Análisis Microbiológico de Pearcings Como Ecosistemas Orales Secundarios

UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DEL ECUADOR
Microbiologa Oral II Dra. Roco Daz Anlisis microbiolgico en piercings como ecosistemas orales secundarios
1. TEMA
Anlisis microbiolgico en piercings como ecosistemas orales secundarios
2. ANTECEDENTES
La microbiologa ligada a la odontologa ha sido muy poco difundida y estudiada por lo que debemos realizar una extensa investigacin acerca de los microorganismos especficos y de los no especficos ya que la cavidad oral tiene la flora bacteriana ms extensa del cuerpo humano. Las diferentes culturas del mundo, a veces desconocidas por las sociedades ms avanzadas, son la cuna de esta prctica, el perforado, como rito o seal de pertenencia a una u otra tribu, o a veces para indicar que una persona es ya madura. Dicha prctica difiere de las actuales, donde un perforado se coloca normalmente por cuestin de esttica o gusto. Con referencia a la salud estas joyas pueden provocar muchas complicaciones orales en especial las de la lengua ya que en estas se proliferan una gran gama de bacterias. Los piercings linguales provocan tambin un excedente salival, si tenemos en cuenta que la saliva es un importante agente regulador del equilibrio bacteriolgico bucal, tanto el exceso como el defecto de ella puede provocar graves problemas en la flora bucal, por ello el exceso salival provocado.
Jazmin Cedeo Cajas Vernica Granda Veloz Jaime Nez Bernal

3. JUSTIFICACIN
Al realizar este proyecto hemos determinado que es importante realizar Investigaciones de la cavidad bucal y de factores que pueden intervenir en est como es el caso de artefactos artificiales presentes ya sean prtesis dentales, aparatos de ortodoncia, ortopedias y piercings (linguales, de frenillos o labiales). Con esto determinar las
complicaciones linguales si son asociadas a infecciones producidas por el uso permanente de piercings y por la microflora existente en la boca y a la posible transmisin de microorganismos del piercing a la mucosa. Adems de las complicaciones relacionadas con la perforacin, tales como fracturas de dientes, gingivitis, sangrado, infecciones, las recesiones gingivales, y sobre todo la alteracin y cambios que puede sufrir la flora normal bacteriana de la lengua como principal afectada por las perforaciones. Esperamos que con los anlisis que se realizaran a cada uno de los piercings podremos concientizarnos acerca de las complicaciones higinicas que pueden presentar estos aparatos extraos en la cavidad oral. Como un aspecto de suma importancia lo que queremos analizar con este proyecto es el reconocimiento de microorganismos presentes tanto en la lengua perforada como en los piercings ya sea metal como de plstico, sus causas de proliferacin, sus resultados y la prevencin de los mismos.

4. OBJETIVOS
4.1. Objetivo General.
Desarrollar el anlisis microbiolgico de los microorganismos existentes en piercings como ecosistemas orales secundarios
4.2. Objetivos especficos.

Recolectar muestras de dos pacientes de sus respectivos piercings. Cultivar y aislar microorganismos existentes en la perforacin de la lengua y adems en los piercings a travs de medios de cultivo especficos. Realizar una comparacin entre los distintos microorganismos que se encontraran en los pacientes a analizar. Identificar los microorganismos de los cultivos a travs del anlisis microscpico, coloracin Gram y pruebas bioqumicas de identificacin. Promover el cuidado de la salud personal a travs de la promocin de este proyecto y la incidencia de los microorganismos en el desarrollo de patologas que pueden producir la utilizacin de piercings.

5. INTRODUCCIN
La cavidad bucal representa un ambiente que tiene caractersticas que favorecen la ubicacin y el crecimiento de una gran variedad de microorganismos. En la cavidad bucal, las reas con diferentes ambientes fisioqumicos y nutricionales, como la mucosa del carrillo, la lengua, las hendiduras gingivales y la superficie de los dientes, favorecen la adherencia y el crecimiento de tipos selectos de microorganismos. Por ejemplo, la espiroqueta treponema microdentium para vivir depende de otros microorganismos y de un ambiente anaerobio como el de las hendiduras de la enca. Las fuentes intrnsecas de nutrientes para los microorganismos de la cavidad bucal son los materiales que se encuentran en torno de los dientes, los exudados, las clulas epiteliales degradadas y los componentes de la saliva, ciertas protenas salivales proporcionan aminocidos que influyen en el crecimiento de Streptococcus mutans y de Streptococcus sanguis; la saliva de los sujetos con caries influye mejor en el crecimiento de los Streptococcus mutans. Adems la comida que ingerimos permanece en la cavidad bucal, sirve como fuente extrnseca de nutrientes para la microflora bucal. Los Stafilococos son miembros de la flora microbiana normal en humanos. Constituyen un gnero de bacterias esfricas, sin movimiento y no esporuladas. Son catalasa-positivo y capaces de crecer y producir cido a partir de la glucosa por va anaerobia, se tien fcilmente en tinciones bsicas comunes y son intensamente grampositivos. Su crecimiento es abundante, y las colonias sobre la superficie de agar son medianamente grandes, redondas, lisas y brillantes. En forma caracterstica, se divide en ms de un plano

y pertenece en conjuntos irregulares que asemejan racimos de uvas. Los Piercing intraorales estn incrementando su popularidad en los ltimos aos, la insercin de objetos de metal en los tejidos intra y peribucal han alcanzado una gran difusin en la poblacin de adolescentes y adultos jvenes. El lugar donde se colocan ms frecuentemente es en la cara dorsal de la lengua. Estos aditamentos causan reacciones adversas a consecuencia de los piercing son numerosas pero la ms observada es el dolor y la inflamacin. El edema, Fibrosas Inflamatoria y Mucoceles, que se origina en los casos de piercing en la lengua es debido a la vascularizacin del rea, la cual lleva a una obstruccin con invaginacin del metal en el cuerpo de la lengua durante la curacin. En otras partes de la boca las complicaciones son asociadas a infecciones producidas por la microflora existente en la boca. Las otras complicaciones vienen dadas por astillamiento o fractura dentaria por el golpeteo del metal contra la superficie de los dientes y trauma gingival.

