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4.4 Espectrofotometria de Absoro Ultravioleta/Visvel

Tcnica: espectrofotometria UV/VIS Equipamento: espectrofotmetro Determinao: absoro de luz (absorbncia)

4.4.1

Introduo:

Os mtodos ticos de anlise so um conjunto de mtodos de anlise qumica que empregam a luz, e se baseiam na interao da luz com a amostra, para quantificar as substncias. Esses mtodos so baseados na medida da quantidade de energia emitida ou absorvida pelas molculas e pelas espcies atmicas de interesse. Como so mtodos onde se emprega a luz como estmulo amostra, necessrio recordarmos: O QUE LUZ? REM = radiao eletromagntica = energia radiante = LUZ = partcula-onda Luz ou radiao eletromagntica uma forma de energia que transmitida atravs do espao a velocidades enormes (velocidade da luz = 300.00 km/s, no vcuo). Essa radiao pode ser descrita como onda com propriedades como comprimento de onda (), freqncia (f):

Mas, qual a importncia disso? por que cada substncia qumica presente na amostra interage com um tipo de luz; essa interao se d na forma de ABSORO ou EMISSO da luz em comprimentos de onda definidos (prprios da substncia que est sendo analisada, de acordo com suas propriedades qumicas e distribuio eletrnica).

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Parmetros que caracterizam a luz: Comprimento de onda (): Distncia entre 2 mximos sucessivos (duas cristas ou dois vales da onda), e medida em metros, centmetros, milmetros, nanmetros (nm = 109 m), ngstrons ( = 10-10 m). A tabela abaixo mostra a unidade de comprimento de onda para vrias regies espectrais:

Energia (E): Quando analisamos as emisses e absores de luz por um tomo de determinado elemento qumico, a radiao eletromagntica tratada como pacotes discretos de energia ou partculas chamadas ftons ou quanta. A energia do fton definida pela expresso: E= hxc sendo h a constante de Planck, 6,63x10-34 J.s , c a velocidade da luz no vcuo (3x108m/s) e o comprimento de onda, em metros. Como podemos classificar os tipos de radiao (luz) existentes? Os mtodos ticos so classificados de acordo com a regio do espectro eletromagntico envolvida na medida da absoro ou emisso da luz, podendo ser os raios X, a luz ultravioleta (UV), a luz visvel (composta pelas cores do arco ris), a luz infravermelha (IV), as mais importantes. O espectro eletromagntico o arranjo ordenado dos tipos de radiao eletromagntica conforme seus comprimentos de onda, na forma de tabelas ou quadros, como ilustrado nas figuras abaixo: ESPECTRO ELETROMAGNTICO: Veja abaixo os tipos de radiao eletromagntica (luz) existentes no planeta, e suas respectivas caractersticas:

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Raios gama uma forma de radiao altamente energtica, emitida a partir do ncleo de elementos radioativos. Raios X - radiao de alta energia que tem a capacidade de penetrar nos organismos, atravessando os tecidos de menor densidade e sendo absorvidos pelas partes densas do corpo, com dentes e ossos. ---Ultravioleta (UV) um tipo de radiao proveniente do Sol, retida em parte pela camada de oznio. Radiao visvel (VIS) a faixa de radiao que nos permite enxergar o mundo que nos cerca. A decomposio da radiao visvel nos mostra que ela constituda por sete cores: violeta, anil, azul, verde, amarelo, alaranjado e vermelho. Raios infravermelhos (IV) esse tipo de radiao emitida por objetos quentes. As chamadas lmpadas infravermelho so utilizadas para ativar a circulao sangunea e para diminuir processos inflamatrios. Raios hertezianos essa forma de radiao apresenta baixa energia e sua recepo e transmisso so feitas por antenas. Esto includas as ondas de rdio AM e FM, e as ondas de TV. No costumam ser estudadas em anlises qumicas. Radiao de microondas tem aplicaes tecnolgicas e analticas, como o forno de microondas. 4.4.2 Anlise quantitativa por medidas de absoro/emisso de luz:

