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Assurance qualit et performance des milieux de culture : exigences de la norme ISO 11.133-1 et -2 en matire de fabrication et de contrle des milieux de culture et de la verrerie
Objectifs et applications Pratiques et prparation Contrle qualit - Solide Contrle qualit - Solide
Objectifs
MILIEU DE CULTURE: mlange de substances, sous forme liquide, semi-liquide ou solide, qui contient des constituants naturels et/ou synthtiques permettant la croissance des microorganismes ou le maintien de leur viabilit Pralable toutes analyses microbiologique Contrles afinde dmontrer Acceptabilit de chaque lot de milieu Milieu rpond au besoin Milieu donne des rsultats constants Applicable : Milieux commerciaux prt lemploi Milieux prpars partir de formules dshydrates commerciales Milieux prpars partir de ses composants individuels
Pratiques
Documentation fournie par le fabricant
Nom du milieu, de ses composants et supplments, et leurs codes produits numro de lot valeur du pH du milieu avant utilisation conditions de stockage et date dexpiration valuation des performances et organismes de contrles utiliss fiche technique certificat de contrle qualit fiche de scurit, si ncessaire Vrification au laboratoire nom du milieu et numro de lot date de rception date dexpiration conditions et intgrits de lemballage
MODULE 1: Hygine
Pratiques
Conservation
Toujours suivre les recommandations du fabricant ! Gestion FEFO nouvelle vrification de ltanchit date de la premire ouverture (< 6 mois) valuation visuelle (couleur (couleur, prise en masse masse, homognit) Milieux prpars 3 mois 5 2 C 1 mois 18 23 C A labri de la lumire et de la dessication sauf spcifications contraires
Pratiques
Conservation
Toujours suivre les recommandations du fabricant ! Gestion FEFO nouvelle vrification de ltanchit date de la premire ouverture (< 6 mois) valuation visuelle (couleur (couleur, prise en masse masse, homognit) Milieux prpars 3 mois 5 2 C 1 mois 18 23 C A labri de la lumire et de la dessication sauf spcifications contraires
Prparation
Traabilit
Peses de chaque composant date de prparation conditions et date de strilisation pH oprateur Eau Eau distille Dchlore avant distillation Matriau inerte Rsistivit > 300 000 Ohm.cm Pauvre en microorganisme Pese Prcision 2 % Protection contre les inhalations Ajout progressif de leau
MODULE 1: Hygine
Prparation
Dissolution
Agitation nergique intervalle rgulier Avant chauffage (surtout glose) Mesure et ajustement du pH Aprs strilisation Milieu 25 C Correction laide de NaOH ou HCL 1N Sans modifier le volume final du milieu Rpartition Prcision 2 %, si ncessaire Rcipient = 1,2 3 fois le volume du milieu
Prparation
Strilisation
Chaleur humide 121 C, 15 min barme adapt en fonction de la charge ! Surchauffe ! Vrification (sonde externe ou papier ractif) Filtration 0,22 m sous vide ou sous pression Filtre strilis
Contrle qualit
Physique
pH mesur 25 C quantit rpartie et/ou paisseur du milieu couleur clart, prsence de dfaut optique stabilit du gel gel, consistance consistance, humidit Microbiologique Strilit Fertilit partir de souches de test de diffrents types Souches robustes montrant des caractres positifs typiques Souches positives poussant faiblement (plus sensible) Souches non ractives Souches inhibes
MODULE 1: Hygine
Points valuer
Productivit Slectivit Spcificit
PR = N S / N 0
avec D0 = dilution la plus leve prsentant une croissance dau moins 10 colonies sur le milieu de rfrence DS = dilution la plus leve prsentant une croissance comparable sur le milieu test
SF = D0-DS
MODULE 1: Hygine
MODULE 1: Hygine
SF = D0-DS
avec D0 = dilution la plus leve prsentant une croissance dau moins 10 colonies sur le milieu de rfrence DS = dilution la plus leve prsentant une croissance comparable sur le milieu test
MODULE 1: Hygine
MODULE 1: Hygine
Contrle qualit
Anomalies
Pas de solidification de la glose Surchauffage du milieu pendant sa prparation
Faible pH caus par une hydrolyse acide Mauvaise concentration dagar Agar partiellement dissoute Mauvais mlange des composants
MODULE 1: Hygine
Contrle qualit
Anomalies (suite)
Couleur anormale Surchauffage du milieu pendant sa prparation
Mauvaise qualit de leau Mauvaise qualit du milieu dshydrat Mauvais pH Contamination externe
Contrle qualit
Anomalies (fin)
Faible slectivit Surchauffage du milieu pendant sa prparation
Mauvaise qualit du milieu dshydrat Mauvaise composition (vrifier les peses) Mauvaise supplmentation (quantit ou temprature)
... questions ?
MODULE 1: Hygine