6. MARCO TERICO
La lengua es un rgano mvil situado en el interior de la boca, impar, medio y simtrico, que desempea importantes funciones como la masticacin, la deglucin, el lenguaje y el sentido del gusto. La musculatura tiene un origen hipobranquial como la epiglotis y es posterior a la formacin de la envoltura lingual. La amgdala palatina tiene el mismo origen tmico que el resto de los elementos del anillo de Waldeyer. La lengua es un msculo potente, tanto que llega a ser el ms poderoso de todo el cuerpo en relacin tamao/fuerza. La lengua tiene forma de cono, presenta un cuerpo, una V lingual una raz y un hueso llamado hioides. El cuerpo o porcin bucal comprende los 2/3 anteriores, la raz o

porcin farngea, el 1/3 posterior, separados ambos por la V lingual o istmo de las fauces. Las partes de la lengua son:
Cara superior: Tambin se llama dorso de la lengua, que presenta la V lingual, abierta hacia delante, formada por las papilas caliciformes. La superficie del dorso de la lengua por delante de la V lingual, est en relacin con el paladar, suele ser lisa y poseer unos surcos congnitos y otros adquiridos que diferencian las lenguas de los individuos. Un tipo de lengua repliegues glosoepiglticos.
Cara inferior: Descansa en el suelo de la boca. En la lnea media se encuentra el frenillo o filete lingual, de forma semilunar, muy resistente que limita los movimientos de la lengua. De no ser por este frenillo, podramos incluso morir tragndonos la lengua, de all su gran importancia. A ambos lados del frenillo de la lengua, en su parte ms anterior, aparecen dos tubrculos perforados en su centro que son los orificios de los conductos de Wharton u orificios de salida de las glndulas salivales submandibulares. Ms posteriores se encuentran los orificios de salida de los conductos deBartolini de las glndulas sublinguales. Las venas raninas se visualizan azuladas en la cara inferior de la lengua, a ambos lados del frenillo.
Bordes linguales: Son libres, redondeados y en relacin con los arcos dentarios e importantes.Tambin cuentan con filtradores de bacterias
Base de la lengua: Es gruesa y ancha y est en relacin de adelante hacia atrs con los msculos milohioideos y genihioideos, con el hueso hioides y con la epiglotis a la que se halla unida por los tres repliegues glosoepiglticos.
Punta lingual: Tambin se le llama vrtice lingual. Sirve para degustar los alimentos mediante la masticacin
La cavidad oral puede ser considerada como un gran ecosistema. Este ecosistema est

formado por una amplia poblacin bacteriana y por el conjunto de los ecosistemas primarios, formados por las distintas zonas que componen la cavidad (superficies dentales, lengua, surco gingival). La mayora de las especies que residen en la cavidad bucal son transitorias; de manera que la cifra especies bacterianas residentes es de unas 20 aproximadamente. La inmensa mayora de las bacterias residentes en la cavidad son compatibles con la salud del hospedador, sin embargo en circunstancias especiales del ambiente oral, bajo determinadas condiciones y comportamientos del husped y debido a los mecanismos de virulencia de los microorganismos el equilibrio establecido entre la microbiota oral y los tejidos se rompe; si esto sucede se habla de disbiosis. Las bacterias estn en la boca en una cantidad tal que no causan dao, forman una comunidad en la que existen ciertas especies pero no otras. Las especies suelen colaborar entre s para su supervivencia, tal es as que a veces se necesita la presencia de ciertas bacterias para que puedan llegar otras. Adems, su presencia evita la colonizacin por otras bacterias u hongos, y previene determinadas infecciones. La microbiota bucal y el sistema inmunolgico estn en equilibrio de modo que la flora no supera unos lmites. Su presencia estimula las defensas, por lo que tienen un efecto beneficioso. No nacemos con esta variedad de microorganismos en nuestra cavidad oral, pues en la placenta no hay grmenes. El primer contacto con ellos es durante el parto, provenientes del canal vaginal materno. La cavidad bucal es considerada como un ecosistema abierto debido a que est en

contacto permanente con el exterior, recibiendo un flujo continuo de especies nuevas, que provienen del medio ambiente o de otros individuos.
DORSO DE LA LENGUA
La lengua interviene en la masticacin, deglucin, lenguaje y sentido del gusto. Contiene papilas filiformes, fungiformes y caliciformes, donde se encuentran los corpsculos gustativos, sobre todo en las dos ltimas. Tambin se localizan en el paladar, faringe, laringe, y pilares del velo del paladar. Generalmente se ven microorganismos anaerobios facultativos (S. salivarius), cocos gram negativos anaerobios estrictos y bacilos gram positivos anaerobios facultativos. En la lengua y partes blandas predomina Streptococcussalivarius. En la saliva, la flora no es muy abundante, pues solo recoge las bacterias de la lengua y partes blandas y muy pocos anaerobios de los dientes y del surco gingival; adems, tiene diversas sustancias antibacterianas, como lisosima y lectoperoxidasas.
MATERIALES ARTIFICIALES

