Fotomorfognese R. F. Carvalho & L. E. P.

Peres

FOTOMORFOGNESE
Rogrio F. Carvalho & Lzaro E. P. Peres Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz - E-mail. lazaropp@esalq.usp.br

I - INTRODUO II - O FITOCROMO III - MUTAES FOTOMORFOGENTICAS IV - GERMINAO, FLORAO E FITOCROMO V - FUNO ECOLGICA DO FITOCROMO VI - A LUZ E OS HORMNIOS VEGETAIS VII - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

I- INTRODUO Fotomorfognese e fotossntese so processos interdependentes A fotossntese no o nico processo para o qual a luz essencial. Durante o ciclo de vida vegetal, vrias respostas, que conferem enormes vantagens no estabelecimento e na sobrevivncia da planta, tais como germinao de sementes, inibio do alongamento caulinar, sntese de clorofila e antocianinas, expanso foliar, florao e tuberizao, esto envolvidas diretamente com a durao e a qualidade da luz. O processo pelo qual a luz regula o desenvolvimento das plantas denominado fotomorfognese (Kendrick & Kronenberg 1994). A maioria dos processos biolgicos influenciados pela luz, tanto para animais quanto para vegetais, ocorrem na faixa do espectro denominada luz visvel, o qual varia de 400 a 700 nm (Figura 1). Assim, a principal fonte de energia para a fotossntese se encontra nos intervalos da luz visvel e os efeitos desta f aixa do espectro podem ser observados tambm na fotomorfognese. Contudo, alguns pigmentos esto envolvidos na percepo dos sinais trazidos pela luz e possuem seu pico de absoro em comprimentos de ondas abaixo de 400 nm e acima de 700nm. Alguns pigmentos envolvidos na fotomorfognese so molculas semelhantes clorofila, mas que conferem planta um ajuste em seu programa de desenvolvimento no ambiente em que se encontra, independente da fotossntese. Por outro lado, tanto pigmentos fotossintticos quanto os fotomorfogenticos podem coincidir seus picos de absoro como um mecanismo interativo do desenvolvimento da planta. A estreita relao entre fotossntese e fotomorfognese se faz notar tambm nos prprios processos fotomorfogenticos listados acima. Assim, na germinao de sementes, aquelas espcies que possuem sementes contendo muitas reservas (produto prvio da fotossntese) geralmente so capazes de germinar no escuro. No entanto, sementes sem reservas geralmente requerem luz para germinar e esse requerimento garante que elas s germinem em condies em que possam fazer fotossntese e compensar a falta de reservas. Do mesmo modo, o maior alongamento dos caules (estiolamento) em locais de pouca luz, aumenta as chances da planta fugir da sombra e realizar fotossntese. Por fim, interessante notarmos que processos

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como a sntese de clorofila e a expanso foliar, os quais so necessrios para a planta fazer fotossntese, e processos como a florao e tuberizao, os quais s devem ocorrer se a planta tem condies de suprir fotoassimilados, so diretamente regulados pela fotomorfognese.

Figura 1: Espectro da luz. A faixa compreendida entre 400 e 700 nm efetiva para a maioria dos processos fisiolgicos tanto em animais (ex. viso) como em plantas (ex. fomorfognese e fotossntese). Comprimentos de onda da extremidade esquerda do presente espectro so denominados ultra violeta e aqueles da extremidade direita so denominados infravermelho. A radiao ultra violeta pode causar danos s clulas vivas por ser ionizante e a radiao infravermelha tambm pode ser bastante danosa, j que so ondas de calor.

Existem pelo menos trs tipos de fotorreceptores para fotomorfognese No processo fotomorfogentico existem pelo menos trs classes de fotorreceptores: fitocromos, os quais absorvem predominantemente o comprimento de onda do vermelho (V, 650-680 nm) e vermelho-extremo (VE, 710-740 nm) (Figura 2), fotorreceptores que absorvem a luz azul/UV-A (320-400nm), denominados criptocromos, e fotorreceptores que absorvem o UV-B (280-320 nm). Esses fotorreceptores traduzem a informao da luz em sinais bioqumicos, por processos ainda pouco elucidados.

Figura 2: Picos de absoro de Fv em V (660) e Fve em VE (730). No entanto, Fv tambm absorve um pouco na faixa do VE e Fve absorve uma quantidade proeminente de V. Note que alm da faixa do vermelho, as formas de fitocromo tambm possuem picos de absoro na faixa do azul (320-400nm) e ultra violeta (280 nm). A absoro na faixa do vermelho e do azul devido ao cromforo. A absoro na faixa do UV deve-se provavelmente poro protica do fitocromo.

