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7, 1653-1659, 2008 Determinao turbidimtrica do antidepressivo amitriptilina em sistema fia explorando a formao do par inico com lauril sulfato de sdio Gustavo Silveira e Csar Ricardo Teixeira Tarley* Departamento de Cincias Exatas, Universidade Federal de Alfenas, Rua Gabriel Monteiro da Silva, 714, 37130-000 Alfenas MG, Brasil Recebido em 11/8/07; aceito em 4/4/08; publicado na web em 4/9/08

TURBIDIMETRIC DETERMINATION OF ANTIDEPRESSANT AMITRIPTYLINE IN FIA SYSTEM EXPLOITING THE IONPAIR FORMATION WITH SODIUM LAURYL SULPHATE. The present work purposes the development of an analytical method for amitriptyline determination in pharmaceutical formulations using FIA system. It was based on interaction of amitriplyline with sodium lauryl sulphate in acid medium (pH 2.5) resulting in the ion-pair formation turbidimetrically detected at 410 nm. The fitting regression equation for range curve from 2.0 x 10-3 up to 3.2 x 10-3 mol L-1 was found to be analytical signal = -2.7417 + 0.1538 [amitriptyline] (r = 0.99991) with a detection limit of 1.8 x 10-3 mol L-1. The precision assessed as relative standard deviation (n = 10) was found to be 2.40 and 1.94%, for the respective concentration of amitriplyline 2.0 x 10-3 and 3.2 x 10-3 mol L-1 and the sample throughout was 60 h-1. The accuracy of method was successfully assessed in pharmaceutical formulation after comparison with a reference analytical method.

Keywords: flow injection turbidimetry; amitriptyline; sodium lauryl sulphate.

INTRODUO Estudos relacionados ao desenvolvimento de antidepressivos tiveram incio na dcada de 40. A amitriptilina [(dimetilamino-3 propilideno)-5 dibenzo(a, d) ciclo-heptadieno], frmaco sob estudo, um representante da classe dos antidepressivos tricclicos (ADTs) resultantes da modificao do ncleo fenotiaznico. A amitriptilina (AMT) largamente utilizada para o tratamento dos transtornos do humor, especialmente a depresso, e sua estrutura est representada na Figura 1.

Figura 1. Frmula estrutural da amitriptilina

Quando usados em doses excessivas, os ADTs podem ser nocivos sade, levando at a morte do paciente. Mesmo em doses teraputicas, h a ocorrncia de diversos efeitos colaterais, tais como sonolncia e sedao excessiva; confuso mental, secura da boca e viso turva. Sobre o aparelho cardiovascular h o aparecimento de taquicardia e modificaes da presso sangunea quando administrados em superdosagem.1 Por isso, o controle do teor do medicamento administrado importante para o sucesso do tratamento e minimizao dos efeitos colaterais. A farmacopia americana recomenda a quantificao por mtodos cromatogrficos ou titulao com cido perclrico.2 Outros mtodos
*e-mail: ctarleyquim@yahoo.com.br

cromatogrficos tambm so relatados na literatura para a quantificao de AMT em plasma humano.3 Para anlise de frmacos, os mtodos espectrofotomtricos tm sido bastante empregados. Vrias estratgias podem ser utilizadas para essa anlise. Agentes oxidantes, como Fe (III) e metavanadato de amnio, podem ser utilizados como precursores espectrofotomtricos para determinao de diferentes ADTs, embora os mtodos propostos requeiram meios cidos ou longo tempo de reao.4-6 A formao de complexos outra alternativa utilizada para a quantificao de ADTs por espectrofotometria. Podem estar baseados na reao com molculas orgnicas ou com metais de transio. A quantificao de vrios ADTs com cloranil relatada por Ibrahim et al..7 Abdel-Salam e colaboradores propem o uso do reagente 2,3 dicloro 5, 6 diciano - p - benzoquinona (DDQ) para a avaliao do teor de ADTs, dentre eles a AMT, em formulaes farmacuticas.8 Esses dois agentes espectrofotomtricos e ainda iodo foram usados por Bebawy et al. para quantificar fluoxetina e sertralina, dois antidepressivos de nova gerao, mostrando a versatilidade desses agentes.9 Entretanto, as reaes com formao desses complexos ocorrem em meio orgnico, tais como uma mistura de dioxano-etanol, acetonitrila, acetona ou dicloroetano. Alm disso, as reaes so lentas e requerem aquecimento. A quantificao do complexo de transferncia de carga AMT-molibdato de amnio em H2SO4 concentrado descrita por Aman et al..10 O emprego de pares inicos, que consistem na interao eletrosttica entre o frmaco, protonado, e um contra-on, carregado negativamente, podendo ser uma molcula orgnica ou um complexo de metal, a estratgia mais explorada para a anlise de antidepressivos. Trata-se de uma possibilidade de anlise bastante diversificada, permitindo medidas espectrofotomtricas, espectromtricas de absoro atmica ou turbidimtricas. Dentre os metais utilizados, relatado o uso de complexos de Ti(IV), Nb(V), Cr(III) (usado para medidas por absoro atmica) e recentemente, Mo(V).11-15 comum em todos esses mtodos a utilizao de solventes orgnicos, tais como clorofrmio, lcool butlico, acetona e diclorometano, respectivamente, a fim de solubilizar o par inico. Alm disso, os meios reacionais so