Vamos entender agora como podemos quantificar uma substancia em uma amostra material somente pela quantidade de luz absorvida ou emitida. Cada faixa de comprimento de onda da luz que uma substncia absorve, por exemplo, fornece um tipo de informao diferente, que pode ser usada por diferentes tcnicas instrumentais ticas. Veja: A absoro/emisso de luz de comprimentos de onda das microondas e do infravermelho d informaes sobre a estrutura molecular da substncia qumica de interesse (quem est ligado com quem e com que tipo de ligao qumica). A absoro/emisso de luz de comprimentos de onda da luz visvel pode dar valiosas informaes quantitativas, pois quanto mais colorida for uma substncia, mais concentrada ela est naquela substncia. Do ultravioleta em diante, podemos obter informaes sobre a composio elementar, a nvel de grupos funcionais de uma molcula orgnica (se cido carboxlico, lcool, cetona, amina, etc.);

Num raciocnio intuitivo, a concentrao de uma substncia colorida, dissolvida num solvente incolor (como a gua), proporcional intensidade de cor da soluo. Desse modo, a intensidade de cor uma medida da concentrao da soluo.

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Como medir quantitativamente a intensidade da cor de uma soluo? Como a relao exata disso com a concentrao? Analisemos por que certas substncias so coloridas e tambm por que as substncias podem ter cores diferentes. As substncias so coloridas porque emitem luz visvel. Desse modo, a luz que emitida por uma substncia s vai ter os comprimentos de onda que ela no absorveu (ou seja se o objeto parece amarelo porque ele refletiu a luz visvel no comprimento de onda da cor amarela, e absorveu todas as outras cores). A retina do nosso olho ver, ento, mais fortemente as cores que deixam de ser absorvidas. O preto existir quando a substncia (ou mistura de) absorve todas as cores da luz visvel.

A proporcionalidade entre concentrao da substncia e absoro de luz tambm vlido na emisso de luz: quanto mais concentrada for uma amostra em determinado composto qumico, mais luz este composto qumico emitir quando excitado. o que acontece no teste de chama: se colocarmos uma soluo de um composto metlico (o sdio, por exemplo) para aquecer em uma chama de bico de Bunsen, ele emitir uma luz amarela, no mesmo comprimento de onda que ele absorveria se estivesse em contato com uma lmpada de radiao visvel. Cor
vermelha

Intervalo de comprimentos de onda (nm) 780 622 622 597 597 577 577 492

alaranja da amarela verde

azul
violeta Elemento Na Li Ca Sr Ba

492 455
455 380 Comprimento de onda (em nm) 589 671 616 707 624

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Portanto, quanto mais concentrado ele estiver naquela substncia, mais luz (radiao eletromagntica) ele ir emitir ou absorver. Essa a base da transformao da interao da luz (por absoro ou emisso) em concentrao de uma substancia na amostra material.

A luz pode interagir com a matria (amostra) por vrios processos, iremos citar os mais importantes: Absoro espectrofotometria de absoro UV/Vis e Absoro Atmica Emisso espectrofotometria de emisso de chama (Fotometria de chama) Refrao Refratometria Polarizao Polarimetria

Iremos detalhar nos captulos seguintes cada tcnica instrumental acima citada, para compreender como conseguimos medir a concentrao de um composto qumico somente pela interao do mesmo com a luz. A palavra espectrofotometria designa um mtodo de anlise baseado em medidas de absoro de radiao eletromagntica. A tcnica que aqui se descreve est restrita a uma pequena regio de comprimento de onda da radiao eletromagntica, que corresponde luz visvel e o ultra-violeta, cuja faixa est entre aproximadamente 200 e 760 nm. Desta forma, podemos ento dividir a espectrofotometria de acordo com sua faixa de comprimento de onda de absoro em: Espectrofotometria UV: absorve radiaes com comprimento de onda entre 180 a 340nm; Espectrofotometria Visvel: absorve radiaes com comprimento de onda entre 340 a 760nm;

