Microbiologa General Ms.C.

Blg Mara Teresa Valderrama Rojas

AGENTES

QUIMICOS

Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes: Bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano; Bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias. En general, si no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos, hablamos respectivamente de agentes microbiostticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiosttico y otro microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante el que acta. Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivacin total de todas las formas de vida microbiana (o sea, su muerte o prdida irreversible de su viabilidad). (Tambin existen agentes fsicos esterilizantes, como ya vimos en los dos captulos anteriores). Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo qumicos) antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar efectos txicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear slo sobre materiales inertes. Agentes antispticos son sustancias qumicas antimicrobianas que se oponen a la sepsis o putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad txica hacia los tejidos vivos donde se aplican. Quimioterpicos son compuestos qumicos con actividad microbicida o microbiosttica, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo. Todos los das usamos agentes qumicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables, antispticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterpicos y antibiticos para tratar enfermedades bacterianas, etc. DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS Como se recordar cuando tratamos el tema del calor como agentes esterilizante, la muerte de una poblacin bacteriana se poda representar como una curva exponencial, expresin de la cintica de primer orden. Este tipo de cintica tambin es aplicable a la muerte microbiana cuando se aplica un agente qumico a una concentracin suficientemente alta. Sin embargo, cuando se aplican menores concentraciones del agente, se pueden encontrar cinticas diferentes, expresables como curvas sigmoidales. FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE 1) 2) Concentracin del agente y tiempo de actuacin pH: El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado de ionizacin del agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables pasan mejor a travs de las membranas biolgicas, y por lo tanto son ms efectivos. Los agentes aninicos suelen ser ms efectivos a pH cidos. Los agentes catinicos muestran ms eficacia a pH alcalinos.

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Temperatura. Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los desinfectantes. Para muchos agentes la subida de 10 grados supone duplicar la tasa de muerte. Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la poblacin microbiana segn la especie empleada: p. ej., el bacilo tuberculoso resiste los hipocloritos mejor que otras bacterias; segn la fase de cultivo; dependiendo de la presencia de cpsulas o de esporas (suelen conferir ms resistencia); dependiendo del nmero de microorganismos iniciales.

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Presencia de materiales extraos: La existencia de materia orgnica en el material a tratar (p. ej., sangre, suero, pus) afecta negativamente a la potencia de los desinfectantes de tipo oxidante (como los hipocloritos) y de tipo desnaturalizante de protenas, hasta el punto que pueden llegar a hacerlos inactivos en cuanto a su poder desinfectante o esterilizante. Por lo tanto, para el empleo eficaz de muchos desinfectantes hay que contar con este factor, determinando previamente el gasto de materia orgnica inerte, o calculando la potencia neta del desinfectante en presencia de la materia orgnica.

ALGUNOS EJEMPLOS DE DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS Y DE SUS APLICACIONES Tanto en los laboratorios como en industrias alimentarias es necesario a menudo tratar superficies inertes (mesas, suelos, paredes, maquinaria) con desinfectantes, a ser posible con efecto microbicida. Por ejemplo se pueden usar sales cuaternarias de amonio como el cloruro de benzalconio. El formaldehido es un agente alquilante que en solucin al 38% sirve bien para tratar superficies. Los materiales termosensibles que no se pueden esterilizar por calor se pueden esterilizar en fro mediante ciertos agentes: En los hospitales, para esterilizar termmetros, catteres, instrumentos, etc., se suele recurrir a un tipo de autoclave que usa el gas xido de etileno o formaldehido gaseoso (ambos son agentes alquilantes) Pequeos objetos se pueden esterilizar en perxido de hidrgeno (agente oxidante). Las cmaras de cra de animales libres de grmenes se esterilizan con cido peractico, un fuerte agente oxidante. Los halgenos son agentes oxidantes muy potentes, y que tienen usos muy importantes: El yodo es un magnfico antisptico de la piel (el mejor que se conoce) El cloro se presenta como cloro gaseoso (Cl2), hipocloritos y cloraminas. El efecto desinfectante se debe a la liberacin de cloro libre (Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el agua para dar cido hipocloroso (ClOH), que a pH cido o neutro es un oxidante fuerte. Cloro gaseoso: a 1-3 ppm se usa en la cloracin de aguas para bebida y de aguas de piscinas. Su actividad se ve muy influida (mermada) por la presencia de materia orgnica; por ello, se suele determinar la demanda de cloro del agua a tratar. Descontada dicha demanda, el cloro gaseoso mata rpidamente (15-30 segundos) a slo 1 ppm. Soluciones de hipocloritos: hipocloritos de sodio, de calcio o de litio. A 200 ppm de cloro se usan ampliamente, ya como lquidos (lejas), o en polvo, en industrias alimentarias y lcteas (para desinfectar el equipamiento y maquinaria que ha de entrar en contacto con los alimentos a procesar), en restaurantes, hoteles, hospitales, etc.