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II - O FITOCROMO A absoro de luz vermelha converte o fotorreceptor fitocromo na forma isomrica ativa Os fotorreceptores mais estudados so os fitocromos. A ampla distribuio dos fitocromos, presentes em algas, plantas menos complexas como musgos e samambaias at plantas superiores, indica o grau de importncia destes fotorreceptores. Recentemente, tambm foi observada a presena destes pigmentos em cianobactrias (Hughes et al., 1997). O fitocromo um pigmento azul com massa molecular 150 KDa consistindo em um polipeptdio (apoprotena) carregando um cromforo, a fitocromobilina, a qual um tetrapirrol linear. Um outro conhecido tetrapirrol esta presente na molcula da clorofila, o qual cclico e contm um tomo de Mg2+ no centro. O cromforo, sintetizado no plastdio, a poro no protica do fitocromo, responsvel pela absoro da luz. A unio do cromforo com a apoprotena ocorre no citoplasma. No se sabe se existe alguma enzima que promove a juno cromforo + apoprotena, contudo, sabe-se que um processo autocataltico, isto , ocorre espontaneamente in vitro se os dois componentes so colocados juntos. A poro protica do fitocromo recebe o nome de holoprotena aps a unio da apoprotena ao cromforo. Existem duas formas interconversveis de fitocromo, uma ativa e outra inativa. A forma inativa do fitocromo (Fv), absorve o comprimento de onda do vermelho (V) e convertida forma biologicamente ativa (Fve). Embora Fv absorva muito pouco no comprimento de onda do azul (Figura 2), esse comprimento de onda tambm converte Fv em Fve. A reverso de Fve a Fv se d pela absoro do vermelho-extremo (VE) pelo Fve (Figura 3). A reverso de Fve a Fv tambm pode ocorrer no escuro. A quantidade de fitocromo presente na planta na forma ativa pode ser expressa como Fve/(Fv+Fve). Para produzir um efeito fotomorfogentico na planta deve haver uma proporo especfica de Fve/Ftotal. Pode se concluir pelo exposto acima que para saber se uma resposta induzida por fitocromo, necessrio saber se ela revertida por luz VE. Contudo, como se ver adiante, esse critrio pode ser utilizado para se confirmar que uma resposta mediada por fitocromo, mas o fato de uma resposta no ser revertida por VE, no quer dizer que ela no seja mediada por fitocromo.

Figura 3: A fotoconverso da forma do fitocromo Fv a Fve induzida por comprimento de onda do vermelho (V) e por luz azul, e a reverso de Fve a Fv induzida por comprimento de onda do vermelho-extremo (VE) e tambm pelo escuro.

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Como visto anteriormente, a forma Fve, alm de absorver luz VE, tambm absorve um pouco de V (Figura 2), e isso faz com que ao expor uma planta a luz V, haver converso de Fv a Fve, mas uma parte do Fve produzido tambm absorver V e se converter de volta a Fv. Desse modo, aps saturao de luz V apenas 85 % de fitocromo estar na forma Fve. Por outro lado, na saturao com luz VE, embora a forma Fv absorva predominantemente luz V e muito pouca luz VE (Figura 2), ainda haver 3% Fve (ativo) contra 97% de Fv (inativo). Como se ver adiante, para alguns tipos de respostas fotomorfogenticas, 3% de fitocromo ativo so suficientes, o que explica que essas respostas no sejam revertidas por luz VE. A proporo entre as formas ativas e inativas na saturao com luz V ou VE denominada estado fotoestacionrio. A reao de converso da forma inativa de fitocromo (Fv) em forma ativa (Fve) uma reao de isomerizao. Desse modo, a absoro do vermelho pelo Fv, resulta na mudana do anel D da forma cis (inativa), com relao ao anel C, para forma trans (ativa) caracterstica do Fve (Figura 4). Mudanas na propriedade protica tambm contribuem para a alterao entre as duas formas do fitocromo.

A absoro do vermelho por Fv, resulta na mudana do anel D da forma cis (inativa) para forma trans (ativa) caracterstica do Fve A protena ligada ao cromforo tambm sofre mudana conformacional.
Figura 4: Fotoizomerizao entre os anis C e D do cromforo.

Um dos primeiros pesquisadores a observar o efeito antagonista V/VE no desenvolvimento das plantas foi Sterling Hendriks, o qual trabalhava em 1950 com germinao de sementes de alface no Departamento de Agricultura do EUA (USDA). Um pouco depois, no ano de 1959 foi confirmada a presena de um fotorreceptor (fitocromo) capaz de mediar essas respostas nos tecidos vegetais. H que se considerar a existncia de uma dificuldade intrnseca no estudo do fitocromo: trata-se de uma molcula muito difcil de purificar para ensaios in vitro. Contudo, em ensaios in vivo com tecido estiolado (sem clorofila para interferir) possvel detectar o fitocromo, medindo a absorbncia de pedaos de hipoctilos/epictilos nos picos caractersticos do fitocromo (Figura 2). Desde os primeiros estudos com fitocromo, sempre houve uma preferncia na utilizao de plntulas estioladas, j que so ricas nesse fotorreceptor. Contudo, plantas crescidas no escuro possuem uma atividade de protelise igualmente proeminente, o que dificulta o isolamento do fitocromo. Existem vrios tipos de apoprotenas para um s cromforo Pode se dizer que os avanos mais significativos no entendimento do fitocromo ocorram no final da dcada de 80, quando se aplicou uma abordagem gentica para o seu

