Marcadores moleculares resumen El mejoramiento tradicional fue por varios factores como, la variabilidad gentica existente entre los

organismos, la eficacia e intensidad de la seleccin aplicada, el tiempo necesario para realizar un ciclo de seleccin y la heredabilidad del carcter que se quera aislar. Los marcadores morfolgicos usados por la taxonoma y tienen la desventaja de que son limitados en nmero (las caractersticas a medir no son infinitas), se deben medir en cierta etapa del crecimiento y pueden estar influenciados por el ambiente. El desarrollo de los marcadores moleculares est ayudando a eliminar tanto los inconvenientes de una seleccin basada en el anlisis exclusivo del fenotipo, como la identificacin de especies y variedades de una forma ms rigurosa y repetitiva. Los Marcadores moleculares permiten conocer la informacin gentica que poseen los organismos y funcionan como sealadores de diferentes regiones del genoma. Los marcadores se usan para el mapeo gentico, como el primer paso para encontrar la posicin e identidad de un gen. Permiten evidenciar variaciones (polimorfismos) en la secuencia del ADN entre dos individuos, modifiquen estas o no su fenotipo . Esto se debe a que los marcadores moleculares sealan tanto regiones codificantes como no-codificantes del genoma. Un marcador gentico es un segmento de ADN con una ubicacin fsica identificable en un cromosoma y cuya herencia se puede rastrear, o sea debe mostrar una variacin experimentalmente detectable entre los individuos de la poblacin, y un modo de herencia predecible segn las leyes de Mendel. Un marcador ideal debe ser: altamente polimrfico o variable dentro y entre especies, de herencia mendeliana no episttica (sin interaccin entre genes), insensible a los efectos ambientales, de rpida identificacin y simple anlisis de posible deteccin en los estadios tempranos del desarrollo.

Tipos de marcadores genticos Marcadores morfolgicos Son caractersticas fenotpicas de fcil identificacin visual. No obstante permanecen como caracteres tiles en la identificacin de materiales dado que representan un conjunto de caracteres que pueden ser evaluados con mtodos sencillos y a bajo costo.

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Isoenzimas Son diferentes formas moleculares de un tipo de enzima, que poseen una actividad cataltica comn, es decir actan sobre el mismo sustrato. Por ejemplo: dehidrogenasas, oxidasas, hidrolasas, isomerasas, transferasas. Importantes en el estudio de poblaciones vegetales para determinar variabilidad y estructura gentica, sistemtica y biologa evolutiva as como en descripcin de germoplasma e identificacin de variedades. Protenas de reserva Se basa en la solubilidad relativa en diferentes solventes: albminas solubles en agua, globulinas en solucin salina, prolaminas en alcohol y glutelinas en cidos o lcalis. El uso de protenas de almacenamiento en estudios de diversidad gentica sistemtica, se basa en el hecho que las protenas de diferentes individuos, poblaciones y especies son homlogas, y que al separarse en un gel producirn bandas similares o diferentes. Debido a que las protenas de reserva carecen de actividad enzimtica, son detectadas por medio de teidos. ADN y marcadores moleculares Un marcador de ADN es simplemente un punto de referencia en un cromosoma, que puede o no corresponder a un gen. Existen diversas tcnicas para detectar variabilidad en la secuencia de ADN; la PCR, las enzimas de restriccin, la electroforesis, las sondas marcadas y las hibridizaciones Los marcadores moleculares pueden ser clasificados en tres grupos:

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Grupo 1: Marcadores basados en la hibrididacin del ADN Estos tipos de marcadores involucran la deteccin de un segmento especfico (marcador) en el ADN de estudio por hibridacin con un fragmento marcado radiactivamente de secuencia complementaria al marcador (sonda). Esto implica que para estudiar un gen de inters, debe conocer al menos una parte de su secuencia, para poder construir una porcin complementaria (sonda) que permita pescar a ese gen de inters

La tcnica de RFLP (Polimorfismo en el tamao de los fragmentos de restriccin) se basa en la deteccin de fragmentos de ADN; est basada en la digestin del ADN total de un individuo con diferentes enzimas de restriccin; produciendo cantidades equimolares de fragmentos estos son separados por electroforesis en geles de agarosa y transferidos por capilaridad a una membrana de nylon (Southern Blot). Esta membrana es hibridada con una sonda radioactiva. El producto de la hibridacin es visualizado por medio de una autoradiografa de rayos-X. Las secuencias de ADN de minisatlites (VNTR) son secuencias repetidas que se presentan en eucariontes. Ellas se encuentran repetidas en tandem (una detrs de la otra) y dispersas a travs del genoma. Existen dos formas de detectar los VNTR ya sea por hibridacin o por tcnicas de PCR. Grupo 2: Marcadores basados en la amplificacin del ADN En este grupo se utiliza la reaccin de PCR. Esta tcnica se basa en la sntesis enzimtica de millones de copias de un segmento especfico de ADN. Marcadores moleculares como los RAPDs, CAPs y SSR. Los microsatlites o SSR Se trata de regiones constituidas por repeticiones en tndem de unos pocos pares de bases

Grupo 3: Marcadores mixtos Son aquellos que resultan de la combinacin de otros tipos de marcadores moleculares. AFLP consiste en amplificar en forma selectiva fragmentos de ADN cortados con dos enzimas de restriccin distintas y luego se le ligan adaptadores a los extremos de los fragmentos de ADN resultantes de dicha digestin, que permite que se amplifiquen en forma selectiva algunos de esos fragmentos que tienen los primers utilizados, se separan estos fragmentos por electroforesis. La ventaja de este mtodo radica en que se puede analizar, en un solo ensayo, un gran nmero de regiones del genoma. Aplicaciones de los marcadores moleculares A continuacin se describen algunas de estas aplicaciones:

 Identificacin de genotipos Pureza varietal Requieren de una adecuada identificacin de los materiales. Esta identificacin se basa en el uso de descriptores morfolgicos y fisiolgicos. Estos caracteres presentan limitaciones en cuanto al nmero restringido de variantes, influencia ambiental y dependencia del estadio de desarrollo de planta. Para resolverlo, los polimorfismos moleculares de protenas y ADN resultan de utilidad en la determinacin de los criterios DUS (distincin, uniformidad y estabilidad). Uso en bancos de germoplasma Los marcadores moleculares permiten caracterizar las muestras a ser incluidas en las colecciones, estudiar el proceso de domesticacin, establecer relaciones filogenticas. Mapeo gentico Muestra la distribucin linear de un grupo de genes y marcadores en cada uno de los cromosomas que constituyen el genoma de un organismo. El objetivo es encontrar aquellos marcadores moleculares que estn ligados a un gen de inters a este proceso se le conoce como seleccin asistida por marcadores moleculares (MAS). Cuanto ms prximos estn el marcador y el gen en cuestin, ms eficiente ser la seleccin. Mapeo comparativo Es la comparacin de mapas de ligamiento entre diferentes especies, si un grupo de marcadores moleculares mantiene el orden y sus relaciones de ligamiento entre dos especies se dice que muestran sintenia. Distribucin de la variabilidad gentica en poblaciones naturales La conservacin de especies naturales tiene como objetivo seleccionar poblaciones que formarn parte de las reas protegidas, conteniendo gran diversidad gentica asegurando el mayor potencial evolutivo. Los marcadores moleculares permiten establecer la diversidad gentica existente en estas poblaciones. Estimacin del flujo gnico Ocurre mediante el movimiento de polen o de semillas el flujo total vara segn la especie. Los marcadores moleculares permiten cuantificar cada uno de estos procesos.