Arquivos Brasileiros de Endocrinologia & Metabologia Print version ISSN 0004-2730

Arq Bras Endocrinol Metab vol.55 no.5 So Paulo June 2011

http://dx.doi.org/10.1590/S0004-27302011000500002
REVISO

Regulao do metabolismo de glicose e cido graxo no msculo esqueltico durante exerccio fsico

Regulation of glucose and fatty acid metabolism in skeletal muscle during contraction

Leonardo R. SilveiraI,II; Carlos Hermano da Justa Pinheiro III; Claudio C. ZoppiIV; Sandro M. HirabaraV; Kaio F. VitzelIII; Reinaldo A. BassitIII; Carol G. LeandroVI; Marina R. BarbosaI; Igor H. SampaioII; Iracema H. P. MeloVI; Jarlei FiamonciniIII; Everardo M. CarneiroIV; Rui CuriIII
I

Departamento de Bioqumica e Imunologia, Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto (FMRP-USP), Ribeiro Preto, SP, Brasil II Escola de Educao Fsica e Esporte de Ribeiro Preto, USP, Ribeiro Preto, SP, Brasil III Departamento de Fisiologia e Biofsica, Instituto de Cincias Biomdicas, Universidade de So Paulo (ICB-USP), So Paulo, SP, Brasil IV Departamento de Anatomia, Biologia Celular, Fisiologia e Biofsica, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, SP, Brasil V Faculdade de Educao Fsica, Universidade Cruzeiro do Sul (Unicsul), So Paulo, SP, Brasil VI Ncleo de Educao Fsica e Cincias do Esporte, Centro Acadmico de Vitria (CAV), Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Recife, PE, Brasil Correspondncia para

SUMRIO

O ciclo glicose-cido graxo explica a preferncia do tecido muscular pelos cidos graxos durante atividade moderada de longa durao. Em contraste, durante o exerccio de alta intensidade, h aumento na disponibilidade e na taxa de oxidao de glicose. A produo de espcies reativas de oxignio (EROs) durante a atividade muscular sugere que o balano redox intracelular importante na regulao do metabolismo de lipdios/carboidratos. As EROs diminuem a atividade do ciclo de Krebs e aumentam a atividade da protena desacopladora mitocondrial. O efeito oposto esperado durante a atividade moderada. Assim, as questes levantadas nesta reviso so: Por que o msculo esqueltico utiliza preferencialmente os lipdios no estado basal e de atividade moderada? Por que o ciclo glicose-cido graxo falha em exercer seus efeitos durante o exerccio intenso? Como o msculo esqueltico regula o metabolismo de lipdios e carboidratos em regime envolvendo o ciclo contrao-relaxamento. Descritores: Metabolismo mitocondrial; exerccio prolongado; ciclo glicose-cido graxo

SUMMARY The glucose-fatty acid cycle explains the preference for fatty acid during moderate and long duration physical exercise. In contrast, there is a high glucose availability and oxidation rate in response to intense physical exercise. The reactive oxygen species (ROS) production during physical exercise suggests that the redox balance is important to regulate of lipids/carbohydrate metabolism. ROS reduces the activity of the Krebs cycle, and increases the activity of mitochondrial uncoupling proteins. The opposite effects happen during moderate physical activity. Thus, some issues is highlighted in the present review: Why does skeletal muscle prefer lipids in the basal and during moderate physical activity? Why does glucose-fatty acid fail to carry out their effects during intense physical exercise? How skeletal muscles regulate the lipids and carbohydrate metabolism during the contractionrelaxation cycle? Keywords: Mitochondrial metabolism; muscle contraction; glucose-fatty acid cycle

INTRODUO
H 40 anos, Randle e cols. (1) propuseram a existncia de uma competio entre glicose e cidos graxos (AG) como substratos para a sntese de ATP no msculo esqueltico, cardaco e adipcitos. Nesse processo, foi demonstrado que, sob elevada disponibilidade de lipdios, os msculos esquelticos utilizam predominantemente AG para a sntese e obteno de ATP. Em contraste, sob elevada disponibilidade de carboidratos, utilizam predominantemente glicose. A questo que surge qual a importncia fisiolgica dessa regulao entre glicose e cidos graxos? Podemos encontrar uma resposta para essa pergunta entendendo a utilizao de glicose e cidos graxos como um processo evolutivo do homem para sobreviver e se adaptar em condies de escassez de alimento. Os carboidratos constituem uma valiosa fonte de energia ao nosso organismo. Porm, a capacidade