En caso de que se hayan utilizado elementos ajenos a los tejidos del hospedador. Como materiales artificiales estos no estaran considerados como ecosistemas primarios. El piercing de lengua es un ecosistema secundario de la cavidad oral. El piercinges definido como una prctica de modificacin corporal. Con fines estticos que necesita la perforacin de la piel y mucosa, con la ayuda de agujas con el objetivo de colocar un objeto generalmente llamado joya y de naturaleza metlica. Esta fractura constituye una potencial va de acceso para agentes infeccioso, en el momento de la realizacin como en el momento de cicatrizacin. Las infecciones no son las solas complicaciones posibles, los fenmenos alrgicos son frecuentes y bien conocidos as como otras complicaciones de tipo traumatolgico. Las infecciones se producen ya que la piel y la mucosa constituyen la principal barrera y la ms eficaz contra los microorganismos, bacterias, virus etc. Aunque existen mltiples variantes de este piercing tales como la horizontal, orbital o superficial, entre otras, su forma ms comn es en vertical, en el centro de la lengua. El piercing en la lengua puede incluso dificultar el habla y la masticacin, favorecer la aparicin de un molesto tejido cicatrizante o lesionar los nervios de la lengua. Tambin
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pueden producirse traumatismos en los dientes por el choque con la joya.
Muchos son los dentistas que no aconsejan esta prctica por razones obvias de salud:
1. Puede provocar una obstruccin de las vas respiratorias debido a la hinchazn e inhalacin del metal 2. Aparicin de hemorragias por una seccin de las arterias que irrigan la lengua 3. Riesgo de infeccin La lengua, ms que cualquier otra parte del cuerpo, es susceptible al riesgo de infeccin. En su estado natural, la boca contiene numerosas bacterias, lo que favorece la aparicin de infecciones si el piercing no ha sido bien desinfectado antes de su colocacin. Estas infecciones pueden afectar desde las mandbulas a toda la boca. Si adems la persona padece problemas dentales o bucales, colocarse un piercing en la lengua puede ser una mala idea, no slo por el riesgo de infeccin adicional sino porque deber ser retirado cada vez que sea necesario realizar una radiografa.
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En la lengua, puede provocar en cualquier momento dolor e hinchazn si no es totalmente tolerado, a esto se una un aumento de saliva y puede provocar hipersensibilidad o alergia al metal y entumecimiento en la punta. El piercing en la lengua podra ser causante de que tanto el habla como la manera de masticar se dificulten o modifiquen. Puede originar que aparezca un desagradable tejido cicatrizante que daa las terminaciones nerviosas de la lengua y por si fuera poco una posible obstruccin de las vas respiratorias debido a la hinchazn e inhalacin del metal.
PROBLEMAS QUE OCASION LOS PIERCINGS

Los piercing ocasionan numerosos problemas como el dolor y la inflamacin, edema, Fibrosas Inflamatoria y Mucoceles, que se
origina en los casos de piercing en la lengua es debido a la vascularizacin del rea, la cual lleva a una obstruccin con invaginacin del metal en el cuerpo de la lengua durante la curacin. En otras partes de la boca las complicaciones son asociadas a infecciones producidas por la microflora existente en la boca.
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Las otras complicaciones vienen dadas por astillamiento o fractura dentaria por el golpeteo del metal contra la superficie de los dientes y trauma gingival. Esto es generado ya que estos generan un panal de bacterias que crecen en pocas semanas de colocarlos. Los investigadores, encontraron 80 bacterias que tienden a causar graves infecciones bucales. De las 80 bacterias 67 se haban acumulado en los pernos de acero inoxidable. Estudios han arrojado que las perforaciones en la lengua aumentan los riesgos de sufrir infecciones en la boca, que ms tarde se pueden expandir a otras zonas del cuerpo. De esta manera, se han registrado casos de Hepatitis C, abscesos cerebrales (cuando las bacterias u hongos infectan parte del cerebro) y una infeccin cardaca denominada endocarditis (inflamacin provocada en las cmaras y vlvulas cardacas). Los investigadores sealan que varias de las bacterias que se encuentran en los pernos de metal tambin se muestran en las infecciones sistmicas, es decir, en todo el organismo. Las infecciones graves se pueden desarrollar a pocas semanas de la perforacin o pueden aparecer en varios meses. Actualmente, la American Dental Association se opone rotundamente a la colocacin de piercings en la lengua.
BIOPELCULA
Un foco de infeccin podra hallarse en las capas finas de bacterias, conocidas
normalmente como biopelculas (o biofilms), que cubren los piercing y que actan como reserva de grmenes. La biopelcula es un gran ecosistema
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microbiano organizado, conformado por uno o varios microorganismos asociados a una superficie viva o inerte, con caractersticas funcionales y estructuras complejas. Este tipo de conformacin microbiana ocurre cuando las clulas planctnicas se adhieren a una superficie o sustrato. Muchas de estas bacterias normalmente se producen en las biopelculas, una combinacin pegajosa de bacterias, clulas, lpidos, protenas, hilos de azcar molecular y otras sustancias. Los investigadores consideran que las superficies de acero inoxidable son ms propicias a la formacin de biopelculas que los pernos de plstico. Para el cientfico SharukhKhajotia, especialista en biomateriales dentales de la Universidad de Oklahoma, las biopelculas forman una cubierta protectora para las bacterias. Esto significa que las bacterias son difciles de combatir con los antibiticos, revel el especialista. Las biopelculas estn asociadas a la naturaleza crnica de infecciones como las que se presentan en los pulmones de pacientes con fibrosis qustica. Tambin se ha encontrado que ms del 60% de las infecciones bacterianas son causadas por biopelculas. Por este motivo, han sido ampliamente estudiadas y actualmente se las consideran una amenaza clnica potencialmente peligrosas ya que son capaces de crecer en catteres e implementos mdicos y quirrgicos. Una biopartcula bien conocida es la placa dental. Los pendientes de acero inoxidable podran recoger ms bacterias que los de plstico, lo que incrementa potencialmente el riesgo de infeccin y otras complicaciones.
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LA PREVELENCIA DE MICROORGANISMOS SEGN EN MATERIAL DEL PIRSING