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extremos, com elevada concentrao dos reagentes, por exemplo, HCl e SCN- at 10 mol L-1.11 Dentre os exemplos de molculas orgnicas utilizadas na formao de pares inicos, encontra-se o azul de timol, o cromo azurol S, verde de bromocresol, alaranjado de metila e alizarina S.14,16-20 Embora no se utilizem reagentes em elevada concentrao, faz-se necessrio o uso de solventes orgnicos para extrao, condio que implica em maior risco ao operador. Medidas turbidimtricas tm sido exploradas para a quantificao de diversos tipos de frmacos. Como exemplo, Farhadi et al. tratam de mtodos para anlise de derivados N-substitudos de fenotiazinas.21 Canaes e Fatibello-Filho desenvolveram um mtodo em fluxo para determinao de metilbrometo de homatropina em formulaes farmacuticas, empregando AgNO3.22 Calatayud e Pastor tambm empregaram sistema de anlise em fluxo (FIA) com deteco turbidimtrica para quantificao do par inico AMT-prpura de bromocresol.23 Outros sistemas de anlise por injeo em fluxo reportados na literatura requerem extrao do composto formado, geralmente feita utilizando dicloroetano ou clorofrmio.17,20 Por fim, El-Nashar et al. propem a quantificao potenciomtrica de AMT por injeo em fluxo por meio do emprego de eletrodos on seletivos construdos pela formao de filmes de fosfotungstato de AMT e fosfomolibdato de AMT com PVC.24 Com base nos mtodos previamente apresentados, nota-se que a maioria requer aquecimento, longo tempo reacional, necessidade de extrao com solventes orgnicos e meios reacionais desfavorveis. Alm disso, constata-se que sistemas FIA apresentam um potencial a ser explorado para determinao de ADTs, principalmente quanto freqncia analtica e anlise sem extrao com solventes orgnicos. O presente mtodo explora medidas turbidimtricas em sistemas em fluxo baseando-se na formao do par inico AMT-lauril sulfato de sdio, medido em 410 nm. A adoo do surfactante aninico como substituto das molculas orgnicas comumente utilizadas e metais responsveis pela formao de pares inicos se deve as suas caractersticas favorveis, tais como biodegradabilidade e baixa toxicidade, fatores importantes para o desenvolvimento de mtodos analticos menos agressivos ao meio ambiente que se enquadrem, desta forma, dentro do atual conceito de Qumica Verde. Parte experimental Instrumentao As medidas turbidimtricas em sistema FIA foram feitas em um espectrofotmetro de feixe simples Femto, modelo 435 (So PauloBrasil) equipado com uma cela de fluxo de 1,0 cm de caminho tico. A aquisio de dados foi realizada por meio de uma interface PCL 711 com programao em macro Visual Basic (Microsoft Excel). Um espectrofotmetro UV-visvel Spectrum, modelo SP-2000 UV (Xangai-China) utilizando cela de quartzo de 1 cm de caminho tico foi empregado nos estudos de validao do mtodo proposto. Para propulso dos padres, amostras e reagentes foi empregada uma bomba peristltica Ismatec (Zurique-Sua) de oito canais contendo tubos de Tygon de diferentes dimetros e tubos de polietileno 0,8 mm de dimetro interno. Um injetor proporcional de trs peas feito em Teflon foi utilizado para introduo dos padres e amostras no sistema FIA. Reagentes e solues Cloridrato de amitriptilina ( 98%, Sigma-Aldrich, Itlia) e lauril sulfato de sdio (mnimo de 90%, Vetec, Brasil) foram utilizados sem prvia purificao. Os demais reagentes empregados foram de grau