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estudo. Tal abordagem revelou uma diversidade de genes deste fotorreceptor, abrindo um amplo caminho nas questes genticas, fisiolgicas, ecofisiolgicas e evolutivas do fitocromo. Evidncias de que as angiospermas possuem vrias espcies de fitocromos codificados por uma pequena famlia de genes foram verificadas inicialmente em estudos com Arabidopsis thaliana (Sharrock and Quail 1989). Cinco genes do fitocromo foram isolados nesta espcie: PHYA , PHYB, PHYC , PHYD e PHYE , que codificam as apoprotenas PHYA, PHYB, PHYC, PHYD e PHYE, as quais aps se ligarem ao cromforo formam os fitocromos phyA, phyB, phyC, phyD e phyE, respectivamente. Em tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill.) tambm foram encontrados cinco genes para apoprotenas: PHYA , PHYB1, PHYB2, PHYE e PHYF (Pratt et al. 1997). O fitocromo que possui a apoprotena phyA considerado do tipo I e todos os demais so considerados do tipo II. A grande diferena entre os dois tipos de fitocromo que o tipo I se acumula predominantemente em plantas crescidas no escuro ou na penumbra e facilmente degradado na presena de luz. Os mecanismos que contribuem para a abundncia de fitocromo do tipo I no escuro o fato do gene PHYA ser transcrito preferencialmente nessas condies e sua expresso ser inibida pela luz. Desse modo, se uma planta crescida no escuro for iluminada com V, a forma Fve de phyA resultante inibir a expresso de seu prprio gene. As respostas mediadas por fitocromo podem variar de acordo com a fluncia ou a irradincia da fonte luminosa Os fitocromos podem agir de trs diferentes modos, de acordo com a qualidade e a durao da luz requerida para induzir respostas na planta: respostas de fluncia 1 muito baixa (RFMB), resposta de baixa fluncia (RBF) e resposta de irradincia alta (RIA). Ambos RFMB e RIA so mediados por phyA, entretanto, RBF mediado por phyB, e em muitos casos por outros fitocromos diferentes de phyA. A RBF a resposta clssica de fitocromo induzida por V e revertida por VE, como ocorre na germinao de sementes de alface. Esse tipo de resposta requer um mnimo de fluncia de 1 mol.m-2 e satura a 1000 mol.m-2 . Desse modo, sob contnua exposio ao V ou pulsos de V, uma grande proporo de molculas de phyB (85%) convertem-se na forma ativa (Figura 5). A RFMB inicia em 0,1 nmol.m-2 e satura em 50 nmol.m-2 . Essa pequena quantidade de luz V converte menos que 0,02 % do fitocromo total (phyA) em Fve. Como visto anteriormente, devido ao fato da forma inativa do fitocromo (Fv) tambm absorver um pouco de VE e se tornar ativa, mesmo sob saturao de VE, haver 3% de Fve. Essa pequena quantidade de fitocromo ativo bem maior do que os 0,02% necessrios para induzir RFMB (Figura 5). justamente por isso que, ao contrrio de RBF, a RFMB no apresenta a clssica reverso por VE.

Entende-se por fluncia a quantidade de ftons (mol) incidindo em uma determinada rea (m-2 ). Se levarmos em conta o tempo (s-1 ) de incidncia dos ftons, teremos a irradincia, ou taxa de fluncia, cuja unidade mol m-2 s-1 . Quanto maior a irradincia, mais brilhante uma fonte luminosa.

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Figura 5: Interao entre fluncia e comprimento de onda da fonte luminosa na resposta ao fitocromo. Plantas crescidas sob V acumulam preferencialmente phyB. Nessas condies, a forma Fv desse tipo de fitocromo (phyBv) ir absorver V e se converter na forma ativa (phyBve). Contudo, a forma phyBve (Fve) tambm absorve um pouco de V (cf. Figura 2), se convertendo novamente em phyBv. No equilbrio fotoestacionrio, 85% de phyB estar na forma ativa, o que suficiente para induzir respostas de baixa fluncia (RBF). Do mesmo modo, na saturao com VE, o tipo de fitocromo que acumula nessas condies (phyA) estar com 97% de suas molculas na forma inativa (phyAv) e somente 3% na forma ativa (phyAve). Contudo, essa quantidade de phyA ativo mais do que suficiente para induzir resposta de fluncia muito baixa (RFMB).

Por fim, RIA requer exposio prolongada ou exposio contnua a luz de irradincia alta, ou seja, a resposta proporcional a irradincia e no fluncia. justamente por isso que ela denominada RIA e no resposta de fluncia alta (RFA). Nesse caso, RIA no responde lei da reciprocidade2 , ou seja, exposio contnua luz fraca ou exposio rpida a luz muito brilhante, no induzem RIA. Alm de RIA precisar de fluncia muito alta para saturar, ela no fotoconversvel (V/VE). Esse tipo de reposta mediada por phyA e s ocorre sob VE contnuo e no sob pulsos de VE ou mesmo V. Um tpico exemplo de RIA a sntese de antocianinas em algumas espcies de dicotiledneas. Os trs tipos de resposta (RBF, RFMB e RIA) podem estar envolvidos em um mesmo evento fisiolgico. Na inibio do crescimento do hipoctilo em plantas previamente crescidas no escuro, o phyA que se acumula nessas condies pode inibir o estiolamento tanto por RFMB sob pulsos de VE, quanto por RIA, sob VE contnuo (Figura 6). Por outro lado, em plantas previamente crescidas no claro e mantidas sob V, a inibio do crescimento do hipoctilo induzida por phyB atuando em RBF. No caso da germinao de sementes, a luz VE contnua em RIA ou pulsos de VE em RBF iro inibir esse processo. No primeiro caso, a inibio da germinao mediada por phyA e no segundo por phyB (Figura 6). Contudo, sementes podem ser induzidas para germinao sob VE, desde que esse atue em fluncia muito baixa, sendo essa resposta mediada por phyA. Exposio com luz V normalmente induz germinao de sementes, sendo essa a clssica RBF media por phyB.

Lei da reciprocidade: se a exposio for prolongada, a intensidade da luz pode ser baixa e vice-versa. RFMB e RBF respondem a essa lei.

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Figura 6: Modos de ao do fitocromo durante a inibio do alongamento do hipoctilo e regulao da germinao de sementes. RFMB mediada por phyA sob VE. RBF mediada por phyB sob V. RIA mediada por phyA sob exposio ao vermelho-extremo contnuo (VEc). Observe que a germinao de sementes inibida por VEc em RIA ou por pulsos de VE em RBF (no mostrado aqui). Adaptado de Casal & Sanchez, 1998.