de estoque desse valioso substrato limitada, fazendo-se necessria a busca por estratgias de economia e armazenamento de energia na forma de carboidrato. O requerimento dirio de glicose por esses tecidos da ordem de 300 g/dia, ao passo que a capacidade do fgado, principal reservatrio de carboidratos, em armazenar glicognio de cerca de 100 g/dia em adultos (2). Por outro lado, as reservas de lipdios em nosso organismo so inmeras vezes superiores quelas de carboidratos, o que explicaria a preferncia do nosso organismo pelos lipdios em condies basais e principalmente de jejum, aumentando a disponibilidade de glicose para outros tecidos (sistema nervoso, sanguneo e imunolgico), os quais so essencialmente mantidos custa desse substrato (3). A importncia fisiolgica desse mecanismo conhecido como ciclo glicose-cido graxo, portanto, consiste no somente no aumento do fornecimento de energia aos tecidos, mas principalmente na economia da utilizao dos estoques limitados de glicose. Esse conceito ajuda a esclarecer a preferncia do tecido muscular pelos cidos graxos durante atividade moderada mantida por longo perodo. Nessas condies, a liplise do tecido adiposo perifrico favorecida aumentando a disponibilidade de cidos graxos para a captao e utilizao pelo msculo esqueltico. Caso essa regulao no ocorra, os estoques de glicognio podem ser depletados precocemente, comprometendo a performance muscular (4,5). Em contraste, durante o exerccio de alta intensidade mantido por curto intervalo de tempo, h aumento na disponibilidade e na taxa de oxidao de glicose, seguido de reduo na disponibilidade e na taxa de oxidao de lipdios (6). As observaes acima sugerem que, durante contraes de intensidade leve para moderada, os cidos graxos so mobilizados do tecido adiposo (perifrico e intramuscular) atravs da liplise e utilizados pelo msculo esqueltico. Durante o exerccio de alta intensidade, a liberao dos AG do tecido adiposo marcadamente diminuda, seguida por elevao na disponibilidade e na oxidao de glicose (7). Embora esteja bem estabelecida, pelo ciclo glicose-cido graxo, a predominncia dos lipdios durante o exerccio leve/moderado e dos carboidratos durante o exerccio intenso, ainda pouco conhecido o mecanismo que regula a preferncia desses dois substratos durante a contrao muscular. Evidncia de produo elevada de espcies reativas de oxignio (EROs) durante a atividade muscular intensa (8) sugere que o balano redox intracelular pode exercer papel importante na regulao do metabolismo de lipdios/carboidratos durante o exerccio. Em concentrao intracelular elevada, as EROs diminuem a atividade do ciclo de Krebs, favorecendo o metabolismo de carboidratos (9,10). Nessa condio, h aumento da atividade da protena desacopladora mitocondrial (UCP3) (6). O efeito oposto esperado durante a atividade moderada, quando a oxidao de cidos graxos predominante. Portanto, as principais questes levantadas nessa reviso so: a) Por que o msculo esqueltico utiliza preferencialmente os lipdios em relao aos carboidratos no estado basal e de atividade leve a moderada? b) Por que o ciclo glicose-cido graxo falha em exercer seus efeitos durante o exerccio intenso? c) Como o msculo esqueltico regula o metabolismo de lipdios e carboidratos durante contraes?

O ciclo glicose-cido graxo durante a atividade muscular moderada

Est bem estabelecido que os cidos graxos e os carboidratos so os principais substratos para a produo de energia muscular (4-6). As principais vias metablicas envolvidas nesse processo, gliclise, ciclo do cido tricarboxlico (CAT) e -oxidao oxidam glicose e cidos graxos, gerando NADH e FADH2. Embora os aminocidos tambm sejam oxidados nesse processo, sua contribuio baixa

comparada a dos carboidratos e cidos graxos (11). Em acordo com a teoria quimiosmtica de Mitchell, os eltrons dessas molculas so transportados atravs da cadeia respiratria, reduzindo a molcula de O2 a H2O. A produo oxidativa de ATP est acoplada ao transporte de prtons da matriz mitocondrial para o espao intermembrana, proporcionando a energia (H+) necessria para a sntese oxidativa de ATP (12). Por outro lado, durante a produo de energia anaerbia, a gliclise a principal via de sntese de ATP, seguida do aumento da produo de lactato/H+ (11) (Figura 1). O processo de contrao muscular regulado de forma que a produo de energia proporcional demanda metablica imposta pela atividade muscular. Porm, o sinal que regula a preferncia do msculo esqueltico por glicose ou cidos graxos complexo e pode ser determinado por diferentes fatores, incluindo dieta, nvel de treinamento, intensidade e durao do exerccio. Por exemplo, agudamente uma elevada disponibilidade de AG (dieta hiperlipdica) em sujeitos normais, durante o repouso, aumenta a oxidao de lipdios diminuindo a oxidao de carboidratos. O efeito oposto observado quando a disponibilidade de carboidratos aumentada (13).

