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Artigo de Reviso

BOMBARDELLI, SYPERRECK & SANCHES

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HORMNIO LIBERADOR DE GONADOTROFINAS EM PEIXES: ASPECTOS BSICOS E SUAS APLICAES

Robie Allan Bombardelli Mirna Adriane Syperreck Eduardo Antnio Sanches BOMBARDELLI1, R.A.; SYPERRECK2, M.A.; SANCHES3, E.A. Hormnio liberador de gonadotronas em peixes: aspectos bsicos e suas aplicaes. Arq. cin. vet. zool. UNIPAR, Umuarama, v. 9, n. 1, p.59-65, 2006 RESUMO: O objetivo deste trabalho revisar alguns aspectos relacionados ao estudo do hormnio liberador de gonadotronas (GnRH) e sua aplicao na manipulao dos processos reprodutivos em peixes. Esse neurohormnio um decapeptdeo presente no hipotlamo e em diferentes regies do crebro, sendo considerado um dos fatores de maior importncia no processo de sntese e liberao das gonadotronas pelas clulas endcrinas da pituitria. O GnRH apresenta variantes moleculares, podendo estar presente nos peixes em duas ou trs formas, as quais, alm de estimular os gonadtrofos da pituitria, podem exercer ao sobre somattrofos e clulas que expressam prolactina e somatolactina. No ltimos anos, diversos estudos tm sido direcionados para o desenvolvimento de metodologias que empregam formas nativas ou sintticas de GnRH, a m de manipular os processos reprodutivos em peixes, com relativo sucesso. Contudo novos estudos devem ser realizados para conhecer melhor a neurobiologia dessas molculas, levando ao desenvolvimento de formas sintticas, anlogas de GnRH (GnRHa) especcas superativas, que apresentem maior atividade biolgica. O desenvolvimento de doses mnimas efetivas e de mecanismos de liberao contnua mais ecientes dever com certeza ser objeto de estudo futuro. PALAVRAS - CHAVE: GnRH. Endocrinologia reprodutiva. Peixes. GONADOTROPIN-RELEASING HORMONE IN FISH: BASIC ASPECTS AND ITS APPLICATIONS BOMBARDELLI1, R.A.; SYPERRECK2, M.A.; SANCHES3, E.A. Gonadotropin-releasing hormone in sh: Basic aspects and its applications. Arq. cin. vet. zool. UNIPAR, Umuarama, v. 9, n. 1, p.59-65, 2006 ABSTRACT: The objective of this work is to review some aspects related to the study of the gonadotropin-releasing hormone (GnRH) and its application in the manipulation of the reproductive processes in sh. This neurohormone is a decapeptide present in hypothalamus and in different regions of the brain, being considered one of the factors of biggest importance in the process of gonadotropin synthesis and release from endocrine pituitary cells. Different GnRH molecular forms had been present in sh in two or three forms, which besides stimulating the pituitary gonadotropins; it can exert some action on somatotropins and cells that express prolactin and somatolactin. In the last years, several studies have been directed to the development of methodologies using native or synthetic forms of GnRH, in order to manipulate the reproductive processes in sh, with relative success. However, new studies must be carried through to get to know the neurobiology of these molecules better, leading to the development of specic and analog forms of super active GnRHa which present greater biological activity. The development of minimum effective doses and more efcient mechanisms of continuous release will be the object of a future study. KEY WORDS: GnRH. Reproductive endocrinology. Fish. HORMONA LIBERADORA DE GONADOTROPINAS EN PECES: ASPECTOS BSICOS Y SUS APLICACIONES BOMBARDELLI1, R.A.; SYPERRECK2, M.A.; SANCHES3, E.A. Hormona liberadora de gonadotropinas en peces: Aspectos bsicos y sus aplicaciones. Arq. cin. vet. zool. UNIPAR, Umuarama, v. 9, n. 1, p.59-65, 2006 RESUMEN: El objetivo de este trabajo es revisar algunos aspectos relacionados con el estudio de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH) y su aplicacin en la manipulacin de los procesos reproductivos en peces. Esta neurohormona es un decapeptido presente en el hipotlamo y en diferentes regiones del cerebro y es considerado como uno de los factores de mayor importancia en el proceso de sntesis y liberacin de las gonadotropinas por las clulas endcrinas de la pituitaria. El GnRH se presenta como variantes moleculares, pudiendo estar presente en los peces en dos o tres formas, las cuales adems de estimular los gonadotropos de la pituitaria, pueden ejercer accin sobre somatotropos y clulas que expresan prolactina y somatolactina. En los ltimos aos, diversos estudios han sido dirigidos para el desarrollo de metodologas que empleen formas nativas o sintticas de GnRH, a n de conducir los procesos reproductivos en peces, con relativo xito. Sin embargo,
1

Professor Assistente do Curso de Engenharia de Pesca UNIOESTE Campus de Toledo. Engenheiro de Pesca, Mestre em Zootecnia rea de Concentrao Produo Animal. Rua da Faculdade, n 645, Jardim La Salle, CEP-85903250, Toledo, PR, Brasil. E-mail: rabombardelli@unioeste.br; rabombardelli@ibest. com.br. 2 Zootecnista. E-mail: masyperreck@bol.com.br. 3 E-mail: eduanches@hotmail.com.