Los pendientes de acero inoxidable y titanio en la lengua tiene mas prevalencia que los pendientes de plstico, no solo por las bacterias y el riesgo potencialmente mayor de infecciones locales en el conducto del piercing, sino tambin debido al riesgo de dientes astillados y al deterioro de las encas", apunt la autora. Los dientes astillados y el deterioro de las encas as como la enfermedad de las encas, son algunas de las complicaciones a largo plazo asociadas con los piercings en la lengua, segn una investigacin anterior. Las primeras complicaciones incluyen dolor,
inflamacin, sangrado prolongado y dificultades para tragar. Y lo que es ms, la boca contiene tantas bacterias que el procedimiento de perforacin para el piercing en s mismo podra elevar el riesgo de infeccin, una de las complicaciones ms comunes de perfora r la lengua. Los pendientes de acero inoxidable eran los principales culpables, ya que representaban el mayor recuento de bacterias, seguidos, aunque en un grado mucho menor, de los pendientes de titanio.
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Ambos metales tienen un recuento mucho ms alto de bacterias que los pendientes de plstico.
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7. PARTE EXPERIMENTAL
En el presente proyecto abordaremos el tema de microorganismos y microflora presentes en lengua y piercings de lengua como ecosistemas orales secundarios tomando dos casos con un piercing de plstico y uno de metal en dos pacientes respectivamente.
Toma de muestra
Se tomarla muestradel piercing de cada paciente. 1. Para la toma de muestra del piercing se va a retirar el piercing de la lengua con guantes estriles y sin comprometer el mismo con ninguna otra superficie evitando lo ms posible la contaminacin con microorganismos no pertenecientes a nuestro estudio, a continuacin sembramos directamente en cadamedio de cultivo previamente preparado.
Material necesario para la recogida de las muestras:

Guantes estriles Mechero Cajas Petri con sus respectivos medios de cultivo
Anlisis microbiolgico
Los pendientes se extraern despus de un mes y se tomarn muestras microbiolgicas de los mismos para realizar la respectiva muestra en cada uno de los medios de cultivo utilizados.
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Un medio de cultivoes un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado(es decir, se le aaden organismos) y a continuacin incubadoen condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras. De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Lquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivoy no tienen agar en su formulacin. Slidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos medios inmovilizan a las clulas, permitindoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al microbilogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan ms de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar tambin se utilizan para la determinacin de clulas viables (recuento en placas). Para el anlisis microbiolgico del presente proyecto se van a utilizar diferentes medios de
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cultivo como: 1. Agar Base (Sangre y Chocolate).- La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.La siembra se realizapor inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.
2. Agar Manitol.-Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el
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agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
3. Agar MuellerHinton.- Se recomienda su uso en forma rutinaria para la realizacin del antibiograma en medio slido, debido a una serie de factores que se detallan a continuacin: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos crecen satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.
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4. Agar Mac Conkey.-
El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial
recomendado para el cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de muestras clnicas, de alimentos, agua, productos lcteos y productos farmacuticos. En este medio se aislan y diferencan bacilos entricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa.
El procedimiento para la preparacin, inoculacin e incubacin de los medios de cultivo que se van a utilizar es el siguiente: 1. Pesar los reactivos necesarios para preparar 250 mL de medio. Y ponerlos en el matraz. 2. Con la probeta, medir la cantidad necesaria de agua y aadirla al matraz con el polvo de medio de cultivo. 3. Mezclar los reactivos con el agua en el matraz y utilizar la varilla de agitacin para disolver grumos y lograr una mezcla homognea. 4. Cuando la solucin est homognea, tapar con un pedazo de gasa. 5. Colocar sobre el reverbero y dejar que se caliente siguiendo las indicaciones del fabricante. 6. Vaciar el medio en las cajas de Petri estriles siguiendo la tcnica asptica. Las
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cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del rea de esterilidad. 7. Ya slidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio, grupo, tipo de muestra y fecha de elaboracin. 8. Se realiza la respectiva siembra de muestra y a continuacin se incuba las cajas Petri con su contenido de acuerdo a lo requerido.
Se van a realizar diferentes pruebas microbiolgicas para la determinacin de microorganismos existentes en piercings linguales que se citaremos bibliogrficamente.
GRAM DE GOTA FRESCA METODO DE COLORACION GRAM

