UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE QUMICA DEPARTAMENTO DE BIOLOGA MICROBIOLOGA EXPERIMENTAL 1515 GRUPO 10.

SEMESTRE 2013/1

EQUIPO: NOMBRE: NOMBRE:

#7 Merino Gonzlez Arturo Sols Vzquez Armando

PRCTICA No.

#9

NOMBRE DE LA PRCTICA:

Caracterizacin metablica de las bacterias

23 y 25/Octubre/ 2012

FECHA(S) DE REALIZACIN: FECHA DEL REPORTE: 29/Octubre/2012

CALIFICACIN DEL REPORTE: COMENTARIOS GENERALES:

REVISADO POR:

OBJETIVOS.
Determinar los requerimientos nutricionales de una bacteria aislada de un ambiente natural. Determinar los requerimientos de oxgeno de una bacteria aislada de un ambiente natural. Relacionar la actividad metablica de los microorganismos con los cambios producidos en diferentes sustratos. Caracterizar mediante pruebas bioqumicas una bacteria aislada y compararlos con una bacteria de referencia.

RESULTADOS.
(Primera sesin. Arturo Merino) Para la primera sesin se tuvo que haber mandado a incubar una resiembra del microorganismo aislado y a partir de este se tuvo que realizar una suspensin microbiana para que posteriormente se hicieran las respectivas siembras en las cajas de petri as como en los tubos de ensayo con sus respectivos medios. La siembra realizada para los medios en las cajas petri fue por estra recta. Agar DNA Agar Nutritivo Agar Almidn Agar leche-descremada Agar sangre

La siembra realizada en Caldos se realiz por medio de asadas. Caldos: NO-3 RMVP Urea RF + manitol RF + sacarosa

La siembra realizada para los medios slidos fueron hechos por medio de estra recta. Citrato de Simmons Descarboxilasa Fenilalanina

La siembra realizada para los medios semi-slidos fue hecha por medio de picadura. O/F Gelatina SIM

En esta misma sesin se indic que se mandaran a incubar los medios ya inoculados a una temperatura de 37OC por 48 horas. Excepto para las pruebas de Kliger, RF + sacarosa, RF + manitol y el medio de Urea. En esta primera sesin se nos indic que se realizara una tincin Gram para comprobar la pureza de nuestro microorganismo aislado. La cual, dio el resultado de que el microorganismo estaba aislado.
Fecha: 23/Oct/2012 Microscopio: CZ-10 Muestra: Microorganismo aislado Aumento total: 1000x Tincin Gram. En esta tincin solo se pueden apreciar las estructuras reportadas anteriormente como el microorganismo aislado; son cocos positivos.

RESULTADOS.
(Segunda sesin. Arturo Merino) Para la segunda sesin se procedi a interpretar los resultados obtenidos de las pruebas realizadas la sesin anterior; para esto se cont con la ayuda de la investigacin sobre las pruebas bioqumicas que se hicieron, las cuales se tenan que buscar por medio de la bibliografa o de cualquier otra fuente confiable para este propsito. Los resultados obtenidos son los siguientes: 1.- Hidrlisis de Gelatina. Prueba negativa para mi microorganismo debido a que despus de la refrigeracin el medio permaneci solidificado. 2.-Hidrlisis de ADN. Prueba positiva para mi microorganismo debido a que despus de agregarse el HCl el medio tuvo un aspecto transparente.

3.-Hidrlisis de Casena. Prueba negativa para mi microorganismo debido a que permaneci opaco alrededor de las colonias. 4.-Poduccion de SH2 en medio SIM y Kliger. Prueba negativa para mi microorganismo ya que no se present coloracin negro en los medios. 5.- Prueba de reduccin de Nitratos. Prueba negativa para mi microorganismo. Antes de la adicin de los reactivos la coloracin era amarilla, despus de adicionar los reactivos Reactivo de Griess la coloracin fue de un rosa claro. 6.- Prueba de Citrato. Prueba positiva para mi microorganismo. Ya que present coloracin azulada y tambin present crecimiento. 7.- Hidrlisis de Urea. Prueba positiva para mi microorganismo. Present una coloracin roja. 8.- Prueba de hemolisis. Prueba negativa para mi microorganismo. No present cambio alguno alrededor o en la misma colonia. 9.- Rojo de Metilo. La prueba fue negativa ya que present una coloracin amarilla. 10.- Hidrlisis de Almidn. Prueba negativa para mi microorganismo. Esto porque el medio present una coloracin azul y no present ningn halo. 11.- Fermentacin de Carbohidratos. Para prueba de Rojo de Fenol present coloracin rojo/rosa por lo que la prueba fue negativa. Para prueba de Kliger, el resultado fue K/A; superficie alcalina (fucsia) sobre fondo cido (amarillo); por lo que el microorganismos solo puede utilizar glucosa. 12.- Prueba de la catalasa/Oxidasa. Prueba para catalasa present burbujeo por lo que la prueba es positiva. Para la prueba de la oxidasa no present ningn cambio de color, por lo que esta prueba es negativa. 13.- Prueba de la descarboxilasa. La prueba para mi microorganismo resulto positiva al presentarse una coloracin morada/azul (alcalino). 14.- Prueba de fenilalanina desaminasa. La prueba para mi microorganismo resulto ser negativa al presentar solo una coloracin amarilla. 15.- SIM (movilidad). Esta prueba resulto negativa para mi microorganismo ya que en el tubo no se percibi la nube caracterstica del medio cuando es positiva.