Atualmente, apesar da abundncia de dados sobre a distribuio intracelular dos fitocromos e as caractersticas das vias de sinalizao controladas por estes fotorreceptores, sua funo molecular primria ainda permanece obscura. As atividades dos fitocromos como holoprotenas receptores quinases associadas membrana e reguladores da transcrio de genes so parcialmente aceitas at o momento. Nesse sentido, j se evidenciou que em clulas iluminadas com V, o fitocromo migra do citossol para as membranas. Do mesmo modo, j foram identificadas algumas protenas que so fosforiladas pela atividade quinase do fitocromo. Uma delas o prprio criptocromo. A constatao de que phyA capaz de ativar molculas de criptocromo por fosforilao explica em parte a o efeito conjunto de phyA e criptocromo na resposta luz azul. Por fim, dois genes cuja expresso regulada por fitocromo so o que codifica a pequena subunidade da rubisco (RBCS) e o que codifica a protena que se liga clorofila a/b do complexo antena (LHCB ou CAB). Essa ltima constatao refora a idia original de que fotomorfognese e fotossntese esto intimamente associadas. Muitos estudos ainda precisam ser realizados para o entendimento do modo de ao do fitocromo e uma abordagem promissora para tal pode ser a anlise do fentipo de vrios mutantes envolvidos nesses processos.

III- M UTAES FOTOMORFOGENTICAS Mutantes fotomorfogenticos so ferramentas muito importantes no estudo de fotorreceptores. O efeito primrio da mutao a expresso defeituosa ou alterada de um gene. Mutaes em genes especficos da biossntese ou da via de transduo de sinal do fitocromo permitem analisar as diferentes funes fisiolgicas destes fotorreceptores. Em tomateiro, mutantes com alterao na sntese ou expresso do fitocromo j foram isolados (Figura 7).

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Figura 7: Deficincia na sntese do fitocromo nos mutantes fri, tri, yg-2 e au. Os mutantes fri e tri so defeituosos para a fabricao de apoprotenas phyA e phyB1, respectivamente. As mutaes au e yg2 possuem alteraes na via de biossntese do cromforo. Apesar dos genes necessrios para biossntese do cromforo estarem no ncleo, sua molcula montada nos plastdios. As alteraes fotomorfogenticas nos mutantes Ip, hp, dg (hp-2) e atv ocorrem na via de transduo de sinal do fitocromo (Adaptado de Kendrick et al. 1997).

Os mutantes yellow green-2 (yg-2) e aurea (au) de tomateiro no respondem aos efeitos da luz branca (Figura 8). Desta forma, o hipoctilo se apresenta alongado e com pouco acmulo de antocianinas. O aspecto clortico das plantas d a impresso de que estejam crescendo na ausncia da luz. Estes aspectos da planta mesmo sob luz branca indicam deficincia de fitocromo. Nesse dois mutantes em questo, todos os tipos de fitocromo esto em baixas quantidades, indicando que a deficincia na sntese do cromforo. Como visto anteriormente, embora existam diferentes tipos de apoprotenas, o cromforo o mesmo para todas elas. Desse modo, a deficincia na sntese do cromforo acarreta alteraes em todos tipos de fitocromos. A deficincia tambm pode ser observada durante a germinao. Plantas de tomateiro no mutantes (WT) so exemplos de plantas que germinam no escuro, porm sementes de au possuem baixa taxa de germinao quando postas no escuro, mostrando que o ndice de fitocromo ativo nas sementes bastante reduzido (Kendrick and Georghiou 1991).

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Figura 8: Fentipo do mutante aurea (au) de tomateiro. As plantas da esquerda so do tipo no mutante e as plantas da direita so do mutante au. Notar o aspecto estiolado das plantas e o baixo acmulo de clorofila, prevalecendo os carotenides (amarelo) que conferem a colorao dourada das plantas.

Outras mutaes com deficincia na percepo da luz podem ser observadas em Lycopersicon. O mutante fri (far red insensitive) aparece em plantas insensveis ao comprimento de onda do vermelho-extremo. O acmulo de fitocromo tipo A (phyA) em plantas que crescem sob VE a tentativa da inibio do alongamento do hipoctilo durante o estiolamento, e a deficincia no acmulo de phyA sob VE aps o perodo de germinao no escuro causam um estiolamento proeminente nestes mutantes (Figura 9). Porm, quando crescidos sob luz branca o fentipo de fri quase indistinguvel ao do tipo selvagem (Van Tuinen. et al. 1995a). Plantas deficientes temporariamente na percepo do comprimento de onda do vermelho, mutantes tri (temporary red insensitive), tambm foram encontradas em tomateiro. O fitocromo tipo B (phyB) o pigmento envolvido na percepo de plantas crescidas sob V, com o mesmo objetivo de inibio do alongamento do hipoctilo. Mutantes de tomateiro que estiolam sob este comprimento de onda so deficientes no acmulo de phyB (Figura 9), e um atraso temporrio por aproximadamente dois dias na inibio do alongamento do hipoctilo pode ser observado aps a transferncia do escuro para o V (Van Tuinen. et al. 1995b). As mutaes fri e tri possuem alteraes na sntese da subunidade protica do fitocromo, ou seja, na codificao da apoprotena PHYA e PHYB1, respectivamente. Alm da participao conjunta de phyA e phyB na inibio do alongamento do hipoctilo, outras respostas fotomorfogenticas parecem envolver ambos durante o ciclo de vida da planta.

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Figura 9: Mutantes deficientes no acmulo de phyA apresentam um estiolamento proeminente aps a transferncia do escuro para o VE (esquerda). Sob V, mutantes deficientes no acmulo de phyB estiolam por um perodo de aproximadamente dois dias aps a transferncia do escuro para o V.