analtico e todas as solues foram preparadas em gua desionizada em sistema de purificao Milli-Q (Millipore, Brasil). A soluo estoque de amitriptilina 1,25 x 10-2 mol L-1 foi preparada pela dissoluo de 100,0 mg do frmaco em gua com posterior transferncia para balo volumtrico de 25,0 mL. As demais solues de amitriptilina foram preparadas por meio de diluies adequadas. O preparo do lauril sulfato de sdio (2,0 x 10-3 mol L-1) tamponado foi realizado pela dissoluo de 320,4 mg de lauril sulfato de sdio e de 375,7 mg de cido tartrico (Isofar, Brasil) em balo volumtrico de 500,0 mL. Antes de aferir o volume do balo volumtrico ajustouse o pH da soluo para 2,5 com NaOH 1,0 mol L-1. Para os estudos que envolveram a validao do mtodo foi empregado clorofrmio como solvente extrator (Tedia, Brasil); soluo de alaranjado de metila (Isofar, Brasil) 0,02% (m/v) preparada pela dissoluo de 20,0 mg do composto em balo volumtrico de 100,0 mL; tampo tartarato 0,1 mol L-1, pH 3,0, obtido aps dissoluo de 3,752 g de cido tartrico em balo de 250,0 mL. Antes da aferio do volume, o pH foi corrigido com NaOH 1,0 mol L-1. Soluo estoque de AMT 1,0 mg mL-1 foi obtida por meio da dissoluo de 100,0 mg do frmaco em pequena quantidade de metanol e posterior aferio do volume com balo volumtrico de 100,0 mL. Sistema de anlise por injeo em fluxo O sistema de anlise por injeo em fluxo por confluncia representado na Figura 2. Alquotas de 600 L (ala de 120 cm) de amitriptilina com concentraes variando de 2,0 x 10-3 a 3,2 x 10-3 mol L-1 foram introduzidas no fluxo carregador (H2O) sob uma vazo de 2,75 mL min-1. No ponto X, a zona dispersa da amostra recebe por confluncia o reagente lauril sulfato de sdio 2,0 x 10-3 mol L-1 (vazo de 2,75 mL min-1 e tamponado em pH 2,5 com tampo tartarato 5,0 x 10-3 mol L-1), promovendo a formao do par inico insolvel. A reao se completa atravs da bobina reacional, B, de 80 cm, com posterior deteco turbidimtrica em 410 nm. Otimizao do sistema de anlise por injeo em fluxo Para otimizar o sistema de anlise por injeo em fluxo foi utilizado um planejamento fatorial fracionrio 25-1 seguido de um planejamento Doehlert. A adoo de planejamento fracionrio em detrimento ao planejamento completo foi efetuada para reduzir o nmero de experimentos pela metade, sem provocar, no entanto, padres de confundimento entre os efeitos principais e aqueles relativos aos efeitos de interao. Os fatores investigados foram volume da ala de amostragem, vazo do carregador, concentrao do lauril sulfato de sdio e do tampo e o

Figura 2. Representao esquemtica da configurao por confluncia do sistema FIA adotado. Concentrao do LSS 2,0 x 10-3 mol L-1, vazo do carregador (H2O) e do LSS de 2,75 mL min-1. A = ala de amostragem (600 L); B = bobina reacional (80 cm); X = ponto de confluncia; D = descarte