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Ciertos cidos orgnicos se usan como conservantes de alimentos. Tal es el caso del cido benzoico y del cido srbico. Por otro lado, los alimentos fermentados producen sus propios conservantes, como el cido actico, lctico y propinico. QUIMIOTERPICOS Los quimioterpicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o microbiosttica) con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un organismo por la va adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los tejidos. Aunque en el captulo 1 ya hablamos del arranque y desarrollo de la Quimioterapia, recordemos aqu esta pgina notable de la historia de la Microbiologa: 1900-15 Ehrlich concibe la idea de usar compuestos qumicos de sntesis como balas mgicas selectivas hacia microorganismos, pero inofensivas para las personas o animales superiores. En 1909 descubre que el salvarsn es efectivo contra la sfilis. Acua el trmino quimioterapia. Domagk, siguiendo los pasos de Ehrlich, descubre la accin del rojo de prontosilo (la primera sulfamida) sobre el neumococo y otros estreptococos in vivo Woods descubre el mecanismo de accin de las sulfamidas. Estamos en plena Edad de oro de la Quimioterapia de sntesis. Fleming descubre la penicilina, el primer antibitico natural, pero fracasa en su intento de purificarlo. La industria farmacutica se muestra "indiferente. Chain y Florey purifican la penicilina. Se usa en la 2 Guerra Mundial. Comienza la era de los antibiticos naturales Waksman, un microbilogo de suelos, ha iniciado una bsqueda de microorganismos productores de antibiticos. Descubre la estreptomicina. Comienza la poca dorada de los antibiticos (quimioterpicos naturales), y la bsqueda racional rinde decenas de nuevos antimicrobianos procedentes de Actinomicetos, otras bacterias y hongos.

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Las propiedades deseables de un quimioterpico ideal seran las siguientes: 1) Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar segn el principio de bala mgica que daa al microorganismo respetando al hospedador Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive irreversiblemente el microorganismo, provocando la prdida total de viabilidad. En el mundo real, sin embargo, hay muchos quimioterpicos microbiostticos. En estos casos, los sistemas de defensa natural del hospedador (mecanismos de inmunidad) hacen el resto, eliminando el agente microbiano previamente inhibido por el quimioterpico. Los microorganismos susceptibles no deberan desarrollar resistencias al quimioterpico. Pero desgraciadamente, en muchos casos, al cabo de un tiempo de uso del antimicrobiano comienzan a surgir cepas microbianas resistentes al mismo. La quimioterapia es una autntica escalada de armamentos entre los microorganismos y los humanos, en los que ante una nueva arma de estos ltimos los microbios pueden responder al cabo del tiempo con estrategias de resistencia, lo que obliga a un uso racional de los quimioterpicos, y a una bsqueda continua de nuevos agentes. Que el quimioterpico sea efectivo contra un amplio espectro de microorganismos. Pero no existe (ni existir) un solo agente capaz de inhibir a todos los microorganismos. Algunos antibiticos son de amplio espectro, pero no son eficaces contra todos los microorganismos. Por otro lado, existen quimioterpicos de espectro estrecho, pero muy selectivos contra ciertas bacterias que son patgenas importantes.

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Que no sea alergnico, y que no tenga efectos secundarios. Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante el tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que alcance pronto la concentracin teraputica en los tejidos.

QUIMIOTERPICOS DE SNTESIS ANLOGOS DE FACTORES DE CRECIMIENTO MICROBIANO SULFAMIDAS Los primeros quimioterpicos de sntesis fueron las sulfamidas. Como ya hemos comentado, su descubrimiento y la comprobacin de su accin quimioterpica, marcaron el comienzo de la Quimioterapia con criterios racionales. Despertaron gran inters cuando se mostr que su mecanismo de accin depende del hecho de que funcionan como anlogos de metabolitos, actuando como inhibidores competitivos respecto de cierta enzima. La primera sulfamida fue la sulfanilamida (para-aminobenceno sulfonamida). Las sulfamidas tienen un efecto bacteriosttico. Su accin antibacteriana se debe al hecho de que funcionan como anlogos estructurales del cido para-aminobenzoico (PABA), inhibiendo competitivamente por el acceso a la enzima dihidropteroil-sintetasa en la ruta de sntesis del cido tetrahidroflico (THF). Como se puede ver, la dihidropteroil-sintetasa cataliza la condensacin del PABA con el 2amino,4-hidroxi, 6-hidroximetil dihidropteroil-pirofosfato, que lleva a la sntesis de cido dihidropteroico (una de las fases intermedias de la sntesis del tetrahidroflico -THF). En la figura se puede apreciar que el PABA y las sulfamidas son muy parecidas. De hecho, la sulfamida es usada por la enzima como un sustrato alternativo al PABA. En este caso, la enzima cataliza una reaccin que genera un producto que no puede actuar como intermediario en los siguientes pasos de la ruta de sntesis del THF. Los microorganismos son sensibles a las sulfamidas porque sus necesidades de THF las han de satisfacer sintetizndolo a partir de PABA usando la ruta de la que estamos hablando. Sin embargo, los animales son resistentes, debido a que carecen de esta ruta, y en cambio, se aprovisionan de flico directamente en su dieta. A partir de la sulfanilamida se sintetizaron desde entonces gran nmero de derivados por sustitucin de uno de los hidrgenos del grupo sulfonamida, formando estos derivados la llamada familia de las sulfamidas. Lo que tienen en comn las sulfamidas con actividad antibacteriana es: tener libre el grupo amino en para grupo sulfona (-SO2-) unido al anillo bencnico; La sustitucin del grupo amido unido a la sulfona, aunque no modifica sustancialmente la actividad antibacteriana, puede suponer una serie de ventajas de tipo farmacolgico.

