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Cromatografa

La cromatografa funciona con el mismo principio que el de la extraccin, pero en este caso una fase se mantiene fija y otra se mueve a travs de ella. En cromatografa la fase mvil (el disolvente que desciende a travs de la columna) es un lquido o un gas. La fase estacionaria (la que se encuentra fija en el interior) es normalmente un lquido viscoso enlazado qumicamente a las paredes interiores de un tubo capilar o a la superficie de las partculas solidas empaquetadas dentro de la columna. Alternativamente, las mismas partculas solidas pueden ser la fase estacionaria. En cualquier caso, el reparto de solutos entres la fase mvil y la estacionaria da lugar a la separacin. El fluido que entra por la columna se llama eluyente y el fluido que sale por el extremo de la columna se llama eluato. El proceso de paso de un lquido o un gas a travs de una columna cromatogrfica se llama elucin. Las columnas pueden ser empaquetadas o tubulares abiertas. Una columna empaquetada se llena con partculas que son la fase estacionaria, la columna de tubo abierto es un capilar hueco estrecho cuyas paredes interiores estn cubiertas con la fase estacionara.

Tipos de Cromatografa La cromatografa se divide en varias categoras en funcin del mecanismo de interaccin del soluto con la fase estacionaria: Cromatografa de adsorcin Usa una fase estacionaria slida y una fase mvil lquida o gaseosa. El soluto se adsorbe en la superficie de las partculas solidas; cuanto mas fuerte se adsorbe un soluto, ms lentamente atraviesa la columna. Cromatografa de reparto Utiliza una fase estacionaria liquida, en forma de una fina pelcula de alto punto de ebullicin sobre la superficie de un soporte slido, que en cromatografa de gases es, tpicamente la cara interna de una columna de cromatografa de slice. Cromatografa de intercambio inico En este tipo de cromatografa existen aniones como el -SO- o cationes como N(CH) , covalentemente unidos a la fase estacionaria slida, que de ordinario es una resina. Los iones en

disolucin de carga opuesta son atrados a la fase estacionaria por fuerzas electrostticas. La fase mvil es un lquido. Cromatografa de exclusin molecular Es tambin llamada cromatografa de filtracin por gel o de permeacin por gel, separa molculas por su tamao. Las molculas de mayor tamao pasa mas rpido que las de menor tamao. A diferencia de otras formas de cromatografa, no hay una interaccin atractiva entre las fase estacionara y el soluto en el caso ideal de una exclusin molecular. En su lugar la fases mvil lquida o gaseosa pasa a travs del gel poroso los poros son bastantes pequeos para excluir a los solutos grandes. Las molculas pequeas tardan ms tiempo en pasar a travs de la columna por que penetran dentro del gel, y por consiguiente deben atravesar ms volumen antes de abandonar la columna. Cromatografa de afinidad Es la ms selectiva, emplea interacciones especficas entre una clase de molculas de soluto y una segunda molcula que esta unida covalentemente (inmovilizada) en la fase estacionaria. Cromatografa de gases La cromatografa de gases utiliza una fase mvil gaseosa para hacer pasar un lquido voltil o un soluto gaseoso por una fase estacionaria que se encuentra dentro de una columna tubular abierta o sobre un soporte solido. Las columnas tubulares abiertas largas y estrechas tienen poca capacidad, pero permiten excelentes separaciones. Las columnas tubulares abiertas de slice fundida pueden ser de pared recubierta, recubierta de soporte y de capa porosa. Las columnas empaquetadas tienen gran capacidad, pero una resolucin limitada. Las fases estacionarias retienen, sobre todo, los solutos de polaridad semejante, las fases estacionarias pueden ser de carbn poroso, almina y tamices moleculares. El ndice de retencin mide los tiempos de salida o elucin en relacin con los alcanos. La programacin de temperatura o de presin reduce el tiempo de elucin de los componentes fuertemente retenidos. La inyeccin con divisin proporciona separaciones de gran resolucin de disoluciones relativamente concentradas. La inyeccin sin divisin que es necesaria en muestras muy diluidas, precisa que se elimine el disolvente, o que se concentren los analitos mediante una trampa fra al principio de la columna (para conseguir bandas estrechas). La inyeccin en columna es la mejor forma de inyeccin en anlisis cuantitativo y en el caso de compuestos trmicamente inestables. Cromatografa de lquidos (HPLC) La cromatografa de liquidos de alta eficacia (HPLC) se lleva a cabo haciendo pasar, mediante una bomba un disolvente a alta presin a travs de una columna que contienen partculas de fase estacionaria de un dimetro entre 3 y 10m. Si el tamao de partcula es menor, mas eficaz es la columna, pero mayor resistencia ofrece a la corriente.

Lo mas comn es utilizar partculas micro porosas de slice, con una fase liquida enlazada covalentemente, como grupos octadecilo. La fuerza del eluyente es una medida de la capacidad de un disolvente dado para eluir solutos de la columna. En cromatografa de fase normal, la fase estacionaria es polar y se usa un disolvente menos polar. La fuerza del eluyente aumenta a medida que aumenta la polaridad del disolvente. La cromatografa de fase inversa emplea una fase estacionaria no polar y un disolvente polar. La fuerza del eluyente aumenta a medida que disminuye la polaridad del disolvent. Cromatografa en capa fina (TLC) En esta cromatografa la fase estacionaria es una capa delgada de un material depositado sobre un soporte comnmente llamado placa. La fase mvil es un disolvente o mezcla de disolventes, llamada eluyente , que se mueve por la fase estacionaria por capilaridad. Generalmente las placas estn formadas por una capa delgada de slice u otro material con propiedades adsorbentes.

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