A anlise na regio do UV aplicada para compostos orgnicos onde a absoro de energia uma funo direta do grupo funcional que a identifica. Exemplo: lcool, cetona, amina, cido carboxlico. A anlise na regio do visvel aplicada para compostos inorgnicos que possam desenvolver cor aps tratamento qumico adequado, mesmo em solues muito diludas. Exemplo: ferro, fsforo. O espectrofotmetro um instrumento que permite determinar a concentrao de uma substncia de acordo com o seu grau de absoro de luz, atravs da comparao
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da radiao absorvida ou transmitida por uma soluo amostra de concentrao desconhecida, e uma quantidade conhecida da mesma substncia (soluo padro). 4.4.3 Teoria da espectrofotometria Lei de Beer-Lambert:

A base da tcnica que a concentrao de uma substncia colorida, dissolvida num solvente incolor (como a gua), proporcional intensidade de cor da soluo. Desse modo, a intensidade de cor uma medida da concentrao da soluo. Como medir quantitativamente a intensidade da cor de uma soluo? Como a relao exata disso com a concentrao? Para podermos quantificar a luz que absorvida por uma substncia qumica, necessrio relacionar essa quantidade emprica em uma quantidade numericamente palpvel. Na tentativa de explicar essa relao quantitativa entre luz concentrao, um pesquisador chamado Lambert estudou a transmisso de luz por slidos homogneos, e Beer estendeu o trabalho de Lambert ao estudo de solues. As concluses destes dois pesquisadores deram Espectrofotometria, com a chamada Lei de Beer-Lambert. origem lei da

Atravs dessa lei, intensidades da luz incidente (que chega na amostra) e emergente (que sai da amostra = transmitida) podem ser relacionadas com as concentraes da substncia presente na soluo. Para que esta lei tenha efeito, necessrio que a radiao incidente (a luz) seja monocromtica, quer dizer, de um comprimento de onda definido. Para medir a concentrao mede-se a luz absorvida e no a refletida. Mas, o que se mede diretamente no a quantidade de luz absorvida. S se poder fazer isto se houvesse um detector de luz junto a cada molcula da substncia qumica, para ver se ela absorveu ou no o fton de luz. O que se faz normalmente medir a luz que consegue passar pela amostra, e no a luz que absorvida. Para entendermos com mais detalhes esse fenmeno, observe a seguinte figura:
Considere uma soluo colorida dentro de uma cubeta (porta-amostra), que recebe certa quantidade de luz incidente:

Luz incidente = b

= Luz transmitida

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Quando se incide um feixe de luz com intensidade I0 (100%) em uma amostra liquida, aps passar pela amostra ele ter uma intensidade menor (I1 < 100%), pois uma parte da luz foi absorvida pela substncia qumica. A quantidade de luz que passou pela amostra chama-se TRANSMITNCIA, cujo valor percentual, e detectada no aparelho espectrofotmetro. A quantidade de luz que absorvida pela substncia na amostra chama-se ABSORBNCIA, cujo valor logartmico.

TRANSMITNCIA = qtde. de luz que passou pela amostra (%T)

ABSORBNCIA = qtde. de luz absorvida pela amostra (A)

Como a TRANSMITANCIA de uma substancia mais fcil de ser quantificada pelo aparelho, para determinar a ABSORBNCIA da amostra preciso fazer uma converso matemtica, empregando a seguinte equao:

A = -log (T/100)
Desta forma, podemos fazer as seguintes aproximaes: Se uma amostra transmite 50% da radiao incidente nela, quanto ela absorve? A transmitncia igual a 50% T = 50 Quanto ser a absorbncia? A = ? A = - log T/100 = - log 50/100 = - log 0,5 = - (-0,30) = +0,30 Verifique agora se os valores de absorbncia da escala acima so condizentes com os valores de transmitncia. Faa esse exerccio! Podemos relacionar a quantidade de luz absorvida (Absorbncia) de uma substncia com a sua concentrao na amostra. Essa relao expressa matematicamente pela equao:

A = a . b. C
A = absorbncia (varia de 0 a 2)

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a ou = absortividade especfica constante que indica o grau de absoro da substncia naquele comprimento de onda (valor tabelado ou determinado atravs de uma soluo padro); b = espessura do caminho tico, em cm. a espessura da cubeta que contm a amostra (valor dado pelo fabricante do espectrofotmetro) C = concentrao da substncia na amostra, em mol/L ou g/L. Por esta equao, vemos claramente que a concentrao de uma substncia diretamente proporcional ABSORO DE LUZ pela mesma substncia, em uma cubeta de espessura definida e em determinado comprimento de onda de absoro. Veja como podemos utilizar essa equao para determinar a concentrao de uma substancia colorida: Uma substncia de absortividade igual a 970 L.mol-1cm-1 apresentou uma absorbncia de 0,15 num comprimento de onda igual a 590 nm, em uma cubeta de 1cm de caminho tico. Calcule a concentrao dessa substncia na soluo amostra. Dados: Absorbncia A = 0,15 Absortividade molar = 970 M-1cm-1 Caminho tico b = 1 cm Concentrao C = ? Aplicando a equao da lei de Beer, temos: A = . b . C 0,15 = 970 x 1 x C Isolando C (concentrao), fica: C = 0,15 / 970 x 1 = 1,55.10-4 mol/L = 0,000155 mol/L Validao da Lei de Beer-Lamber a curva de calibrao:

4.4.4

Para verificar se a Lei de Beer-Lambert est sendo cumprida para determinada substncia, devemos fazer um grfico utilizando uma srie de solues padro de concentraes conhecidas da substncia, e determinar suas absorbncias no comprimento de onda de mxima absoro. Ento, de posse dos dados de absorbncia e concentrao das solues padro, plotamos um grfico de Ap (absorbncia padro) x Cp (concentrao padro), chamado CURVA DE CALIBRAO. Veja um exemplo de curva de calibrao da substncia KMnO4 (permanganato de potssio), onde foram utilizadas 9 solues padro (observe os pontos no grfico) com suas respectivas absorbncias medidas a um comprimento de onda de 545 nm em uma cubeta de 1 cm de caminho tico:

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Uma relao linear (reta) no grfico indica que a substncia em soluo obedece a Lei de Beer nas condies da anlise, e pode servir de curva de calibrao para a determinao da concentrao de solues de mesma natureza. Isso significa dizer que ao aumentar-se a concentrao da substncia, sua absorbncia aumenta proporcionalmente (por ex., se duplicarmos a concentrao, a absorbncia duplica). 4.4.5 Determinao experimental da concentrao da substncia na amostra:

Vamos supor agora que voc queira determinar a concentrao da vitamina C em suco de laranja industrializado. Voc pode fazer isso de duas formas: 1 PELO FATOR DE CALIBRAO mtodo simplificado (1 soluo padro): atravs de uma soluo padro de concentrao conhecida da substncia que se quer determinar na amostra (nesse caso, vitamina C): prepara-se em laboratrio uma soluo de vitamina C com uma concentrao exatamente conhecida, por exemplo, 0,0004 mol/L (ou 4.10-4 mol/L), e determina-se a sua absorbncia no comprimento de onda de mxima absoro. Desta forma, temos dois dados importantes: Ap = absorbncia da soluo padro Cp = concentrao da soluo padro (0,0004 mol/L) Com esses dados, calcula-se o fator de calibrao da vitamina C (Fc):