Coloracin diferencial utilizada para demostrar propiedades tintoriales de todos los tipos
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de bacterias. Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta tras la decoloracin y aparecen de color azul intenso. Las bacterias Gram negativas no son capaces de retener el cristal violeta tras la decoloracin y s contracolorean de rojo con la safranina.
TECNICA DE TINCION GRAM

Tomar con una asa bacteriolgica una muestra de cada colonia y hacer un frotis sobre el portaobjetos. Fijar el material al portaobjetos de modo que no sea arrastrado durante el proceso de tincin, pasando el portaobjetos 3 o 4 veces por la llama de un mechero de Bunsen o una lmpara de alcohol. Colocar el preparado sobre un soporte de tincin y cubrir la superficie con solucin cristal violeta. Luego de dos minutos, lavar bien con agua. Cubrir el preparado con el yodo de Gram durante un minuto, lavar nuevamente con agua. Sostener el portaobjetos entre el pulgar y el ndice y baar la superficie con unas gotas de decolorante (acetona - alcohol) hasta no arrastrar ms de colorante
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violeta. Esto requiere de dos minutos. Lavar con agua corriente y colocar nuevamente el portaobjeto sobre el soporte. Cubrir la superficie con contracolor (safranina) durante un minuto. Lavar con agua corriente. Colocar el preparado sobre un soporte de tincin en posicin vertical, dejando que escurra el exceso de agua y se seque el extendido. Examinar el preparado al microscopio con objetivo de 100X. Las bacterias Gram positivas se tien de azul oscuro; las bacterias Gram negativas aparecen rojo rosadas. Reportar el nmero, tipo y morfologa de las bacterias encontradas.
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8. ANLISIS DE RESULTADOS
Se realizaron 5 aislamientos de cada muestra en cada medio de cultivo preparado y posteriormente las diferentes pruebas microbiolgicas para la identificacin de los microorganismos aislados cuyos resultados e interpretacin fueron los siguientes:
Paciente 1.- El primer paciente de nuestra investigacin es una mujer de 22 aos que
porta piercing lingual por ms de 6 aos.
Agar MacConkey
En la presente placa no se obtuvo crecimiento por lo que se concluye que el aislamiento en Agar MacConkey fue nulo.
Agar Manitol
De la misma forma que la anterior placa el crecimiento en Agar Manitol es nulo.
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Agar Mueller Hinton
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En Agar Mueller Hinton hubo crecimiento de una colonia: Colonia 1 Color: Blanquecina Dimetro: De 0.3 a 0.5 mm Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Bacilos y Diplobacilos curvados, Streptobacilos en cadenas cortas con movimiento positivo (+)
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Gram: Diplobacilos agrupados en cadenas cortas y curvadas Grampositivos (Presencia de bacilos de coloracin bipolar).
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Interpretacin de Resultados
De acuerdo a la tabla 1 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet teniendo en cuenta la morfologa, respiracin y coloracin Gram citamos los siguientes microorganismos: ANAEROBIOS: Actinomyces, Arachnia, Bifidobacterium Clostridium Eubacterium, Lactobacillus, Propionibacterium
Segn la tabla 68 del Manual de Microbiologa de lvarez y Boquet descartamos CLOSTRIDIUM ya que presenta formacin de esporas y EUBACTERIUM, LACTOBACILLUS Y PROPIONIBACTERIUM por no presentar bacilos ramificados, por lo cual el microorganismo aislado puede pertenecer a las siguientes familias: Actinomyces sp. Arachnia sp. Bifidobacterium sp.
Descartamos a ACTINOMYCES SP debido a que este microorganismo est presente en inflamaciones con pus y la muestra tomada no tena estas caractersticas. Se descarta ARACHNIA SP, ya que este microorganismos necesita un medio enriquecido
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con sal como es el Agar Manitol. Por ello llegamos a la conclusin de que el microorganismo aislado pertenece a la familia de BIFIDOBACTERIUM SP. Basados en el libro de Microbiologa Estomatolgica Martha Negroni Definimos la nica especie de inters odontolgico es el Bifidobacterium Dentium. Su hbito normal es frecuente en boca, se considera protector del organismo y favorecedor de las defensas, aislado de la placa dental, caries y abscesos odontolgicos. Las colonias son blancas cremosas, son anaerobios estrictos su disposicin celular son bacilos y diplobacilos curvados cadenas cortas Grampositivos y movilidad positiva.
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Agar Sangre
En Agar sangre del primer paciente hubo crecimiento de dos colonias.
Colonia 1
Color: Blanca Griscea Dimetro: De 2 a 5 mm Hemlisis: Alfa hemlisis Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Bacilos arracimados con movilidad negativa (-)
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Gram: Bacilos Grampositivos agrupados, curvados, en letras chinas y empalizados (presencia de bacilos gramnegativos).
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Debido a la escasa informacin del microorganismo aislado para su identificacin nos basamos en el libro de Microbiologa Oral de Libana Urea en el cul despus del respectivo anlisis y comparacin de las caractersticas del microorganismo aislado llegamos a la conclusin por la concordancia encontrada, que sta colonia pertenece al gnero Leptotrichia la cual est constituido por una sola especie, Leptotrichia bucalis ya que ste es un bacilo recto o curvado, inmvil, con extremos afilados o redondeados, y que se asocian en parejas, cadenas o empalizadas, los cuales en cultivos jvenes aparecen