Ainda em tomateiro, mutantes exibindo uma resposta exagerada luz tm sido descritos: high-pigment (hp), dark green (dg), Intense pigment (Ip) e atroviolacea (atv ). Estas mutaes conferem alta pigmentao ao caule, folha e fruto nesta espcie (Kendrick et al. 1994). A sntese do fitocromo nestes mutantes ocorre normalmente, sem alteraes na formao da apoprotena ou do cromforo, sugerindo que a alterao est na via de transduo de sinal equivalendo a uma superexpresso dos fitocromos durante a fotomorfognese. O mutante recessivo hp caracterizado pela produo de altos nveis de carotenos ( caroteno e licopeno) e xantofilas, alm de apresentar elevados ndices de vitamina C em frutos maduros. A colorao verde escura dos frutos imaturos (Figura 10) devido alta concentrao de clorofila, comparada a do tipo selvagem (Kerckhoffs et al. 1997). Alta pigmentao de antocianina no hipoctilo e em frutos imaturos de tomateiro so caractersticas encontradas especialmente em mutantes atv . O fentipo da mutao dominante Ip semelhante quele de hp.
Figura 10: Fentipo da mutao high pigment (hp) em tomateiro. O fruto da esquerda representa a forma no mutada (WT) e o fruto da direita o mutante hp. Notar a intensa colorao verde dos frutos imaturos. A colorao verde parece ser devido a um maior nmero de cloroplastos. Ao longo do amadurecimento h uma degradao da clorofila e os carotenides presentes nos cloroplastos se tornam evidentes. Esses carotenides juntamente com o licopeno sintetizado de novo conferem uma intensa colorao vermelha aos frutos deste mutante.

O carter recessivo das mutaes hp e atv sugere que os genes HP e ATV no mutados sejam repressores da expresso do fitocromo. Desse modo, a perda da funo dos genes HP e ATV permite ao fitocromo atuar de modo exagerado. Por outro lado, o carter dominante da

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mutao Ip sugere o gene IP seja um indutor da expresso do fitocromo, cuja mutao fez com que ele perdesse a capacidade de ser regulado (reprimido).

IV- G ERMINAO, FLORAO E FITOCROMO

Existem sementes que s germinam no escuro e outras que s germinam no claro

A germinao de sementes e a florao so os eventos mediados por fitocromos mais estudados no ciclo de vida da planta. Muitas espcies vegetais requerem luz para a germinao (ex. Latuca sativa cv Grand Rapids, ou seja, alface) de suas sementes, um processo que tem mostrado ser estimulado pela luz vermelha e inibido pelo vermelhoextremo. Muitas sementes germinam em completa ausncia de luz e outras inclusive no se germinam se forem iluminadas (ex. Cucumis anguria, ou seja, o maxixe). Isto indica que o fitocromo na forma ativa j estava presente nestas sementes ou a germinao no requer fitocromos. Algumas sementes necessitam de perodos alternados de luz e escuro para induzir a germinao, implicando no mecanismo de fotorreverso das formas do fitocromo. Sob contnua exposio ao comprimento de onda do V possvel observar em sementes de tomateiro altas propores de germinao. Sob VE, a germinao de sementes de tomateiro bastante inibida (Figura 11).

Figura 11: Sementes de tomateiro postas para geminar sob V apresentam elevadas propores de germinao (esquerda-superior). Sob VE a germinao inibida (esquerdainferior). O V foi fornecido por lmpadas fluorescentes sobre um filtro vermelho (direitasuperior). VE foi fornecido por lmpadas incandescentes sobre um filtro vermelho e um azul (direita-inferior). A incubadora mostrada aqui foi montada no laboratrio do Dr. Massanori Takaki (UNESP-Rio Claro). Notar as emisses branca e a amarelada caractersticas das lmpadas fluorescente e incandescente, respectivamente.

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O estmulo e a inibio da germinao de sementes pela luz so denominados fotoblastismo positivo e negativo , respectivamente. Para considerar estes dois processos necessrio tambm levar em conta, alm da proporo das formas do fitocromo (Fv/Fv+Fve), fatores como disponibilidade de gua, temperatura e oxignio, os quais so imprescindveis para a germinao. Sementes fotoblsticas positivas postas no escuro germinaro somente se um pulso de V suficiente para fotoconverter Fv a Fve for fornecido. O mecanismo de reverso pode ocorrer se um subseqente pulso de VE for suficiente para reverter forma inativa do fitocromo, inibindo a germinao (Figura 12). O fitocromo envolvido nesse tipo de resposta phyB, sendo essa uma RBF. Desse modo, tanto mutantes de tomateiro quanto de Arabidopsis deficientes em phyB possuem baixa germinao, mesmo sob luz V.

Figura 12: Sementes fotoblsticas positivas no germinam no escuro. O comprimento de onda do vermelho (V) promove a germinao de sementes no escuro, mas este efeito revertido por comprimento de onda do vermelho-extremo (VE). O ltimo pulso de luz durante o tratamento alternado entre V e VE determina a ocorrncia da germinao. Essa uma tpica RFB mediada por phyB.

Os efeitos do fitocromo na ativao do embrio da semente podem resultar, como exemplo, na expresso de determinados genes, sntese de protenas e mudanas nos nveis hormonais necessrios para a germinao. A florao de certas espcies vegetais regulada pelo comprimento da noite A periodicidade regular entre luz e escuro no desenvolvimento da planta conhecida como fotoperiodi smo . O efeito do fotoperodo na florao o aspecto mais evidente da presena ou ausncia da luz sobre as mudanas dos padres de desenvolvimento durante o ciclo de vida das angiospermas. Tanto o perodo de luz quanto o de escuro so necessrios para ocorrer uma resposta. O desenvolvovimento floral de muitas espcies depende do nmero de ciclos fotoperidicos dados, contudo, outras espcies dependem somente da

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temperatura, sem a necessidade de um estmulo fotoperidico. Considerando um ciclo de 24 horas, as plantas que requerem um estmulo do fotoperodo para florescerem podem ser divididas em dois grupos de acordo com os valores do fotoperodo crtico: plantas de dia curto (PDC ) e plantas de dia longo (PDL ). O primeiro grupo de plantas florescem quando comprimento do dia for menor ou igual ao seu fotoperodo crtico. PDL somente florescem quando o comprimento do dia for maior ou igual ao seu fotoperodo crtico. Uma conseqncia dessa definio que PDL conseguem florescer em luz contnua. Fotoperodo crtico o valor em horas diria de ilumino capaz de provocar a florao. No entanto, o perodo de escuro que induz a florao. Por exemplo, PDL com fotoperodo crtico igual 18 horas, deve florescer em perodos dirios de iluminao superiores a 18 horas ou em perodos dirios de escuro iguais ou inferiores a 6 horas (Figura 13). A importncia da durao do perodo de escuro na florao pode ser confirmada interrompendo uma noite longa, a qual foi submetida uma planta de dia longo, com um breve perodo de luz, permitindo que ocorra a florao. Um perodo de escuro durante um perodo longo de luz no far florescer uma planta de dia curto.

