MAESTRÍA: MEDICINA PREVENTIVA

CONTROL DE ENFERMEDADES

BRUCELOSIS:
EPIDEMIOLOGÍA, SALUD PÚBLICA
NUEVAS TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS

ALFREDO J. SÁNCHEZ-VILLALOBOS
Profesor titular- FCV LUZ
saucow33@cantv.net
0416 2682253

MARZO, 2009
BRUCE DESCRIBE LA
ENFERMEDAD EN EL HUMANO
EN 1884, EN MALTA.

ZAMMIT AISLÓ B. melitensis DE ¿PORQUÉ

LECHE DE CABRAS ABORTADAS
EN 1897.
VAMOS A
BANG AISLÓ B. abortus DE UNA
DISCUTIR
VACA ESE MISMO AÑO. SOBRE
WRIGHT Y SMITH PROPONEN EL UNA
TEST DE SEROAGLUTINACIÓN
(1897).
ENFERMEDAD
PREHISTÓRICA?
BUCK EN 1930, REPORTÓ
RESULTADOS MUY
PROMISORIOS CON UNA
VACUNA DENOMINADA
BACTERIUM ABORTUS STRAIN
19.
GOAT MILKING STREET MALTASE, 1810
UN PRODUCTOR ÉLITE DEL MUNICIPIO MIRANDA PLANTEA SU
INCONFORMDAD RESPECTO A LOS RESULTADOS DE UNA PRUEBA
DIAGNÓSTICA PARA BRUCELOSIS QUE SEÑALA 4,12% DE
POSITIVIDAD EN SU REBAÑO. INFIERE QUE UN NUEVO ANÁLISIS
SÓLO IDENTIFICA 4 VACAS POSITIVAS Y NO 35 COMO SE LE
IMPUTAN.

LOS ANTECEDENTES REFIEREN POSITIVIDAD DEL 1% ANUAL A LA

PRUEBA OFICIAL E ÍNDICES REPRODUCTIVOS ACEPTABLES. LAS
PÉRDIDAS POR ABORTO NO SUPERAN EL 5% ANUAL.
ESPECIE HOSPEDADORES

CABALLOS, BÚFALOS,
abortus (8) BOVINOS AN. SILVESTRES

suis (5) PORCINOS

melitensis (3) CAPRINOS / OVINOS

canis (1) CANINOS

ovis (1) OVINOS ?

neotomae (1) Rata del desierto

maris (2) Mamíferos marinos

 ABORTOS

ORQUITIS INFERTILIDAD
EPIDIDIMITIS

SIGNOS CLÍNICOS

CRÍAS DÉBILES
LESIONES ARTICULARES

RETENCIÓN DE M. FETALES

GRAN IMPACTO PRODUCTIVO Y ECONÓMICO

 REPERCUSIÓN
SOBRE LA SALUD
PÚBLICA
DISMINUCIÓN EN LA
DISMINUCIÓN EN LA
PRODUCCIÓN DE
PRODUCCIÓN DE
CARNE
LECHE

INCREMENTO DE
GASTOS PARA EL PÉRDIDAS POR DISMINUCIÓN EN EL
CONTROL DE LA BRUCELOSIS NÚMERO DE
ENFERMEDAD NACIMIENTOS

66 MILLONES € / AÑO

DISMINUCIÓN EN EL
PÉRDIDAS POR EL
INVENTARIO DE
VALOR GENÉTICO
VIENTRES
PÉRDIDA DE LOS
MERCADOS
INTERNACIONALES
 RESERVORIO
SALVAJE
LIEBRE, RATA, JABALÍ

