CINTICA ENZIMTICA (MACERACIN)

Juan Pablo Arias1; Gina Marcela vila Castao2

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Estudiante de Ingeniera Qumica. UN-Sede Orinoquia. Km 9 va Cao Limn-Arauca. juparias@unal.edu.co.

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Estudiante de Ingeniera Ambiental. UN-Sede Orinoquia. Km 9 va Cao Limn-Arauca. gmavilac@unal.edu.co.

RESUMEN En esta prctica se realizaron procedimientos para el estudio de la cintica enzimtica de la reaccin entre perxido de hidrogeno y la enzima proveniente de la papa amarilla. Por medio de la maceracin de la papa se extrajo la enzima y se hizo reaccionar con el en un montaje de recoleccin de gases y as determinar el volumen del gas desprendido en la reaccin, simultneamente se obtuvo en cuenta el tiempo en el que sucedi la reaccin para calcular la velocidad. Adems se experimentaron y comprendieron los factores que afectan la velocidad de una reaccin qumica como el efecto de la concentracin, el efecto de la temperatura el efecto del cambio de pH. Para esta prctica se utilizaron materiales como el mortero con mano y la para amarilla para la maceracin, un montaje para recoleccin de gases, una jeringa con , NaOH para modificar el pH y los dems implementos bsicos que permitieron finalizar la prctica. INTRODUCCION

Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones bioqumicas. Los catalizadores disminuyen la energa de activacin de una reaccin, al disminuir la energa de activacin aumenta la velocidad la cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin de equilibrio qumico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio. [1] Hay factores que afectan la actividad enzimtica: Concentracin del reactivo. A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin. Concentracin de la enzima. Siempre y cuando haya reactivo disponible, un aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite. Temperatura. Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva
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demasiado, la enzima pierde su actividad. Por el contrario si se disminuye la temperatura la velocidad de disminuye porque se generan menos choques entre partculas. pH. El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, si se aumenta el pH y se obtiene uno muy bsico, la reaccin no sucede. [2] La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada.) Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente: [3]

2H2O2 + CATALASA Velocidad de una reaccin

O2(g)

+ 2 H2 O

La velocidad de una reaccin qumica es la cantidad de producto que sta genera, o la cantidad de reactivo que consume en una unidad de tiempo. Por lo tanto, la velocidad de descomposicin del agua oxigenada puede medirse segn la cantidad de oxgeno que se desprende, por ejemplo, en un minuto. Esto se logra midiendo el tiempo y el volumen de gas producido utilizando un montaje para recoleccin de gases.

PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS Se utilizaron dos vasos de precipitados de 250 mL, un baln de fondo plano, un mortero con mano, una probeta de 50 mL, una probeta de 100 mL, una manguera para recoleccin de gases, un termmetro, una jeringa, para la extraccin de la enzima papa amarilla, para la filtracin tela de 30x30 cm, agua oxigenada ( ), NaOH 2M.

PROCEDIMIENTO Para la extraccin de la enzima se pel y pico ms de 30 gramos de papa con ayuda del cuchillo, seguidamente se macero hasta obtener la pulpa de lo pesado, se filtr lo macerado a travs de un trozo de tela se dej reposar y se afor a 100 mL con agua destilada. MEDIDA DE LA ACCIN ENZIMTICA Para determinar la medida de la accin de la enzima en la reaccin se construy el montaje de recoleccin de gases sobre agua a una temperatura de 37 C. En el baln del montaje se deposit 10 mL del extracto enzimtico, se llev a 37 C por medio del bao mara y se le adicionaron por

medio de la jeringa 2 mL de , se agit y con un cronometro se determin el tiempo en que tardaba el oxgeno gaseoso en salir. EFECTO DE LA CONCENTRACIN Para determinar el efecto de la concentracin durante la reaccin se realizaron los pasos anteriores excepto el que en vez de adicionar a la enzima 2 mL de perxido de hidrogeno se adicionaron 4 mL y tambin se determin el tiempo trascurrido con respecto a la cantidad de oxigeno recolectado. EFECTO DEL CAMBIO DE pH Para medir este efecto antes de adicionarle los 2 mL de H2O2 se hizo un cambio de pH de 7 a 14 adicionando a la enzima 1 mL de Hidrxido de sodio (NaOH), una vez cambiado el pH se siguieron los pasos del primer procedimiento. EFECTO DE LA TEMPERATURA Para determinar el efecto de la temperatura en la reaccin se sigui el procedimiento inicial pero se le disminuy la temperatura a 14C adicionando al bao mara cubos de hielo.

Con los datos recolectados se construyeron las tablas y graficas necesarias para realizar el anlisis de los resultados.