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nuevos estudios deben ser realizados para conocer mejor la neurobiologa de estas molculas, llevando al desarrollo de formas sintticas de GnRH especcas, superactivas que presenten mayor actividad biolgica. Todava, el desarrollo de dosis mnimas efectivas y de mecanismos de liberacin continua ms ecientes, ciertamente ser objeto de estudio futuro. PALABRAS CLAVE: GnRH. Endocrinologa reproductiva. Peces.

Introduo O controle dos processos reprodutivos na aqicultura indispensvel para o sucesso da atividade. Nesse processo, fatores ambientais e ferormnios so percebidos e transduzidos pelo crebro em sinais neuroendcrinos para a regulao da secreo pela pituitria das gonadotronas (GtH I e II), as quais desempenham papel fundamental no desenvolvimento gonadal (PETER & YU, 1997). O principal neurohormnio envolvido nesse processo de transduo de sinais o hormnio liberador de gonadotronas (GnRH), o qual est presente em diversas regies cerebrais e hipotalmicas nos peixes (YAMAMOTO, 2003). O GnRH um decapeptdeo e encontra-se presente nos peixes telesteos podendo existir em duas ou trs formas de variantes moleculares (CAROLSFELD et al., 2000). Essas diferentes formas apresentam diferentes potenciais de estimulao da pituitria para a sntese e liberao de GtH I e II. Nesse sentido, o emprego desses neurohormnios no processo de manipulao hormonal da reproduo pode apresentar algumas vantagens como: a) GnRHa so pequenas molculas aparentemente incapazes de desencadear resposta imune; b) GnRHa so capazes de atuar em altos nveis do eixo hipotlamo pituitria gnadas e; c) GnRHa so sintetizados quimicamente e no causam o risco de transmitir doenas aos reprodutores (ZOHAR & MYLONAS, 2001). Nas ltimas dcadas, diversos estudos tm sido direcionados para o desenvolvimento de metodologias, empregando o GnRH e seus anlogos sintticos superativos, no controle e manipulao da reproduo de peixes de importncia econmica na aqicultura. Nesse sentido, o presente trabalho tem como objetivo revisar os diversos aspectos, tanto de cunho bsico quanto aplicado, relacionados com o hormnio liberador de gonadotronas, em peixes. Reviso de Literatura O hormnio liberador de gonadotronas (GnRH): seu estudo, localizao e atividade O hormnio liberador de gonadotrona um decapeptdeo (HARVEY & CAROLSFELD, 1993; DELLOVADE et al., 1998) bastante conhecido, o qual apresenta a funo de estimular a sntese e liberao de gonadotronas pela pituitria, exercendo, dessa forma, grande importncia na regulao do processo de gametognese (ZOHAR et al., 1995) e maturao gonadal (AMANO et al., 2002). As primeiras evidncias da atividade do GnRH, no hipotlamo de peixes telesteos, foram vericadas em 1971, quando BRETON e colaboradores realizaram a adio de extrato hipotalmico (EH) de carpa (Ciprinus carpio) em culturas in vitro de pituitria de carpa e vericaram o aumento dos nveis de GtH (PETER, 1983). Apesar dos estudos iniciais relacionados com o isolamento de GnRH em mamferos sugerir sua presena