CONTACTO DIRECTO
DE PIEL Y MUCOSAS CON SECRECIONES
DE ABORTOS U OTRAS

RESERVORIO VÍA DIGESTIVA

DOMESTICO VERDURAS, AGUA
VACA, CABRA, CERDA, OVEJA,
BUFALA

CONTACTO INDIRECTO HOMBRE

CONTAMINACIÓN DEL AMBIENTE

VÍA INHALATORIA
POLVO, AEROSOLES

LECHE Y DERIVADOS INGESTIÓN

 CONSUMO ALIMENTOS
MANEJO ANIMALES
MANEJO LABORATORIO

TRANSFUSIÓN
MÉDULA

Ig G

SRE
Ig M INMUNIDAD
NUTRICIÓN

ABSORCIÓN
LINFOCITOS T : CITOQUINAS : MACRÓFAGOS INTESTINAL
 NEUROBRUCELOSIS

ESCALOFRIOS

CEFALEAS
OSTEOARTICULARES

CARDIOVASCULARES
HIPOREXIA
ASTRALGIAS

HEMATOLÓGICAS

DIAFORESIS FIEBRE
MIALGIAS

GENITOURINARIAS
 MÉTODOS DIAGNÓSTICOS

DIRECTOS:
A- AISLAMIENTOS: CULTIVOS BACTERIOLÓGICOS
CULTIVOS CELULARES

B- DETECCIÓN DE ANTÍGENOS: INMUNOHISTOQUÍMICA

INMUNOFLUORESCENCIA
ELISA DE CAPTURA
OTROS

C- DETECCIÓN DE MATERIAL GENÓMICO: PCR

INDIRECTOS:
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ESPECÍFICOS
PRUEBAS USADAS COMO TAMIZ

ANTÍGENO BUFERADO EN PLACA

ROSA DE BENGALA (CARDTEST) @

RAP AUTOMATIZADA

PRUEBA RÁPIDA EN PLACA

PRUEBAS CONFIRMATORIAS FUENTE: OIE, 2006

LENTA EN TUBO

2 MERCAPTO ETANOL

FIJACIÓN DE COMPLEMENTO ?
ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA) @
FLUORESCENCIA POLARIZADA
 REGLAMENTO PARA EL CONTROL Y ERRADICACIÓN DE
BRUCELOSIS (SEPTIEMBRE 2003)

EL DIAGNÓSTICO OFICIAL SE BASA EN LA DEMOSTRACIÓN DE

ANTICUERPOS MEDIANTE LA PRUEBA DE CARD TEST (ROSA DE
BENGALA) Y POSTERIOR CONFIRMACIÓN MEDIANTE OTROS ANÁLISIS.

DEBEN INCLUIRSE TODAS LAS HEMBRAS MAYORES DE 20 MESES DE

EDAD Y MACHOS REPRODUCTORES DESDE LOS SEIS MESES.

EL DIAGNÓSTICO DEBERÁ EJECUTARSE EN UNA UNIDAD DE TIEMPO

 BRUCELOSIS

ELISA-C / FPA
ENFERMO SANO

CARDTEST
+ 1 1 2

- 7 387 394

8 388 396

Sn = 12,5% VP+ = 50,0%

J DE YOUDEN = 0,12
Es = 99,7% VP- = 98,2%

PREV. Ap = 0,51% PREV. Ve = 2,02%

BRUCELOSIS
FLUORESCENCIA POLARIZADA
 FLUORESCENCIA POLARIZADA
FUNDAMENTO

MUESTRA NEGATIVA

LUZ POLARIZADA LUZ DESPOLARIZADA

CONJUGADO OPS ANTICUERPO BRUCELLA INMUNOCOMPLEJO

 FLUORESCENCIA POLARIZADA
FUNDAMENTO

MUESTRA POSITIVA

DESPOLARIZACIÓN
LUZ POLARIZADA INCOMPLETA

CONJUGADO OPS ANTICUERPO BRUCELLA INMUNOCOMPLEJO

EL DIAGNÓSTICO PROVIENE DE INTERPRETACIÓN DE
LOS DATOS DEL LABORATORIO Y DEL ANÁLISIS
EPIDEMIOLÓGICO DE LOS ASPECTOS QUE
ENVUELVEN LA PROBLEMÁTICA.

EN ESTA ENFERMEDAD ES DE VITAL IMPORTANCIA EL CONOCIMIENTO

EPIDEMIOLÓGICO DE LA MISMA POR PARTE DEL MÉDICO VETERINARIO
ASESOR Y DEL LABORATORIO QUE PROCESA LAS MUESTRAS. EL
VETERINARIO ASESOR DEBE CONOCER LOS PUNTOS CRÍTICOS DE LA
CADENA EPIDEMIOLÓGICA PARA PLANTEAR UNA ESTRATEGIA DESDE
DONDE ATACAR PARA PODER INTERRUMPIR EL CONTAGIO DE LOS ANIMALES
EN LAS FUENTES DE INFECCIÓN.
ES OBLIGATORIO E IMPERIOSO QUE AMBOS ENTIENDAN Y CONOZCAN LA
UTILIDAD Y LIMITACIONES DE CADA ENSAYO (CT, BPA, PLT, 2 ME, ELISA I
FPA, ELISA DE COMPETENCIA,) A LOS EFECTOS DE INDICAR LA PRUEBA QUE
CORRESPONDA DE ACUERDO A LA SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA PLANTEADA
O LA URGENCIA EN LA OBTENCIÓN DE LOS RESULTADOS.
 FLUORESCENCIA POLARIZADA
PROCEDIMIENTO

