radiao luminosa, por exposio luz natural, apresentou mudana de colorao devido oxidao de seus componentes, uma vez que a adio de conservante antioxidante impediu a alterao da colorao.

O aspecto de um fitocosmtico, em relao homogeneidade e colorao do produto, importante do ponto de vista comercial, uma vez que pode influenciar a compra, por parte do consumidor, que no se sente atrado pela aparncia do produto. A modificao do odor pode ter ocorrido, provavelmente, por contaminao microbiana, devido ao uso inadequado do produto, como aplicao com a ponta dos dedos, ao invs do uso de esptula; entretanto, nenhuma alterao visual foi notada nos produtos. O valor de pH dos produtos que foram usados para os ensaios que esto sendo apresentados neste trabalho, est apresentado na Figura 1. Como pode ser verificado, os valores no sofreram alterao maior que 10%, o que representa a manuteno de valores entre 5,5 e 6,5, compatveis com o pH cutneo. Valores baixos de pH podem estar relacionados ao aparecimento de irritao drmica cumulativa (Leonardi, 2002), e ser devido degradao de qualquer componente do fitocosmtico. A densidade de sistemas emulsionados e no emulsionados no tm apresentado variao significativa. Os valores medidos durante os ensaios de estabilidade diferem entre si, nos produtos dos projetos realizados e em execuo no nosso laboratrio, em valores inferiores a 10%, razo pela qual est sendo adotado que variao de valores maior que 20% pode significar instabilidade. Foi possvel observar, a partir das Figuras 2 e 3, que a inoculao de microrganismos (amostras 4 a 6, como descrito na Figura 1) pouco alterou a densidade dos cremes. Da mesma forma, durante os 15 dias em que se realizou o teste de estabilidade, a variao entre os valores de densidade entre os cremes e entre as condies a que estavam expostos foi pequena. Foi possvel observar na Figura 3 um ligeiro aumento do valor da densidade em relao outra condio de estresse, isso se deve, provavelmente, a uma maior perda de gua, fazendo com que a densidade aumentasse; entretanto, a alterao de densidade das amostras no foi suficiente para determinar se esta propriedade promoveu instabilidade nas preparaes ensaiadas. A variao da viscosidade influenciada por dois diferentes valores de pH (6 e 7), em xampus espessados com diferentes concentraes (entre 2,80 e 3,20%) de cloreto de sdio foi avaliada por Speroto et al. (2007). A viscosidade foi determinada em viscosmetro coaxial, utilizando xampus manipulados com trs diferentes concentraes de tensoativo detergente: 15, 25 e 30%. Os resultados mostrados na Tabela 1 indicaram que o pH foi determinante para aumento da viscosidade de xampus; entretanto, a concentrao de tensoativos e do agente espessante cloreto de sdio, tambm influenciaram no valor da viscosidade de xampus (Corra et al., 1997; Isaac et al., 1998b; Speroto et al., 2007) O ensaio para a determinao da espalhabilidade foi executado com 15 voluntrios, sendo efetuadas quatro medies por pessoa, quando foram aplicados, no lado interno do antebrao, 4mg de cada amostra de creme fotoprotetor manipulado com diferentes emolientes, espalhados por um perodo de 10 minutos sobre a pele.