ANLISIS DE RESULTADOS

REACCIN DEL H2O2 Y LA ENZIMA H2O2 + ENZIMA ACCIN ENZIMTICA TABLA #1. DATOS DEL VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO. t (s)
0 18,41 20,31 25,17 29,19 35,88 45,61

O2(g)

+ H2O

VO2 (mL)
0 10 14 16 18 20 22

En esta tabla se registraron los datos correspondientes a la recoleccin del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin.
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GRAFICA #1. TIEMPO VS VOLUMEN DE O2

30 25 20 15 10 5 0 0 10 20 30 40 50 Series1 Lineal (Series1) R = 0,9221

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto al volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal adecuando entre los valores, aunque se registraron pocos datos. TABLA 2. DATOS DEL LN del VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t (s)
0 18,41 20,31 25,17 29,19 35,88 45,61

ln VO2 0 2,30258509 2,63905733 2,77258872 2,89037176 2,99573227 3,09104245

En esta tabla se registraron los datos correspondientes al ln del volumen recolectado del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin.

GRAFICA #2. TIEMPO VS Ln VOLUMEN DE O2

4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 0 10 20 30 40 50 Series1 Lineal (Series1) R = 0,6479

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto al ln del volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal muy regular entre los valores, aunque se registraron pocos datos.

TABLA 3. DATOS DEL 1/VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t (s)
0 18,41 20,31 25,17 29,19 35,88 45,61

1/VO2 0 0,1 0,07142857 0,0625 0,05555556 0,05 0,04545455

En esta tabla se registraron los datos correspondientes a 1 dividido en el volumen recolectado del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin.

GRAFICA #3. TIEMPO VS 1/ VOLUMEN DE O2

0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 10 20 30 40 50 R = -0,372 Series1 Lineal (Series1)

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto 1 dividido en el volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal muy malo entre los valores, aunque se registraron pocos datos. ANALISIS: En este experimento se trabajaron en condiciones ptimas de temperatura, concentracin y pH=7 lo cual permiti el normal desarrollo de la reaccin para obtencin de oxigeno gaseoso.

EFECTO DE LA CONCENTRACION EN LA VELOCIDAD DE LA REACCION TABLA 4. DATOS DEL VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t(s) 0 13,55 16,6 19,2 21,97 25,7 29,66 33,57 37,58 42,24 46,63 51,85

VO2 0 12 15 18 23 26 29 32 35 37 40 43 6

57,27 64,19 71,76 80,58

45 47 48 50

En esta tabla se registraron los datos correspondientes a la recoleccin del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin. Aumentando de la concentracin de perxido durante la reaccin.

GRAFICA #4. TIEMPO vs VOLUMEN DE O2

70 60 50 40 Series1 30 20 10 0 0 20 40 60 80 100 Lineal (Series1) R = 0,8582

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto al volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal adecuando entre los valores, aunque se registraron pocos datos.

TABLA 5. DATOS DEL LN DEL VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t(s) 0 13,55 16,6 19,2 21,97 25,7 29,66 33,57 37,58 42,24 46,63 ln VO2 0 2,48490665 2,708050201 2,890371758 3,135494216 3,258096538 3,36729583 3,465735903 3,555348061 3,610917913 3,688879454 7

51,85 57,27 64,19 71,76 80,58

3,761200116 3,80666249 3,850147602 3,871201011 3,912023005

En esta tabla se registraron los datos correspondientes al ln del volumen recolectado del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin. Se obtuvieron estos datos aumentando la concentracin de perxido durante la reaccin.

GRAFICA #5. TIEMPO VS Ln VOLUMEN DE O2

7 6 5 4 Series1 3 2 1 0 0 20 40 60 80 100 Lineal (Series1) R = -0,518

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto al ln del volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal muy regular entre los valores, aunque se registraron pocos datos.

TABLA 6. DATOS DEL 1/ VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t(s) 0 13,55 16,6 19,2 21,97 25,7 29,66 33,57 1/VO2 0 0,083333333 0,066666667 0,055555556 0,043478261 0,038461538 0,034482759 0,03125 8

37,58 42,24 46,63 51,85 57,27 64,19 71,76 80,58

0,028571429 0,027027027 0,025 0,023255814 0,022222222 0,021276596 0,020833333 0,02

En esta tabla se registraron los datos correspondientes a 1 dividido en el volumen recolectado del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin.