Fc = Cp / Ap
Supondo que a absorbncia da soluo padro fosse 0,89, o fator de calibrao seria igual a: Fc = 0,0004 / 0,89 = 4,5 Para calcular a concentrao de vitamina C na amostra (Ca), multiplica-se o valor da sua absorbncia (Aa) por esse fator de calibrao:

Ca = Aa x Fc
Se a absorbncia da amostra for igual a 0,67, a sua concentrao ser igual a: Ca = 0,67 x 4,5 = 0,0020 mol/L

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Viu como fcil? Agora tente voc: Para determinar o cido fosfrico em uma amostra de refrigerante, preparou-se uma soluo padro de cido fosfrico de concentrao igual a 1,45 x 10-3mol/L, e sua absorbncia foi lida no espectrofotmetro a 378 nm, cujo valor foi igual a 0,35. A amostra de refrigerante foi colocada no mesmo espectrofotmetro, e mostrou uma absorbncia igual a 0,12. Calcule a concentrao do acido fosfrico na amostra de refrigerante. (R = 4,97 x 10-4 mol/L) 2 PELA CURVA DE CALIBRAO: a curva de calibrao um grfico construdo com pelo menos 5 solues padres de concentraes conhecidas (Cp) e crescentes da substancia de interesse. Determina-se a absorbncia (Ap) de todas essas solues padres e plota-se Cp (eixo x) x Ap (eixo y), desta forma:

Construdo o grfico, podemos determinar a concentrao da substncia de interesse na amostra pela regresso linear dos dados, obtendo-se a EQUAAO DA RETA do tipo y = ax + b, onde: y = Aa (absorbncia lida da amostra) x = Ca (concentrao da substancia na amostra) a e b = coeficientes de ajuste dados pelo mtodo dos mnimos quadrados (constantes numricas ) Substitui-se o valor de y (leitura de A da amostra) na equao e calcula-se o valor de x (Ca). um mtodo muito mais preciso e exato.

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Agora, faa os exerccios: Determine a concentrao de uma substncia na amostra (Aa = 0,90) atravs do uso de uma soluo padro, cujos dados foram: Apadro = 0,73 e Cpadro = 0,00046 mol/L Determine a concentrao de uma substncia na amostra (Aa = 0,158) atravs da curva de calibrao, cujos dados esto na tabela abaixo: Padro n 01 02 03 04 Concentrao 1,0 2,0 3,0 4,0 Absorbncia 0,056 0,129 0,209 0,313

4.4.6

Instrumentao o espectrofotmetro:

Vamos estudar agora como determinamos a concentrao de uma substncia utilizando o ESPECTROFOTMETRO. Um espectrofotmetro um equipamento utilizado para se determinar quantidades muito pequenas de substncias em uma amostra, da ordem de 0,01 mol/L ou menor. Para isso, utiliza a Lei de Beer para determinar a concentrao (Absorbncia proporcional concentrao da substancia na soluo). um aparelho que apresenta boa sensibilidade, baixo custo relativo, fcil operao, e possui aplicaes analticas variadas, em anlise qumica quantitativa de vrias amostras materiais (solo, gua, alimentos, lquidos biolgicos). O esquema dos componentes do espectrofotmetro pode ser descrito da seguinte maneira:

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Figura 1.7 Esquema ptico dos principais componentes do espectrofotmetro. As letras representam: (a) fonte de luz, (b) colimador, (c) prisma ou rede de difrao, (d) fenda seletora de X, (e) compartimento de amostras com cubeta contendo soluo, (f) clula foteltrica, (g) amplificador. Link de um video mostrando todos os componentes do espectrofotmetro e seu funcionamento: http://www.youtube.com/watch?v=R4ZT3g2-Ryg

1. Fonte de luz: a lmpada do aparelho, responsvel por enviar a luz de comprimento de onda desejado amostra. Pode ser uma lmpada de tungstnio (luz visvel) ou de hidrognio / deutrio (luz ultravioleta), dependendo do aparelho. Deve ter uma intensidade constante durante a analise, e tem uma vida til pr-definida pelo fabricante.