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Foram observadas condies ambientais propcias, tais como temperatura de 23 C e umidade relativa do ar de 60%. Os resultados possibilitaram obter o perfil de espalhabilidade dos emolientes presentes na formulao. Foram realizados testes com sete diferentes emolientes e as medidas das regies, onde os produtos foram aplicados para a avaliao da espalhabilidade, esto apresentadas na Tabela 2. As caractersticas de espalhamento sobre a pele de uma emulso fotoprotetora so importantes, tanto do ponto de vista sensorial como de eficcia. Uma emulso fotoprotetora deve propiciar a sensao correta e esperada pelo consumidor, alm de ter espalhamento adequado para garantir o Fator de Proteo Solar (FPS) nominal (Francisco et al., 2001). Usando o conceito de cascata de emolientes, possvel a obteno de emulses com caractersticas sensoriais otimizadas, em relao espalhabilidade (Pereira et al., 2001, Silva et al., 2004; Isaac et al., 2005). Nos ltimos anos, a inovao tecnolgica tem possibilitado o desenvolvimento de novos mtodos de anlise, com destaque para os mtodos calorimtricos, de elevada sensibilidade, capazes de fornecer informaes a cerca da energia envolvida em muitos processos, aos quais est associada a liberao e/ou absoro de energia calorfica. Os mtodos calorimtricos juntamente com tcnicas analticas que permitem medir alteraes das propriedades qumicas e/ou fsicas de uma amostra, em funo da temperatura, constituem o que se denomina Anlise Trmica. A anlise trmica possibilita uma ampla faixa de aplicao para medidas de propriedades fsicas, estudos de reaes qumicas, avaliao da estabilidade trmica, determinao da composio de materiais e desenvolvimento de metodologia analtica. Faria et al. (2002) estudaram a estabilidade trmica de leos e gorduras vegetais por trs tcnicas analticas: termogravimtrica, termogravimtrica derivada e anlise trmica diferencial, concluindo que as tcnicas foram adequadas a esse fim. Os autores usaram um mdulo simultneo DSC-TGA da TA-Instruments, modelo SDT 2960, numa faixa de temperatura de 30 a 650 C, com razo de aquecimento de 10 C min-1 e atmosfera dinmica de nitrognio com vazo de 100ml. min-1 e cadinho de alumina com massa de 10 a 20mg. Foi observado um patamar de estabilidade trmica dos leos entre 180 e 321 C e o processo de decomposio trmica ocorreu em uma nica etapa, sendo finalizado entre 433 e 478 C. A estabilidade trmica dos leos foi determinada atravs da faixa de temperatura na qual a massa permaneceu inalterada. ATabela 6 mostra a temperatura referente estabilidade e a temperatura final de decomposio dos produtos. Os autores afirmaram que os leos analisados apresentaram a seguinte ordem crescente de estabilidade: babau, murici, guariroba, araticum e buriti, fator determinante no controle de qualidade de leos e gorduras durante o processamento, estocagem e utilizao industrial (Faria et al., 2002)

Solis-Fuentes & Duran-De-Bazua (2003) caracterizaram misturas eutticas de diferentes composies de leos e gorduras vegetais por anlise trmica (DSC) e concluram que as gorduras podem suportar misturas com diferentes composies equivalentes manteiga de cacau e serem aplicadas em produtos cosmticos, entre outros. Guillen et al. (2006) avaliaram a contribuio da anlise trmica na avaliao do DMAE e seus sais correspondentes e do cido ascrbico e derivados. Os autores encontraram resultados que no conferem com a especificao do laudo, salientando a importncia do mtodo no controle de qualidade de substncias. A espectrometria de fluorescncia um mtodo confivel, rpido, preciso, de baixo custo, que permite a determinao de princpios ativos, tornando-se um mtodo bastante atrativo em ensaios de controle de qualidade e de estudos de estabilidade.A metodologia de anlise pelo espectrofluormetro bastante simples, na qual se aplica uma certa energia em uma faixa de comprimento de onda e, por meio de filtros de emisso, pode ser observado um determinado valor de concentrao. Em funo da curva analtica possvel determinar a concentrao da amostra e avaliar a estabilidade da preparao segundo a concentrao do ativo A fluorescncia causada pela absoro de energia radiante e reemisso de parte dela, sob a forma de luz; ou seja, radiao visvel. A luz emitida tem, sempre, comprimento de onda maior do que o da absorvida (Bassett et al., 1981). Na prtica, isso ocorre quando uma soluo iluminada por um feixe luminoso, de comprimento de onda especfico, absorvendo luz e emitindo em um comprimento de onda diferente. Pytel et al. (2005), estudaram a atividade antiradicalar, em trs reas da pele de antebrao de voluntrias: uma aps incidncia de radiao ultravioleta A e B, outra da pele irradiada e tratada com creme contendo complexo antioxidante e a outra regio da pele no irradiada e no tratada, atravs da quantificao de perxidos, pela aplicao de sonda fluorescente em adesivo especfico, que retirou uma amostra do estrato crneo das reas estudadas. As unidades fluorimtricas obtidas foram usadas para calcular a proteo anti-radicalar. Os resultados obtidos por Pytel et al. (2005) mostraram que a pele irradiada e tratada com creme contendo o complexo antioxidante testado apresentou concentrao 116% menor de perxidos cutneos, enquanto a pele tratada com creme sem o complexo antioxidante apresentou concentrao 49% menor, o que no foi considerado estatisticamente significativo em comparao rea irradiada. No ensaio de granulometria por difrao a laser, a distribuio de tamanho da partcula calculada comparando o ensaio de uma amostra com um modelo tico apropriado. Relkin et al. (2008) estudaram a estabilidade de nanoemulses leo em gua usando diferentes tcnicas e, entre elas, a granulometria, para avaliar a influncia da presena de - tocoferol, como constituinte da fase oleosa,