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pH do carregador. Na Tabela 1, esto reunidos os fatores com seus respectivos nveis. Cabe salientar que os nveis escolhidos foram definidos a partir de estudos prvios, justificando, por exemplo, a excluso da bobina reacional para os nveis dos fatores estudados. Aps a etapa de triagem dos fatores e de posse da significncia dos fatores no sistema em estudo, empregou-se o planejamento Doehlert a fim de otimizar o mtodo. Todos os experimentos do planejamento fatorial fracionrio foram conduzidos com a concentrao de AMT fixa em 5,0 x 10-3 mol L-1, ao passo que no planejamento Doehlert a concentrao de AMT foi de 2,5 x 10-3 mol L-1. Os dados obtidos foram processados por meio do programa STATISTICA (StatSoft, Tulsa, USA). Tabela 1. Fatores e seus respectivos nveis empregados na construo do planejamento fatorial fracionrio 25-1 Nvel Nvel menor (-) maior (+) Concentrao do Tampo (mol L-1 x 10-3) 5,0 10,0 -1 -3 Concentrao do LSS (mol L x 10 ) 5,0 10,0 Vazo do Carregador (mL min-1) 1,70 2,40 Volume da Ala (L) 50 150 pH do carregador 2,5 5,0 A vazo do LSS foi igual vazo empregada para o carregador (H2O) Fatores Preparo das formulaes farmacuticas e determinao de amitriptilina Foram obtidos comprimidos revestidos de cloridrato de amitriptilina de 4 empresas farmacuticas, denominadas A, B, C e D. De cada amostra, foram pesados 10 comprimidos e pulverizados em almofariz. Uma quantidade adequada do comprimido foi dissolvida em 10 mL de cido sulfrico 0,5 mol L-1, sob agitao (~ 10 min), seguida da filtrao em papel qualitativo. Posteriormente, corrigiu-se o pH dessa soluo com NaOH 1,0 mol L-1 at o valor de 2,5. As quantidades pesadas de comprimido pulverizado foram feitas de modo a se obter 50,0 mL de soluo de amitriptilina 2,4 x 10-3 mol L-1, considerando a dosagem declarada no rtulo do produto.

RESULTADOS E DISCUSSO Medidas turbidimtricas requerem a manipulao rigorosa das solues padro e/ou amostras para obteno de resultados analticos precisos, pois qualquer variao no preparo da suspenso pode acarretar na falta de uniformidade do tamanho das partculas formadas e, conseqentemente, na determinao analtica. Esta dificuldade pronunciada em sistemas em batelada, porm, bastante minimizada em sistemas de anlise por injeo em fluxo.25 O diagrama esquemtico do sistema em fluxo mostrado na Figura 2. A influncia dos fatores qumicos e de fluxo no sistema proposto foi investigada inicialmente a partir de um planejamento fatorial fracionrio 25-1, cuja combinao dos nveis e os resultados experimentais obtidos encontram-se na Tabela 2. Cabe salientar que a matriz geradora utilizada foi I = abcde, ou seja, os sinais da coluna vertical para o fator pH foram obtidos multiplicando os sinais dos demais fatores. Para avaliar a significncia das estimativas de contraste dos fatores, primeiramente foi calculada a estimativa conjunta da varincia (sp2), com 16 graus de liberdade de acordo com a Equao 1 (1)

onde, n o nmero de repeties em cada ensaio e s2 a varincia obtida em cada ensaio. A partir da Equao 1, obteve-se a estimativa conjunta da varincia de 5,82 x 10-4. Fazendo uso da Equao 2 possvel calcular a varincia experimental.

(2) onde n (neste caso 16) o nmero de respostas com sinais positivos e negativos. Assim, a varincia experimental obtida foi de 1,45 x 10-4. O erro experimental, tambm conhecido como erro padro da estimativa, foi calculado extraindo a raiz da varincia experimental, sendo, portanto 1,20 x 10-2. Empregando a distribuio t de Student, pode-se construir intervalos de confiana para os valores das estimativas e, assim, decidir quais fatores so significativos. Desta

Tabela 2. Combinaes dos fatores e resultados do planejamento fatorial fracionrio 25-1. A matriz geradora empregada foi I = abcde N exp. Conc. Tampo Conc. LSS VC Volume Ala pH 1 + 2 + 3 + 4 + + + 5 + 6 + + + 7 + + + 8 + + + 9 + 10 + + + 11 + + + 12 + + + 13 + + + 14 + + + 15 + + + 16 + + + + + Experimento realizado com concentrao de AMT = 5,0 x 10-3 mol L-1. Sinais analticos Sinais analticos mdios 0,460/0,458 0,459 0,366/0,375 0,371 0,139/0,166 0,153 0,001/0,002 0,002 0,376/0,341 0,359 0,314/0,323 0,319 0,076/0,081 0,079 0,187/0,186 0,187 1,312/1,354 1,333 0,816/0,870 0,843 0,205/0,211 0,208 0,522/0,435 0,479 0,603/0,562 0,583 0,870/0,876 0,873 0,204/0,235 0,220 0,323/0,362 0,343 Varincia 2,00x10-06 4,05x10-05 3,64x10-04 5,00x10-07 6,12x10-04 4,05x10-05 1,25x10-05 5,00x10-07 8,82x10-04 1,46x10-03 1,80x10-05 3,78x10-03 8,41x10-04 1,80x10-05 4,81x10-04 7,60x10-04

