DISCIPLINA DE FARMACOGNOSIA II PROF.

PATRICIA BAIER KREPSKY ANLISE FITOQUMICA PRELIMINAR

Extrato: macerado, preparado ao abrigo da luz (frasco mbar), com agitaes ocasionais, durante 4 dias, empregando uma mistura hidroalcolica (etanol:gua, 1:1) como extrator. # Anotar os caracteres organolpticos do extrato: Cor: Odor: # Realizar as seguintes reaes qumicas. AULA 1: DIA 04 DE DEZEMBRO 1. Reao com cloreto frrico - reao geral para polifenlicos Transferir 1 ml do extrato bruto filtrado para um tubo de ensaio. Adicionar 1-2 gotas de soluo de cloreto frrico a 2,5%. Verificar se h desenvolvimento de cor (verde musgo). Se necessrio, diluir com gua para melhor visualizao da cor desenvolvida. 2. Reao da cianidina ou de Shinoda - reao para flavonides Transferir 5 ml do extrato bruto filtrado para cpsula de porcelana e aquecer at secura em banho-maria, cuidando para que no haja carbonizao do resduo. A evaporao do solvente tambm pode ser efetuada em evaporador rotatrio. Retomar o resduo em 1,5 ml de etanol e verter para um tubo de ensaio. Adicionar cuidadosamente 12 fragmentos de magnsio (ou uma pitada de magnsio em p). Verter cuidadosamente, pelas paredes do tubo de ensaio, cerca de 0,5 ml de HCl conc. - CUIDADO COM POSSVEIS PROJEES!. Observar a colorao. A maioria dos flavonides, na presena de magnsio e cido clordrico, reage desenvolvendo coloraes variveis em funo de suas estruturas qumicas, conforme a descrio abaixo: Flavona - amarelo a vermelho Flavonol e Diidroflavonol - vermelho a vermelho-sangue Flavanona - vermelho a violeta Derivados antocinicos - vermelho tornando-se rosa Chalconas, auronas, diidrochalconas, isoflavonas, isoflavanonas - reao negativa, sem colorao 3. Reao da gelatina - deteco de taninos Transferir 2 ml do extrato para uma cpsula de porcelana e evaporar o etanol. Transferir o restante para um tubo de ensaio e adicionar uma soluo de gelatina a 2,5%, gota a gota. A formao de precipitado indica reao positiva para taninos. 4. Reao de Stiasny - diferenciao de taninos hidrolisveis e condensados

Submeter a refluxo por 30 minutos, 5 ml do extrato + 40 ml de gua + 5 ml do reativo de Stiasny*. Os taninos condensados originam um precipitado vermelho (flabafenos). Os taninos hidrolisveis permanecem em soluo e podem ser assim detectados: Filtrar na capela (por causa do formol) e colocar 5 ml do filtrado em tubo de ensaio + acetato de sdio em excesso + 1-2 gotas da soluo de FeCl3 a 2,5%. Reao positiva: colorao azul-acinzentado escuro. * Reativo de Stiasny - PREPARAR NO MOMENTO DE USO - 1,5 ml de HCl conc. + 3,5 ml de formol. 5. Reao de Borntrger - deteco de antraquinonas Em um balo de fundo redondo de 100 ml, colocar 5 ml do extrato + 30 ml de HCl 2N + 2 ml de uma soluo de FeCl3. Montar o balo no sistema de refluxo, adicionar pedras de porcelana, e manter sob ebulio durante 15 minutos. Deixar esfriar e filtrar para uma ampola de decantao. Desprezar o resduo slido. Extrair o hidrolisado (fase aquosa) com 10 ml de hexano. Concentrar o extrato hexnico, verter para tubo de ensaio e adicionar 2 ml de uma soluo de NH4OH 50%. Agitar e observar a cor na fase aquosa. #. Para as reaes 6, 7, 8 e 9, proceder da seguinte forma: Evaporar em cpsula 6 ml do extrato. AULA 2: DIA 11 DE DEZEMBRO Continuao: Retomar o resduo em 1 ml de MeOH e diluir com + 4 ml de diclorometano. Distribuir este extrato em 4 tubos de ensaio. Evaporar o solvente em banhomaria. 6. Reao de Liebermann-Burchard - deteco de ncleos triterpnicos e esterides Adicionar pelas paredes do tubo 1, o reativo de Liebermann-Burchard (= 1 ml de anidrido actico e gotas de cido sulfrico concentrado). Observar o aparecimento de colorao, aps 10 a 15 minutos de repouso. Cor azul ou verde: provavelmente ncleo esteroidal. Cor vermelha, rosa, prpura ou violeta: provavelmente ncleo triterpnico. Provvel fundamento da reao de Liebermann-Burchard: esta reao particular dos compostos esterides e triterpnicos, explica-se pelo fato do reagente de LiebermannBurchard promover desidratao e desidrogenao no ncleo fundamental, formando derivados corados com duplas conjugadas. No entanto, este mecanismo ainda no foi totalmente comprovado. Nos esterides: 2 ligaes duplas conjugadas no anel B ou 1 ligao dupla e um grupo metileno desimpedido no C7 (podendo sofrer oxidao e desidratao) seriam essenciais para a reao. Nos triterpenides: parece que o responsvel pela reao o grupo metileno do C11 (anel C). 7. Reao de Salkowsky - deteco de esterides Adicionar pelas paredes do tubo 2, 1 ml do reativo de Salkowsky (= H2SO4 concentrado). Observar o aparecimento de colorao. Cor castanho-escuro-avermelhado: ncleo esteroidal.

8. Reao de Keller-Killiani - deteco de desoxioses em extremidades livres dos heterosdeos cardiotnicos Adicionar ao tubo 4, 0,5 ml do reativo de Keller-Kiliani para dissolver o resduo clorofrmico. Verter lentamente esta soluo para um outro tubo de ensaio que j contenha 3 ml de H2SO4 conc., de modo que no se misturem os dois lquidos. Heterosdeos com desoxiacares nos extremos da cadeia formam um anel marromavermelhado no nvel de separao dos dois lquidos e a fase actica cora-se lentamente de azul-esverdeado. Reativo de Keller-Kiliani: misturar, no momento de usar, 1,5 ml de cido actico glacial + 1 gota da soluo de cloreto frrico cida (1g de FeCl 3 + 10 ml de H2O destilada + 0,2 ml de HCl conc.). 9. Reao de Kedde - caracterizao do anel lactnico pentagonal insaturado dos cardenoldeos (no ser realizada) Adicionar ao tubo 3, 1 ml de etanol a 50% + 1 ml do reativo de Kedde. Se a soluo corar-se, em 5 minutos, de castanho-avermelhado a vermelho-violeta reao positiva. Reativo de Kedde: misturar, no momento de usar, 0,4 ml (8 gts.) da soluo metanlica do cido 3,5 - dinitrobenzico a 2% (soluo recente) + 0,6 ml (12gts.) da soluo metanlica de KOH 1N. 10. Teste de formao de espuma Transferir 10 ml do extrato aquoso para uma cpsula de porcelana ou balo de fundo redondo e evaporar o etanol, em banho-maria ou evaporador rotatrio. Transferir o extrato restante para um tubo de ensaio grande e agitar vertical e fortemente o tubo, durante 1 minuto. Deixar repousar e observar o aparecimento de espuma. Em caso afirmativo, adicionar 1 ml de HCl 2N e observar se a espuma persiste.