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na distribuio do tamanho das partculas da emulso. Os autores usaram o equipamento Malvern Mastersizer 2000 Instruments para avaliar a distribuio do tamanho das partculas, aps diluio da nanoemulso em gua destilada (H2O) ou em soluo de dodecilsulfato de sdio (DSS) e agitados lentamente por 30 minutos e verificaram, com os resultados, uma proteo ao -tocoferol. Para a adequao da medida na elaborao das curvas de distribuio granulomtrica de uma amostra, podem ser usados dois princpios de medida: Fraunhofer e Mie. A aproximao de Fraunhofer tem sido usada em instrumentos mais antigos de difrao. Supe que as partculas que esto sendo medidas so opacas e espalham luz em ngulos estreitos. Em conseqncia, somente aplicvel s partculas grandes e dar uma avaliao incorreta da frao da partcula fina. A teoria de Mie mais rigorosa para o clculo de distribuies de tamanho da partcula dos dados de espalhamento de luz. As intensidades de espalhamento podem ser aplicadas a todas as partculas, pequenas ou grandes, transparentes ou opacas. A teoria de Mie permite um espalhamento preliminar da superfcie da partcula, com a intensidade calculada pela diferena de ndice de refrao entre a partcula e o meio de disperso. possvel, tambm, determinar o espalhamento secundrio, causado pela refrao dentro da partcula - esta especialmente importante para partculas abaixo de 50 micra de dimetro, como indicado no padro internacional para medidas de difrao a laser pela ISO13320-1, em 1999 (Kippax, 2007). Os sistemas se apresentam mais estveis quando a amostra dispersa em gua com agente surfactante, apresentar distribuio homognea de tamanho de partcula. Tamanhos caractersticos relativos s propores em que 10, 50 e 90% do material devem ser determinados. Enquanto o d50 representa o tamanho mediano do material, a razo d90/d10 oferece uma indicao da homogeneidade granulomtrica do material. Reologia representa o estudo das propriedades de escoamento e deformao da matria sob a ao de foras, com o objetivo de descrever as relaes entre as tenses e deformaes, atravs das leis constitutivas ou do comportamento de fluxo. A determinao do comportamento reolgico da formulao auxilia na avaliao da natureza fsico-qumica do veculo ou excipiente, de tal forma que torna possvel detectar sinais precoces de instabilidade fsica, possibilitando o controle de qualidade dos constituintes, das formulaes teste e dos produtos finais (Barry, 1993). Diferentes processos fsicos como cremeao ou sedimentao, floculao e coalescncia podem ocorrer em sistemas emulsionados e serem investigados usando diferentes tcnicas reolgicas. Caractersticas sensoriais e desempenho do produto so freqentemente relacionados s suas propriedades reolgicas, principalmente s propriedades de fluxo, que determinam a consistncia, alm de avaliar a fcil espalhabilidade sem escoamento excessivo do produto (Masson, 2005).