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forma, multiplicando o erro padro da estimativa pelo valor de t crtico (2,120) com 95% de confiana e com 16 graus de liberdade, obtm-se o erro padro de 2,55 x 10-2.26 Existe influncia significativa do fator quando este apresenta estimativa maior que erro padro. Portanto, de acordo com a Tabela 3, conclui-se que apenas a concentrao do tampo no significativa no sistema em estudo. Apesar da ausncia de influncia deste fator, optou-se por fixar a concentrao em 5,0 x 10-3 mol L-1 para os posteriores estudos, uma vez que a adoo do tampo rendeu sinais analticos com maior repetibilidade. Tabela 3. Estimativas de contraste para os fatores empregados no planejamento fatorial fracionrio 25-1 Relaes entre as Contraste Estimativas colunas de sinais a=bcde la a + bcde la = 0,0028 b=acde lb b + acde lb = -0,4338 c=abde lc c + abde lc = -0,1108 d=abce ld d + abce ld = 0,3693 e=abcd le e + abcd le = -0,1423 ab=cde lab ab + cde lab = 0,0848 ac=bde lac ac + bde lac = 0,1176 ad=bce lad ad + bce lad = 0,0457 ae=bcd lae ae + bcd lae = 0,0416 bc=ade lbc bc + ade lbc = 0,1074 bd=ace lbd bd + ace lbd = -0,1619 be=acd lbe be + acd lbe = 0,0407 cd=abe lcd cd + abe lcd = -0,1004 ce=abd lce ce + abd lce = 0,0634 de=abc lde de + abc lde = -0,0897 I=abcde lI mdia + (abcde) lI = 0,4253 a = Concentrao do Tampo; b = Concentrao do LSS; c = VC; d = volume da ala e e=pH A concentrao do lauril sulfato de sdio foi o fator mais significativo no sistema estudado, apresentando uma estimativa de contraste de -0,4338. Este valor negativo implica que ao se elevar o nvel deste fator (5,0 para 10,0 x 10-3 mol L-1) h um decrscimo na resposta analtica. Este comportamento sugere que, devido elevada concentrao do surfactante, possivelmente h a formao de micelas capazes de solubilizar o par inico amitriptilina-lauril sulfato de sdio, com a conseqente reduo no sinal analtico.21 O segundo fator mais importante foi o volume da ala de amostragem. Neste caso, a estimativa de contraste foi positiva (0,3693), revelando que incrementos no volume de amostragem promovem aumento no sinal analtico. A estimativa de contraste obtida para o fator pH (-0,1423) coaduna-se com a reao qumica para a formao do par inico, pois em valores baixos de pH a molcula de amitriptilina est protonada (pKa = 9,4), podendo estabelecer uma atrao eletrosttica com o surfactante. Por fim, o fator vazo do carregador apresentou estimativa de contraste negativa (-0,1108) dentro do domnio experimental (1,70 a 2,40 mL min-1), sugerindo o emprego de vazes menores que 2,40mL min-1 na otimizao. O resultado observado deve-se ao efeito do tempo de residncia sobre a formao da suspenso. A menor vazo do carregador resulta num maior tempo para a nucleao, levando ao aumento do sinal analtico. Aps a etapa de triagem dos fatores empregou-se a matriz de Doehlert a fim de otimizar o mtodo. A matriz de Doehlert compreende um planejamento com nmero de experimentos igual a k2+k+pc, em que k o nmero de fatores e pc o nmero de experimentos