2. Selecionador de comprimento de onda: chama-se monocromador, isola o comprimento de onda de mxima absoro da substncia que se deseja determinar, o qual informado pelo operador. Este componente pode ser de dois tipos: um prisma (que divide a luz em vrios comprimentos de onda individuais mais preciso) ou um filtro (que divide a luz em intervalos ou faixas de comprimentos de onda menos preciso). uma pea importante e que define o preo do espectrofotmetro.

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Disperso da luz por (a) prisma;

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3. Porta-amostra: chama-se cubeta, o recipiente transparente luz em que ser colocada a soluo a ser analisada ou as solues padro, para ser feita a leitura. Tem-se cubetas de vidro e plstico (utilizada para medidas na regio do visvel) e de quartzo (utilizada para medidas na regio do ultravioleta). Deve-se tomar muito cuidado no seu manuseio, pois qualquer impresso digital, riscos, sujeiras, pode barrar a passagem de luz atravs da cubeta, prejudicando a leitura da absorbncia ou transmitncia. Geralmente tem forma retangular e largura tica de 1cm (espessura da cubeta), determinada pelo fabricante.

4. Detector de radiao: o corao do espectrofotmetro, responsvel por converter a luz transmitida atravs da amostra em um sinal analtico numrico, tal como os valores de absorbncia, transmitncia ou concentrao. O sinal resultante do detector proporcional concentrao da substncia na amostra.

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um componente responsvel pela sensibilidade do aparelho, e por isso tambm define o seu preo.

4.4.7

Operao do instrumento:

1 Passo: Ligue o aparelho 2 Passo: Mude o comprimento de onda do aparelho para o indicado na anlise. 3 Passo: Coloque a cubeta com o branco na abertura do espetrofotometro. 4 Passo: Clique no boto de zerar o aparelho (Abs = 0 e %T = 100) 5 Passo: Leitura das solues padres construo da curva de calibrao (opcional) 6 Passo: Coloque a cubeta com a amostra para ler a sua absorbncia 4.4.8 Calibrao:

O espectrofotmetro precisa ser calibrado com uma soluo de referncia (soluo padro) antes de ser utilizado. A calibrao deve ser feita para verificar se a substancia que se deseja analisar obedece ou no a Lei de Beer. Soluo padro: soluo preparada pelo analista contendo a substncia que se deseja determinar na amostra, em uma concentrao exatamente conhecida.

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Devemos fazer dois tipos de calibrao: -Calibrao com o branco -Calibrao com a soluo padro ou Curva de Calibrao. 1) Calibrao com o branco: deve ser usada toda vez em que se liga o espectrofotmetro. A soluo branco deve ser o mesmo solvente em que se empregou para diluir a soluo amostra e os padres, geralmente a gua destilada. Se na soluo amostra se empregou algum reagente para desenvolver cor ou purificar a soluo, esse reagente tambm deve ser adicionado ao branco e s solues padro, na mesma quantidade em que foi adicionado amostra. A finalidade da calibrao com o branco de eliminar toda absoro de luz que no seja devida somente substancia que se quer determinar. Isso inclui a absoro de luz pelo solvente e pelos reagentes empregados na preparao da soluo amostra. Para zerar esses interferentes, calibra-se o espectrofotmetro da seguinte maneira: -Encher a cubeta com a soluo branco (gua destilada, por ex.) -Calibrar Absorbncia = 0 e/ou Transmitncia = 100%, de acordo com as instrues do fabricante do aparelho. 2) Calibrao com soluo padro: Mtodo direto utiliza somente uma soluo padro de leitura (A) prxima leitura da amostra. Trata-se de um mtodo rpido de anlise mas apresenta pouca preciso e exatido. Por este mtodo determina-se a concentrao de uma amostra levando-se em considerao um ponto de concentrao conhecida. Construo da Curva de Calibrao mtodo mais preciso e exato para determinar a concentrao da amostra, pois utiliza no mnimo 5 solues padres. A construo da curva de calibrao necessria em casos em que se deseja uma maior exatido e preciso dos resultados analticos, para comparao com laudos ou padres previstos em legislao especfica, como o caso de alimentos. 4.4.9 Tipos de espectrofotmetros UV/Visvel:

Os componentes pticos descritos na Figura 25-1 tm sido combinados de vrias formas para produzir dois tipos de instrumentos e permitir a obteno de medidas de absoro. Os espectrofotmetros permitem a medida da razo entre as potncias de dois feixes, uma exigncia para se medir a absorbncia. Os espectrofotmetros oferecem a vantagem considervel de que o comprimento de onda pode ser alterado continuamente tornando possvel registrar-se um espectro de absoro. Vrias dezenas de modelos de espectrofotmetros esto disponveis comercialmente. A maioria dos espectrofotmetros cobre a regio do UV/visvel e, ocasionalmente, a regio do infravermelho prximo, enquanto os fotmetros so quase

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exclusivamente utilizados na regio do visvel. Os espectrofotmetros podem ser encontrados nas variedades de feixe nico ou duplo.
Instrumentos de Feixe nico:

Esse instrumento surgiu inicialmente no mercado em meados dos anos 1950 e a verso modificada, que est representada na figura, ainda produzida e bastante vendida. O nmero de instrumentos desse tipo que est correntemente em uso ao redor do mundo maior que o de qualquer outro modelo de espectrofotmetro.

Esse equipamento funciona assim: A radiao de uma fonte de filamento de tungstnio passa atravs de uma fenda de entrada para o monocromador. Uma rede refletora difrata a radiao e uma faixa selecionada de comprimentos de onda passa atravs da fenda de sada para a cmara da amostra. Um detector de estado slido converte a intensidade de luz em um sinal eltrico que amplificado e apresentado em um mostrador digital. Para obter uma leitura da porcentagem de transmitncia, o dispositivo de leitura inicialmente zerado com o compartimento da amostra vazio de forma que o obturador bloqueie o feixe e nenhuma radiao atinja o detector. Esse processo denominado calibrao de 0% T ou ajuste de 0% T. Uma clula contendo o branco (geralmente o solvente) ento inserida no compartimento de medida e o mostrador levado a ler 100% de T ajustando-se a posio da abertura de controle de luminosidade e, portanto, a quantidade de luz que atinge o detector. Esse ajuste chamado calibrao de 100% T ou ajuste de 100% T. Finalmente, a amostra colocada no compartimento da clula e a porcentagem de transmitncia ou absorbncia lida diretamente no mostrador de LED.

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Os instrumentos de feixe nico do tipo descrito so adequados para as medidas quantitativas de absoro em um nico comprimento de onda. Neste caso, a simplicidade do instrumento, o baixo custo e a facilidade de manuteno oferecem vantagens importantes.

Instrumentos de Feixe Duplo

Dois feixes so formados por um espelho em forma de V denominado divisor de feixe. Um dos feixes passa atravs da soluo de referncia para um fotodetector e o segundo passa, simultaneamente, pela amostra para um segundo fotodetector casado. Os instrumentos de feixe duplo oferecem a vantagem de compensar qualquer flutuao na potncia radiante da fonte, exceto aquelas de durao mais curta. Eles tambm compensam amplas variaes na intensidade da fonte em funo do comprimento de onda. Alm disso, o desenho de duplo feixe muito adequado para o registro contnuo de espectros de absoro.

4.4.10 Aplicaes em anlise de alimentos: anlise de componentes do alimento que absorvem na regio UV ou Vis (corantes, nutrientes inorgnicos, vitaminas); anlise de molculas orgnicas por fluorescncia (deteco de contaminantes como bactrias e alguns resduos de pesticidas).

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