2.1. DEFINICIONES Agentes biolgicos(segn RD 664/97).

Microorganismos, con inclusin de los genticamente modificados, cultivos celulares y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad. Microorganismo (segn RD 664/97). Toda entidad microbiolgica, celular o no, capaz de reproducirse o de transferir material gentico. Cultivo celular (segn RD 664/97). El resultado del crecimiento in vitro de clulas obtenidas de organismos multicelulares. Peligro. Todo aquello que puede producir un dao o un deterioro de la calidad de vida individual o colectiva de las personas. Dao. Es la consecuencia producida por un peligro sobre la calidad de vida individual o colectiva de las personas. Riesgo. Probabilidad de que ante un determinado peligro se produzca un cierto dao, pudiendo por ello cuantificarse. Desinfeccin (segn la OMS). Eliminacin de agentes infecciosos que estn fuera del organismo por medio de la exposicin directa a agentes qumicos o fsicos. Contaminacin(segn la OMS). Presencia de un agente infeccioso en la superficie del organismo; tambin en vestimenta, ropa de cama, juguetes, instrumentos quirrgicos, apsitos u otros objetos inanimados o substancias, incluyendo el agua y los alimentos. Esterilizacin (segn la OMS). Destruccin de todas las formas de vida por calor, radiacin, gas o tratamiento qumico. Limpieza (segn la OMS). Eliminacin, mediante fregado y lavado con agua caliente, jabn o un detergente adecuado, o por el empleo de una aspiradora, de agentes infecciosos y substancias orgnicas de superficies en las cuales stos pueden encontrar condiciones adecuadas para sobrevivir o multiplicarse. 2.2. CLASIFICACIN DE LOS AGENTES BIOLGICOS POR GRUPOS DE RIESGO El RD 664/97 clasifica los agentes biolgicos en cuatro grupos en funcin del riesgo de infeccin:

Agente biolgico del grupo 1. Aqul que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre. Agente biolgico del grupo 2. Aqul que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Agente biolgico del grupo 3. Aqul que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Agenete biolgico del grupo 4. Aqul que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente frente a l profilaxis o tratamiento eficaz. 2.3. NIVELES DE CONTENCIN La Seguridad Biolgica se fundamenta en tres elementos: 1) Las tcnicas de laboratorio, 2) El equipo de seguridad (o barreras primarias) y 3) El diseo de la instalacin (o barreras secundarias).

Tcnicas de laboratorio. El elemento ms importante para contener los riesgos biolgicos es el seguimiento estricto de las prcticas y tcnicas estndar microbiolgicas. Como parte de estas prcticas est el desarrollo o adopcin por parte de cada laboratorio de un manual de operaciones (o Manual de Seguridad Biolgica) en el que se identifiquen los riesgos que pueda sufrir el personal y que especifique los procedimientos que puedan minimizar esos riesgos. Equipo de seguridad (barreras primarias). Se incluyen en este apartado tanto dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad (por ejemplo, las cabinas de seguridad biolgica), como las prendas de proteccin personal (guantes, mascarillas, batas, calzado...). Diseo y construccin de la instalacin (barreras secundarias). La magnitud de las barreras secundarias depender del tipo de agente infeccioso que se manipule en el laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la separacin de las zonas donde tiene acceso el pblico, la disponibilidad de sistemas de descontaminacin (autoclaves), el filtrado del aire de salida al exterior, el flujo de aire direccional, etc.

El trmino "contencin" se emplea para describir los mtodos que hacen seguro el manejo de materiales infecciosos en el laboratorio. El propsito de la contencin es reducir al mnimo la exposicin del personal de los laboratorios, otras personas y el entorno a agentes potencialmente peligrosos. Se suelen describir cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica, que consisten en la combinacin, en menor o mayor grado, de los tres elementos de seguridad biolgica descritos: tcnica microbiolgica, equipo de seguridad y diseo de la instalacin. Cada combinacin est especficamente dirigida al tipo de operaciones que se realizan, las vas de transmisin de los agentes infecciosos y la funcin o actividad del laboratorio. Nivel de contencin 1. Es el nivel de seguridad requerido para los agentes biolgicos del grupo 1, es decir, los que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los laboratorios de prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean cepas no patgenas (E. coli K12, Saccharomyces cerevisiae, etc.). Ejemplos tpicos son todos los microorganismos que se utilizan en la industria de la alimentacin para la elaboracin de quesos, cerveza, embutidos, etc. Nivel de contencin 2. EEs el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que, perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologa infecciosa humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal especializado (tcnicos de laboratorio, especialistas en Microbiologa) y son los que con ms frecuencia se estudian en el Laboratorio de Microbiologa Clnica: estafilococos, Salmonella, etc. Nivel de contencin 3. Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo 3, microorganismos que cursan con patologa grave, de difcil y largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte. El mayor y ms frecuente peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por ello, las principales medidas a tomar en este caso son la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas de seguridad. En los Laboratorios de Microbiologa Clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo de microorganismos son M. tuberculosis, Brucella, Coxiella burneti, etc. Slo pueden ser procesados por personal cualificado y en una zona con la infraestructura apropiada para el Nivel de Contencin 3, es decir, con aire acondicionado independiente, sin recirculacin de aire, con gradiente de presin, cabinas de bioseguridad, etc.