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como grampositivos y en cultivos viejos hay presencia de gramnegativa. Leptotrichia bucalis es anaerobio, pero sta se puede adaptar a una atmsfera oxigenada. Leptotrichia Bucalis puede crecer en medios de cultivo que contengan peptonas, extracto de levadura y suero sanguneo lo cual est contenido en agar sangre y el microorganismo aislado creci bien en agar sangre enriquecido con sangre. Por lo descrito anteriormente concluimos con que el microorganismo aislado pertenece a Leptorichia Bucalis.
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Colonia 2
Color: Gris Dimetro: De 1 a 2 mm Hemlisis: Nula Catalasa: Negativa (-) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Cocobacilos con movilidad variable (v)
Gram: Bacilos Grampositivos en letras chinas
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Fijndonos en la tabla 1 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet citamos a los microorganismos con forma bacilar Grampositivos con respiracin aerobia y anaerobia facultativa: Bacillus, Mycobacterium, Nocardia, Streptomyces, Corynebacterium, Erysipelothrix y Listeria. Descartamos Erysipelothrix debido a que es catalasa negativa, por su disposicin celular y capacidad de esporulacin descartamos a Bacillus spp, Mycobacterium spp, Nocardia spp, Streptomyces spp quedndonos con Corynebacterium spp y Listeria spp. Segn la tabla 9 descartamos a Listeria, ya que presenta movilidad positiva y beta hemlisis, por lo cual el microorganismo aislado pertenece a la familia Corynebacterium spp debido a que ste presenta bacilos rectos o ligeramente curvados en empalizada o letras chinas, con hemlisis variable, no esporulados que crecen bien en agar sangre y forman colonias pequeas, de color gris y bordes contnuos. Segn la tabla 11 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet que corresponde a caractersticas diferenciales de las principales especies del gnero corynebacterium concluimos que el microorganismo aislado por presentar hemlisis negativa y catalasa positiva adems de que su hbitat natural es vas respiratorias altas es Corynebacterium Pseudodiphthericum.
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Agar Chocolate
En Agar Chocolate del primer paciente se encontr una colonia.
Colonia 1
Color: Verde con halo rojo Dimetro: De 0.5 a 2.5 cm Catalasa: Negativa (-) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Bacilos sueltos de movilidad variable (v)
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Gram: Bacilos Grampositivos agrupados y en letras chinas
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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet los microorganismos Grampositivos, morfologa bacilar anaerobios pertenecen a las familias: Actynomices, Aracnnia, Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Lactobacillus y Propionibacterium. Basndonos en la tabla 68 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet descartamos Actinomyces spp, Aracnnia spp, Bifidobacterium spp, Eubacterium spp, Lactobacillus spp y Propionibacterium ya que no forman esporas y el microorganismo aislado presento pequeas esporas, por lo tanto el microorganismo aislado pertenece al gnero Clostridium. La tabla 66 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet nos dice las caractersticas
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del gnero clostridium que son bacilos alargados con paredes paralelas, Grampositivos, con formacin de esporas positivas, anaerobios o aerotolerantes y catalasa negativa. Segn la tabla 67 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet Clostridium tetany presenta movilidad variable y esporas y esporas terminales positivas y subterminales variable por lo cual concluimos con que el microorganismo aislado es Clostridium Tetani.
Paciente 2.- El segundo paciente es un hombre de 17 aos con piercing lingual desde
hace 3 aos.
Agar MacConkey
El crecimiento en Agar MacConkey fue nulo.
Agar Manitol
En Agar Manitol el crecimiento de microorganismos no se dio.
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Agar Mueller Hinton
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En Agar Mueller Hinton se encontraron dos colonias:
Colonia 1
Color: Blanquecina Dimetro: 2 a 4 mm Catalasa: Levemente Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Bacilos y Streptobacilos con movilidad positiva (+)
Gram: Bacilos y Streptobacilos Grampositivos en cadenas cortas y curvadas.
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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de gua de Alvarez y. Boquet de acuerdo a su morfologa, respiracin y coloracin Gram tenemos los siguientes microorganismos: ANAEROBIOS FACULTATIVOS Corynebacterium Erysipelotrix Listeria
Tabla 9 Clave Diferencial de Bacilos Grampositivos Aerobios y Anaerobios Facultativos del Manual de Gua de Alvarez y Boquet de acuerdo a la prueba de catalasa tenemos y disposicin de las clulas descartamos a CORYNEBACTERIUM Y LISTERIA. Por lo cual el microorganismo aislado puede pertenecer a la siguiente familia ERYSIPELOTRIX SP. Basados en el libro de Microbiologa oral de Libana Urea Definimos la especie Erysipelotrix Rhusiopathiae. Este microorganismo se lo asla en abrasin o herida punzante de la piel con exposicin a un animal, con mayor frecuencia se asocia con personas que manipulan a animales Es una bacteria Gram positiva con morfologa de bacilar, es anaerobio facultativo. Las colonias son rugosas de 0,1 a 0.2 mm de dimetro y convexas. La morfologa de las clulas se observan como bacilos pequeos, rectos o ligeramente curvados con extremos redondeados. Su agrupacin puede ser en pares y cadenas cortas.
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Colonia 2 Color: Amarilla Dimetro: De 0.1 a 0.3 mm Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Cocos y diplococos agrupados con movilidad positiva (+)
Gram: Cocos y diplococos Gramnegativos agrupados
