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TRANSAMINASE OXALACTICA (AST/GOT)

INDICAO MDICA DO EXAME A determinao da aspartato aminotransferase ou transaminase glutmico oxalactica (AST/GOT) em amostras de sangue til na avaliao da funo heptica. PRINCPIO A transaminase oxalactica promove a transferncia de grupamentos amina de alfa aminocidos para alfacetocidos. TGO L-Aspartato + Alfacetoglutarato - Glutamato + Oxalacetato

O oxalacetato formado medido atravs da formao de hidrazona, que tem intensa cor em meio alcalino. AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Tipos de amostra Usar soro ou plasma (EDTA, heparina) ou lquido cefalorraquidiano. Armazenamento e estabilidade da amostra A atividade enzimtica estvel por 4 dias entre 2 8 C e 2 semanas a 10 C negativos. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra Presena de hemlise ou sinais de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Transaminase Oxalactica, Catlogo 52 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010031

Substrato: Armazenar entre 2 8 C. Contm tampo 67 mmol/L pH 7,4, cido alfacetoglutrico 2 mmol/L, cido L-asprtico 99 mmol/L, estabilizadores e azida sdica 15,4 mmol/L. Reagente de Cor: Armazenar entre 2 8 C. No congelar. Contm 2,4 dinitrofenilhidrazina 1,0 mmol/L e cido clordrico 1,0 mol/L. NaOH Estoque: Armazenar entre 2 8 C. Reagente custico. Contm hidrxido de sdio 10 mol/L. Padro - Piruvato de Sdio 22 mg/dL: Armazenar entre 2 8 C. Armazenar bem vedado para evitar evaporao. Contm Piruvato de Sdio 2 mmol/L. NaOH de Uso: Transferir quantitativamente o contedo do frasco n 3 (20 mL) para um balo volumtrico de 500 mL, completar at a marca com gua destilada ou deionizada livre de CO 2 e homogeneizar. Estvel 12 meses em recipiente de plstico, entre 15 25 C. Precaues e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais.

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3. O substrato contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 505 nm ou filtro verde (490 a 540 nm). 2. Pipetas para medir amostras e reagentes. 3. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C). 4. Cronmetro. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. CURVA DE CALIBRAO Como o sistema de medida (Reitman-Frankel-U/mL) no proporcional atividade enzimtica, impossvel utilizar o mtodo do fator para clculo, sendo necessrio a preparao de Curva de Calibrao. Tomar 5 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Tubo n Padro (n 4) TGO substrato (n 1) gua destilada ou deionizada Reagente de Cor (n 2) NaOH de uso 1 mL ----1,0 0,2 1,0 10,0 2 mL 0,1 0,9 0,2 1,0 10,0 3 mL 0,2 0,8 0,2 1,0 10,0 4 mL 0,3 0,7 0,2 1,0 10,0 5 mL 0,4 0,6 0,2 1,0 10,0

Misturar e deixar na temperatura ambiente 20 minutos. Misturar e deixar na temperatura ambiente 5 minutos. Determinar as absorbncias ou T% em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero com gua destilada. A cor estvel 60 minutos. TRAADO DA CURVA DE CALIBRAO Traar a Curva de Calibrao correlacionando as leituras obtidas com os valores em Unidades/mL, expressos na tabela abaixo, utilizando papel linear (para absorbncias) ou monolog (para T%). Tubo n TGO (Unidades/mL) 1 zero 2 24 3 61 4 114 5 190

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PROCEDIMENTO Procedimento manual 1. Tomar 1 tubo de ensaio e proceder como a seguir: TGO Substrato (n 1) Teste 0,25 mL

2. Colocar em banho-maria a 37 C 2 minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. Amostra Reagente de Cor (n 2) NaOH de Uso 0,05 mL 0,25 mL 2,5 mL 3. Misturar e incubar em banho-maria a 37 C exatamente 60 minutos. 4. Misturar e deixar na temperatura ambiente 20 minutos. 5. Misturar e esperar 5 minutos. Determinar as absorbncias ou T% em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero com gua destilada. A cor estvel 60 minutos. Obter o valor de TGO usando a curva de calibrao. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos <0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. 3. Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. A diferena de um minuto no tempo de incubao desta dosagem introduz um erro de 3,3% nos resultados. RESULTADOS Unidade de medida Unidades/mL Converso de Unidades/mL para Unidade SI: U/L = U/mL x 0,482 Valores de referncia Soro: 4 a 36 Unidades/mL Os nveis na infncia so duas a trs vezes superiores queles encontrados nos adultos. LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade

Se o resultado obtido for maior que 190 Unidades/mL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L e proceder nova determinao. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 50 e 150 Unidades/mL. Indicar o
procedimento de diluio utilizado no laboratrio.

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Interferncias 1- A hemlise prejudica o teste devido a elevada concentrao de AST nas hemcias, fornecendo valores falsamente elevados. 2- Valores de Triglicrides entre 170 e 900 mg/dL produzem interferncia positiva que pode ser minimizada utilizando o branco de amostra: Misturar 3,0 mL de NaCl 150 mmol/L com 0,05 mL da amostra e medir a absorbncia em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero com gua destilada ou deionizada. Subtrair a absorbncia assim obtida, da absorbncia do teste e obter a atividade da transaminase oxalactica utilizando a curva de calibrao. 3- Para reviso das formas fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia, sugere-se consultar Clin Chem 1975; 21:1D-432D. SIGNIFICADO CLNICO Elevaes das transaminases ocorrem nas hepatites (viral e txica), na mononucleose, cirrose, colestase, carcinoma heptico primrio ou metasttico, pancreatite, traumatismo extenso e no choque prolongado. Nas hepatopatias agudas geralmente o valor da transaminase pirvica (ALT) excede o da oxalactica (AST). A AST est quase sempre elevada aps o infarto agudo do miocrdio. Esta comea a se elevar 6 a 12 horas aps a dor precordial, alcanando o pico mximo entre 24 a 48 horas, retornando aos valores de referncia aps o 5 ou 6 dia. Deve-se ressaltar que a sensibilidade e especificidade da dosagem de AST no diagnstico do infarto agudo do miocrdio so baixas, tornando a determinao desta enzima a menos indicada para este diagnstico. A uremia encontra-se associada queda da AST. Elevaes significativas da atividade da AST no lquor tm sido observadas em pacientes com acidentes cerebrovasculares. Se o nvel srico da enzima encontra-se tambm elevado, trata-se, provavelmente, de dano macio ao parnquima cerebral. Neoplasias envolvendo o crebro e a medula espinhal so acompanhadas de vrios graus de elevao na atividade da AST no lquor. Nos indivduos com meningite bacteriana tm-se, usualmente, valores dentro da faixa de referncia. Vrias drogas comumente usadas encontram-se relacionadas ao aumento da AST: izaniazida, fenotiazinas, eritromicina, progesterona, esterides, opicidos, indometacina, halotano, metildopa, aspirina em crianas, dentre outras. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Karmen A. J Clin Invest 1955;34:131. 2. Reitman S, Frankel S. Am J Clin Path 1957;28:56. 3. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co, 1970. 4. Varley H. Practical Clinical Biochemistry, Willian Heinemann Medical Book Ltd. 1967. 5. Wroblewski F, Cabaud P. Am J Clin Path 1957;27:235. 6. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-501. 7. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagentes Division, Scarborough, Canada, 1972 8. Transaminase Oxalactica, Instrues de Uso, Labtest Diagnstica.Labtest. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___