apenas no hipotlamo, estudos subseqentes, por volta de 1972, evidenciaram neurnios de GnRH em outras reas fora do hipotlamo (YAMAMOTO, 2003). Aps essas descobertas, MUNZ et al. (1981) evidenciaram em Platysh (Xiphophorus), neurnios de GnRH em regies extra-hipotalmicas como o nervo terminal, alm do grupo de clulas da regio pr-ptica. Esse fato levou a sugerir a existncia de trs tipos distintos de populaes de clulas de GnRH: grupos do nervo terminal, da regio hipotalmica pr - ptica e do encfalo mdio. Desde ento, vrias descobertas tm demonstrado a presena do GnRH em diversas espcies de vertebrados, apresentando ao menos 14 formas moleculares diferentes (MYLONAS & ZOHAR, 2001; PARHAR et al., 2002), sendo que a diferena molecular encontrada entre as formas apenas de um a trs aminocidos (YAMAMOTO, 2003). Dessa forma, a nomenclatura das diferentes formas segue a inicial do nome da espcie em que foi pela primeira vez identicada (YAMAMOTO, 2003). A estrutura bsica da molcula de GnRH, originalmente identicada em mamferos, pGlu His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly NH2 (PETER & YU, 1997; MYLONAS & ZOHAR, 2001). A estrutura de outras formas de GnRH encontradas em diferentes espcies de vertebrados est apresentada na Figura 1. Apesar de uma determinada forma de GnRH ser evidenciada inicialmente em alguma espcie, isso no impede a sua presena em outras, mesmo que distantes na escala evolutiva (YAMAMOTO, 2003). Em geral, nos peixes telesteos podem existir duas ou trs formas de GnRH. A nica forma constante dentro dos vertebrados, desde os peixes cartilaginosos at os primatas, o cGnRH-II (das aves). Assim, os peixes que apresentarem duas formas, tero na sua segunda forma, o sGnRH (salmo), mGnRH (mamferos) ou ento cfGnRH (catsh) (AMANO et al., 2002) com variantes. Logo, as espcies que apresentarem trs formas de GnRH podero ser relatadas as formas cGnRH-II e sGnRH como constantes e sbGnRH (sea bream) (AMANO et al., 2002) ou mdGnRH (medaka) ou hrGnRH (herring) (CAROLSFELD et al., 2000; OKUBO et al., 2000) como variantes. A presena dessas diferentes formas de GnRH no crebro sugere diferentes distribuies e funes; contudo essa ao siolgica ainda no completamente conhecida (AMANO et al., 2002). Esses autores, a partir da tcnica de hibridao in situ, vericaram a expresso de trs formas de GnRH em Barn ounder e em regies diferentes, sendo estas sGnRH (regio do bulbo olfatrio), cGnRH-II (regio do tegumento do crebro mdio) e sbGnRH (regio da rea pr ptica) (Figura 2). Considerando as evidncias de que as bras nervosas de sbGnRH se estendem at a pituitria e que a forma dominante de GnRH essa glndula o sbGnRH, sugere-se que essa forma de GnRH esteja relacionada diretamente com a liberao de GtH. KOBAYASHI et al. (1994) tambm vericaram maior importncia relativa da

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Mammalian GnRH Guinca pig GnRH Chicken GnRH-I Chicken GnRH-II Rana GnRH Dogsh GnRH Herring GnRH Salmon GnRH Catsh GnRH Medaka GnRH Seabream GnRH Lamprey GnRH-III Lamprey GnRH-I Tunicate GnRH-I Tunicate GnRH-II Figura 1 -

1 pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu pGlu

2 His Tyr His His His His His His His His His His His His His

3 Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Tyr Trp Trp

4 Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser

5 Tyr Tyr Tyr His Tyr His His Tyr His Phe Tyr His Leu Asp Leu

6 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Asp Glu Tyr Cys

7 Leu Val Leu Trp Leu Trp Leu Trp Leu Leu Leu Trp Trp Phe his

8 Arg Arg Gln Tyr Typ Leu Ser Leu Asn Ser Ser Lys Lys Lys Ala

9 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro

10 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2

Seqncia de aminocidos de 15 formas de GnRH conhecidas em vertebrados e urocordatos. Os aminocidos em negrito diferem da forma bsica dos vertebrados (YAMAMOTO, 2003)

regio prptica em fmeas de Goldsh, nos processos relacionados com a liberao de gonadotronas estimulada pelo GnRH. Por outro lado, apesar das bras de sGnRH tambm se estenderem at a pituitria, as formas sGnRH e cGnRH II, parecem atuar como neuromoduladores. Em Gilthead Seabream, as trs formas de GnRH encontradas so sGnRH, cGnRHII e sbGnRH, todas com atividade estimuladora de liberao de GtH. Apesar das trs formas estarem presentes na pituitria dessa espcie, a forma de maior importncia para desencadear o processo de liberao de GtH - II a sbGnRH, mesmo sendo a forma menos ativa, contudo encontrada em maior concentrao na pituitria (ZOHAR et al., 1995). Em machos de Sea bass as mesmas trs formas de GnRH expressas no crebro so encontradas na pituitria, tanto no perodo de diferenciao sexual quanto na primeira maturao (RODRGUEZ et al., 2000).

Seabream, Striped Bass, e African Catsh apesar da presena das trs formas de GnRH, a forma cGnRHII mais ativa na funo de estimular a secreo de GtHII (PETER & YU, 1997). No futuro, estudos bioqumicos e neurobiolgicos dessas molculas podero elucidar a endocrinologia reprodutiva das diversas espcies de peixes, o que poder auxiliar no desenvolvimento de tcnicas de manipulao da maturao gonadal a partir do emprego de hormnios sintticos especcos e de alta ecincia. Hormnio liberador de gonadotronas (GnRH) como estimulador da pituitria na liberao de hormnios Na maioria dos peixes telesteos, a distribuio do GnRH nos gonadotrfos da pituitria se d por inervao direta, o que permite o controle neural das funes da pituitria (REDDING & PATIO, 1993). Contudo, essa ligao uma exceo em alguns peixes em que o sistema porta hipotlamohiposrio est presente (VAN DER KRAAK et al., 1997). Dentre os diversos estimuladores dos gonadtrofos, as diferentes formas de GnRH so consideradas como sendo os mais importantes. O controle do desenvolvimento e maturao gonadal controlado pelo GtH estimulado pelo GnRH cerebral e pituitrio (AMANO et al., 1994). Um dos aspetos mais estudados com relao ao mecanismo de ao do GnRH em peixes est relacionado principalmente com a sntese e liberao de GtHII. Isso, porque, provavelmente, nas fmeas (PETER & YU, 1997) e machos (RODRGUEZ et al., 2000), a ovulao e espermiao, respectivamente, somente ocorram em resposta liberao de GtHII. Peter & Yu (1997) vericaram uma relao inversa entre os nveis de GnRH cerebral (regies bulbo-olfatrios, telencfalo, regio prptica e hipotlamo) e GtHII pituitrio em fmeas prximas do perodo de desova.