ANTIBITICOS INTRODUCCIN Los antibiticos son sustancias normalmente de bajo peso molecular producidas por seres vivos (antibiticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibiticos semisintticos), que a pequeas concentraciones tienen efectos antimicrobianos

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(microbicidas o microbiostticos), tras ser administrados por va adecuada a un organismo receptor. La mayor parte de los antibiticos proceden del metabolismo secundario de microorganismos procariotas (actinomicetos, Bacillus, etc.) o eucariotas (hongos de los gneros Penicillium, Cephalosporium, etc.). Se conocen unos 5.000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300 nuevos, pero en clnica solo se usa un 1% de los descubiertos. Su importancia econmica se pone de manifiesto al pensar en las 100.000 Tm. de antibiticos producidas al ao, por un valor equivalente a 3.000 millones de euros, lo cual representa una de las industrias biotecnolgicas ms importantes. La mayor parte de los antibiticos comerciales se emplea para tratar enfermedades de etiologa bacteriana, aunque algunos se usan contra hongos y levaduras, y unos pocos presentan actividad antitumoral. Desde el punto de vista qumico, se clasifican en grandes familias: antibiticos que contienen carbohidratos; lactonas macrocclicas; quinonas y compuestos relacionados; antibiticos peptdicos y con aminocidos; heterociclos del N; heterociclos del O; aromticos; alifticos, etc. La mayora de los antibiticos son molculas relativamente pequeas pero complejas, con regiones hidrofbicas que facilitan el transporte al interior celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la interaccin de la molcula con su diana macromolecular. Para estudiarlos es ms til agrupar a los antibiticos no por clases segn su naturaleza qumica, sino en funcin de las dianas sobre las que actan y con las que interfieren: A) antibiticos que interfieren con la biosntesis de la pared celular B) antibiticos que actan sobre la membrana celular C) antibiticos que inhiben la sntesis de protenas D) antibiticos que actan sobre la sntesis de cidos nucleicos. Los antibiticos ms abundantes, y los mejor estudiados, son los que interfieren con enzimas de la biosntesis del peptidoglucano de las eubacterias, y los que interfieren con la funcin del ribosoma eubacteriano (obviamente, esto cumple el requerimiento de balas mgicas). A continuacin estudiaremos algunos grupos importantes de antibiticos, dando importancia a sus mecanismos de accin. ANTIBITICOS QUE INTERFIEREN EN LA BIOSNTESIS DE PROTEINAS Los antibiticos que interfieren en la sntesis de protenas son muy variados y abundantes, y la mayora de ellos funcionan interfiriendo con el ribosoma, sobre todo los que se unen a protenas ribosmicas o a alguno de los ARN ribosmicos. Nosotros vamos a detenernos principalmente en aquellos antibiticos que afectan a la elongacin de la cadena

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naciente del polipptido. Obviamente, los ms tiles son aquellos que tienen efectos selectivos frente a los ribosomas 70S procariticos, pero no sobre los 80S eucariticos. Dentro de ellos, y siguiendo el orden natural del funcionamiento de la elongacin de la cadena polipeptdica, podemos agruparlos segn la fase concreta de la elongacin sobre la que actan: 1. inhibicin del reconocimiento de un aminoacil-ARNt (aa-ARNt) hacia el sitio A del ribosoma; introduccin de errores en la lectura de los ARNm; inhibicin de la reaccin de formacin del enlace peptdico; inhibicin de la traslocacin del peptidil-ARNt (pp-ARNt) desde el sitio A al sitio P. bloqueo de los factores de elongacin.

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