no ponto central. Uma caracterstica importante do planejamento Doehlert refere-se ao nmero de nveis empregados para cada fator. Empregando dois fatores, por exemplo, o nmero de nveis 3 e 5, o que permite avaliar com maior nmero de nveis para aqueles fatores considerados mais importantes.27 Alm disso, este tipo de planejamento necessita de um menor nmero de experimentos em relao a outros planejamentos, como o planejamento composto central sendo, assim, mais eficiente. Foram construdas duas matrizes de planejamento Doehlert. A primeira contm os fatores concentrao do lauril sulfato de sdio e volume de amostragem (Tabela 4), uma vez que a interao destes fatores bastante significativa. Na construo da segunda matriz foram empregados os fatores pH e vazo do carregador (Tabela 5). De acordo com a Figura 3A, obtida a partir da matriz de Doehlert (Tabela 4) e mantendo fixa a vazo do carregador em 2,00 mL min-1 e pH 3,0, observa-se um ponto de cela.28 Como constatado, nota-se a presena de um valor timo para a concentrao do lauril sulfato de sdio (2,0 x 10-3 mol L-1), ao passo que elevados sinais analticos podem ser obtidos com volumes de amostragem de 1000 e 600 L. Assim, empregou-se a concentrao de lauril sulfato de sdio de 2,0 x 10-3 mol L-1 e o volume de amostragem de 600 L. Em seguida, com os dados da Tabela 5, obteve-se a superfcie de resposta mostrada na Figura 3B, a qual foi construda sob as condies previamente otimizadas de lauril sulfato de sdio e volume de amostragem. Verificou-se, como esperado, que o sinal analtico aumenta linearmente com a diminuio do pH do carregador. Experimentos com valores de pH abaixo de 2,5 no foram conduzidos para evitar a hidrlise do lauril sulfato de sdio e, portanto, fixou-se o pH em 2,5 para os posteriores estudos.29 Com relao vazo do carregador, nota-se, de acordo com a Figura 3B, que os valores inferior (1,90 mL min-1) e superior (2,75 mL min-1) podem ser empregados, resultando em elevados sinais analticos, desde que o meio seja cido (pH 2,5). Tal como observado na triagem dos Tabela 4. Matriz de Doehlert para as variveis [LSS] e comprimento da ala de amostragem N exp [LSS] (mol L-1 x 10-3) Volume de ala (L) Sinais analticos 1 2,5 800 0,461/0,486 2 5,0 800 0,141/0,128 3 3,7 1000 0,221/0,246 4 0,01 800 0,001/0,001 5 1,2 600 0,903/0,926 6 3,7 600 0,224/0,221 7 1,0 1000 0,945/0,934 Experimentos realizados com concentrao de AMT 2,5 x 10-3 mol L-1, em pH 3,0 e vazo do carregador e LSS = 2,00 mL min-1. Tabela 5. Matriz de Doehlert para as variveis pH e vazo do carregador N exp pH VC (mL min-1) Sinais analticos 1 3,7 2,32 0,867/0,844 2 5,0 2,32 0,770/0,761 3 4,4 2,75 0,952/0,972 4 2,5 2,32 1,027/1,023 5 3,1 1,90 0,949/0,948 6 4,4 1,90 0,849/0,875 7 3,1 2,75 0,939/0,973 A vazo do LSS foi igual vazo empregada para o carregador (H2O). Concentrao de AMT 2,5 x 10-3 mol L-1.

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Figura 4. Efeito do comprimento da bobina sobre o sinal analtico