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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de gua de Alvarez y Boquet de acuerdo a su morfologa, respiracin y coloracin Gram tenemos los siguientes microorganismos: ANAEROBIA Veillonella
Este microorganismo se caracteriza por presentar forma de cocos dispuestos en pares (diplococos), son anaerobios estrictos, Gram negativos, no poseen movilidad, no forman esporas. Las colonias de esta especie miden aproximadamente de 1 a 3 mm de dimetro, de superficie lisa, opacas, de color blanco grisceo. Forman parte de la microbiota normal de cavidad bucal, colon y vagina. Bajo algunas circunstancias se comportan como patgenos oportunistas. Se han podido aislar de saliva y lengua con mayor frecuencia. De acuerdo al libro de Microbiologa Estomatolgica Martha Negroni A nivel odontolgico las especies ms importantes son Veillonella Dispar y Veillonella Atypica. Estos microorganismos se los encuentran en estado de salud en el dorso de la lengua y forma parte de la biopelicula supragingival aislados y coagregados con Actynomyces
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Agar Sangre
En Agar Sangre crecieron dos colonias.
Colonia 1
Color: Verde Amarillenta Dimetro: De 0.5 a 1.5 cm Hemlisis: Beta hemlisis Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-)
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Fresco: Bacilos grandes sueltos con movilidad positiva (+)
Gram: Bacilos Grampositivos empalizados.
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Comenzamos diferenciando este microorganismo con la tabla nmero uno del libro de lvarez E. Boquet diferenciando la coloracin y morfologa adems de la respiracin, as tenemos bacilos Grampositivos con respiracin aerobia y anaerobia facultativa tenemos los siguientes microorganismos: bacillus, mycobacterium, nocardia, streptomyces, corynebacterium, erysipelothrix, listeria. Segn la tabla nmero nueve y diez del libro de lvarez E. Boquet que corresponde a bacilos aerobios y anaerobios facultativos descartamos por su respiracin erysipelothrix, quedando: bacillus, mycobacterium, nocardia, streptomyces, corynebacterium, listeria. Si mismo segn la tabla nmero nueve y diez del libro de lvarez E. Boquet que corresponde a bacilos aerobios y anaerobios facultativos descartamos por su morfologa a
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bacillus, streptomyces y nocardia. Quedando corynebacterium y listeria. De la misma manera segn la tabla nmero nueve y diez del libro de lvarez E. Boquet que corresponde a bacilos aerobios y anaerobios facultativos descartamos por su movilidad y hemolisis a corynebacterium, asi quedando listeria por su morfologa y disposicin de las clulas adems por ser Grampositivos y sobre todo por tener hemolisis beta si con esta descripcin llegamos a identificar a listeria monocytogenes.
Colonia 2
Color: Gris Dimetro: De 0.2 a 0.3 mm Hemlisis: Nula Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Cocos agrupados con movilidad negativa (-)
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Gram: Bacilos y Diplobacilos Grampositivos en letras chinas
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Comenzamos diferenciando este microorganismo con la tabla nmero 1 del Manual de Microbiologa de lvarez y Boquet diferenciando la coloracin y morfologa adems de la respiracin, as tenemos bacilos Grampositivos con respiracin anaerobia tenemos los siguientes microorganismos: actinomices spp, aracnnia spp, bifidobacterium spp, clostridium spp, eubacterium spp, lactobacillus spp, propionibacterium spp. Segn la tabla nmero 68 del Manual de Microbiologia de lvarez y Boquet que corresponde a bacilos Grampositivos anaerobios descartamos Clostridium spp porque no presenta formacin de esporas por lo tanto nos quedamos con los microorganismos actinomyces spp, aracnnia spp, bifidobacterium spp, eubacterium spp, lactobacillus spp, propionibacterium spp. A si mismo segn la tabla nmero 68 del Manual de Microbiologia de lvarez y Boquet que corresponde a bacilos Grampositivos anaerobios descartamos por su morfologa a actinomyces spp, aracnnia spp, bifidobacterium spp. Quedando eubacterium spp, lactobacillus spp, propionibacterium spp. De la misma manera segn la tabla nmero 68 del Manual de Microbiologa de lvarez y Boquet que corresponde a bacilos Grampositivos anaerobios descartamos por su catalasa a propinobacterium spp, asi quedando eubacterium spp, lactobacillus spp. Analizando esta bacteria y segn la tabla nmero 69 del Manual de Microbiologa de lvarez y Boquet que corresponde a caractersticas morfolgicas de bacilos Grampositivos anaerobios no esporulados descartamos lactobacillus por solo presentar basilos aislados o agrupados en parejas o cadenas, as de esta manera quedando eubacterium por presentar bacilos finos en forma de v , cruz, empalizadas, parejas, cadenas, aislados.
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Este gnero est formado por bacilos Grampositivos, a veces mviles, las colonias son de color gris con bordes irregulares. Forman parte de la microbiota normal del tracto intestinal, en la cavidad oral, las de mayor inters son E. alactolyticum, E. saburreum, E. yurii, E. brachy, E. nodatum y E. timidum, quedndonos con Eubacterium saburreum ya que este microorganismo crece en zonas mucosas de la cavidad bucal que no es expuestas a oxgeno.
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Agar Chocolate
En la presente placa se aislaron dos colonias.
Colonia 1
Color: Verde Amarillenta Dimetro: De 1 a 1.5 mm Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Negativa (-) Fresco: Bacilos y cocos agrupados con movilidad positiva (+)
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Gram: Bacilos Grampositivos sueltos, agrupados y en letras chinas
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Segn la tabla 1 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet entre los microorganismos grampositivos de morfologa bacilar tenemos: Aerobios como Bacillus, Mycobacterium, Nocardia, Streptomyces y Anaerobios facultativos como