GRAFICA #6. TIEMPO VS 1/ VOLUMEN DE O2

0,09 0,08 0,07 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 0 20 40 60 80 100 R = 0,1995 Series1 Lineal (Series1)

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto 1 dividido en el volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal muy malo entre los valores, aunque se registraron pocos datos. ANLISIS: Al aumentar la concentracin del perxido de hidrgeno aument notoriamente el volumen y la cantidad de gas recolectado ya que al haber mayor cantidad de partculas que reaccionen (colisionen) por lo tanto aumenta la velocidad de la reaccin. [4] Cuando se aumenta la concentracin del sustrato en esta caso del perxido de hidrogeno, aumenta la velocidad porque todos los sitios activos estn saturados y cuando alcanza la mxima velocidad, esta se hace constante.[5]

EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA REACCION A 14C TABLA #7. DATOS DEL VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t(s) 0 24 26 36 39 66

VO2 0 10 12 14 16 18

En esta tabla se registraron los datos correspondientes a la recoleccin del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin. La informacin recolectada se obtuvo en base a la temperatura 14c GRAFICA #7. TIEMPO VS VOLUMEN DE O2
25 R = 0,7851 20

15 Series1 10 Lineal (Series1)

0 0 20 40 60 80

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto al volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal adecuando entre los valores, aunque se registraron pocos datos.

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TABLA #8. DATOS DEL LN DEL VOLUMEN DE O2 RECOLECTADO.

t(s) 24 26 36 39 66

ln VO2 2,302585093 2,48490665 2,63905733 2,772588722 2,772588722

En esta tabla se registraron los datos correspondientes al ln del volumen recolectado del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin. Segn las condiciones de la temperatura a 14c.

GRAFICA #8. TIEMPO vs ln VOLUMEN DE O2

3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 0 20 40 60 80 R = 0,598 Series1 Lineal (Series1)

Esta grfica representa la relacin del tiempo con respecto al ln del volumen, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal muy regular entre los valores, aunque se registraron pocos datos. GRAFICA #9 TIEMPO vs 1/VOLUMEN O2
t(s) 0 24 26 36 39 66 1/VO2 0 0,1 0,083333333 0,071428571 0,0625 0,055555556

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En esta tabla se registraron los datos correspondientes a 1 dividido en el volumen recolectado del oxgeno y el tiempo gastado durante la reaccin. GRAFICA #9. TIEMPO VS 1/ VOLUMEN DE O2
0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 20 40 60 80 R = 0,1371 Series1 Lineal (Series1)

Esta grafica representa la relacin del tiempo con respecto 1 dividido en el volumen recolectado de acuerdo al descenso de temperatura, se puede observar que el coeficiente de correlacin muestra un ajuste lineal muy malo entre los valores, aunque se registraron pocos datos. ANALISIS: segn los resultados obtenidos se puede determinar que al bajar la temperatura se disminuye la velocidad de la reaccin por ende la accin de la enzima en la reaccin disminuye lo que hace que las partculas tenga menos interaccin entre si y el volumen del gas producido sea menor. [4]

EFECTO DEL CAMBIO DEL pH: DE 7 A 14 En este experimento la reaccin no sucedi debido a que la condicin ptima para que la enzima reaccione es de un pH cercano a 7 porque aumenta la velocidad, en condiciones tan bsicas la enzima no se activa y por tanto la reaccin no sucede. [5]

ANLISIS DE LAS GRAFICAS: Despus de representar grficamente los resultados del experimento se determin que la reaccin era de orden 0 ya que de las grficas realizadas del tiempo vs volumen de O2, del tiempo vs logaritmo natural de volumen de O2 y del tiempo vs 1/volumen de O2, la primera grfica tuvo el coeficiente de correlacin ms adecuado.
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VELOCIDAD DE LA REACCION SEGN LAS CONDICIONES

t(s)

VO2

con 2 mL de

VO2

con 4 mL de

VO2

con pH 14

VO2

con temperatura

perxido de hidrogeno

perxido de hidrogeno

de 14C

15,98 8 15 0 0 22,74 15 20 0 8 27,18 18 28 0 18 Tabla #10 influencia de las condiciones segn la velocidad en un mismo tiempo. Clculos a los 2mL:

Clculos a los 4 mL:

Clculos con pH 14:

Clculos a temperatura de 14C

CONCLUSIONES El aumento de la concentracin del H2O2 en la reaccin con una enzima proveniente de la papa amarilla permiti acelerar la formacin de los productos. Mediante las grficas realizadas del tiempo vs volumen de O2, del tiempo vs logaritmo natural de volumen de O2 y del tiempo vs 1/volumen de O2 se determin que la reaccin era de orden 0 ya que la primera grfica tuvo el coeficiente de correlacin ms adecuado. La adicin de NaOH a la reaccin disminuye el pH y hace que la reaccin no suceda.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFIAS 1. 2. 3. 4. http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#e 14/11/11 http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm 14/11/11

http://html.rincondelvago.com/efecto-del-ph-en-la-enzima-catalasa.html

Palomeque, L; Molina M. Universidad Nacional de Colombia -Sede Caribe. San Andrs Islas.

5. www.telmeds.org/.../Biologa-135a-laboratorio-Resumen-seg...

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