Figura 13: Florescimento em plantas de dia longo (PDL). Fotoperodo crticos diferentes so mostrados pelas linhas azul e vermelha. As PDL representadas pela linha azul devero florescer acima ou igual ao fotoperodo crtico de 10 horas. PDL representadas pela linha vermelha devero florescer acima ou igual ao fotoperodo crtico de 18 horas. Note que para cada fotoperodo crtico a durao de escuro completa o perodo de 24 horas.

A inibio da florao por noites interrompidas em plantas de dia curto foi um dos primeiros processos fisiolgicos propostos estar sob controle do fitocromo (Borthwick et al. 1952). Em muitas PDC, a noite interrompida inibindo a florao torna-se efetiva somente quando a luz fornecida suficiente para saturar a fotoconverso de Fv a Fve. O fitocromo total induzido por tratamento com V durante a interrupo da noite inibe a florao em PDC. A subseqente exposio ao VE reverte Fve a Fv, permitindo que ocorra a florao devido ao desaparecimento da saturao do fitocromo. A reversibilidade das formas do fitocromo

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tambm tem sido observada em plantas PDL, nas quais a noite interrompida por V promove a florao, e a subseqente exposio ao VE inibe esta resposta (Figura 14).

Figura 14: Controle da florao por luz V e VE. Interrompendo o perodo de escuro com um pulso de V, a florao inibida em PDC (ex.: Crisantemum) e promovida em PDL (ex.: Arabidopsis). O e efeito revertido com um pulso de VE. O ltimo pulso de luz durante o tratamento alternado entre V e VE determina a ocorrncia da florao.

A induo da florao envolve a translocao de substncias da folha para o pice caulinar Atualmente sabe-se que fitocromo do tipo I (phyA) estimulador de florao e que o tipo II (phyB, C, D, E, F) inibidor (Lin, 2000). Desse modo, em Arabidopsis, mutantes sem phyA possuem florescimento retardado e mutantes sem phyB, possuem florescimento acelerado. Uma das hipteses de que phyA seria um inibidor de uma substncia (hormnio) que, por sua vez, inibiria a florao. importante ressaltar que, embora a resposta fotoperidica seja percebida na folha, a resposta da florao ocorre no pice caulinar. Tal distribuio espacial requer a presena de substncia inibidoras ou estimuladoras capazes de serem translocadas. Experimentos de enxertia confirmam a presena de tais substncias (Figura 15). Esses experimentos levaram alguns pesquisadores, ainda na dcada de 30, a postularem a existncia de um hormnio denominado florgeno. Muitas tentativas sem sucessos de isolar e caracterizar este hormnio hipottico tm sido realizadas no intuito de compreender os mecanismos de interao com fitocromos.

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Figura 15: Experimento de enxertia sugerindo a existncia do florgeno. Planta de dia curto (Chalonke sp. ) mantida nessa condio (DC) floresce, o mesmo no ocorrendo com aquela mantida sob dia longo (DL). A enxertia do pice caulinar da planta mantida sob dia DL na planta induzida por DC promove a converso do pice vegetativo em reprodutivo (florescimento), mesmo em condies de DL. Esse experimento sugere que uma substncia (florgeno?) foi translocada, provavelmente atravs do floema, da planta induzida (fonte) para o pice da planta no induzida (dreno).

Alguns candidatos a florgeno j apareceram ao longo de dcadas, mas nenhum deles conseguiu perfazer todos os requisitos esperados. Como a aplicao do hormnio giberelina (GA) capaz de promover florao em PDL mantidas em condies de DC, ele tem sido um candidato a florgeno (Bernier et al., 1988). Um fato interessante que mutantes de Arabidopsis (uma PDL facultativa) incapazes de produzir GA so capazes de florescer em DL, mas no em DC. Contudo, o mesmo tipo de mutao em tomateiro, uma planta que no responde a fotoperodo para florescimento, no causa alteraes no florescimento. Anlises genticas tm demonstrado que existem genes especficos envolvidos na induo floral. Um desses genes LEAFY, o qual foi isolado em mutantes de Arabidopsis. Plantas transgnicas de Populus sp. superexpressando o gene LEAFY floresceram com 8 meses de idade (Coupland, 1995), o que surpreendente se considerarmos que essa espcie normalmente demora 8 anos para o primeiro florescimento. A constatao de que GA induz o gene LEAFY em Arabidopsis (Blzquez et al., 1998) refora a idia de que esse hormnio importante para a florao em algumas espcies vegetais, mas pouco provvel que ele seja o florgeno. Recentemente, foi demonstrado que mRNAs so capazes de se translocarem via floema e alterarem o programa de desenvolvimento do pice caulinar (Kim et al., 2001). Tal experimento leva hiptese de que o chamado florgeno poderia ser o mRNA de uma gene estimulatrio da florao, tal como o gene LEAFY. V- F UNO ECOLGICA DO FITOCROMO O fitocromo importante para que as plantas possam competir pela luz nos ecossistemas A interpretao dos sinais trazidos pela luz do ambiente e as adaptaes morfogenticas pelas plantas implicam em uma significncia ecolgica particular dos fitocromos. Por exemplo, em um ambiente onde as plantas se desenvolvem sob baixa luminosidade, como sob o dossel de uma vegetao ou muito prximas uma das outras, a interao competitiva entre os indivduos desta vegetao determina o estabelecimento e a sobrevivncia das espcies. A competio pela luz em ambientes sombreados um fator que predomina durante o desenvolvimento da planta at que ela possa se reproduzir. A habilidade