Estudo de interferentes no mtodo proposto A influncia de concomitantes no sistema de injeo em fluxo foi avaliada por meio da comparao do sinal analtico obtido para uma soluo padro de amitriptilina (785 mg L-1) com aquela contendo concomitantes em potencial em diferentes concentraes. Percentuais de recuperao do sinal analtico variando de 95 a 105% para a concentrao do padro de amitriptilina demonstram a no influncia dos concomitantes, uma vez que o erro tolerado em anlises farmacuticas de 5%.25 Foram empregados como concomitantes excipientes comumente usados em formulaes farmacuticas: lactose, dextrose, glicose, amido e estearato de magnsio. Para os excipientes lactose, dextrose e glicose o teste de interferncia foi conduzido pela solubilizao de amitriptilina com o concomitante em gua. J para amido e estearato de magnsio, o procedimento adotado consistiu da homogeneizao de 20,0 mg de amitriptilina e 100,0 mg do excipiente, seguida pela filtrao a vcuo com 25 mL de gua em funil de vidro sinterizado. A soluo filtrada foi posteriormente introduzida no sistema de anlise em fluxo. De acordo com a Tabela 6, verifica-se que os sacardeos no interferiram na quantificao do frmaco, mesmo em concentraes 60 vezes maiores que do analito. importante ressaltar que os teores destes excipientes nos produtos farmacuticos so inferiores aos testados neste estudo. Com relao ao concomitante amido, constatou-se tambm no haver interferncia no sinal analtico, j que a recuperao foi de 104,7%. Por outro lado, o estearato de magnsio provocou interferncia, rendendo recuperao de 73,8%. A reduo significativa do sinal analtico pode ser devida solubilizao parcial do concomitante durante o procedimento de filtrao permitindo sua reao com a amitriptilina e, conseqentemente, reduzindo a quantidade do analito para reagir com o lauril sulfato de sdio. Apesar desta interferncia, a relao testada analito/ concomitante (1:4 m/m) inferior quelas utilizadas em formulaes Tabela 6. Estudo da relao analito/concomitante no percentual de recuperao do sinal analtico para amitriptilina* Concomitantes Relao analito/ concomitante Recuperao (%) do sinal analtico para amitriptilina 99,3; 99,3; 95,9 99,2; 99,3; 94,7 100,2; 99,5; 97,4

Figura 3. Superfcie de resposta obtida a partir da matriz de Doehlert. (A) superfcie construda com dados da Tabela 4 fixando o pH em 3,0 e a vazo do carregador em 2,00 mL min-1; (B) superfcie construda com dados da Tabela 5 fixando a ala em 600 L e a concentrao de LSS em 2,0 x 10-3 mol L-2

fatores, os experimentos realizados em vazes menores favorecem a formao da suspenso (maior tempo para nucleao). Entretanto, a explicao para os elevados sinais analticos em valores maiores de vazo possivelmente esteja associada com o elevado volume de amostragem (600 L), o qual consideravelmente maior que aqueles empregados na triagem (50 a 150 L). Com o uso de volume de amostragem de 600 L foi atingido um sinal analtico constante (steady state). Assim, o emprego de vazes baixas e elevadas, provoca, respectivamente, apenas alargamento e estreitamento do sinal analtico, ao passo que a altura de sinal praticamente inalterada devido pequena diferena entre as vazes (1,90 at 2,75 mL min-1). Desta forma, optou-se por empregar a vazo de 2,75 mL min-1 a fim de obter maior freqncia analtica. Para finalizar a otimizao do mtodo, avaliou-se o efeito do comprimento da bobina reacional no sistema (50 a 90 cm) (Figura 4). interessante notar que a insero da bobina reacional se tornou fundamental no intuito de melhorar o desempenho do sistema. O sinal analtico aumenta gradualmente at o valor de 80 cm, tornando evidente o efeito da nucleao do precipitado sobre o sinal analtico. O efeito da disperso no sistema s se torna importante aps esse comprimento da bobina reacional. Assim sendo, a melhor relao entre o tempo de residncia na nucleao do precipitado e a disperso obtida com uma bobina reacional de 80 cm, sendo este o comprimento da bobina empregado neste trabalho.

Dextrose 1/1, 1/10, 1/60 Lactose 1/1, 1/10, 1/60 Glicose 1/1, 1/10, 1/60 *Concentrao de amitriptilina 785 mg L-1

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Silveira e Tarley

Quim. Nova

farmacuticas, o que permitir, conforme ser demonstrado, aplicar o mtodo para quantificao de amitriptilina nas referidas amostras. Figuras de mrito e aplicao do mtodo O sistema de anlise por injeo em fluxo com deteco turbidimtrica desenvolvido neste trabalho totalmente dependente da concentrao do LSS pois, como mencionado, o excesso de LSS em relao amitriptilina resulta na formao de micelas, responsveis pela solubilizao do par inico e conseqente reduo do sinal analtico. Como observado na Figura 5, h duas regies lineares da curva analtica, a primeira onde h excesso de LSS e a segunda onde h excesso de amitriptilina. Adotou-se a segunda regio da curva (2,0 x 10-3 a 3,2 x 10-3 mol L-1) devido maior sensibilidade e linearidade [sinal analtico = -2,7417 + 0,1538 [amitriptilina x 10-4 mol L-1] (r = 0,99991)]. O limite de deteco do mtodo (1,8 x 10-3 mol L-1) foi calculado a partir da interseco das duas equaes lineares, similarmente ao procedimento empregado em medidas potenciomtricas.30 A preciso do mtodo foi avaliada em termos de repetibilidade (n =10) para concentraes de 2,0 x 10-3 e 3,2 x 10-3 mol L-1, rendendo os respectivos desvios padro relativos, 2,40 e