Figura 2 -

Desenho esquemtico da localizao da expresso das trs diferentes formas de GnRH em Barn ounder. OB - bulbo olfatrio; MT - tegumento do crebro mdio e POA - regio pr-ptica. Adaptado de AMANO et al. (2002)

Em outras espcies de peixes como Gilthead

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Klausen et al. (2001) vericaram em Carassius auratus que as duas formas de GnRH presentes nesta espcie (sGnRH e cGnRHII) podem estimular a sntese das subunidades GtH, e GtHI e GtHII pela pituitria. Alm disso, as formas sGnRH e cGnRH II tambm estimulam a sntese e liberao de GH pela pituitria. A sincronia entre os picos de GtHII e GH em perodos pr ovulatrios (MELAMED et al., 1998) freqente e regulada por um mecanismo neuroendcrino multifatorial, em que o GnRH um dos fatores inuentes (PETER & YU, 1997). Alm das evidncias de que esse neuropeptdeo regula a sntese e secreo de GH, outros autores tm vericado que as bras de GnRH alcanam as clulas produtoras de somatolactina da pituitria em O. mykyss (PAHAR & IWATA, 1994) e ainda atuam como fator liberador de prolactina em O. mossambicus (WEBER et al., 1997). Stefano et al. (1999) evidenciaram em Pejerrey (Odontesthes bonariesis) stios de ligao de GnRH com ao menos quatro tipos de clulas pituitrias: gonadtrofos, somattrofos e clulas que expressam prolactina e somatolactina, sugerindo que esse neuropeptdeo poderia regular a sntese e/ou a liberao desses hormnios. Segundo Parhar et al. (2002), a habilidade do GnRH dos peixes sseos em estimular essas clulas sugere a existncia de diferentes formas de receptores de GnRH (tipo IA, IB, e III), o que permite a regulao diferente e, em algum grau, das clulas endcrinas da pituitria. Apesar das poucas evidncias da funo siolgica da somatolactina relacionada com a reproduo, essa parece estimular a esteridognese gonadal in vitro em Salmo Coho (Oncorhynchus kisutch) (PLANAS et al., 1992). Okubo et al. (2003) recentemente encontraram uma nova forma de receptor de GnRH em medaka (Oryzias latipes), denominado de GnRH R3, o qual parece exercer funo de mediar a transduo de sinais induzidos pelas formas cGnRH II e sGnRH no crebro. De forma contrria ao GtHII, existem poucos dados a respeito dos efeitos do GnRH sobre o controle da sntese e liberao de GtHI (BRETON et al., 1998). Contudo, o aumento da liberao dessa gonadotrona em resposta ao GnRH tem sido vericado em Oncorhynchus kisutch, durante as fases iniciais da espermatognese e em fmeas vitelognicas de truta arcoris (VAN DER KRAAK et al., 1997). Por outro lado, BRETON et al. (1998) no vericaram em truta arcoris efeito signicativo do GnRH sobre a liberao in vivo de GtHI, apesar de ter sido vericado in vitro em animais imaturos. Esses autores sugeriram que provavelmente exista um fator inibitrio in vivo que ainda no tenha sido evidenciado. O GnRH tambm parece exercer funes no controle do incio da diferenciao sexual. Rodrguez et al. (2000) vericaram que as trs formas de GnRH (sGnRH, cGnRHII, sbGnRH) presentes em European Sea Bass (Dicentrarchus labrax, L.) permaneceram em nveis maiores no incio da diferenciao sexual, em comparao ao perodo de primeira maturao gonadal. Isso leva a sugerir que as trs formas de GnRH esto envolvidas no processo de diferenciao sexual em Sea Bass. Hormnio liberador de gonadotronas (GnRH) e seus mensageiros secundrios: estmulo e inibio Mukhopadhyay et al. (1997) sugerem que uma