Ao contrrio das reservas de carboidratos, as reservas de lipdios em humanos so ilimitadas proporcionando maior eficincia na produo final de energia em comparao aos carboidratos. A densidade energtica dos lipdios aproximadamente 10 vezes maior a que dos carboidratos (i.e., 38 kJ.g-1 vs 4.2 kJ.g-1), enquanto o peso relativo como estoque de energia menor (3). Isso significa que, para estocarmos uma quantidade equivalente de energia fornecida

pela gordura como glicognio, o estoque de energia teria de ser cerca de 10 vezes mais pesado, o que seria crtico para a performance durante a contrao muscular. A eficincia dos cidos graxos como substrato energtico foi bem ilustrada em pssaros migratrios, os quais foram capazes de voar aproximadamente 1.500 milhas durante 60 h a 40,2 km/h. Anlises de bipsia mostraram que os ndices de massa adiposa nessas espcies diminuram em aproximadamente sete vezes (de 4,0 para 0,6 U aps o esforo) (11). Em humanos, estima-se que os estoques de triacilgliceris so suficientes para sustentar a contrao muscular moderada por aproximadamente 120 h. Em contraste, para a mesma condio, os carboidratos so estimados para proporcionarem energia para contrao muscular por somente ~ 90 min de exerccio (3), podendo alcanar valores um pouco mais elevados em atletas de resistncia. Os cidos graxos oxidados no msculo esqueltico durante o exerccio so derivados principalmente dos triacilglicerdeos do tecido adiposo e dos depsitos intracelulares do tecido muscular (14). A liplise nesses tecidos regulada pela lipase sensvel a hormnios, ativada pela estimulao beta-adrenrgica durante o exerccio, particularmente pelas catecolaminas (15). Romijn e cols. (16) examinaram a contribuio dos lipdios na produo de energia durante 30 min de exerccio a 25%, 65% e 85% do consumo mximo de O2 (VO2mx) em indivduos treinados e em jejum. Foi demonstrado que a oxidao de lipdios aumenta em resposta intensidade de exerccio, alcanando o pico em aproximadamente 65% VO2mx (Figura 2). Nessas condies, a quantidade absoluta de cidos graxos oxidados aumenta na mesma proporo em que o tempo de exerccio elevado (2,4,5). Esse aumento na oxidao dos cidos graxos induz uma regulao no metabolismo de carboidrato, reduzindo a oxidao de glicose. Costill e cols. (17) foram os primeiros a demonstrar que, em comparao a indivduos controles, a ingesto de lipdios combinada administrao de heparina (para liberao das lpases de lipoprotenas do endotlio), antes do exerccio, elevou os nveis de cidos graxos circulantes diminuindo a glicogenlise em aproximadamente 40% durante 30 min de corrida moderada. A oxidao elevada de cidos graxos, portanto, pode substancialmente reduzir a utilizao de carboidrato. Esse conceito foi proposto originalmente por Randle e cols. em 1963 e definido como ciclo glicose-cido graxo (1). O mecanismo que suporta esse conceito est associado a uma razo elevada das concentraes de acetil-CoA/CoA-SH como consequncia de uma oxidao elevada de lipdios seguida por um aumento no contedo intracelular de citrato e glicose-6-P (G6-P). O acmulo de acetil-CoA inibe a enzima piruvato desidrogenase (PDH), via ativao da PDH quinase, a enzima responsvel pela fosforilao e inativao do complexo PDH, reduzindo a oferta de piruvato (glicose) como substrato oxidativo. De modo sinrgico, o contedo elevado de citrato inibe a enzima reguladora da via glicoltica fosfofrutoquinase (PFK). Esse efeito aumenta a razo G6-P/F1,6-bifosfato inibindo a hexoquinase, a enzima responsvel pela captao e fosforilao de glicose, consequentemente reduzindo a disponibilidade intracelular de glicose como substrato (Figura 3). Apesar do papel central do citrato nesse processo, atualmente um grande nmero de estudos tem falhado em demonstrar esse efeito no msculo esqueltico durante o exerccio (18-20). Igualmente, o acmulo de G6-P proposto originalmente pelo ciclo glicose-cido graxo tem sido questionado. Roden e cols. (20) examinaram o efeito da disponibilidade elevada de cidos graxos na resistncia insulina em msculo esqueltico. Os autores demonstraram que a reduo da captao de glicose foi acompanhada de um contedo de G6-P reduzido. Esses achados so consistentes com as observaes em pacientes diabticos tipo 2 (19). Apesar das discrepncias entre os estudos mais recentes e os achados de Randle e cols. (1), h consenso do efeito inibitrio da disponibilidade elevada de cidos graxos no metabolismo de glicose.