Corynebacterium, Erysipelothrix y Listeria. De acuerdo a la tabla 9 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet decimos que entre los microorganismos grampositivos de morfologa bacilar catalasa positiva se encuentran: Bacillus spp, Corynebacterium spp, Listeria spp, Nocardia spp y Streptomyces spp. Segn su disposicin celular en empalizada o letras chinas y la capacidad de esporulacin negativa, basandonos en los resultados obtenidos de la colonia aislada el
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microorganismo pertenece a las familias Corynebacterium spp o Listeria spp. Descartamos el gnero Corynebacterium debido a que segn la tabla 10 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet son microorganismos de respiracin anaerobia facultativa con algunas cepas aerobias, movilidad negativa y el microorganismo aislado present movilidad positiva (+). Segn la tabla 9 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet la Listeria monocytogenes presentan bacilos con extremos redondeados en empalizada y a veces dan lugar a cadenas cortas. En Listeria monocytogenes se presentan bacilos pequeos (0,4 a 0,5 micrones de ancho x 0,5 a 1,2 de largo) no ramificado y anaerobio facultativo capaz de proliferar en un amplio rango de temperaturas (1C a 45C) y una elevada concentracin de sal. Es catalasa positiva y no presenta cpsula ni espora. Tiene flagelos pertricos, gracias a los cuales presenta movilidad. Por las caractersticas citadas, debido a la disposicin de los bacilos, a su buen desarrollo en Agar Chocolate y a las caractersticas de las colonias concluimos en que el microorganismo aislado es Listeria monocitogenes.
Colonia 2
Color: Blanca griscea Dimetro: 1 mm Catalasa: Positiva (+) Coagulasa: Positiva (+)
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Fresco: Bacilos sueltos con movilidad negativa (-)
Gram: Bacilos en empalizada.
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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet entre los microorganismos grampositivos de forma bacilar podemos encontrar a los Aerobios: Bacillus, Mycobacterium, Nocardia y Streptomyces; Anaerobios facultativos:
Corynebacterium, Erysipelothrix y Listeria; y Anaerobios: Actinomyces, Araccnia, Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Lactobacillus y propionibacterium. Segn la tabla 9 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet entre los bacilos grampositivos catalasa positiva encontramos a Bacillus spp, Corynebacterium spp, Listeria spp, Nocardia spp y Streptomyces spp. Descartamos Bacillus spp debido a que se presenta en cadenas y su capacidad de esporulacin es positiva, Corynebacterium spp y Listeria spp
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se presentan en empalizada o letras chinas y el microorganismo aislado se present en forma de V o flores y bacilos sueltos, elmicroorganismo aislado no produjo hifas ramificadas por lo cual no pertenece a las familias Streptomyces spp o Nocardia spp. Basndonos en la tabla 68 del Manual de Microbiologa de Alvarez y Boquet decimos que entre los microorganismos grampositivos anaerobios con formacin de esporas negativa encontramos a Actinomyces spp, Aracnnia spp, Bifidobacterium spp, Lactobacillus spp y Propionibacterium spp de los cuales descartamos a las familias Actinomyces, Aracnnia y Bifidobacterium debido a que presentan bacilos ramificados y a las familias Eubacterium y Lactobacillius ya que tienen catalasa negativa y el microorganismo aislado no presento ramificaciones, adems de ser catalasa positiva. El microorganismo grampositivo morfologa bacilar catalasa positiva, formacin de esporas y ramificaciones negativa, que coincide con las caractersticas de la colonia aislada y que crece bien en Agar Chocolate pertenece al gnero Propionibacterium spp. La tabla 44-1 del Libro de Diagnstico Microbiolgico de Bailey y Scott dice que los propionibacterium son bacilos grampositivos pleomorfos similares a los difteroides dispuestos en empalizada, las colonias son pequeas y de color blanco a blanco grisceo. Segn la microbiologa Oral de Liebana Urea las especies del gnero propionibacterium que tienen inters odontolgico so P. acns, P. avidum, y P. propinico de los cuales Propionibacterium propinico son aerotolerantes y produce catalasa positiva y crecen bien en medios selectivos como agar chocolate, por lo tanto el microorganismo aislado es Propionibacterium Propinico.
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9. Conclusiones
Desarrollamos el anlisis microbiolgico de los microorganismos existentes en piercings como ecosistemas orales secundarios Recolectamos muestras de dos pacientes de sus respectivos piercings. Cultivamos y aislamos microorganismos existentes en la perforacin de la lengua y adems en los piercings a travs de medios de cultivo especficos. Realizamos una comparacin entre los distintos microorganismos que se encontraron en los pacientes analizados. Identificamos los microorganismos de los cultivos a travs del anlisis microscpico, coloracin Gram y pruebas bioqumicas de identificacin. Promovimos el cuidado de la salud personal a travs de la promocin de este proyecto y la incidencia de los microorganismos en el desarrollo de patologas que pueden producir la utilizacin de piercings.
10. bibliografa
Manual de Tcnicas en Microbiologa M. V. Alvarez E. Boquet y Boquet y M. I. De Fez. Microbiologa Oral J. Libana Urea. Diagnstico Microbiolgico de Bailey y Scott. Microbiologa Estomatolgica Marta Negroni.
11. webgrafa
www.wikipedi.org
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www.losmicrobios.com www.microral.wikispaces.com
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Análisis Microbiológico de Pearcings Como Ecosistemas Orales Secundarios

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