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das plantas em ajustar seu desenvolvimento em resposta ao sombreamento requer mecanismos fotomorfogenticos inerentes s condies de luz disponveis. As folhas que recobrem uma vegetao funcionam como um filtro de luz do ambiente, e os comprimentos de ondas que alcanam as camadas inferiores da vegetao possuem baixos nveis energticos, prevalecendo menores propores de V/VE, pois a quantidade de clorofila presente nas plantas absorve seletivamente a luz V, enquanto transmite VE, reduzindo a razo V/VE. Para perceber as caractersticas dos sinais da luz que chegam sob o dossel, as plantas utilizam-se de fotorreceptores capazes de programar as respostas fotomorfogenticas. Nesse caso, o fitocromo pode servir como um indicador do grau de sombreamento de uma planta por outras plantas. Com o aumento do sombreamento, os valores de V/VE decrescem, promovendo a fotoconverso do Fve a Fv, e conseqentemente os nveis de Fve/Ftotal so reduzidos. Como resposta ao sombreamento e ao decrscimo nas propores de Fve/Ftotal, possvel observar nas plantas o alongamento do hipoctilo ou dos entrens (estiolamento) e a baixa sntese de clorofila. A estratgia de alcanar maiores extenses no corpo da planta tem como objetivo adquirir melhor qualidade de luz presente em camadas superiores da vegetao. As diferentes respostas de phyA e phyB ao VE e V, respectivamente, fornece planta a habilidade de inibir o estiolamento. Portanto, a fotomorfognese em ambientes sombreados depende de uma quantidade relativa de p hyA e phyB, bem como do V e VE disponvel. Na abertura de uma clareira de uma vegetao, onde o sol penetra intensamente com uma luz rica em V, a inibio do estiolamento mediada primeiramente por phyB. O efeito de phyA na inibio do estiolamento ocorre se o comprimento de onda predominante for VE. Porm, considerando a instabilidade de phyA, o qual degradado medida que a intensidade luminosa aumenta, posteriormente a resposta passa a ser mediada por phyB (Figura 16).

Figura 16: Efeitos de phyA e phyB na evitao sombra. Plantas crescendo em clareiras (ambiente rico em luz V) acumulam preferencialmente phyB. Plantas em condies sombreadas (ambiente rico em luz VE) acumulam phyA. Como phyA instvel, ao ser degradado ele posteriormente substitudo por phyB. Modificado de Taiz & Zeiger (1998).

Espcies de sol e de sombra respondem de modo diferente razo V/VE do ambiente As respostas dos vegetais quantidade de luz do ambiente variam muito entre as espcies. A maioria das plantas adaptadas sombra (umbrfilas) no responde diminuio da proporo Fve/Ftotal, promovido pelo enriquecimento de VE (Figura 17). Por outro lado, aquelas plantas adaptadas ao sol e que, justamente por isso, possuem eficientes mecanismos para evitar a sombra precisam alocar reservas para o aumento do alongamento do entren. O

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preo pago por esse gasto extra de reservas costuma ser a diminuio da rea foliar e a inibio das gemas laterais.

Figura 17: Plantas tpicas de sol e de sombra respondem de modo diferente s mudanas na qualidade da luz. medida que aumenta a radiao do tipo V, h um maior acmulo da forma ativa do fitocromo (Fve), aumentando a razo Fve/Fv (ou Fve/Ftotal), o qual inibe o estiolamento das plantas de sol. As plantas de sombra, embora alterem as propores das formas (Fv para Fve) e tipos (phyA para phyB) de fitocromo, no respondem com um correspondente estiolamento ou desestiolamento. Pode-se conjecturar que essas plantas possuem alteraes na via de transduo de sinal do fitocromo.

A germinao dependente de fitocromo favorece o estabelecimento das ervas daninhas Um outro interessante mecanismo ecolgico envolvendo fitocromo o aproveitamento da qualidade e durao da luz no processo de germinao de sementes de plantas daninhas. Essas plantas geralmente possuem sementes de tamanho pequeno e germinao dependente da luz. Tais sementes so facilmente dispersas e enterradas durante a preparao do solo para a agricultura. Sementes de plantas daninhas experimentam perodos prolongados de escuro sob o solo, at que, novas operaes agrcolas que provocam o revolvimento do solo expem um grande nmero destas sementes luz. Como o revolvimento do solo para o plantio est associado com o emprego de adubos, torna-se muito compensatrio para as plantas daninhas germinarem nessas condies. Diferente de outras sementes, um rpido feixe de luz suficiente para induzir a germinao de quantidades significativas de sementes de ervas daninhas, um processo mediado por fitocromos. A habilidade dessas sementes em germinar sob breves feixes de luz interpretada como uma transio dos modos de ao do fitocromo, de resposta de fluncia baixa a resposta de fluncia muito baixa. O phyA opera como uma antena na percepo do breve fornecimento da luz. Freqentemente, sementes de plantas daninhas que requerem breves exposies luz para germinar no germinam quando expostas a perodos prolongados de intensa luminosidade, indicando que h necessidade de uma resposta de fluncia muito baixa mediada por phyA. VI A LUZ E OS HORMNIOS VEGETAIS Luz e hormnios controlam o desenvolvimento vegetal