A prova de maratona um modelo clssico de representao da importncia do ciclo glicose-cido graxo no msculo esqueltico em atividade. Embora no seja novidade, maratonistas possuem um excepcional VO2mx variando entre 70 e 85 mL.kg-1.min-1. Curiosamente, esses atletas percorrem uma maratona em intensidades abaixo do VO2mx, como observado em eventos de durao superior a 10-15 min. A estimativa de que muitos dos 42 km de uma maratona sejam percorridos em aproximadamente 75%-85% do VO2mx. Desse total, 10 km so percorridos entre 90%-100% do VO2mx e aproximadamente 5 km, muito prximos do VO2mx (21). Embora 15 km sejam percorridos de forma intensa, a maioria do percurso realizada em intensidades abaixo do VO2mx, sugerindo a participao do ciclo glicose-cido graxo. Durante esse tipo de evento, a oxidao de glicose e cidos graxos estimada para ocorrer numa razo de 7:3; para cada sete

molculas de glicose trs molculas de cido graxo so oxidadas (2). Nessas condies, a oxidao de lipdios favorece a continuidade da atividade muscular por longo perodo. Caso isso no ocorra, os estoques de glicognio so rapidamente depletados comprometendo a continuidade da atividade. Em 1925, Hill (22) observou, pela primeira vez, a relao inversa entre distncia percorrida e velocidade, o que mais tarde foi descrito por Costill (23) como relao inversa entre distncia percorrida e concentrao de lactato sanguneo. Embora aparentemente simples, esses achados refletem a importncia do ciclo glicose-cido graxo durante atividades de longa durao. Porm, importante observar que a taxa relativa de oxidao de glicose 2,3 vezes maior (7:3) que a de lipdio, demonstrando a importncia da entrada de carbonos no ciclo do cido tricarboxlico (anaplerose) custa de carboidrato. Geralmente, esse aumento ocorre na forma de oxalacetato, -cetoglutarato e malato, consequentemente aumentando a sntese de energia oxidativa (24), o que explica os 15 km realizados de forma intensa. Atletas de elite (nvel olmpico) podem alcanar uma razo ainda maior entre carboidrato/lipdio, isto , usam predominantemente carboidratos durante o exerccio de longa durao, como demonstrado pelo quociente respiratrio (QR) (25). Esses atletas conseguem manter-se em intensidades prximas de 90% do VO2mx, confirmando a predominncia da utilizao de carboidratos (25). Nesse caso, tero maior sucesso em provas de maratona aqueles atletas que conseguirem manter uma elevada taxa de oxidao de glicose por unidade de tempo (potncia aerbia). Um quadro semelhante ao que esperado em provas de menor durao (meia-maratona e corridas de 10.000 a 15.000 m). Quando comparados os recordes mundiais em provas masculinas de maratona (42,2 km em 02:04:55s) e meia-maratona (21,1 km em 00:58:55s), observamos uma velocidade de 5,63 e 5,96 m/s, respectivamente. Uma diferena de apenas 6% sugerindo que um VO2mx elevado pode ser determinante na manuteno da taxa elevada de oxidao de carboidrato durante uma maratona. No entanto, uma alta capacidade de estocar glicognio associada a uma elevada eficincia mecnica decisiva para a performance desses atletas (21,25). A capacidade do msculo esqueltico em sustentar a produo de energia oxidativa altamente dependente da atividade mitocondrial. Fink e cols. (26) demonstraram que a atividade mxima da enzima succinato desidrogenase (SDH) determinada em msculo gastrocnmio de maratonistas de elite foi substancialmente maior quando comparada a de atletas de meia-distncia e destreinados (21,6; 17,7 e 6,4 mol/g, respectivamente). As consequncias fisiolgicas dessas alteraes podem estar associadas a maior VO2, maior oxidao de lipdios, reduo da glicogenlise, aumento na capacidade de manter a produo de lactato em estado estvel e aumento na capacidade de sustentar a produo de energia oxidativa (resistncia aerbia) (27). Uma possvel explicao para esse fenmeno seria o maior volume de treinamento realizado por esses atletas de fundo, 161 comparado a 121 km/semana em atletas de meia-distncia (26). Esse mecanismo facilmente percebido quando comparamos a oxidao de lipdios e carboidratos em indivduos sedentrios e atletas. Indivduos sedentrios dependem predominantemente de carboidratos durante a realizao de atividade fsica moderada. H tambm uma capacidade reduzida de realizar exerccio de longa durao, ao passo que, em atletas, a predominncia dos lipdios, favorecendo a produo de energia oxidativa e a economia na utilizao dos carboidratos. Nesses atletas, entre outras adaptaes, ocorre aumento de biognese mitocondrial, da densidade vascular e da atividade de enzimas oxidativas (11). Portanto, o favorecimento da oxidao de lipdios e reduo na oxidao de carboidratos imposta pelo ciclo glicose-cido graxo explica o aumento da capacidade do msculo esqueltico em sustentar atividade muscular prolongada.