cascata de eventos ocorra na pituitria em resposta ao do GnRH. Esses autores vericaram que em Channa punctatus o cGnRH parece estimular a liberao de GtH em duas fases: inicialmente uma liberao aguda dos estoques de GtH envolvendo Ca+2 (VAN DER KRAAK et al., 1997) e Calmodulina quinase II (CaM quinase II), seguida por uma segunda fase de liberao contnua de GtH, envolvendo a sistema adenil ciclase (cAMP) e protena quinase A (PKA). A fase de liberao aguda de GtH ocorre em resposta a um inuxo de Ca+2 do meio extra para intracelular, atravs dos canais de clcio sensveis voltagem (MUKHOPADHYAY et al., 1997). Isso foi vericado por esses autores, quando bloquearam o inuxo de clcio com verapamil e vericaram que a liberao de GtH tambm era bloqueada, sugerindo, dessa forma, a importncia obrigatria desses canais para mediar o efeito do cGnRH na liberao aguda de GtH pelas clulas pituitrias de Channa punctatus. Da mesma forma, o aumento do Ca+2 intracelular o responsvel pela ativao da CaM quinase II e cAMP, para atuarem na primeira e segunda fase de liberao, respectivamente (MUKHOPADHYAY et al., 1997). Segundo Melamed et al. (1998), clulas pituitrias de tilpias expostas ao sGnRH leva ao aumento dos nveis de RNAm GtHII, sendo esse aumento mediado pela ativao de ambas PKA e protena quinase C (PKC). A habilidade do GnRH em estimular o aumento de inositol trifosfato (InsP3) indica que a fosfolipase C (PLC) (VAN DER KRAAK et al., 1997), por mediar sua hidrlise (GRANNER, 1998), pode fazer parte do caminho de transduo do sinal do GnRH. Alm disso, InsP3 conhecido por estimular a liberao de Ca+2 dos estoques intracelulares (VAN DER KRAAK et al., 1997), como o retculo sarcoplasmtico e mitocndrias, promovendo a ativao da PKC e o aumento do clcio inico citoplasmtico (GRANNER, 1998). Segundo Van Der Kraak et al. (1997), outros mensageiros utilizados pelo GnRH para estimular a liberao de GtH so a fosfolipase A2 (PLA2) e o cido araquidnico (AA), especialmente pela mobilizao e metabolismo do AA pela PLA2. Dentre os agentes inibitrios da ao do GnRH, as dopaminas (DA) apresentam maior importncia. Sabe-se que as DA inibem a liberao de GtH, tanto em nvel basal, quanto a liberao estimulada pelo GnRH (PETER & YU, 1997). O mecanismo de inibio parece ser mediado por diversos pontos na cascata de transduo de sinais que regula a liberao de GtH a partir de estmulos de GnRH, sendo as principais aes a inibio da mobilizao do Ca+2 e a inibio da gerao de cAMP (VAN DER KRAAK et al., 1997). Essa inibio regula a magnitude e sensitividade da liberao de GtH-II alm de controlar os nveis de liberao de GtH-II na segunda fase de liberao. Aplicaes do hormnio liberador de gonadotronas (GnRH) no controle e manipulao endcrina da reproduo Atualmente, um grande nmero de espcies de peixes necessitam de algum tipo de tratamento hormonal para controlar ou induzir a reproduo. Apesar de diversas tcnicas de manipulao hormonal serem empregadas atualmente com sucesso, alguns problemas tm sido

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evidenciados como o fato do animal estar em estgio de desenvolvimento gonadal avanado e as mltiplas aplicaes hormonais necessrias para atingir o sucesso na reproduo (MYLONAS & ZOHAR, 2001). O processo de reproduo articial de diversas espcies de peixes apresentam diversos problemas que levam s disfunes do processo reprodutivo, tais como: ausncia de vitelognese e maturao nal dos ovcitos em fmeas e reduzida capacidade de realizar a espermatognese e espermiao dos machos, levando produo de smen de baixa quantidade e qualidade (MYLONAS & ZOHAR, 2001). O desenvolvimento de procedimentos farmacolgicos que viessem a aperfeioar os processos de induo a maturao nal em peixes foram bastante estudados nos ltimos anos. Inicialmente, o estudo das gonadotronas foi bastante intenso, contudo, nas ltimas duas dcadas, diversos pesquisadores focaram o estudo para o uso de formas de GnRH nativas ou sintticas (GnRHa) e seus anlogos hiperativos (ZOHAR et al., 1989; GISSIS et al., 1991; TAN-FERMIN et al., 1997; OLITO et al., 2001; MOON et al., 2003; MARINO et al., 2003). O emprego desses compostos apresentam diversas vantagens com relao ao uso das gonadotronas: os GnRHa so pequenos decapeptdeos aparentemente incapazes de desencadear resposta imune; so capazes de atuar em altos nveis do eixo hipotlamopituitriagnadas, podendo proporcionar uma estimulao mais balanceada dos eventos reprodutivos e possivelmente melhor integrao com outras funes siolgicas, que direta ou indiretamente afetam os processos endcrinos reprodutivos; so sintetizados quimicamente e no causam o risco de transmitir doenas aos reprodutores, perigo este, sempre associado ao uso dos extratos de pituitria (ZOHAR & MYLONAS, 2001). As formas sintticas de GnRHa so desenvolvidas a m de melhorar a sua resistncia na circulao sangunea contra a degradao enzimtica e aumentar o tempo de resistncia na circulao em comparao s formas nativas (MYLONAS & ZOHAR, 2001). Infelizmente a forma mais resistente de GnRHa leva 23 minutos para ser degradada em comparao a cinco minutos na forma nativa sGnRH (GOTHILF & ZOHAR, 1991 apud MYLONAS & ZOHAR, 2001). Esse reduzido tempo de resistncia na corrente sangunea certamente pode justicar as falhas na induo ovulao quando protocolos que utilizam apenas uma nica aplicao hormonal, o que possivelmente no induz ao aumento dos nveis de GtHII (TAN-FERMIN et al., 1997). Alm disso, a maturao nal dos ovcitos no alcanada imediatamente aps a aplicao de GnRH, pois necessrio que altos nveis de GnRHa sejam mantidos nesse perodo para garantir a liberao adequada de GtH, sendo esse perodo dependente da espcie e do estgio de desenvolvimento gonadal (MYLONAS & ZOHAR, 2001), apresentando melhores respostas dentro da estao reprodutiva (TANFERMIN et al., 1997). Nesse sentido, diversos experimentos tm focado o emprego de mltiplas aplicaes hormonais. Slater et al. (1995) empregaram duas aplicaes na forma injetvel e com intervalos de dois dias entre aplicaes em Sockeye Salmon (Oncorhynchus nerka) e vericaram efeito positivo