LECTURA 1 LECTURA 2

MUESTRA O BLANCO MUESTRA + CONJUGADO

LUZ POLARIZADA
LUZ PARCIALMENTE
LUZ POLARIZADA LUZ DESPOLARIZADA
POLARIZADA

CONJUGADO OPS ANTICUERPO BRUCELLA INMUNOCOMPLEJO

 COMPONENTES DEL KIT PARA FPA
LABORATORIO DE MORFOFISIOLOGÍA PVU
SENTRY 100: EQUIPO PORTÁTIL PARA FPA
 BRUCELOSIS

FLUORESCENCIA POLARIZADA
VALIDACIÓN Y PUESTA EN PRÁCTICA

FPA ELISA-C
 COMPARACIÓN FDA - ELISA-C

J DE YOUDEN = 0,986

POSITIVOS

NEGATIVOS

FPA ELISA-C
 VENTAJAS COMPARATIVAS
F P A vs. ELISA-C

RÁPIDO
La prueba puede completarse en 5 minutos y
produce resultados cuali cuantitativos. No
requiere pasos de lavados o tiempos
prolongados de incubación.
FÁCIL Y EFICAZ
La prueba puede ser realizada a campo o en
el laboratorio y requiere de pocos reactivos e
insumos.

PRECISO
La sensibilidad y especificidad son
equivalentes o superiores a ELISA CONFIABLE
competitivo y Fijación de Complemento. El La técnica está recomendada por la OIE
test permite distinguir entre animales (Organización Mundial de Sanidad Animal)
vacunados y enfermos. desde el año 2004. En el 2008, es
incorporada como prueba de referencia en el
diagnóstico de brucelosis.

**EXCELENTE RELACIÓN COSTO BENEFICIO**

 HACIA DÓNDE DEBEMOS IR:

ES IMPORTANTE AVANZAR EN LA IMPLEMENTACIÓN DE ENSAYOS DE LECTURA

EN EQUIPOS: ELISA, FPA.

EXISTEN VARIAS RAZONES:

1- ESTANDARIZACIÓN DE RESULTADOS.
2- UTILIZACIÓN CONTINUA DE CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS
3- REGISTRO ESCRITO Y ELECTRÓNICOS DE LOS ENSAYOS.
4- EMISIÓN DE REPORTE EPIDEMIOLÓGICOS EN FORMA RÁPIDA.
5- DISMINUCIÓN DE LA CANTIDAD DE PUNTOS CRÍTICOS.
6- DISMINUCIÓN DE REACTIVOS Y SOLUCIONES.
7- DISMINUCIÓN DE ERRORES (PIPETEADAS).
8- ESTABLECIMIENTO DE UMBRALES DIAGNÓSTICOS PROPIOS.
 CONCLUSIONES
LA BRUCELOSIS REPRESENTA AÚN UNA GRAN LIMITANTE AL
DESARROLLO DE NUESTRA GANADERÍA.

FLUORESCENCIA POLARIZADA POSEE UNA CAPACIDAD DIAGNÓSTICA

SIMILAR O SUPERIOR A ELISA-c CON LA VENTAJA DE SER MÁS RÁPIDA,
FÁCIL, CONFIABLE Y DE MEJOR RELACIÓN COSTO BENEFICIO.

ES NECESARIO REALIZAR UN LLAMADO A LA REVISIÓN Y

ACTUALIZACIÓN DEL PROGRAMA OFICIAL DE CONTROL Y
ERRADICACIÓN DE BRUCELOSIS EN NUESTRO PAÍS.

LA UTILIZACIÓN DEL MÉTODO FP ES UNA EXCELENTE ELECCIÓN, YA

DISPONIBLE EN VENEZUELA. SE DEBE TRABAJAR EN ADAPTARLA
PARA UTILIZARLA COMO PRUEBA DE BARRIDO Y DE ESTA FORMA
OPTIMIZAR LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA
BRUCELA.