O ciclo glicose-cido graxo durante atividade muscular intensa

Ao contrrio do exerccio moderado, durante o exerccio intenso (> 65%-75% VO2mx), a energia requerida para suprir a demanda metablica preferencialmente mantida pela oxidao de carboidratos. Nessas condies, as concentraes de cidos graxos plasmticos so baixas sugerindo que o turnover (liberao/oxidao) deve ser alto nos adipcitos. Porm, parte dos cidos graxos liberados pela liplise no direcionada para oxidao no msculo esqueltico, provavelmente em decorrncia da reesterificao ou limitao em alguma etapa do transporte de cidos graxos em direo oxidao, incluindo alterao do equilbrio cido-base intracelular (pH), modulao alostrica e aumento da produo de espcies reativas de oxignio (4-6). Romijn e cols. (16), comparando o efeito de diferentes intensidades de esforo na liplise, curiosamente observaram que, apesar de uma menor concentrao de AGL durante a atividade muscular intensa, aps o trmino do exerccio a 85% do VO2mx, a liplise aumenta abruptamente e, em menor proporo, nas intensidades de 65% e 25% do VO2mx. Esse aumento no foi associado ao aumento da liplise aps o exerccio, mas sim a uma maior liberao dos AGL do tecido adiposo. Durante o exerccio intenso, h forte vasoconstrio perifrica imposta pela maior ativao do sistema nervoso simptico, consequentemente aumentando a vasoconstrio perifrica e dificultando a liberao dos cidos graxos para a circulao sistmica. Isso sugere que a disponibilidade limitada de cidos graxos, durante a atividade muscular intensa, previne o aumento e a oxidao dos cidos graxos plasmticos, reduzindo sua taxa de oxidao (7). Interessantemente, quando a disponibilidade de cidos graxos foi mantida artificialmente pela infuso de cidos graxos de cadeia longa durante o exerccio intenso, sua oxidao foi menor quando comparada com a oxidao de cidos graxos durante o exerccio moderado e de baixa intensidade (16). O ciclo glicose-cido graxo, portanto, pode explicar a interao entre lipdio e carboidrato durante contraes musculares de intensidade leve e moderada, mas no durante contraes intensas. Portanto, improvvel que um aumento nas concentraes plasmticas de AGL durante contraes intensas possa induzir uma maior preferncia na oxidao de lipdios. Embora o mecanismo permanea desconhecido, esse aparente efeito dominante da intensidade sobre a disponibilidade de substrato parece exercer papel central na escolha de carboidrato como substrato preferencial para o msculo esqueltico durante contraes intensas. Ento, mesmo que virtualmente exposto a ambos os substratos, durante contraes intensas, o msculo esqueltico oxida preferencialmente carboidrato, aumentando a eficincia da contrao (6). Em acordo com essa afirmao, Willis e Jackman (28) examinaram a taxa de produo de ATP em mitocndrias isoladas de msculo esqueltico humano sob estado respiratrio 3. Os autores demonstraram que a taxa de produo de ATP mitocondrial na presena de cidos graxos foi estimada para ser da ordem de trs vezes menor que nas mesmas condies na presena de carboidratos. Esses achados explicam a existncia de uma taxa relativa elevada de oxidao de carboidratos durante o exerccio de longa durao em atletas (2). O mecanismo que regula a preferncia do msculo esqueltico pelos carboidratos durante o exerccio intenso ainda desconhecido. A hiptese mais aceita de que o efeito inibitrio dos cidos graxos na oxidao de carboidrato removido quando a demanda energtica no msculo em atividade excede aquela que pode ser sustentada pela oxidao dos cidos graxos (4,5). O efeito inibitrio dos cidos graxos na oxidao dos carboidratos descrito pelo ciclo glicose-cido graxo mediado diretamente pelo acmulo de citrato, o qual reduz o fluxo pela via