quanto reduo do tempo necessrio para os animais atingirem a ovulao e a espermiao, sendo essa reduo de tempo de 21 para 11 dias e de 24 para 10 dias, para animais contidos em gua doce e gua salgada, respectivamente. Contrariamente aos resultados apresentados anteriormente, SURESH et al. (2000) alcanaram bons resultados de induo ovulao em White Bass, utilizando apenas uma dose aguda, aplicada na forma injetvel de mGnRHa. Outros trabalhos tm buscado desenvolver metodologia de liberao contnua de GnRH, como por exemplo o uso do implantes hormonais. Marino et al. (2003) utilizou implantes de GnRHa para induzir a ovulao em Dusky Grouper (Epinephelus marginatus) e vericaram que das 13 fmeas tratadas, 11 atingiram a maturao nal dos ovcitos, enquanto que as no tratadas desenvolveram apenas alguns sinais de maturao. Olito et al. (2001) utilizaram implantes de LHRHa em Chinook Salmon e vericaram que esses tratamentos alm de acelerar a ovulao em relao aos animais no tratados, induziram a sincronizao da ovulao das fmeas. Esses autores vericaram que todas as fmeas tratadas ovularam 17 dias aps o incio dos tratamentos, enquanto as no tratadas atingiram esse estdio por volta do 38dia. Apesar de acelerar o tempo de maturao nal dos ovcitos, os autores vericaram que os implantes reduzem a qualidade e a sobrevivncia das proles. Moon et al. (2003) utilizaram implantes de GnRHa (LHRHa pGlu-His-Trp-Ser-yr-D-Ala-Leu-ArgPro-NHEt) em machos de Starry Flounder (Plathchthys stellatus) durante a estao de reproduo e vericaram que os tratamentos no afetaram a motilidade espermtica nem o pH do smen, mas aumentaram o volume de smen ejaculado e a sua uidez. Esse fato, conseqentemente, levou a uma reduo da concentrao de espermatozides, provavelmente pelo GnRHa no estimular a produo de novos espermatozides. O aumento da uidez do smen pode ser um resultado positivo, pois a elevada viscosidade desse material, freqente em animais de cativeiro, um problema na reproduo articial, pois diculta a homogeneizao do smen com as solues ativadoras. Hilomen-garcia et al. (2002) evidenciaram os mesmos efeitos sobre a qualidade e quantidade de smen produzido em Sea Bass (Calcarifer bloch), contudo esses autores utilizaram LHRHa (D-Ala6, Pro9-N-ethilamida) na forma injetvel. Mylonas et al. (1997) encontraram resultados semelhantes utilizando implantes de GnRHa em forma de micro esferas em White Bass (Morone chrysops), porm esses implantes no causaram efeito deletrio na concentrao de espermatozides, alm de evidenciarem um aumento nos nveis de GtHII. Principais compostos empregados no desenvolvimento de sistemas de liberao contnua de GnRHa Os tratamentos hormonais tm utilizado diversos tipos de veculos com diferentes ecincias. Considerando que as formas de aplicaes injetveis necessitam de excessivo manejo, devido repetio dos tratamentos, muitos estudos tm sido direcionados para o desenvolvimento de metodologias utilizando implantes hormonais que permitam a liberao contnua de hormnio. Diversos compostos tm sido utilizados na confeco desses implantes. Esses podem ser feitos na forma de peletes