Nivel de contencin 4. Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente especialmente patgeno e infectocontagioso, extico o no, que produce alta mortalidad y para el que no existe tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel tambin puede utilizarse para trabajar con animales de experimentacin infectados por microorganismos del grupo 4. Ejemplos de este nivel son los arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa y el virus Machupo, virus Ebola, etc. Adems, deben incluirse en este nivel de contencin los microorganismos propios del grupo 3 que adquieran propiedades patgenas que los eleven al grupo 4. Un ejemplo sera Mycobacterium bovis multirresistente que puede causar fallecimiento por fracaso teraputico. En general, la naturaleza infecciosa del material clnico es desconocida y al Laboratorio de Microbiologa suelen remitirse muestras muy diversas. Es responsabilidad del Jefe del Laboratorio el establecimiento de prcticas normalizadas que de forma realista permitan su manipulacin. Excepto en casos excepcionales (por ejemplo: sospecha de fiebres hemorrgicas), el procesamiento inicial de los especmenes clnicos y las pruebas serolgicas pueden realizarse de forma segura en un nivel 2, que es el nivel recomendado para trabajar con patgenos que se transmiten por va sangunea como el virus de la hepatitis B y el VIH, a lo que habra que aadir las precauciones universales que deben ser tomadas con todas las muestras de sangre y otros materiales potencialmente infecciosos. Los laboratorios que realicen trabajos que impliquen la manipulacin de agentes biolgicos de los grupos 2, 3 4 con fines de investigacin, desarrollo, enseanza o diagnstico debern establecer medidas de contencin que se aplicaran segn la naturaleza de las actividades, la evaluacin del riesgo para los trabajadores y las caractersticas del agente biolgico de que se trate.
NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos personales en el lugar que se les indique para tal fin. Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer completamente cerrada. Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesin prctica.

 Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades programadas, antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes. Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando fsicamente cmodo. Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en las reas de laboratorio. Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podran ser fuente de contaminacin (por ejemplo joyas). Recoger el cabello largo. LABORATORIO DE MICROBIOLOGA NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO ________________________________________________________________________________ __________________ 1. 4 Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar slo lo indispensable. No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios, aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn rea del laboratorio. Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al profesor. Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la realizacin del trabajo prctico. Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar ste desatendido. Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad. Reporte cualquier dao de los mismos al profesor. Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para

tal fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de desecho, etc. No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las etiquetas de los mismos y estar seguro de cmo emplearlo. No devolver sustancias a sus envases originales. Emplear la propipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido pipetear con la boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la contaminacin de estos dispositivos de pipeteo. Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo experimentos no autorizados. Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como menor. Reducir al mnimo la formacin de aerosoles durante la realizacin de cualquier trabajo prctico. LABORATORIO DE MICROBIOLOGA NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO ________________________________________________________________________________ __________________ 1. 5 Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la inoculacin accidental y la generacin de aerosoles durante su manipulacin y desecho. Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos Requisitos esenciales para todos los trabajos de laboratorio. Las necesidades esenciales de cualquier trabajo con agentes infecciosos, por muy inocuos que puedan ser, son las siguientes: 1. El laboratorio debe ser fcil de limpiar, con superficies impermeables al agua y resistentes a los agentes qumicos. Deben tener una pila de lavado de manos y una ducha de emergencia, incluyendo tambin un

lavador de ojos en cada laboratorio para los peligros de tipo qumico y de otro tipo que pueden estar presentes. Deben establecerse procedimientos para una limpieza y desinfeccin frecuentes durante el tiempo de trabajo y al finalizar el mismo. 2. Debe restringirse el acceso del personal al rea de trabajo. Cuando existe un riesgo elevado de la presencia de patgenos, se precisan medidas adecuadas, como el control electrnico de acceso. Prohibido comer, beber, fumar, almacenar alimentos No pipetear con la boca Barreras de proteccin (vestimenta protectora, CSB) No salir del laboratorio con bata, guantes, etc. Evitar formacin aerosoles (utilizar mecheros elctricos, usar asas desechables, centrfugas de tapa hermtica, centrifugaciones en CSB) Trasvase de lquidos Eliminacin adecuada de residuos Al final, limpieza de mesa Lavado de manos Comunicar cualquier accidente Tcnica del personal (concentracin en el trabajo para evitar pinchazos, accidentes, aerosoles, etc.) 3.3. Normas y procedimientos estndar Prohibido comer, beber, fumar, almacenar alimentos No pipetear con la boca Barreras de proteccin (vestimenta protectora, CSB) No salir del laboratorio con bata, guantes, etc. Evitar formacin aerosoles (utilizar mecheros elctricos, usar asas

desechables, centrfugas de tapa hermtica, centrifugaciones en CSB) Trasvase de lquidos Eliminacin adecuada de residuos Al final, limpieza de mesa Lavado de manos Comunicar cualquier accidente Tcnica del personal (concentracin en el trabajo para evitar pinchazos, accidentes, aerosoles, etc.) 3.3. Normas y procedimientos estndar