glicoltica pela inibio alostrica da enzima PFK. O citrato exerce esse efeito em combinao com ATP, um potente inibidor da PFK. Porm, durante contraes musculares intensas, um aumento no contedo de AMP, ADP, NH4+ e Pi sempre observado (1,2). Ao contrrio do ATP, esses metablitos so potentes ativadores da PFK. Sob essas condies, a razo ATP/ADP baixa, removendo o efeito inibitrio do citrato na PFK e favorecendo o fluxo glicoltico (2). Nosso grupo recentemente mostrou em cultura de clulas-tronco de msculo esqueltico de ratos durante contraes basais (repouso) e intensas que o desacoplamento mitocondrial, uma condio conhecida de reduo no contedo de ATP mitocondrial, significativamente aumentou a gliclise anaerbia como demonstrado pelo contedo elevado de lactato no meio de cultura. Isso sugere que a razo ATP/ADP tambm um regulador importante da predominncia na utilizao entre carboidratos e cidos graxos no msculo esqueltico durante contraes intensas (6). A taxa de oxidao de carboidrato outro regulador da oxidao de lipdio no msculo esqueltico. Em condies basais de disponibilidade elevada de carboidrato (ps-prandial), os nveis plasmticos de cidos graxos circulantes diminuem devido a uma reduo na liplise imposta pela elevada produo de insulina circulante e aumento na captao heptica de cidos graxos. Essas alteraes so de grande relevncia na regulao da glicemia basal, induzindo menor oxidao dos cidos graxos e favorecendo o aumento na taxa de oxidao da glicose. Coyle (7) testou a hiptese de que a oxidao de lipdio regulada pelo metabolismo de carboidrato em seis ciclistas, os quais ingeriram carboidrato antes do exerccio para induzir hiperglicemia e hiperinsulinemia, requiridos para aumentar o fluxo glicoltico. A taxa de oxidao de lipdio foi medida pela constante infuso de cido graxo de cadeia longa (AGCL) marcado (1-13C-palmitato) versus cido graxo de cadeia mdia (AGCM) marcado (1-13C-octanoato). Os achados mostraram que o aumento da concentrao de glicose reduziu a oxidao de palmitato, sem efeito na oxidao do octanoato. A oxidao reduzida dos cidos graxos de cadeia longa parece estar relacionada com a ativao da acetil-CoA carboxilase (ACC) seguida pela formao de malonil-CoA, o qual tem sido descrito como um inibidor do sistema carnitina palmitoiltransferase (CPT-I), com pouco efeito no transporte dos cidos graxos de cadeia mdia. Assim, improvvel que um aumento da concentrao plasmtica de AGL, durante contraes intensas, possa induzir uma maior preferncia na oxidao de lipdios. Em adio, um maior recrutamento de fibras glicolticas (tipo II) observado durante o exerccio intenso favorece o acmulo de lactato, um inibidor da oxidao de lipdios (4,5). Essas observaes sugerem que, durante contraes de intensidade leve para moderada, os cidos graxos so mobilizados do tecido adiposo pela liplise e utilizados pelo msculo esqueltico. Em contraste, durante o exerccio de alta intensidade, a liberao dos AGL do tecido adiposo marcadamente diminuda, seguida por uma elevao na taxa de oxidao de glicose (Figura 4). Portanto, um aumento artificial na disponibilidade de lipdios plasmticos durante a atividade muscular intensa pode conduzir a um acmulo substancial de cidos graxos no msculo esqueltico (30).

As EROs como reguladoras do metabolismo de glicose durante atividade fsica intensa

Nosso grupo tem mostrado que, durante a contrao muscular intensa, a produo de EROs substancialmente elevada no msculo esqueltico (8), um efeito mediado pelo consumo elevado de oxignio mitocondrial (31,15). A mitocndria, um importante stio gerador de EROs durante a atividade muscular, pode tambm ser vulnervel s aes dessas espcies (32,33). Em situaes nas quais a produo de EROs aumentada, o superxido tem sido descrito, ao longo dos ltimos anos, como um inibidor potente da aconitase, por um mecanismo envolvendo a oxidao do ferro, importante cofator dessa enzima (34). Embora a aconitase no seja uma enzima reguladora do ciclo de Krebs (DG +), a reduo na atividade dessa enzima pode resultar em menor fluxo de substratos (11). Conforme descrito anteriormente, a diminuio da atividade do ciclo de Krebs reduz a disponibilidade de agentes redutores, NADH e FADH2, para a cadeia de transporte de eltrons mitocondrial, comprometendo a sntese de ATP. Esse mecanismo pode favorecer a atividade glicoltica aumentando a produo de lactato/H+ e consequentemente reduzindo a oxidao de cidos graxos (34,35). Igualmente importantes ao efeito do superxido, outras espcies, incluindo o H 2O2, xido ntrico e peroxinitrito, podem tambm inibir a atividade da aconitase (34). Um aumento nas concentraes de H2O2 tambm reduz a atividade de uma das principais enzimas reguladoras do ciclo de Krebs, a -cetoglutarato desidrogenase (G-), seguido de um menor potencial de membrana (), como resultado da menor disponibilidade de NADH gerado pela baixa atividade do ciclo de Krebs (11,35). Embora ainda haja poucas evidncias desse mecanismo e da atividade dessas vias durante a atividade prolongada, a menor razo capacidade oxidativa/capacidade antioxidante nos msculos do tipo II (glicolticos) sugere que a baixa capacidade antioxidante nos msculos tipo II muito importante para o aumento da captao e oxidao de glicose durante a contrao muscular intensa (Figura 5). Sandstrm e cols. (36), investigando o efeito da produo endgena de EROs na captao de glicose durante a contrao muscular intensa em camundongos, demonstraram que o tratamento agudo com N-acetilcistena (NAC), um antioxidante inespecfico e

doador de GSH, reduziu a captao de glicose em aproximadamente 50% (P < 0,05) em comparao ao controle. Em adio, msculos de camundongos superexpressando superxido dismutase dependente de Mn 2+ (SOD-Mn2+), uma enzima que catalisa a converso do nion superxido em H2O2, exibiram taxa maior de captao de glicose (~25%, P < 0,05), durante a contrao muscular, em comparao ao grupo de animais controles (wild-type). Esses resultados reforam a proposio de que as EROs exercem efeito importante na regulao do metabolismo de glicose durante atividade muscular intensa.