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cilndricos de colesterol (3mmx3mm), em que variaes de sua concentrao na matriz, em adio com celulose, pode garantir uma rpida ou lenta liberao (ZOHAR & MYLONAS, 2001). Peletes de acetato de etilenovinil tambm so utilizados, sendo que esse composto um copolmero no degradvel e os implantes so confeccionados de forma cilndrica com 2 a 3 mm de dimetro (MYLONAS & ZOHAR, 2001). Desde 2001 implantes fabricados na forma de micro-esferas biodegradveis (5-200m de dimetro) tm sido largamente utilizados e com bons resultados. Na sua fabricao, so empregados co-polmeros de cido ltico e cido gliclico (LGA), os quais foram inicialmente desenvolvidos para emprego em suturas cirrgicas. A liberao dessas microesferas pode ser imediata ou continuar por alguns meses, dependendo da relao entre cido ltico e gliclico e comprimento dos implantes empregados, o que causa alterao no peso molecular do polmero (ZOHAR & MYLONAS, 2001). Consideraes Finais O emprego do GnRH e suas formas anlogas tm mostrado ecincia no controle e manipulao da reproduo de peixes, alm de facilitar o manejo dos estoques de reprodutores. Contudo novos estudos devem ser realizados, buscando-se conhecer melhor as formas nativas de GnRH presentes em cada espcie e suas relativas localizaes, mecanismos de ao e anidade com seus receptores. Esse conhecimento poderia levar ao desenvolvimento de formas sintticas de GnRHa especcas, superativas, ou combinaes mais apropriadas, que apresentem maior atividade biolgica nos processos de maturao nal dos ovcitos, ovulao, espermiao e desova. Ainda, o desenvolvimento de doses mnimas efetivas e de mecanismos de liberao contnua mais ecientes dever ser objeto de estudo futuro. Referncias
AMANO, M. et al. Molecular cloning of three cDNAs encoding different GnRHs in the brain of barn onder. General Comparative Endocrinology, Orlando, v. 126, p. 325-333, 2002. AMANO, M. et al. Salmon gonadotropin releasing hormone and gonadotropin are invoved in precocious maturation induced by photoperiod manipulation in underyearling male Masu Salmon, Oncorhynchus masou. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 95, p. 368-373, 1994. BRETON, B. et al. GtH I and GtH II secretion proles during the reproductive cycle in female Rainbow trout: relationship with pituitary responsiveness to GnRH A stimulation. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 111, p. 38-50, 1998. CAROLSFELD J. et al. Primary structure and function of three gonadotropin-releasing hormones, including a novel form, from an ancient teleost, herring. Endocrinology, Baltimore, v. 141, p. 505512, 2000. DELLOVADE, T. et al. Aspects fo GnRH neurobiology conserved across vertebrate forms. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 112, p. 276-282, 1998. GISSIS, A. et al. The effect of gonadotropin-releasing hormone superactive analog and dopamine antagonists on gonadotropin level

and ovulation in tilapia hybrids. The Israeli Journal of Aquaculture Bamidgeh, Israel, v. 43, n. 4, p.123-136, 1991. GRANNER, D. K. Restraint. In: ________. Ao hormonal. So Paulo: Atheneu, 1998. p. 509-521. HARVEY, B.; CAROLSFELD, J. Induced breeding in tropical sh culture. Ottawa: International Development Research Center, 1993. HILOMEN-GARCIA, G. V. et al. Milt production of Sea Bass, Morone chrysops, administred an analogue of luteinizing hormonereleasing hormone and 17--methyltestosterone. The Israeli Journal of Aquaculture Bamidgeh, Israel, v. 54, n. 4, p. 173 -182, 2002. KLUSEN, C. et al. The effect of gonadotropin releasing hormone on growth hormone and gonadotropin subunit gene expression in the pituitary of goldsh, Carassius auratus. Comparative Biochemistry and Physiology, Part B, New York, v. 129, p. 511-516, 2001. KOBAYASHI, M. et al. Gonadotropin releasing hormones of terminal nerve origin are not essential to ovarian development and ovulation in goldsh. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 95, p. 192-200, 1994. MARINO, G. et al. Induction of ovulation in captive reared dusky grouper, Epinephelu marginatus (Lowe, 1834), with a sustained release GnRHa implant. Aquaculture, Amsterdam, v. 219, p. 841858, 2003. MELAMED, P. et al. Endocrine regulation of gonadotropin and growth hormone gene transcription in sh. Comparative Biochemistry and Physiology, Part C, Oxford, v. 119, p. 325-338, 1998. MOON, S. H. et al. Increased plasma 17-hydroxyprogesterone and milt production in response to gonadotropin-releasing hormone agonist in captive male starry ounder, Platichthys stellatus. Aquaculture, Amsterdam, v. 218, p. 703-716, 2003. MUKHOPADHYAY, B. et al. Intracelular events in response to GnRH causing gonadotropin release from pituitary cells of a channid sh, Channa punctatus (Bloch). Comparative Biochemistry and Physiology, Oxford, v. 118c, n. 2, p. 129-136, 1997. MNZ, H. et al. LHRH systems in the brain of platysh. Brain Research, Amsterdam, v. 221, p.1-13, 1981. MYLONAS, C. C. et al. Hormonal changes in male white bass(Morone chrysops) and evaluation of milt quality after treatment with a sustained released GnRHa delivery system. Aquaculture, Amsterdam, v. 153, p. 301-311, 1997. MYLONAS, C. C.; ZOHAR, Y. Use of GnRHa delivery system for the control of reproduction in sh. Reviews in sh biology and sheries, London, v. 10, p. 463-491, 2001. OKUBO, K. et al. A novel form of gonadotropin-releasing hormone in the medaka, Oryzias latipes. Biochemistry Biophysics Research Commun, Amsterdam, v. 276, p. 298-303, 2000. ______. A novel third gonadotropin releasing hormone receptor in the medaka Oryzias latipes: evolutionary and functional implications. Gene, Amsterdam, v. 314, p. 121-131, 2003. OLITO, C. et al. Acceleration of sexual maturation in Chinook Salmon broodstock using luteinizing hormone-releasing hormone analog. North American Journal of Aquaculture, Bethesda, v. 63, p. 208-214, 2001. PAHAR, S. I.; IWATA, M. Gonadotropin - releasing hormone