16.- SIM (Indol). La prueba resulto negativa para mi microorganismo porque la coloracin del medio fue amarillenta y no rojiza/magenta para la prueba positiva. 17.- Prueba Voges-Proskauer. Despus de agregar las gotas de alfa-naftol y KOH al 40% el resultado fue negativo al permanecer el color amarillento. En la siguiente tabla se har un recuento de las caractersticas observadas y obtenidas de las pruebas hechas al microorganismo aislado.
Determinacin Gram DNasa Almidn Carbohidratos Casena Catalasa Citrato L-lisina Fenilalanina-deamilasa Gelatina Resultado + + Glucosa + + + Determinacin Hemolisis Indol Oxi/Fer Oxidasa Movilidad Nitratos Rojo de Metilo H2S Ureasa V.P. Resultado + + -

Sistemas Miniaturizado API.

Los sistemas miniaturizados API son mtodos rpidos que permiten la identificacin de microorganismos a travs de la realizacin de diferentes pruebas bioqumicas. Estos sistemas consisten en un dispositivo de plstico con varios micro-tubos que contienen diferentes medios de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba que se requiere montar. Entre algunas de las pruebas bioqumicas que pueden realizarse con estos sistemas estn las pruebas de fermentacin de carbohidratos, la determinacin de la produccin de H2S, la determinacin de la hidrlisis de la gelatina, entre otras. Entre algunos de los sistemas miniaturizados API que actualmente se encuentran disponibles en el mercado se tienen: API 20E Permite la identificacin de microorganismos pertenecientes al grupo de las enterobacterias y de otros bacilos gram negativos. Es una galera conformada por 20 micro-tubos. API 20 NE Permite la identificacin de bacilos gram negativos no pertenecientes al grupo de las enterobacterias como por ejemplo Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros. Es una galera conformada por 20 microtubos.

API 20 A Con este sistema miniaturizado se pueden montar las pruebas bioqumicas que permiten la identificacin de bacterias anaerobias. Es una galera conformada por 20 microtubos. Una vez inoculada la galera con la suspensin del microorganismo a identificar, el sistema requiere ser incubado en una jarra Gaspak u otro sistema que provea condiciones de anaerobiosis. API STAPH Este sistema permite la identificacin de microorganismos pertenecientes al gnero Staphylococcus, Micrococcus y Kocuria. Es una galera conformada por 20 microtubos. OTROS SISTEMAS API Existen otros sistemas miniaturizados API; entre ellos podemos sealar el API 20 STREP, el API CAMPY, el API CORYNE, el API CANDIDA.

La diferencia entre los sistemas API y los convencionales recaen en que el sistema API consiste de una serie de pequeos depsitos denominados microtubos y que contienen los sustratos deshidratados para diversas pruebas, los cuales se reconstituyen con la suspensin bacteriana a probar. Despus de la incubacin las reacciones se leen ya sea por el color o bien despus de agregar reactivos para la revelacin. Esto puede favorecer en que al comprar estas series ya no se pierde tiempo en estar preparando los medios y facilita las determinaciones (en un tiempo ms corto). Mientras que los convencionales consisten en preparar el medio de cultivo con las sustancia o sustancias especficas en fresco y despus de preparar estos medios se puede hacer la inclusin del microorganismo; la desventaja de los mtodos convencionales es que se puede perder tiempo al estar preparando los medios y en estos pueden presentarse errores aleatorios que podran afectar los resultados.

ANALSIS DE RESULTADOS.
En base a los resultados obtenidos en las pruebas bioqumicas se puede aseverar que el microorganismo aislado presenta ciertas condiciones para crecer y/o nutrimentos especficos para su crecimiento. La bacteria debido a la prueba positiva de DNasa; el alto nivel de ADN molecular hace posible la deteccin de la DNasa que despolimeriza el ADN. Otra de las caractersticas de esta bacteria es que utiliza la glucosa como fuente de carbohidrato (carbono orgnico). Las pruebas tambin nos dan el resultado de que esta bacteria produce la enzima catalasa, esta se produce debido a que el perxido de hidrgeno se reduce al utilizar la bacteria el azcar por va oxidativa. Y al ser este un compuesto oxidante, las bacterias lo eliminan mediante la produccin de la enzima.

Las pruebas tambin dieron positivo para la prueba de citrato, la cual nos indica que este microorganismo es capaz de utilizar el citrato como fuente de carbono para el crecimiento y metabolismo provocando alcalinidad. Tambin dio positivo para la prueba de descarboxilacin de lisina; la cual nos indica que mide la capacidad del microorganismo de descarboxilar el aminocido para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. Las pruebas tambin dieron positivo para la enzima ureasa; la cual determina la capacidad de un microorganismo de desdoblar la urea formando 2 molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.

CONCLUSIONES.
Las pruebas bioqumicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una va metablica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer lo puede utilizar o no utilizar. A partir de las pruebas bioqumicas de identificacin bacteriana, mediante estndares establecidos, podemos conocer que bacteria tenemos en una muestra problema basndonos en sus reacciones metablicas las cuales son caractersticas de cada microorganismo. Gracias a que se investigaron las caractersticas de cada prueba bioqumica utilizada se pudieron saber cules fueron las funciones metablicas de nuestro microorganismo; as se pudieron comparar los resultados obtenidos experimentalmente con los resultados ya prescritos en la bibliografa cuyo anlisis ya se ha determinado y de esta manera se puede llegar a que el microorganismo aislado fu

BIBLIOGRAFA.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_SistemasA PI.pdf