A protena DESACOPLADORA mitocondrial (UCP-3) como moduladora do metabolismo de glicose e cidos graxos durante a contrao muscular
A UCP-1 exerce papel importante no metabolismo energtico no tecido adiposo marrom, pelo desacoplamento da respirao mitocondrial com a produo de energia, resultando em sntese reduzida de ATP (37,38). Os cidos graxos podem tambm induzir desacoplamento mitocondrial por um mecanismo independente de UCP (6,39,40). Assim, o desacoplamento mitocondrial, como previamente reportado por um grande nmero de estudos, aumenta o requerimento de substrato energtico (6,37,41). Em funo da homologia com a protena desacopladora UCP-1 do tecido adiposo marrom, UCP-2 e -3 foram inicialmente descritas para exercer funo importante na regulao do metabolismo, aumentando a termognese no tecido muscular esqueltico (40). Quando superexpressas em leveduras, a UCP reduz substancialmente o gradiente de H+ mitocondrial (H+), confirmando o efeito termognico (42). Porm, o mecanismo ainda permanece desconhecido. H evidncias de que as UCPs transportam H + diretamente do espao intermembrana para a matriz mitocondrial ou ainda que o gradiente de prton (H+) reduzido pelo movimento flip-flop dos cidos graxos, tendo como intermediria a protena UCP, aumentando o transporte do nion cido

graxo da matriz para o espao intermembrana (Figura 6). Dessa forma, a UCP-3 protege as mitocndrias contra o acmulo de AG na matriz. Essa hiptese suportada pelas observaes de que a UCP-3 up-regulada em situaes em que a disponibilidade de AG excede sua capacidade de oxidao, incluindo jejum, dieta hiperlipdica, tratamento com hormnios tireoidianos e exerccio fsico agudo, ao passo que a UCP-3 down-regulada em situaes nas quais a capacidade de oxidar AG aumentada incluindo treinamento aerbio e reduo da massa corporal (43). Em adio, a expresso elevada de UCP-3 em msculos do tipo II, comparado a msculo do tipo I, consistente com essa hiptese, uma vez que esse tipo de msculo apresenta baixa capacidade de oxidar lipdios (44).

Em contraste UCP-2, expressa na maioria dos tecidos, a UCP-3 restrita ao msculo esqueltico. Desde sua descoberta em 1997 (40), uma enorme quantidade de estudos foi publicada na tentativa de caracterizar a funo da protena UCP no tecido muscular esqueltico. Apesar das evidncias em leveduras, experimentos utilizando camundongos knockout para o gene UCP-3 falharam em demonstrar o efeito desacoplador dessa protena in vivo (42). Esses animais no demonstraram qualquer alterao termognica comparados aos controles. Em adio, no apresentaram caractersticas de animais obesos, mesmo quando expostos a uma dieta rica em lipdios (42). Isso sugere que a principal funo da UCP-3 em condies fisiolgicas no de proteger contra obesidade aumentando a oxidao de lipdios. Mais surpreendente a falta de efeito da UCP-3 na performance do msculo esqueltico durante a contrao. Seria lgico esperar reduo na disponibilidade de ATP mitocondrial em situao de elevado desacoplamento mitocondrial, uma vez que a produo de energia oxidativa proporcionada pelo gradiente de prtons (H+). Essa energia definida como fora prton motriz (P) consistindo de um gradiente eltrico () e qumico (pH): P = - 59pH (38,40). Com base nessa teoria, a capacidade de produo final de energia ser sempre maior quando o DP for aumentado. No msculo esqueltico, a eficincia