1,94%. O mtodo proposto apresentou freqncia analtica de cerca de 60 determinaes por hora. Para avaliar a aplicabilidade do mtodo foram analisadas as quatro amostras A, B, C e D, tratadas conforme descrito na parte experimental e os resultados foram comparados com um mtodo de referncia publicado na literatura (Tabela 7).19 O mtodo de referncia baseado na formao do par inico entre a amitriptilina e alaranjado de metila com posterior extrao e solubilizao do par inico em clorofrmio e determinao no comprimento de onda de 420 nm. De acordo com os resultados e, aplicando o teste t pareado, com um nvel de confiana de 95%, constata-se que o mtodo proposto no apresenta diferena estatstica significativa em relao ao mtodo de referncia, confirmando assim a exatido para as amostras analisadas.31 CONCLUSO Os mtodos analticos comumente empregados para a determinao de amitriptilina so caracterizados pelo uso de solventes orgnicos, cidos concentrados e, principalmente, pelo longo tempo de anlise. Como pde ser visto, o mtodo proposto rene vrias vantagens, incluindo simplicidade, reduzido consumo de amostras/reagentes devido mecanizao da anlise, baixo custo e elevada freqncia analtica, podendo ser aplicado em laboratrios de controle de qualidade. Tambm, deve-se destacar que o mtodo se enquadra no conceito de Qumica Verde, pois empregado o surfactante lauril sulfato de sdio como reagente, ao contrrio dos mtodos usuais que fazem uso de reagentes muitas vezes txicos, seguidos por extrao com solventes orgnicos. De acordo com a reviso da literatura, nota-se que os mtodos j existentes de quantificao de amitriptilina possuem limites de deteco e quantificao bastante baixos,5,11-13,19,23 bem como ampla faixa linear. Embora essas caractersticas analticas no tenham sido obtidas no mtodo proposto, elas no constituem uma limitao, pois os teores do princpio ativo nas formulaes farmacuticas so suficientes para o preparo de amostras com concentraes adequadas leitura e faixa linear, conforme demonstrado pela aplicao satisfatria do mtodo. Finalmente, o mtodo apresentou preciso e exatido satisfatrias permitindo sua aplicao em diferentes formulaes farmacuticas para quantificao de amitriptilina. AGRADECIMENTOS

Figura 5. Fiagrama e curva de calibrao para determinao de amitriptilina. Sinais obtidos em triplicata mediante injeo de padres de amitriptilina (2,0x10-3; 2,4 x10-3; 2,8x10-3; 3,2x10-3 e 3,6x10-3 mol L-1) para segunda regio da curva. Condies experimentais conforme descrito na parte experimental

FAPEMIG, CNPq, CAPES e ao programa PROBIC/CNPq Unifal-MG pela bolsa de iniciao cientfica concedida ao acadmico G. Silveira. Tambm, os autores agradecem empresa farmacutica Medley pelo fornecimento de amostras e aos assessores pelas valiosas sugestes. REFERNCIAS

Tabela 7. Determinao de amitriptilina em amostras de formulaes farmacuticas empregando o mtodo proposto e o mtodo de referncia Cloridrato de Amitriptlina (mg/comprimido) Valor encontrado Valor encontrado Amostras Valor rotulado pelo mtodo pelo mtodo de turbidimtrico FIA referncia (A) 75,0 73,4 4,3 75,9 2,8 (B) 75,0 74,6 2,9 78,9 0,9 (C) 75,0 71,6 1,2 72,6 2,1 (D) 25,0 23,2 0,9 24,7 0,4 n = 3; valor de t calculado = 3,147; valor de t tabelado = 3,182, com 95% de confiana.

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Determinao turbidimtrica do antidepressivo amitriptilina em sistema fia

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