Dessa maneira, a caracterizao reolgica completa, seja pelos ensaios rotacionais, complementados pelos ensaios oscilatrios, possibilita determinar a estabilidade do material ou produto, auxiliando na determinao do prazo de validade. Ensaios com gis hidroflicos permitiram determinar o melhor excipiente para veicular pigmento inorgnico para uso como mscara para os clios. Foram realizados ensaios rotativos e oscilatrios que determinaram o limite de escoamento, a deformao e a recuperao do material, o que representa informaes importantes para o desenvolvimento de produtos, uma vez que possibilita inferir que, ao ser aplicada, a mscara no vai apresentar dificuldade para ser retirada da embalagem, vai fluir com facilidade, mas no vai escoar, uma vez que sua recuperao rpida, aps o espalhamento (Gregolin et al., 2008). Neste teste foi utilizada uma faixa de tenso de cisalhamento de 0,01 a 0,5 Pa, por 180 segundos, para avaliar em que tenso de cisalhamento os gis sofreriam deformao. Essa faixa contm valores bastante baixos de tenso, pois esperado que um gel flua facilmente, sem haver necessidade de uma fora elevada. Pela anlise do grfico, foi possvel notar que o gel se deformou dentro dessa faixa, necessitando realmente de uma tenso pequena para isso. No apresentou picos antes de fluir completamente (Figura 5), demonstrando baixa resistncia deformao e apresentando linearidade entre 0,1 e 1 Pa, ou seja, proporcionalidade entre a tenso aplicada e a resposta obtida (Ribeiro et al., 2004). No ensaio de fluncia e relaxao, foi possvel observar que o gel apresentou boa recuperao da parte elstica (Figura 6). A sua caracterstica viscoelstica permite sua utilizao como base cosmtica para os diferentes tipos de produtos (Gregolin et al., 2008). Os dados do presente estudo permitem concluir que os ensaios propostos garantem a estabilidade fsico-qumica e a qualidade de fitocosmticos. Assim, o conjunto de ensaios aqui mostrados constitui um protocolo para avaliar a estabilidade fsico-qumica de fitocosmticos, como proposto na Tabela 5 e os ensaios preparados conforme descrito em Material e Mtodos. Agradecimentos Os autores agradecem pelos financiamentos recebidos do CNPq (Braslia), FINEP (Braslia), FUNDUNESP (So Paulo), FAPESP (So Paulo) e PADCFCF (Araraquara), pelo apoio aos projetos desenvolvidos nos Laboratrios de Cosmetologia e de Controle Biolgico de Qualidade da Faculdade de Cincias Farmacuticas da UNESP.

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ABSTRACT: Guide to physical and chemical stability of phytocosmetics The growing demand for stable, safe and effective cosmetics has required increasingly complex studies by the scientific community and the use of more efficient techniques to determine the stability of these products. The use of active principles from the Brazilian flora has led to the development of numerous products, in the most varied pharmaceutical forms, making it, even more difficult to standardize experimental protocols to certify the stability of cosmetic preparations. While in Brazil there is no one protocol that standardizes the tests that should be carried out to determine product stability, several studies have been conducted in academic laboratories to determine the stability of specific raw materials. The rheological properties of topical use products have to be taken into account in their manufacture, storage and application. The determination of the rheological behavior of a formulation helps in evaluating the physicochemical nature of the vehicle, allowing early signs of physical instability to be detected and thus enabling quality control of the constituents, test formulations and final products. Thermal analysis has also been used to assist in the study of cosmetic stability and differential scanning calorimetry to guide the development of new products. Other tools, such as fluorimetry and laser granulometry can be used to help the study and development of both emulsified and non-emulsified systems. The aim of the present study is to develop a protocol for the investigation of the physical and chemical stability of phytocosmetics - systems containing active compounds extracted from the Brazilian biodiversity. Keywords: Brazilian biodiversity; physical and chemical stability; phytocosmetic. REFERNCIAS Archondo AEDL. Sistematizao do desenvolvimento de produtos dermatolgicos contendo extrato de Centella asitica L. (Urban). [Tese] So Paulo: Faculdade de Cincias Farmacuticas, USP; 2003. Baby AR, Migliato KF, Maciel COM, Zague V, Pinto CASO, Salgado HRN, Kaneko TM, Velasco MVR. Accelerated chemical stability data of O/W fluid emulsions containing the extract of Trichilia catigua Adr. Juss (and) Ptychopetalum olacoides Bentham. Braz J Pharm Sci 2007; 43(3):405-12. Barry BW. Dermatological formulations. New York: Marcel Dekker, 1993.

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