mxima de utilizao de ATP somente obtida quando todos os processos de sntese esto acoplados (40). Portanto, o desacoplamento mitocondrial deve reduzir a produo oxidativa de ATP resultando em uma performance menor. Recentemente, examinando o efeito da infuso de uma soluo rica em cidos graxos de cadeia longa (lipovenos) por 1h em animais experimentais, verificamos que a fora de contrao durante atividade muscular intensa induzida por estmulo eltrico no foi alterada em comparao fora de contrao em animais controles aps infuso com soluo fisiolgica de Krebs Ringer (6). Hesselink e cols. (45) tambm foram incapazes de mostrar qualquer efeito significante no torque do msculo quadrceps em humanos durante contraes mximas aps tratamento com dieta hiperlipdica. A falta de efeito na performance intrigante, uma vez que a disponibilidade elevada de cidos graxos induz desacoplamento mitocondrial por um mecanismo intrnseco e independente de UCP-3 consequentemente reduzindo o P (6,39,40). Evidncia desse mecanismo intrnseco foi recentemente demonstrada pelo nosso grupo em mitocndrias isoladas de msculo esqueltico de ratos na presena dos inibidores oligomicina (ATP-sintase) e carboxiatractilosdio (CAT, transportador de ATP/ADP) e ciclosporina A (poros de transio mitocondrial). A adio de lipovenos suspenso mitocondrial aumentou significativamente o consumo de O2. Porm, GDP, um inibidor potente de UCP, no reduziu o consumo de O2 induzido por lipovenos, sugerindo que o desacoplamento foi realizado por um mecanismo independente de UCP-3. Em adio, a concentrao elevada de lactato intracelular no msculo gastrocnmio vermelho (GV) aps a infuso de lipovenos sugere que muito provavelmente a gliclise anaerbia foi muito ativada, compensando uma possvel reduo na sntese de energia mitocondrial. Outro aspecto importante de destacar que a disponibilidade elevada de AG e a baixa capacidade do msculo gastrocnmio em oxidar lipdio podem ter favorecido o acmulo de lipdio e o desacoplamento mitocondrial, ao passo que, no msculo sleo, a quantidade baixa de UCP-3 combinada com sua alta capacidade de oxidar FA pode ter contribudo com uma menor produo de lactato intramuscular (6). Em um experimento controle, demonstramos ainda que o tratamento de culturas de clulas musculares com o desacoplador mitocondrial DNP (2,4-dinitrophenol) aumentou a produo de lactato. Em outras palavras, o desacoplamento mitocondrial induzido pelo DNP diminuiu a fosforilao oxidativa aumentando a contribuio da gliclise para formao de ATP (6). Portanto, muito provvel que a atividade desacopladora mitocondrial pode levar a um aumento na oxidao de glicose seguido da inibio da oxidao de cidos graxos. Talbot e Brand (46) atriburam o papel fisiolgico da UCP-3 regulao da produo de espcies reativas de oxignio (EROs). Uma vez ativada, a UCP-3 pode aumentar o estado de oxidao da cadeia de transporte eltrons contribuindo para o aumento no estado respiratrio 3 (40). Porm, evidncias desse mecanismo ainda so escassas, uma vez que a ativao de UCP-3 tem falhado para induzir desacoplamento mitocondrial. Demonstramos, em cultura de clulas tratadas com o sistema xantina/xantina oxidase, uma fonte conhecida de gerao de EROs, um aumento substancial na expresso gnica de UCP-3, sugerindo que essa protena pode ter mesmo um papel importante na regulao da produo de EROs no tecido muscular (47). Isso seria importante para a performance muscular durante atividade intensa, uma vez que, sob elevada concentrao, as EROs so importantes sinalizadores do desacoplamento mitocondrial, favorecendo a gliclise anaerbia (6). Portanto, durante atividade muscular intensa em que a produo de EROs muitas vezes aumentada (8), a ativao de UCP-3 em msculos do tipo II (abundante em UCP-3) pode ser de grande importncia na regulao do metabolismo de carboidrato durante contraes intensas. Embora ainda faltem evidncias concretas do real papel fisiolgico da UCP-3 no tecido muscular esqueltico, os resultados disponveis na literatura, incluindo achados do nosso grupo de pesquisa, sugerem que UCP-3 pode desempenhar funo importante na

regulao do metabolismo de lipdios/carboidratos e na produo de EROs no tecido muscular esqueltico. Em concluso, a oxidao preferencial de cidos graxos no estado basal e de atividade moderada muito provavelmente originou do processo de evoluo biolgica do homem em sobreviver e se adaptar em condies de escassez de alimento. Os estoques de carboidratos so limitados, enquanto os de lipdios so abundantes, explicando a preferncia do nosso organismo pelos lipdios. A importncia desse mecanismo (ciclo glicose-cido graxo) consiste no somente no aumento de energia aos tecidos, mas ainda na economia dos estoques de glicose. Em contraste, durante o exerccio de alta intensidade h predominncia do metabolismo de glicose. Embora o mecanismo ainda seja desconhecido, a hiptese mais aceita de que o efeito inibitrio dos cidos graxos na oxidao de carboidrato removido quando a demanda energtica no msculo em atividade excede aquela que pode ser sustentada pela oxidao dos cidos graxos. Isso pode estar diretamente associado ao contedo elevado de AMP, ADP, NH4+ e Pi, os quais so estimuladores da via glicoltica. A produo elevada EROs durante a atividade muscular intensa sugere que o balano redox intracelular pode tambm exercer papel importante nessa regulao do metabolismo de glicose durante o exerccio intenso. Esse aparente efeito dominante da intensidade sobre a disponibilidade de substrato parece exercer papel central na escolha de carboidrato como substrato preferencial para o msculo esqueltico durante contraes intensas. O ciclo glicose-cido graxo, portanto, pode explicar a interao entre lipdio e carboidrato durante contraes musculares de intensidade leve e moderada, mas no durante contraes intensas. Agradecimentos: este estudo teve suporte financeiro da Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (Fapesp), Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (Capes) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq). Declarao: os autores declaram no haver conflitos de interesse cientfico neste estudo.

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Correspondncia para: Leonardo R. Silveira Escola de Educao Fsica e Esporte de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo, Av. Bandeirantes, 3900, - 14040-901, Ribeiro Preto, RS, Brasil lrs@icb.usp.br Recebido em 17/Jan/2011 Aceito em 12/Maio/2011