Arq. cin. vet. zool. UNIPAR, Umuarama, v.9, n.1, p. 59-65, jan./jun., 2006

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(GnRH) neurons project to growth hormone and somatolactin cell in the Steelhead trout. Histochemistry, Berlin, v. 102, p. 195-203, 1994. PARHAR, I. S. et al. Spatio temporal expression of gonadotropin releasing hormone receptor subtypes n gondotropes, somatotropes and lactotropes in cichlid sh. Journal of Neuroendocrinology, Oxford, v. 14, p. 657-665, 2002. PETER, R. E. The brain and neurohormones in teleost reproduction. In: HOAR, W. S.; RANDALL, D. J.; DONALDSON, E. M. Fish physiology. London: Academic Press, 1983. p. 97-135. PETER, R. E.; YU, K. L. Neuroendocrine regulation of ovulation in shes: basic and applied aspects. Reviews in sh biology and sheries, London, v. 7, p. 173-197, 1997. PLANAS, J. V. et al. Somatolactin stimulates in vitro gonadal steroidogenesis in coho salmon, Oncorhynchus kisutch. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 87, p. 1 -5, 1992. REDDING, J. M.; PATIO, R. Reproductive physiology. In: EVANS, D. H. The physiology of shes. London: CRC Press, 1993. p. 503-534. RODRGUEZ, L. et al. Pituitary levels of three forms of GnRH I male Europe Sea Bass (Dicentrarchus labrax, L.) during sex differentiation and rst spawning season. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v.120, p. 67-74, 2000. SLATER, C. H. et al. GnRHa injection accelerate nal maturation an ovulation/spermiation of sockeye salmon (Oncorhynchus nerka) in both fresh and salt water. Aquaculture, Amsterdam, v.130, p. 279-285, 1995. STEFANO, A. V. et al. Colocalization of GnRH binding sites with gonadotropin-, somatotropin-, and prolactin expressing pituitary cells of the Pejerrey, Odontesthes bonariensis, in vitro. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 116, p. 133-139, 1999.

SURESH, A. V. et al. Single injections of human chorionic gonadotropin or mammalian gonadotropin releasing hormone analog at low dosages induce ovulation in White Bass. North American Journal of Aquaculture, Bethesda, v. 62, p. 87-94, 2000. TAN-FERMIN, J. D. et al. LHRHa and pimozide-induced spawning of Asin catsh Clarias macrocephalus (Gunther) at different times during an annual reproductive cycle. Aquaculture, Amsterdam, v. 148, p. 323-331, 1997. VAN DER KRAAK, G. et al. Reproduction. In: EVANS, D. H. The physiology of shes - 2thed. London: CRC Press, 1997. p. 465-490. WEBER, G. M. et al. Evidence that gonadotropin releasing hormone (GnRH) function as a prolactin releasing factor in a teleost sh (Oreochromis mossambicus) and primary structures for three native GnRH molecules. Journal of Endocrinology, Bristol, v. 155, p. 121 -132, 1997. YAMAMOTO, N. Three gonadotropin releasing hormone neural groups with special reference to teleosts. Anatomical Science International, London, v. 78, p. 139-155, 2003. ZOHAR, Y. et al. Gonadotropin releasing activities of the three native forms of gonadotropin releasing hormone present in the brain of Gilthead Seabream, Spaurus auratus. General and Comparative Endocrinology, Orlando, v. 97, p. 289-299, 1995. ZOHAR, Y. et al. Induction of spawning in the gilthead seabream, Spaurus aurata, using (D-Ala6-Pro9-NET)-LHRH: comparison with the use of HCG. The Israeli Journal of Aquaculture Bamidgeh, Israel, v. 41, n. 3, p. 105-113, 1989. ZOHAR, Y.; MYLONAS, C. C. Endocrine manipulation of spawing in cultured sh: from hormones to genes. Aquaculture, Amsterdam, v. 197, p. 99-136, 2001.

Recebido para publicao em 08/03/2005 Received for publication on 08 March 2005 Recibido para publicacin en 08/03/2005 Aceito para publicao em 01/11/2005 Accepted for publication on 01 November 2005 Acepto para publicacin en 01/11/2005

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