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Praticamente todos os eventos fisiolgicos influenciados pela luz, e conseqentemente pelos fotorreceptores, so conhecidos efeitos de diferentes classes hormonais, tais como auxina, citocinina, giberelina, cido abscsico, etileno e brassinoesteride. Nesse sentido, os hormnios vegetais regulam o alongamento caulinar, a germinao de sementes, a sntese de clorofia, o florescimento e a tuberizao. No obstante, at o presente tem se pouco conhecimento a cerca dos mecanismos envolvidos na interao entre hormnios vegetais e fotomorfognese. A inibio do alongamento celular por comprimentos de ondas do azul, vermelho e vermelho-extremo, mediadas por criptocromos e fitocromos, respectivamente, foi sugerida sofrer interaes significativas com a auxina (AIA), apesar de no ser o nico fator envolvido neste processo. O uso dos mutantes fotomorfogenticos fri e tri de tomateiro, e dos duplos mutantes dos mesmos gentipos, confirmam o envolvimento de phyA e phyB na regulao dos nveis de auxina encontrados (Van Tuinen et al. 1995a; Kerckhoffs et al. 1996). Kraepial et al. (1995) estabeleceram correlaes entre deficincia de fitocromo e altos nveis de auxina, utilizando mutantes de tabaco defectivos para sntese do cromforo. As relaes entre cido abscsico (ABA) e luz parecem ser muito complexas, devido s atividades sinergsticas e antagnicas entre estes dois fatores. Em mutantes de tabaco deficientes na sntese do cromforo foram observados maiores acmulos de ABA comparados aos do tipo selvagem. O melhor processo fisiolgico envolvendo luz e atividade hormonal, tem sido descrito para giberelinas (GAs). Embora luz e giberelinas controlem o alongamento do hipoctilo em algumas espcies, poucos estudos suportam a hiptese de que a luz aja alterando as atividades de GA. Entretanto, alteraes nos nveis de fitocromo tm mostrado afetar os nveis de GA em tabaco. Quanto germinao de sementes, embora GA seja um dos principais hormnios envolvidos, no h evidncias de que a ao do fitocromo nesse processo seja mediada por GA. As citocininas (Cks) e a luz causam efeitos similares na planta, como exemplo, no desenvolvimento dos cotildones e das folhas, no controle da dominncia apical e na diferenciao dos cloroplastos. A transcrio de numerosos genes do cloroplasto induzida tanto pela luz quanto por Cks (Cohen et al. 1998; Bracale et al. 1998). Em mutantes de tabaco com alteraes nos nveis de fitocromos, foi observada metade dos nveis de Cks comparados aos do tipo selvagem, sugerindo um controle dos nveis de Cks pela luz. Em muitos casos, luz e etileno induzem respostas opostas na planta. A aplicao de etileno inibe os efeitos estimulatrio da luz na taxa de expanso foliar em plntulas de ervilha. Os tratamentos com luz em tecidos estiolados so freqentemente seguidos por um decrscimo nos nveis de etileno. Este ltimo efeito tem sido particularmente estudado em tecido do gancho plumular de feijoeiro. O etileno promove a manuteno do gancho plumular enquanto a luz promove a abertura, diminuindo a produo de etileno. As mudanas no metabolismo da planta envolvendo luz e etileno, mediadas por fotorreceptores, ainda permanecem obscuras. Os hormnios brassinoesterides parecem estar diretamente envolvidos na fotomorfognese Os brassinoesterides (BRs) so hormnios necessrios para que haja um alongamento dos caules (estiolamento) na ausncia da luz, devido ao estmulo da expanso celular. Evidencias para isso so o fato de muitos mutantes que no estiolam na ausncia da luz possurem alteraes na biossntese de BR. Mutantes com deficincia nos nveis de BR j foram caracterizados em Arabdopsis (Li et al., 1996); arroz (Mori et al., 2002) e tomateiro (Bishop et al., 1999) (Figura 18). Dependendo da espcie e da severidade das mutaes, alguns mutantes cultivados no escuro apresentam caractersticas de plantas que se

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desenvolvem sob luz, como expanso do cotildone, abertura do gancho plumular e expresso normal de genes regulados pela luz. Em outras palavras, os mutantes sem BR costumam possuir fentipo oposto ao dos mutantes sem fitocromo. Desse modo, enquanto os mutantes sem BR tendem a ser desestiolados no escuro (Figura 18), os mutantes sem fitocromo apresentam se estiolados mesmo no claro (Figura 8). As vias metablicas dependentes da expresso de genes envolvidos na regulao das caractersticas dos mutantes em BR possivelmente esto associadas aos mecanismos de atividades de fotorreceptores. Portanto, as evidncias de como os fotorreceptores participam da sinalizao dos eventos de inibio e estmulo das respostas aos BRs necessitam ser elucidadas para uma melhor compreenso do modo de ao dos fitocromos.

Figura 18: Fentipo do mutante de tomateiro deficiente em brassinoesteride ( dwarf ). Planta do mutante crescida no escuro (A) apresenta o comprimento do hipoctilo semelhante ao da planta crescida sob luz (B). Enquanto o tipo selvagem (WT) estiola no escuro, o mutante dwarf apresenta-se desestiolado. Essa constatao sugere que os brassinoesterides sejam essenciais para o estiolamento, sendo a luz um inibidor de sua biossntese ou ao.

Apesar dos esforos em compreender as relaes entre luz e hormnios, muito ainda necessita ser desvendado. Em suma, alguns efeitos da luz podem ser amplificados ou restringidos por hormnios vegetais, e mudanas significativas dessas substncias freqentemente ocorrem aps os tratamentos com luz. Entretanto, no est claro o envolvimento direto de fotorreceptores e hormnios em muitos eventos que ocorrem na planta.

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